对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒的精细结构、核酸、多肽及血清学研究

对纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）进行了超微结构、紫外吸收、核酸类型及多肽ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的研究。同时用单克隆抗体对ＨＨＮＢＶ的两分离株和ＭＢＶ进行了血清学比较研究。用ＴＭＶ作为内标定物测得病毒粒子大小为１５０ｎｍ×４５０ｎｍ，其衣壳为两个帽状物端夹１３圈螺旋对称的园柱体结构。病毒在２６０ｎｍ处吸光系数为０．１１７ｍｇ／ｍＬ／ＯＤ２６０。病毒核酸为双链ＤＮＡ，分子量大于３５×１０６ｄ。病毒囊膜有１２种主要多肽。病毒衣壳有两种主要多肽。从寿光（ＨＨＮＢＶ—９３７）和青岛（ＨＨＮＢＶ—９３８）分离到的病毒种在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和抗ＨＨＮＢＶ—９３７单抗ＥＬＩＳＡ反应上没有显著差异。ＨＨＮＢＶ与斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）在抗原决定簇上存在差别。     

中国对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（HHNBV）DNA探针的制备及应用

ＨＨＮＢＶ是１９９３年中国对虾暴发性流行病的主要病原之一。从纯化的病毒中提取ＤＮＡ，用ＥｃｏＲｌ限制性内切酶酶切成ＤＮＡ片段，与ＰＵＣ１８体外重组，建立ＨＨＮＢＶＤＮＡ文库。从中筛选出三个重组质粒（５＃、８＃、９＃），它们所插入的片段大小分别为：２．８Ｋｂ、０．８Ｋｂ、１．６Ｋｂ，它们分别用光敏生物素标记成探针，与感染ＨＨＮＢＶ的病虾ＤＮＡ呈阳性反应，以此利用制备的ＨＨＮＢＶＤＮＡ探针的高敏感性和特异性来检测虾病。     

鱼类肠道微生物总DNA的提取

尝试提取鲫（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓ）肠道菌群总ＤＮＡ，为研究鱼类肠道菌群结构提供依据。以鲫肠道内容物为样本，用ＰＢＳ多次洗涤，离心样品，沉淀菌体。使用试剂盒法提取肠道菌群总ＤＮＡ，电泳结果显示，样品ＤＮＡ条带明亮，无降解现象，可用于后续分子生物学试验研究；通过设计的细菌通用引物，对其１６ＳｒＤＮＡ基因进行ＰＣＲ扩增，得到较清晰的图谱，条带整齐；表明采用该方法提取鱼类肠道微生物群落的ＤＮＡ较为简单、准确、可行。     

Comparative Studies on the Stability of Various Forms of vitamin C

ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＳＴＡＢＩＬＩＴＹＯＦＶＡＲＩＯＵＳＦＯＲＭＳＯＦＶＩＴＡＭＩＮＣＬｅｉＱｉｎｇｘｉｎ，ＬｉＡｉｊｉｅ，ＸｕＷｅｉ，ＲｅｎＺｅｌｉｎ（ＯｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ　Ｑｉｎｇｄａｏ，２６６００３）ＣＯ...     

斑节对虾（Penaeus monodon）暴发性病害的病原超微结构观察

斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ）暴发性病害的病原超微结构观察ＳＵＰＥＲＭＩＣＲＯＳＴＲＵＣＴＵＲＥＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＮＰＡＴＨＯＧＥＮＯＦＥＸＰＬＯＳＩＶＥＤＩＳＥＡＳＥＯＦＢＬＡＣＫＴＩＧＥＲ（ＰＥＵＡＥＵＳＭＯＮＯＤＯＮ）邓国成李焕...     

对虾病毒HHNBV DNA构建质粒的研究与分析

用ＰＵＣ１８构建了对虾病毒ＨＨＮＢＶＤＮＡ重组质粒，提取后经斑点杂交及酶切分析，证实质粒中插入片段为病毒ＤＮＡ，其中０５＃质粒的插入片段大于２Ｋｂ，与质粒的分子量相近。对０５＃质粒酶切后的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交亦取得了满意的结果。同时，还对０５＃质粒的插入片段进行了内切酶图谱分析，共进行了ＥｃｏＲｌ、Ｈｉｎｄｌｌｌ、Ｓｍａｌｌ、Ｐｓｔｌ、ＰＵＶｌ、Ｈｉｎｄｌｌ６种限制性内切酶分析，结果表明，只有Ｐｓｔｌ在插入片段的一端有一个酶切位点，酶切位点的确切位置有待于进一步确定。     

VARIATIONSOFCOMMUNITYSTRUCTURE，DIVERSTITYANDBIOMASSOFDEMERSALFISHASSEMBLAGEINTHEBOHAISEABETWEEN1982～

ＶＡＲＩＡＴＩＯＮＳＯＦＣＯＭＭＵＮＩＴＹＳＴＲＵＣＴＵＲＥ，ＤＩＶＥＲＳＴＩＴＹＡＮＤＢＩＯＭＡＳＳＯＦＤＥＭＥＲＳＡＬＦＩＳＨＡＳＳＥＭＢＬＡＧＥＩＮＴＨＥＢＯＨＡＩＳＥＡＢＥＴＷＥＥＮ１９８２～１９８３ＡＮＤ１９９２～１９９３ＪｉｎＸｉａｎｓｈ...     

低酶水解法提取无苦味鳀鱼水解蛋白

低酶水解法提取无苦味鳀鱼水解蛋白王长云，薛长湖，陈修白（青岛海洋大学水产学院，２６６００３）关键词鳀鱼，水解蛋白，无苦味，低酶水解法ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＯＦＦＩＳＨＮＯＮ－ＢＩＴＴＥＲＨＹＤＲＯＬＹＳＡＴＥＦＲＯＭＡＮＣＨＯＶＹ（ＥＮＧＲＡＵＬＩＳ...     

鄱阳湖渔区的团头鲂胚胎发育观察

鄱阳湖渔区的团头鲂胚胎发育观察ＯＲＳＥＲＶＡＴＩＯＮＳＯＮＴＨＥＥＭＢＲＹＯＮＩＣＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＯＦＭＥＧＡＬＯＢＲＡＭＡＡＭＢＬＹＣＥＰＨＡＬＡＩＮＴＨＥＦＩＳＨＩＮＧＡＲＥＡＳＯＦＰＯＹＡＮＧＬＡＫＥ虞鹏程张丰旺（南昌大学生物科学工程系，...     

鳜鱼病毒PCR诊断方法的建立

从ＲＡＰＤ扩增的鳜鱼病毒（ＳＣＶ）核酸电泳带中回收了二个片断，克隆子pUC19质粒（称为ＳＣＶＥ３６９和ＳＣＶＥ４５０），序列分析表明插入片段分别为３６９bp和450bp与ＧenBank序列没有显著的同源，根据克隆序列调计两对引物Ｐ１／Ｐ２和Ｐ３／Ｐ４ ，在健康鳜鱼，病鳜以及提纯的ＳＣＶ核酸中进行ＰＣＲ试验，结果表明，Ｐ１／Ｐ２组引物在ＳＣＶ基因组中扩增出特异性核酸片段，可作为鳜鱼病毒ＰＣＲ诊断，检测片段为３６９bp.     

对虾一种杆状病毒多角体蛋白基因的PCR扩增

根据已发表的几种杆状病毒的多角体基因的序列比较与分析，设计并合成两对ＰＣＲ简并引物Ｐ—６０／Ｐ７４０和Ｐ１６４／Ｐ６４０，从纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒提取ＤＮＡ并进行ＰＣＲ扩增，Ｐ—６０／Ｐ７４０的扩增片段较为复杂，基中１条的长度为８００ｂｐ的主带与设计的ＤＮＡ片段长度相近。Ｐ１６４／Ｐ６４０经优化ＰＣＲ的反应条件后，成功地扩增出与设计相同的约４８０ｂｐＤＮＡ片段。进一步的实验表明，Ｐ—６０／Ｐ７４０扩增的分子量为８００ｂｐ的片段可被Ｐ１６４／Ｐ６４０引物对扩增，分子量与预期的相同，初步研究结果显示，Ｐ—６０／Ｐ７４０可用于杆状病毒多角体蛋白全基因的克隆，Ｐ１６４／Ｐ６４０对于对虾杆状病毒的调查和研究有实际应用价值。     

单克隆抗体酶联免疫技术检测对虾皮下及造血组织坏死病的病原及其传播途径

用单克隆抗体ＥＬＩＳＡ技术对１９９４年５月～７月自山东和辽宁采集的虾池和海区材料，包括对虾、浮游生物、小型甲壳类生物、鱼类、底泥及饲料等共１９２个样品进行了对虾暴发性流行病病原ＨＨＮＢＶ的检测。结果表明，对虾中的ＨＨＮＢＶ阳性与虾池发病情况基本相符，用单抗ＥＬＩＳＡ方法可提前２０～４０ｄ对虾池的发病可能性作出预报；桡足类浮游生物的带毒率高于对虾，且其阳性的出现早于对虾，沿岸海区的桡足类浮游生物有较高的阳性率，它可能是对虾暴发性流行病的主要病原携带者；部分地区的卤虫也带有ＨＨＮＢＶ，同时还从糠虾等小型甲壳类生物中检出了病原。     

对虾暴发性流行病病原对中国对虾幼体及仔虾的人工感染研究

用对虾暴发性流行病病原（ＨＨＮＢＶ）作为人工感染实验的毒种来源，对中国对虾幼体及仔虾进行了人工感染研究，结果表明ＨＨＮＢＶ通过水体浸浴不能感染健康的中国对虾卵，幼体及仔虾；但可通过投喂感染健康的中国对虾仔虾，使其发病死亡，死亡的进程随着体长的增加而缩短。     

对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒单克隆抗体的研制

用经密度梯度离心纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ—９３７）注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其免疫后的脾细胞与ｓｐ２／０骨髓瘤细胞进行融合。经筛选与克隆，获得７株抗ＨＨＮＢＶ的单克隆杂交瘤细胞株。其中Ｆ９株的染色体数为８７，ＥＬＩＳＡ测定培养上清中单抗滴度为１∶８，腹水为１∶１０００。患有杆状病毒的皮下及造血组织坏死症的对虾组织切片的单抗酶联免疫染色，表明Ｆ９株单抗只与ＨＨＮＢＶ病灶发生特异性结合，与对虾组织结构不发生特异性反应。将其用于现场样品的检测研究表明，该抗体适于用来进行对虾暴发性流行病的病原检测。     

Assessment of transmission risk in WSSV-infected shrimp Litopenaeus vannamei upon cooking

White spot syndrome virus has been a threat to the global shrimp industry since it was discovered in Taiwan in 1992. Thus, shrimp-producing countries have launched regulations to prevent import of WSSV-infected commodity shrimp from endemic areas. Recently, cooked shrimp that is infected with WSSV tested positive by PCR. However, there is no study to determine the infectivity of WSSV in cooked shrimp that tested positive by PCR. In the present study, WSSV-infected shrimp were cooked at boiling temperature for different times including 0, 1, 3, 5, 10 and 30 min. Upon exposure to boiling temperature, WSSV-infected shrimp were fed to SPF shrimp (Litopenaeus vannamei). The result showed experimentally challenged shrimp from 0-min treatment (positive control) indeed got infected with WSSV. However, experimentally challenged shrimp that were fed tissues boiled at 1, 3, 5, 10 and 30 min were not infected with WSSV. Mortality data showed that only the positive control (0-min) treatment displayed high mortality, whereas no mortality was observed in any other treatment category. These findings suggest that cooking shrimp at boiling temperature for at least 1 min might prevent any potential spread of WSSV from endemic countries to other geographical areas where WSSV has not yet been reported.     

用nested—PCR方法快速检测鲑鱼肾杆菌

描述了用嵌套式聚合酶链式反应(nested PCR)快速检测鲑鱼细菌性肾病病原鲑鱼肾杆菌的方法。以BKDR和BKDF为引物,扩增鲑肾杆菌编码57kDa主要可溶性蛋白基因中501bp的DNA片段,再用引物BKDR2和BKDF2扩增其中长度为314bp的DNA片段。用其它15种常见鱼类致病菌验证这两组引物的特异性,结果没有非特异性的DNA片段被扩增出来。用酚抽提法和煮沸加冻融的方法获得的细菌裂解产物,PCR检测的灵敏度均可达到1.8×103CFU·mL-1,用Nested PCR进一步扩增PCR扩增的产物,检测灵敏度可再提高100倍。检测鲑鱼肾杆菌菌悬液与鲟卵的混合物,结果表明,该方法能准确、可靠、快速地检测鲑肾杆菌。     

A rapid non-enzymatic method of DNA extraction for PCR detection of white spot syndrome virus in shrimp

The present study describes a simple method of extraction of white spot syndrome viral DNA (WSSV) from infected shrimp for the polymerase chain reaction (PCR) detection of WSSV. The DNA preparation using this method was found to be free from the host DNA, RNA and protein, and is suitable for different PCR protocols such as single‐step PCR, nested PCR and single‐tube semi‐nested PCR. This method of extraction has worked successfully for extracting the WSSV‐DNA from different organs (haemolymph, eyestalk, carapace, head muscle, heart, gills, appendages, heptopancreas, stomach, intestine, abdominal muscle and tail muscle) of WSSV‐infected adult shrimp, and WSSV‐infected larvae and postlarvae.     

养殖沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法的建立

利用GyrB基因的特异性引物建立沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法。将已知浓度的气单胞菌菌液加入灭菌的沉积物样品中,作为模拟沉积物样品。通过选择和优化沉积物DNA提取方法、特异性引物、标准曲线模板,建立沉积环境中气单胞菌属细菌准确检验的实时荧光定量PCR方法,同时验证该方法的特异性、灵敏性、重复性。结果表明,采用改进的溶菌酶-SDS温和裂解法提取沉积物DNA,以扩增GyrB基因片段的IAF和IAR为特异性引物,并直接以模拟沉积物样品DNA为标准品构建标准曲线,可以建立适用于定量检测沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR方法。该方法可灵敏、特异、准确地定量检测刺参养殖池塘底泥中气单胞菌属中不同种的细菌,检出效率可达103CFU/g。统计分析显示,变异系数为0.21%-0.80%,均小于5%,表明重复性良好。