养殖大菱鲆中牙鲆肠弧菌的分离鉴定及组织病理学

2007年1月，山东省胶南某养殖场人工养殖的大菱鲆（Scophthalmus maximus）发生严重病害并大批死亡。病鱼的主要症状是体表溃疡，腹腔积液，肠道肿胀，肝脏萎缩，胆囊暗绿色等。从病鱼胆囊中分离纯化得到优势菌株，命名为da3。人工感染试验证实，该菌株对大菱鲆有较强的致病性。对体重为25 g的大菱鲆的半数致死量为每尾鱼2×106 cfu。通过细菌16S rDNA序列测定及形态学和生理生化特征研究确定，该病原菌为牙鲆肠弧菌（Vibrio ichthyoenteri）。组织病理学观察表明，病鱼的肝脏、肾脏、脾脏、肠道和脑的微观结构发生了明显的病理变化，由此引起的器官功能衰竭可能是病鱼死亡的主要原因。本文结果对大菱鲆细菌性病害的控制具有参考价值。     

一株广温性大菱鲆肠道益生菌的筛选与鉴定

从健康的大菱鲆肠道内分离细菌,以大菱鲆致病菌鲨鱼弧菌Vibrio archariae和大菱鲆弧菌Vibrio scophthalmi为指示菌,根据拮抗作用原则,分离得到一株菌TYTG-1.根据菌株的形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析,菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.从养殖大菱鲆肠道中分离获得枯草芽孢杆茵在国内属首次报道.该株茵在4～42℃均能生长,属广温性.经过28d的投喂添加浓度为107和109CFU/g枯草芽孢杆菌的饲料,大菱鲆生长正常,未产生不良反应.该株枯草芽孢杆茵对引起大菱鲆腹水病和肠炎病的两株致病弧茵具有良好的拮抗作用,其具有较大潜力作为肠道益生菌应用于大菱鲆的养殖.     

养殖大菱鲆鳗弧菌疾病的初步研究

从某养殖场患病的大菱鲆病灶和肝肾等组织分离到一株病原菌YC-01,经人工感染健康大菱鲆后,其皮下、鳍基部、及口部皮下出血,皮肤溃烂、腹部膨胀等,与自然发病大菱鲆的症状相同.药敏实验结果表明,菌必治、氟哌酸、呋喃妥因、复达欣、红霉素、卡那霉素,对YC-01有较强的抑制作用,该菌株对四环素、磺胺类、青霉素等抗生素有耐药性.经过光镜和电镜的综合形态观察,生理生化特征测试,标准菌种比对等,可将病原菌CY-01鉴定为鳗弧菌.     

大菱鲆弧菌耐药谱、耐药基因检测和ERIC-PCR分型分析

2020年6—10月,从辽宁地区患病大菱鲆(Scophthalmus maximus)体内共分离到394株菌株.基于16S rRNA序列鉴定分离株,采用微量稀释法分析随机挑选的18株大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)对8种抗生素的敏感性,检测其耐药基因携带情况,并基于ERIC-PCR进行分型研究.结果显...     

噬菌蛭弧菌及其在大菱鲆养殖中的应用探讨

噬菌蛭弧菌被誉为新型的"活性抗生素",由于其独特的生物学特性,它在水产动物的健康养殖中逐渐推广开来。随着大菱鲆养殖的发展,该鱼的病害和药物残留问题越来越突出,成为养殖快速发展的瓶颈。文章结合大菱鲆养殖过程中发生的主要病害展开论述,探讨了噬菌蛭弧菌在大菱鲆疾病防治方面存在的优缺点,并指明了今后的发展方向,旨在为大菱鲆健康养殖提供参考。     

副溶血弧菌对养殖大菱鲆致病性研究

从患出血症的大菱鲆体内分离到5株菌,编号为L-0603314、L-0603442、L-0603431、L-0603121、L-0603241。采用肌肉注射的方法进行人工感染,每尾注射0.05 ml,菌浓度为108cfu/ml和109cfu/ml;采用K-B法用青霉素、环丙沙星、四环素、呋喃妥因、红霉素、庆大霉素、链霉素7种药敏纸片对确定病原性的菌株进行抗生素敏感试验,同时进行生理生化特性研究。结果显示,L-0603121菌株为3.0×108cell/ml时只引起个别试验个体轻微症状,1.0×109cell/ml可造成100%感染率,40%死亡率,可确定L-0603121菌株为引起大菱鲆出血症的致病菌株。药敏试验表明,L-0603121株菌对庆大霉素、红霉素、链霉素、呋喃妥因敏感。根据形态观察、生理生化特征等试验结果,确定L-0603121株菌为副溶血弧菌。     

养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)腹水病的病原多样性及其耐药性分析

为了解引起养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)腹水病的病原多样性及其耐药性情况,针对2002-2010年由不同地区病样分离的27株细菌性病原进行了16S rDNA鉴定,并采用K-B法测定了27株细菌对22种抗生素的耐药性,分析了病原菌的耐药谱及耐药率变化.结果显示,大菱鲆腹水病病原菌主要有大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、假交替单胞菌(Pseudoalteromonas espejiana).山东青岛地区以大菱鲆弧菌为主,威海地区以迟钝爱德华氏菌为主,烟台地区菌株种类分布平均.5类细菌对青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、复方新诺明耐药率高于50％.只有1株迟钝爱德华氏菌对氟苯尼考产生了耐药,其余菌株对其均没有耐药性,且在长期使用中不易产生耐药性,证实氟苯尼考为当前防治腹水病的一种良好抗菌药物.27株病原菌的耐药谱数量为27个,每个菌株具备自己独特的耐药谱,74.1％的菌株对10种以上的抗菌药物产生了耐药性,均有多重耐药性.     

大菱鲆鱼苗腹水病病原菌药敏试验

2005年10～11月,利用发病的大菱鲆鱼苗,用TCBS培养基进行细菌培养,细菌菌落为黄绿色,可判定其病原菌为弧菌属的一种。取优势种继续纯化培养,再用纸药片进行药敏试验。药敏试验结果表明,氯霉素、先锋霉素、头孢唑啉、庆大霉素、利福平、强力霉素、万古霉素7种抗生素对该病原菌有明显的抑制作用。     

大菱鲆肠道乳杆菌Lactobacillus sp.N5的筛选鉴定及其抑制水产病原菌的研究

从大菱鲆（Scophthalmus maximus）肠道内分离出8株乳酸菌，经16S r DNA鉴定为Lactobacillus sp.，以对水产病原菌的抑制和对抗生素的敏感性为指标，研究乳酸菌的特性。其中，菌株N5对鳗弧菌（Vibrio anguillarum）、哈维氏弧菌（V. harveyi）、副溶血弧菌（V. parahaemolyticus）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）均具有较强的抑制作用，对氨苄青霉素、庆大霉素和罗红霉素敏感。菌株N5发酵上清液经加热、排酸和过氧化氢酶处理后，仍有抑菌作用；经蛋白酶处理后失去抑菌能力，推测菌株N5分泌的抑菌物质为耐热的乳酸菌素，其可以抑制病原菌生物膜的形成。菌株N5在凡纳对虾（Litopenaeus vannamei）肠道定植5 d后，加入鳗弧菌和哈维氏弧菌，继续养殖7 d，死亡率显著降低。本研究结果可为菌株N5制备水产养殖益生菌剂提供实验依据。     

养殖大菱鲆病原菌迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及其疫苗研制

2006年9月山东胶南某养殖场大菱鲆(Scophthalmus maximus)发生病害,从患病大菱鲆脾脏分离出优势菌株WY28,人工感染试验证实WY28菌株对大菱鲆和斑马鱼(Danio rerio)有较强的致病性,其对大菱鲆和斑马鱼的半数致死剂量(LD50)分别为39cfu/g(Bw)(3.3×102cfu/ind)和2.1×104cfu/g(Bw)(6.4×103cfu/ind).综合该菌在形态与生理生化特征及16S rDNA同源性等方面的实验结果,确定WY28菌株为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda).该菌对先锋霉素V、庆大霉素、氟哌酸、痢特灵等抗生素敏感.WY28菌株经福尔马林灭活制成灭活疫苗,对大菱鲆进行腹腔注射免疫,免疫后第4周测得免疫鱼血清中抗迟缓爱德华氏菌的抗体效价平均为1:1 280.免疫后第6周.免疫鱼血清中抗迟缓爱德华氏菌的抗体效价达到更高水平(平均值为1:3 289.6).攻毒试验表明,受免鱼的相对存活率明显高于对照组.由此可见,利用从病鱼体内分离的迟缓爱德华氏菌菌株制备的灭活疫苗能使大菱鲆较有效抵御迟缓爱德华氏菌强毒株的攻击.     

养殖裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)疥疮病病原菌的分离与鉴定

裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)是一种名贵的冷水经济鱼类,已在我国北方地区开展小规模的工厂化繁育和养成.目前,我国关于裸盖鱼的病害研究仍是空白.本研究对山东烟台一养殖场自然发生疥疮病的裸盖鱼进行了病原分析,从发病鱼体内分离得到形态一致的优势菌株,命名为AF-1,并对其进行了致病性检测、菌种鉴定及药物敏感性研究.人工感染实验证明,AF-1对裸盖鱼有致病性,呈现症状与自然发病状态一致;结合形态观察、革兰氏染色、生理生化特征、16S rRNA和gyrB基因序列进化树分析,将AF-1鉴定为杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida);药物敏感性实验结果显示,AF-1对青霉素、阿莫西林、头孢噻吩等13种抗生素具有耐药性,对氟苯尼考、氟甲喹等16种抗生素敏感.综上所述,本研究首次报道了我国养殖裸盖鱼感染杀鲑气单胞菌病例,为裸盖鱼养殖过程中的疾病防控和疫苗开发提供了参考.     

Pathology of Enterococcus sp. infection in farmed turbot, Scophthalmus maximus L.

Abstract The lesions of an enterococcal septicaemia occurring in turbot, Scophthalmus maximus (L.), cultured in several farms in northwest Spain are described. The agent of this septicaemia was identified previously as an Enterococcus -like bacterium. Two main patterns of lesions were observed in the diseased turbot: a focal form characterized by exophthalmia, muscular haemorrhages, acute branchitis, and suppurative inflammation of periorbital tissues, eyeball, meninges and brain; and another generalized form with similar lesions, but showing more extensive haemorrhages, ulceration and purulent inflammation of the skin, desquamative enteritis, and necrosis of spleen and kidney. Fatty changes of the liver were observed in all turbot examined (diseased and controls), which indicates that these alterations were not related to the infection. Experimentally inoculated turbot developed lesions corresponding to the generalized form of the natural disease. Although the Enterococcus strain was recovered in pure culture from all the organs, Gram-positive bacteria could not be visualized histologically in the lesions of muscle and brain.     

Ocular bacterial signatures of exophthalmic disease in farmed turbot (Scophthalmus maximus)

As is the case at other sites in the body (e.g. the gut, skin and mouth), the ocular microbiota plays a crucial role in their host, as disturbances of the composition and function of the ocular microbiota are known to be associated with ocular disorders. Exophthalmic disease (ED) is a significant cause of high mortality in fish species, including farmed turbot (Scophthalmus maximus). However, the relationship between alterations in the ocular microbiota and ED in turbot is unclear. In this work, we collected turbot samples from farmed ponds with ED and healthy samples to understand changes in the ocular microbiota of turbot suffering from ED. We compared the structural and metabolic differences of ocular bacterial communities from farmed turbot with exophthalmic disease and those of healthy controls. Besides less microbial diversity found in turbot with ED regarding the control group, we also found that Aeromonas was the dominant bacteria both in controls and ED samples, but the abundance of Aeromonas was significantly greater in ED individuals. Moreover, the results of correlation test further suggest that Aeromonas overgrowth was correlated with the progress of the disease and shifts in ocular microbiota functional pathways in turbot. These findings emphasize that an increased abundance of Aeromonas serves as an ocular bacterial signature associated with ED in turbot, which provide basic information useful for diagnoses, prevention and treatment of ocular diseases occurring in cultured fish.     

海水网箱养殖许氏平鲉细菌性疾病病原鉴定及致病性研究

2019年8月,大连市金州区大李家街道海域海水网箱养殖许氏平鲉(Sebastes schlegeli)暴发严重的皮肤溃疡性疾病。以其为研究对象,从体表病灶、肝脏和肾脏上进行细菌分离,得到1株优势菌株BN-1910。为了验证网箱养殖许氏平鲉死亡是否由该菌株引起,采取腹腔注射的方式进行该菌株回感,以确定该菌株的致病力。在对菌株进行生理生化检验和形态学观察后,可以初步判断菌株为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。基于16S rRNA基因序列构建的分子系统发生树表明,哈维氏弧菌(MT864681.1)和该菌株在系统发育树中聚为一支,99%置信水平。研究结果显示,菌株BN-1910为哈维氏弧菌(V.harveyi),对许氏平鲉10 d的LD50为7.98×10^3 CFU/mL;对14种药物的敏感试验证实,菌株BN-1910对氟哌酸、链霉素和左氧氟沙星敏感。     

锦鲤源铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

对从发病锦鲤分离出的病原菌主要形态与生理生化特性、16S rRNA基因序列及耐药特性等进行了研究,旨在为锦鲤疾病防治提供理论依据,对铜绿假单胞菌的进一步研究提供基本资料。发病锦鲤体长37~42 cm,体重1.5~2.0kg,眼球脓肿凸出,鳃丝被轻微腐蚀,其上可见附着物,肛门红肿并伴有黄色粘液流出。健康锦鲤体长7~10cm,体重(25±3)g。分离到的1株形态一致优势生长菌株（记为HL2）呈现圆形光滑、边缘整齐、中央隆起、略透明、乳白色,直径约1.4mm。分离菌经革兰氏染色镜检,均为革兰氏阴性、短杆状。肌肉注射感染后,供试健康锦鲤14d内全部死亡,并在试验后期注射部位轻微出血,眼球周边有白浊及化脓的现象。HL2有运动性,精氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶阳性,苯丙氨酸脱羧酶阴性,发酵麦芽糖、甘露醇、蔗糖、半乳糖等,不发酵侧金盏花醇与阿拉伯糖等。分离株HL2的序列长度为1461bp(GenBank登录号为KF413420),在系统发育树上与铜绿假单胞菌（KC959478）聚为一支。头孢曲松、卡那霉素、四环素等35种药物有效抑制HL2,庆大霉素、强力霉素、头孢拉定等5种药物具有一定的抑菌作用,青霉素G、氨苄西林、头孢唑林等15种药物无效。使用抗生素时必须更加科学、合理、有效;从药物选择、使用剂量、用药疗程等方面着手,以减少耐药菌株的产生。     

颗粒饲料携带细菌与大菱鲆疾病发生的相关性

白便症是工厂化养殖大菱鲆Scophthalmus maximus的一种常见和多发病,常造成大规模的死亡.2006年针对大菱鲆所用饲料携带细菌与其疾病发生的关系展开调查.调查发现,山东蓬莱(A)、莱州(B)和威海(C)3家大菱鲆养殖场均不同程度的感染了白便症,损失惨重.为查明病因,从切断病原入手,详细调查了这3家养殖场的病鱼、水源和养殖所用的颗粒饲料,通过细菌分离和形态学比较,发现颗粒饲料携带细菌KL-1与大菱鲆白便症的病原菌BB-1具有一致性,经常规生理生化测试、API-ID32E鉴定和16S rRNA序列分析,发现KL-1与BB-1是同一种细菌,为假交替单胞菌属的一种(Pseudoalteromonas sp.),人工感染试验也证明这2株细菌都是大菱鲆白便症的致病原,感染症状与自然发病特征基本一致,表明颗粒饲料携带细菌是大菱鲆白便症的直接病原.并对菌株KL-1和BB-1进行了药敏试验测试,为该疾病的控制提供参考.     

Presence of a lethal protease in the extracellular products of Vibrio splendidus-Vibrio lentus related strains

The presence of a lethal extracellular 39-kDa protease, a virulence determinant of a Listonella pelagia strain which produces vibriosis in turbot, was determined in the extracellular products (ECP) of 33 Vibrionaceae strains. Both immunological and enzymatic techniques distinguished this specific protease from other Vibrionaceae proteins. It was detected in 15% (5/33) of the ECPs assayed belonging to strains of the Vibrio splendidus-V. lentus related group isolated in Galician aquaculture systems (NW Spain). As these strains were associated with diseased octopus and cultured turbot, were able to colonize the internal organs of fish and produced a lethal ECP for fish, they are a potential risk for the health of reared aquatic organisms.     

养殖大菱鲆主要疾病及防治技术

在流行病学调查的基础上，对目前我国大菱鲆养殖中常见疾病进行了较全面的介绍，包括病毒性、细菌性和寄生虫性疾病。系统地描述了这些疾病的流行特征、发病症状、危害程度、感染率及致病原等。同时为各种疾病提供了具体的防治技术和措施，对大菱鲆养殖生产与疾病防治具有理论指导意义和重要的参考价值。本文系国内首次对养殖大菱鲆疾病进行的全面性报道。     

养殖大菱鲆腹水症病原菌SR1的分离及鉴定

从患腹水症的养殖大菱鲆（Scophthalmus maximus）腹水分离到1株优势细菌SR1，人工感染实验证实其具有致病性。经API ID32E系统鉴定为溶藻弧菌（Viibrio alginolyticus），并测定了其16S rRNA基因序列和热激蛋白HSP60（Heat shock protein，HSP）基因序列。基于16S rRNA基因序列构建的系统树结果表明，菌株SR1与溶藻弧菌（AY967727）亲缘关系最近，然而置信度较低，仅有27％，不能有效地鉴定到种。HSP60基因序列分析表明，该菌株与溶藻弧菌（AF230931）同源性最高，为99．2％。系统发育树表明SR1确与溶藻弧菌（AF230931）聚为一个分支，且置信度较高，为84％。综合上述结果，菌株SR1可鉴定为溶藻弧菌。[中国水产科学，2006，13（4）：603—609]