双重PCR在创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolytious)快速检测中的应用

建立双重PCR方法检测海产品中的创伤弧菌(Vbrio vulnificus)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolytious)。针对创伤弧菌和副溶血弧菌的gyrB基因的不同位点设计引物,前者扩增片断的大小为968bp,后者扩增片断的大小为284bp。共对三种海产品进行了创伤弧菌和副溶血弧菌的检测,结果在部分海产品中能特异性地检测到目标菌株。该方法快速,灵敏度高,特异性强。为海产品的创伤弧菌和副溶血弧菌的检测提供了有效的方法。     

基于一种新基因的溶藻弧菌毒力菌株检测方法的建立

根据溶藻弧菌毒力菌株HN08155的1个新的特异性基因序列设计了1对特异性引物SDRHf和SDRHr,扩增产物大小为217 bp;以此引物对为基础成功建立了与HN08155具有相似遗传型的溶藻弧菌毒力菌株PCR快速分子检测试剂盒.该试剂盒具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,为海产品及水体中致病性溶藻弧菌的检测提供了一种有效方法.     

创伤弧菌物种特异性检测靶标基因的发掘及评价

实验根据GenBank公布的细菌全基因组数据,采用比较基因组学分析创伤弧菌与其它细菌基因组间的差异,筛选出34个潜在的创伤弧菌物种特异性检测靶标基因,其中VV1_2692、VV2_0075和VV2_0939这3个基因已有功能注释.常规PCR扩增结果显示这3个基因均具有良好的特异性和灵敏度.进而以这3个基因和传统靶基因vvhA作为检测靶标,采用常规PCR技术检测来自杭州市农贸市场的137份海产品中创伤弧菌,发现VV2_0075、VV2_0939和vvhA基因的检测结果与传统生化鉴定方法一致,表明新发掘的VV2_0075和VV2_0939基因在对海产品中创伤弧菌检测时具有很好的稳定性和很强的抗干扰能力.在137份海产品中创伤弧菌的检出率为28.5％,其中牡蛎的检出率最高(68％),表明杭州市农贸市场售卖的海产品,尤其是牡蛎中的创伤弧菌污染现状严重,应加强对杭州市海产品中创伤弧菌污染状况的监测.     

养殖大黄鱼病原弧菌多重PCR检测技术的建立和应用

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是浙江省养殖大黄鱼(Pseudnosciaena crocea)弧菌病的主要致病菌.本研究选择针对溶藻弧菌和副溶血弧菌的胶原酶基因,哈维氏弧菌的部分ToxR基因的特异性,优化设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,建立了一种检测致病性弧菌的多重PCR检测方法.经过琼脂糖凝胶电泳后的条带分析判断,可以在一个PCR管中同时成功地检测这3种病原细菌,含溶藻弧菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌3种致病弧菌核酸的阳性对照样品分别扩增出大小为737 hp、382 bp和271 bp的预期产物,其灵敏度是102～102 CFU/mL.将该方法应用于检测人工感染后的养殖大黄鱼病鱼肝脏和肾脏,结果在6份组织样本中,5份检出原始感染菌株,与API 20E鉴定结果相符;对弧菌病流行季节采集的未发病的16份养殖大黄鱼组织样本和16份水体样本进行抽检,结果在1份大黄鱼组织样本中检出哈维氏弧菌,7份水体样本中检出这3种弧菌中的1种或2种,鉴定结果与API 20E鉴定结果符合率为93.75%.说明该方法不仅可以检测发病鱼,还可以检测无病症带菌大黄鱼以及带菌水样,且说明海洋水体中存在着大黄鱼弧菌病的致病菌.结果说明,多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,可以缩短检测时间,降低检测成本,该方法的建立对养殖大黄鱼弧菌病的快速诊断和分子流行病学的调查具有重要意义.     

创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体的制备及其特性分析

[目的]制备创伤弧菌特异性抗体,为建立免疫学快速检测创伤弧菌提供参考依据。[方法]以创伤弧菌外膜蛋白作为抗原,将抗原分多次免疫新西兰大白兔获得特异性多克隆抗体,采用蛋白G亲和层析法纯化多克隆抗体,通过间接ELISA和Western Blot测定创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体的效价、敏感性和特异性。[结果]实验获得了纯度较高的创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体,效价为1∶64 000;抗体对创伤弧菌具有高的特异性,它与多株致病菌均无明显交叉反应,其对创伤弧菌检测灵敏度为103CFU/m L;Western Blot分析表明,制备的多克隆抗体能识别创伤弧菌外膜蛋白,创伤弧菌外膜蛋白具较强的抗原性。[结论]创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可应用于创伤弧菌的快速、灵敏的免疫学检测。     

仿刺参腐皮综合征病原灿烂弧菌RPA-Cas13a检测方法的建立

为预防和控制灿烂弧菌引发的仿刺参腐皮综合征，促进仿刺参养殖业的健康可持续发展，利用LwCas13a中特异性CRISPR RNA(crRNA)与靶RNA结合后可激活Cas13a蛋白对外源RNA分子附属切割活性的特征，结合重组酶介导的聚合酶扩增技术(RPA),建立1种针对灿烂弧菌gyrB基因的快速、灵敏、特异的定量检测方法——RPA-Cas13a。RPA-Cas13a可实现在37℃恒温下、60 min内对灿烂弧菌的快速实时检测。灵敏度测试结果显示，RPA-Cas13a检测限为550拷贝/μL(gyrB),与荧光定量PCR的检测灵敏度水平一致；特异性测试结果表明，RPA-Cas13a对创伤弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌等其他弧菌及产黑假交替单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌等常见水产动物病原菌均无交叉反应，特异性较强。RPA-Cas13a方法对仿刺参体表黏液(32份)、养殖池塘水体(15份)和表层沉积物(10份)等57份环境样本的阳性检出率为8.77%,与传统荧光定量PCR方法的检出一致性高(Kappa=1.00),无统计学差异(P>0.05)。试验结果表明，灿烂弧菌的RPA-Cas13a...     

哈维氏弧菌RT-LAMP检测方法建立与应用

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是引起海南省后水湾深水网箱养殖卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)"烂身病"的主要病原菌。为了能够快速诊断该病原菌,急需建立一种耗时短、准确以及便捷的检测方法。本研究利用分离到的致病菌株QT520的ToxR基因序列设计特异性引物和加入SYTO-9特异荧光染料,建立了一种可以实时、快速检测哈维氏弧菌的LAMP法(RT-LAMP)。该方法对哈维氏弧菌的基因组DNA及菌液灵敏度分别为100 fg/μL和10~3 cfu/mL,与Real-time PCR法检测灵敏度相当,比普通PCR的检测灵敏度要分别高1000倍和10倍,能有效区分哈维氏弧菌与坎氏弧菌(Vibrio campbellii);可以实时观察检测结果,且检测时间只需要40 min;具有耗时短、特异性和灵敏度高、仪器便携、操作简单且能实时观察检测结果等优点,非常适合在生产现场进行哈维氏弧菌的检测。     

基于toxR基因病原哈氏弧菌PCR检测方法的建立

基于toxR基因序列设计检测哈氏弧菌的1对特异性引物,通过PCR反应条件优化、PCR反应特异性及敏感性检测,建立一种哈氏弧菌的特异性分子检测方法.试验结果表明,该引物可使哈氏弧菌扩增出大小为390 bp的toxR基因片段,3种水产动物病原弧菌未扩增出任何条带,敏感性检测结果为该PCR反应最低能检测出0.375 ng/μ...     

哈氏弧菌特异性检测方法的建立和应用

针对哈氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列设计了一对引物,从分离自患病长鳍真鲨体内的哈氏弧菌基因组中扩增获得一段约800 bp大小的基因片段.进行了PCR方法的特异性和敏感性以及海产品检测试验,建立了一种检测致病性弧菌的PCR检测方法.结果表明,该法只检测出致病性哈氏弧菌.同时对不同浓度的细菌悬液扩增,结果显示,此方法对哈氏弧菌菌体DNA的最低检测量为0.139 ng/μL,可以为哈氏弧菌的检测提供参考依据.     

水产品中溶藻弧菌PCR-变性高效液相色谱检测方法的建立

采用DHPLC 技术检测溶藻弧菌特异性PCR扩增产物,优化分析条件,探讨其灵敏度特异性,并与传统检测方法进行了比较.试验结果表明,该方法有很好的特异性,灵敏度较高.得到溶藻弧菌PCR-DHPLC特征峰型图,样本检测的峰型图可用于定性或定量监测样本中溶藻弧菌的动态变化.建立的水产品中溶藻弧菌PCR-DHPLC方法具有广泛而良好的适用性.     

南海北部灯光罩网渔获组成及其对渔业资源的影响

近年来,灯光罩网在南海区迅速发展,给南海区北部沿岸浅水域幼鱼资源增大了捕捞压力.为了查明南海区灯光罩网渔业的渔获组成及其对渔业资源的影响,2006年4月27日～5月2日在阳江沿海水域进行了灯光罩网海上渔获组成调查.研究结果表明:(1)主捕对象是趋光性鱼类和头足类,枪乌贼Loligo sp.、带鱼Trichiurus haumela、蓝圆鲹Decapterus maruadsi、康氏马鲛Scomberomorus commerson、刺鲳Psenopsis anomala、乌贼Sepia sp.、赤鼻棱鳀Thrissa kammalensis、乌鲳Formio niger、杜氏棱鳀Thryssa dussumieri和竹筴鱼Trachurus japonicus是南海北部灯光罩网的常见渔获种类;(2)幼鱼渔获比例高,损害海洋渔业资源严重;(3)网目尺寸小、灯光照度大和近岸渔场是导致幼鱼渔获比例高的主要成因.笔者建议规定最小网目尺寸和加强渔具管理.     

福建海洋渔业生态环境研究现状及发展趋势

海洋渔业环境污染和生态退化已成为制约福建省海洋渔业可持续发展的主要问题。进行海洋渔业水域生态环境的研究，对海洋渔业资源和渔业环境的保护起着重要作用，可为海洋渔业的健康持续发展提供理论和技术支撑。本文根据近年来福建沿海渔业水域生态环境的研究资料，综述了福建沿海渔业生态环境的研究现状，分析了目前以及今后海洋渔业生态环境研究...     

杭嘉湖平原地区内河水域渔政管理面临的问题与对策——以平湖市为例

杭嘉湖平原地区内河水域捕捞业较为发达,渔政管理在社会管理中占有举足轻重的地位。随着经济社会快速发展,渔政管理工作也面临着一些新的问题。本文以平湖市为例,探讨了近几年内河渔政管理面临的主要问题,并从实际出发提出了一系列针对性的措施,取得了较好的效果,可供其他地区的渔政管理部门参考。     

闽东海区流刺网渔业的现状分析

根据2000－2001年对闽东地区流刺网渔业的社会调查资料，研究分析了闽东海区流刺网渔业的利用现状，存在问题和发展趋势。提出了控制内湾，沿岸海域小网目流刺网作业的数量规模；调整近海捕捞结构，优化捕捞资源的合理配置；优先扶持，达量发展近海和外海大中型流刺网作业管渔业管理意见。     

微塑料在海洋渔业水域中的污染现状及其生物效应研究进展

海洋塑料污染已成为与全球气候变化、臭氧耗竭、海洋酸化并列的重大全球环境问题，其中尺寸小于5 mm的塑料碎片或颗粒(微塑料)更是倍受全球关注的新型污染物。研究表明，微塑料在海洋渔业水域中广泛存在，而且，作为人类优质蛋白重要来源的海洋渔业生物也已受到微塑料的污染。因此，微塑料在海洋渔业水域中的污染现状及其生物效应研究越来越受到关注。本文总结了海洋渔业水域中微塑料的主要来源及污染现状，归纳了微塑料对海洋渔业生物的主要毒性效应及致毒机制，探讨了微塑料沿食物链的传递作用及其对水产品质量安全的潜在影响，剖析了当前研究所面临的问题，并对未来的研究工作进行了展望，以期为科学评估微塑料对海洋渔业资源和水产品质量安全的影响提供科学依据。     

中国渔业生态标签制度研究

渔业生态标签制度利用市场激励机制和消费者对绿色渔产品的偏好,引导生产者自觉关注环保,促进渔业可持续发展,是一种有效的渔业管理手段。中国目前有无公害渔产品、绿色渔产品和有机渔产品3种生态标签认证制度,它们在实施过程中存在标准不统一,缺乏有效监督管理机制,且与国际标准不相一致等问题,因而需要根据国际标准建立统一的国家标准,并通过制定完善相应法规建立配套的渔业标签监管机制,以完善中国的渔业生态标签制度。     

应用双抗夹心ELISA法检测皱纹盘鲍致病病原—创伤弧菌的研究

以皱纹盘鲍脓足病致病病原－ － 创伤弧菌为抗原,制备兔抗血清,抗体纯化后以辣根过氧化物酶标记,建立检测创伤弧菌的双抗夹心ＥＬＩＳＡ 检测法。结果表明,双抗夹心ＥＬＩＳＡ 法有较高的灵敏度,可检出含菌１０４ 个／ｍｌ 的菌悬液。与创伤弧菌对照菌株有明显的阳性反应不与副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、河流弧菌等８ 株对照菌株产生影响检测结果的交叉反应。应用该法检测３０ 份病鲍样品,阳性检出率为６６ ．７ ％ 。     

Trends in import and export of fishery products in the Czech Republic during 2010–2015

There has been a worldwide increase in consumption of fish from open waters and aquaculture during the last decades. In 2013, the Czech Republic was the sixth largest producer of fish within the EU, with annual production of 20,135 tonnes. However, during the period 2010–2015 import of fishery products to the Czech Republic increased from 39,098 to 43,399 tonnes. The monetary value of import increased by 81 % from 90.2 million EUR in 2010 to 169.9 million EUR in 2015. In 2010, the major imported fishery product was frozen fillets of sutchi catfish (Pangasianodon hypophthalmus) from Vietnam (8872 tonnes). In 2015, the most imported fishery product was whole chilled salmon (Salmo salar) from Norway (6897 tonnes). During 2010–2015, the export of fishery products increased from 18,167 to 22,134 tonnes, which is an increase by 21.8 %. The value of export has increased by 80 % from 54.5 million EUR in 2010 to 98.1 million EUR in 2015. The major exported fish was live common carp (Cyprinus carpio) at volume of 7545–9075 tonnes. This study looks at changes in market, volume and value of fish imported and exported during the last 6 years.     

哈萨克斯坦渔业主要水域环境现状及保护对策

分析了哈萨克斯坦渔业主要水域的环境现状。伊犁河（Ile River）-巴尔喀什湖（Balhash Lake）、乌拉尔河（Oral River）-里海（Caspian Sea）、锡尔河（Ser River）-咸海（Aral Sea）、额尔齐斯河（Ertis River）-斋桑泊（Zai-sang Lake）均受不同程度的污染,污染物有化肥、农药、石油产物、重金属及含氮化合物、氯化物、硫酸盐,来源包括国内外两个渠道。污染物破坏渔业主要水域生境,对水生物种（鱼类）的安全造成威胁,导致了水生生物资源衰竭。国家有关管理部门应采取相应标准化管理措施,依法执行治理工作,防止国外污染物进入本国渔业水域;并通过和邻国联合对哈国渔业主要水域环境及生物资源开展保护与利用研究,确保本国主要渔业水域生态环境的可持续发展,保护与合理利用人类共有资源。     

浙江沿海水域温、盐度的年际变化和渔况变动的关系

本文使用 1960—1989 年期间浙江沿海各海洋站的海表温度、盐度、海洋水文断面观测以及长江径流量资料,据相关和谱分析方法分析了浙江沿海水域温、盐度和长江径流量的年际变化,其相互之间以及与渔况的关系。指出浙江沿海水域温、盐度、长江径流量和渔况均明显存在2.5年的周期变化。在2.5 年变化周期上,这些要素变化关系密切,部分地与El Nino/La Nina 事件相联系。每当浙江沿海水域海表温、盐度和长江径流量发生持续的异常,渔况必发生变化。可据温、盐度、长江径流量的长周期变化预测渔况的长周期变化。