栉孔扇贝大规模死亡致病病原的研究

对2000-2002年山东沿海6个疫区患病栉孔扇贝进行电镜观察，在消化腺、外套膜、肾和肠的结缔组织细胞和间质细胞中发现一种球形病毒．并引起相直的病理学变化。该病毒具囊膜，直径为130～170nm，核衣壳直径为90～140nm。病毒分离纯化后．观察到的病毒囊膜表面覆有长20nm的纤突。病毒在细胞质中的囊泡样结构内完成装配，其内未发现包涵体存在。从发病疫区栉孔扇贝组织中分离出病毒毒种对键康扇贝进行人工感染。结果显示，各感染实验组发病扇贝表现出与自然海区发病扇贝相同的临床症状。病毒注射组死r二率为?5％，病毒浸浴组死亡率为68．7％．灭活病毒注射组和空白对照组死亡率皆为12．5％。病毒注射、浸浴组与灭活病毒注射组、空白对照组死亡率差异显著。电镜复检结果显示，各感染实验组发病扇贝组织中分布有大量病毒粒子，与自然海区发病扇贝组织所观察到的病毒粒子在形态特征和病理学特征上完全一致。以上结果证明，病毒是导致栉孔扇贝大规模死亡的直接病原。     

中国对虾淋巴组织培养中的病毒及病理观察

通过对中国对虾的淋巴器官和经过培养的养殖、海捕中国对虾的淋巴组织细胞进行电镜观察 ,均发现在细胞内存在一种形状为球形 ,有囊膜 ,平均直径为 136nm的病毒 ,病毒分布于细胞质内 ,或成团存在 ,似为一种虹彩病毒 ;在养殖对虾淋巴器官及培养过的组织细胞中还发现另一种病毒 ,病毒粒子为正二十面体 ,无囊膜 ,平均直径为 33nm ,分布于细胞质中 ,似为一种小RNA病毒。在体外培养淋巴组织过程中 ,病毒在细胞内没有明显增殖迹象。感染病毒的细胞呈现细胞核固缩 ,细胞质空泡化 ,线粒体内嵴模糊 ,粗面内质网水肿等一系列病理变化。对淋巴组织切片进行光镜观察 ,发现淋巴器官组织部分坏死 ,有些细胞核肿大 ,苏木精深染 ,严重的细胞核结构已经被破坏。     

栉孔扇贝急性病毒性坏死症(AVND)病理学观察与分析

2000~2002年,应用光镜和电子显微技术对AVND发生期间栉孔扇贝(Chlamys farreri)各主要组织器官病理变化进行了连续观察。光镜观察显示,除生殖腺、闭壳肌外,濒死栉孔扇贝的外套膜、鳃、肾、消化腺和肠组织都有不同程度的组织病理变化。病灶主要出现在上述各器官的结缔组织以及上皮组织,病理变化表现为细胞核肿大、固缩、破裂,核染色质边缘化或空泡化,受感染细胞崩解、脱落,留下大片均质无结构的空白区域,形成凝固性坏死,结缔组织细胞质中有嗜碱性包涵体样颗粒存在。电镜观察显示,在病灶出现的组织细胞内,细胞核染色质异常凝集和边缘化、核膜周隙扩张或溶解。细胞器病理变化明显,内质网扩张,核糖体脱落,有髓鞘样小体出现;线粒体肿大、嵴融解,整个细胞出现解体现象。病变的结缔组织细胞与间质细胞细胞质中有大量直径为130~170nm、具有囊膜的球形病毒粒子存在,负染电镜观察表明,病毒囊膜表面覆有长20nm放射状纤突。病毒的发生基质在细胞质内,并被一膜性结构所包围。病毒在宿主细胞中的繁殖分为3个阶段,即病毒发生期、病毒装配期和病毒释放期。病理学观察证明,病毒感染与病理变化具有明显的相关性。     

大鲵虹彩病毒的形态结构及其包涵体特征

运用电镜和免疫荧光技术,对纯化的大鲵(Andrias davidianus)虹彩病毒粒子、感染病毒的EPC细胞以及确诊感染病毒的病鲵组织样品进行观察和分析。结果表明,纯化的大鲵虹彩病毒负染后电镜下显示球形结构,具囊膜,直径约150 nm;感染EPC细胞中的病毒颗粒呈典型的正二十面体结构,由核衣壳和核心构成,核衣壳呈正六边形,对角直径为(150±5)nm(N=30),核衣壳厚度约5 nm,核心直径为(98±18)nm(N=27)。在病鲵病变的肺和肾组织中发现存在大量聚集或分散的病毒颗粒,其形态特征和感染EPC细胞超薄切片观察的结果一致。免疫荧光电镜观察结果显示,感染病毒的细胞可观察到明显的红色荧光信号,且呈斑块状分布,大小不等。综合大鲵虹彩病毒初步的形态发生和免疫荧光观察结果,认为病毒感染细胞后在不同的发生时期会形成不同类型的病毒包涵体。     

养殖扇贝几种常见疾病及防治

1 栉孔扇贝的球形病毒病 1.1 病原 球形病毒。王崇明等(2002)报告了栉孔扇贝(Chlamys farreri)的球形病毒病。病毒粒子近似圆形,大小为130～170nm,核衣壳直径为90～140nm。具有囊膜,厚约7～10nm,囊膜与核衣壳之间的间距为13～16nm,囊膜表面覆有长20～25nm的纤突,囊膜纤突致密地镶嵌成规则的毛边样。无包涵体。     

海湾扇贝一种球形病毒的形态发生及细胞病理学观察

2001年3-5月,青岛海区养殖海湾扇贝发生外套膜"糜烂病"并导致约50%亲贝死亡,主要表现为外套膜糜烂;严重者,约2/3的外套膜溃烂呈胶水状.电镜检测发现病贝体内感染有病毒等病原微生物.本文报道了该病毒粒子的形态、发生及宿主细胞由此所产生的细胞病理学变化.成熟的病毒粒子近球形,直径150～180nm,具囊膜,在细胞核附近的溶酶体内发生和增殖.发生初期溶酶体内形成板层髓样结构,随后形成块状、泡状、絮状等多形态的病毒发生基质及具有正方形花样的蛋白质晶格结构.最后,大量的病毒粒子装配形成,填充在溶酶体内.该病毒粒子主要存在于消化盲囊上皮细胞及结缔组织细胞的胞质中.受感染的宿主细胞线粒体肿胀、嵴溶解,内质网肿胀、核糖体脱落,溶酶体数量增多,核膜膨胀、溶解等,大部分细胞器受损.     

猪伪狂犬病的防控

<正>伪狂犬病毒属于疱疹病毒科(Herpesviridae)、猪疱疹病毒属,病毒粒子为圆形,直径150～180nm,核衣壳直径为105～110nm。病毒粒子的最外层是病毒囊膜,它是由宿主细胞衍生而来的脂质双层结构。囊膜表面有长约8～10nm呈放射状排列的纤突。     

中国对虾淋巴细胞培养中的病毒及病理观察

通过对中国对虾的淋巴器官和经过培养的养殖,海捕中国对虾的淋巴组织细胞进行电镜观察,均发现在细胞内存在一种形状为球形,有囊膜,平均直径为１３６ｎｍ的病毒。病毒分布于细胞质内,或成团存在,似为一种虹彩病毒;在养殖对虾淋巴器官及培养过的组织细胞中还发现另一种病毒,病毒粒子为正二十面体,无囊膜,平均直径为３３ｎｍ,分布于细胞质内,似为一种小ＲＮＡ病毒。     

养殖中华鳖出血病病毒的电镜观察

本文应用电镜超薄切片技术，观察了福建省四个主要养鳖县市现场采集的鳖出血病样品，首次发现了一种感染养殖中华鳖的球形病毒（Trionyx sinensis spherovirus,TSSV）。该病毒分布在肺、胃、咽喉粘膜和腹甲皮层。主要靶细胞是这些组织的小血管和毛细血管的内皮细胞。TSSV粒子近球形，直径35-39nm，无囊膜包被，有的成群聚集在内皮细胞质中，有的由单位膜包裹在包涵体中，病毒感染的内皮细胞病变明显。本文还讨论了TSSV与出血病的关系。     

牡蛎疱疹病毒对魁蚶的致病性

为探明牡蛎疱疹病毒(Os HV-1)对魁蚶的致病性,本研究使用发病魁蚶组织制作病毒悬液进行感染实验。感染实验分为空白组、阴性悬液注射组和病毒悬液注射组,并使用实时定量PCR法对感染后魁蚶体内病毒的时空分布进行检测。实验结果显示,空白组和阴性悬液组魁蚶感染后未检测到病毒粒子,病毒悬液注射组魁蚶经人工感染后,各部位病毒含量均呈先上升再下降随后又上升的趋势,最终达到106拷贝/ng DNA左右。通过电镜观察,在感染魁蚶的鳃、肝胰腺、外套膜中出现染色质边缘化甚至消失,细胞核肿胀、溶解,核仁消失,核膜扩张、不清晰,线粒体肿大,脊崩解,核糖体脱落等一系列细胞病理变化。在其细胞核和细胞质中均能发现大量直径为90~110 nm球形病毒粒子,该病毒粒子具囊膜,囊膜内可见均匀高电子密度的核衣壳,与自然发病魁蚶负染电镜中的病毒粒子形态相同。研究结果表明,Os HV-1可以感染魁蚶并与魁蚶大规模死亡有直接相关关系;魁蚶感染Os HV-1后机体产生应激反应,对Os HV-1有一定抑制作用,但其作用机制还有待进一步实验验证。     

山东省刺参养殖产业现状分析与可持续发展对策

对近几年迅猛发展起来的山东省刺参养殖产业状况进行了详细的调查研究与分析。山东省作为我国刺参养殖的主产地,初步构建了刺参养殖优势产业带。以烟台、威海、青岛等地区为原主产区的刺参养殖属刺参优势产业带,主导着行业的发展;东营、滨州二地市属开发引进刺参养殖新兴产业带,证明在我省西部部分沿海实施"东参西养"是可行的;以日照、莱州地区为主的深水井大棚工厂化养参属新模式开发优势产业带,成为2007年以来刺参养殖的新亮点。此外,本文系统总结了山东省刺参养殖产业发展所面临的问题与挑战,提出了发展对策,对山东省乃至我国刺参养殖业的健康可持续发展具有很好的指导意义,并为相关主管部门的决策导向提供了可靠的理论依据和技术支持。     

五种海洋生物葡萄糖磷酸变位酶和磷酸葡萄糖异构酶的同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳方法对虾夷马粪海胆（Strongylocentrotus intermedius）、刺参（Apostichopus japonicus Selenka）、半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）、文蛤（Meretrix meretrix）和虾夷扇贝（Pecten yessoensis）不同组织中的葡萄糖磷酸变位酶（PGM）和磷酸葡萄糖异构酶（GPI）进行了检测分析。结果发现，虾夷马粪海胆肌肉组织和成熟性腺组织中的PGM有较强的表达活性和表达位点差异，两种组织中GPI活性稍差。刺参的肠道组织和肌肉组织只有PGM和GPI表达活性的差异，而无位点差异。半滑舌鳎肌肉组织检测到两个PGM位点，三个GPI位点。文蛤闭壳肌组织PGM表现出非常高的多态性，而GPI表现为单态。虾夷扇贝闭壳肌组织的PGM和GPI各只检测到一个位点，遗传变异程度比较低。以PGM和GPI为指标，对我国北方5种重要海水养殖品种的同工酶遗传变异水平和其它相关遗传参数进行了分析，对群体遗传结构可能的变化规律以及与某些性状的相关性进行了探讨，这些参数对它们的遗传选育有一定的指导作用。     

浙南室内水泥池刺参度夏试验

通过自然常温饲育和人工控温(23.6±0.5)℃的降温饲育,研究了3种规格体质量(10、20、50个/kg)刺参于浙江南部海区室内水泥池的度夏。结果表明,常温饲育下,3种规格的刺参体质量均呈负增长,且特定负生长率随着刺参体质量的增加而升高;降温饲育下,10个/kg与20个/kg体质量刺参组呈负增长,而50个/kg体质量刺参组略呈正增长,第30 d与第60 d的特定生长率分别为0.0496%与0.0513%。降温(23.6±0.5)℃饲育能有效提高刺参度夏时的存活率,有效降低刺参的特定负生长率,且刺参体质量越大,有效降低的体质量下降幅度也越大。在浙江南部海区室内水泥池养殖刺参,温度保持在(23.6±0.5)℃时,50个/kg的刺参不夏眠。     

饲料中添加甘薯(Ipomoea batatas)块根与茎蔓对刺参(Apostichopus japonicus)生长和非特异性免疫力的影响

在刺参(Apostichopus japonicus)配合饲料中添加不同比例(10％、20％、30％、40％、50％、60％)的甘薯块根粉与甘薯茎蔓粉,测定了添加2种甘薯饲料成分对刺参生长和非特异性免疫力的影响.结果显示,在50 d实验期间,投喂添加甘薯块根粉饲料的实验组刺参平均体重随实验时间呈上升趋势,实验结束时,添加20％甘薯块根粉组终末体重显著高于对照组(P＜0.05),10％、30％组特定生长率(SGR)与对照组差异不显著(P＞0.05);投喂添加10％甘薯茎蔓粉的实验组刺参SGR与对照组差异不显著(P＞0.05),其余各组SGR均低于对照组(P＜0.05).投喂添加10％、20％甘薯块根粉饲料的实验组刺参体腔液中过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)均显著高于对照组(P＜0.05);投喂添加10％甘薯茎蔓粉饲料的实验组ACP显著高于对照组(P＜0.05),刺参体腔液中的溶菌酶(LZM)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、CAT和AKP与对照组差异不显著(P＞0.05).研究表明,当甘薯块根与茎蔓的添加比例分别在30％和20％以下时,可满足刺参的营养需求,促进或保证刺参的生长,提高刺参免疫能力.     

裂壶藻对刺参生长、免疫及消化酶的影响

以初始平均体重为(12.5±2.0)g的刺参为研究对象,在室内玻璃钢桶内进行了56 d饲喂实验。以基础饲料为对照组(A),研究基础饲料中分别添加0.5%(B)、1.25%(C)、2.0%(D)的裂壶藻对刺参生长、免疫及消化酶的影响。结果表明,C组、D组可显著提高刺参的特定生长率(SGR)(P0.05)。C组和D组刺参体腔液碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、吞噬活性、肠道淀粉酶均显著高于对照组(P0.05)。C组的体腔液呼吸爆发活性和肠道蛋白酶活性显著高于对照组(P0.05)。B组的AKP、LZM、肠道淀粉酶活性均显著高于对照组(P0.05)。饲料中添加裂壶藻各处理组刺参成活率均为100%。实验结果表明,1.25%-2.0%裂壶藻添加量可显著提高刺参的生长速度和免疫酶活性;饲料中添加1.25%裂壶藻能够显著增加刺参肠道的蛋白酶、淀粉酶的消化活性:裂壶藻有作为刺参营养添加剂的应用前景。     

辛硫磷对刺参幼参的急性毒性效应

研究了静水条件下辛硫磷对刺参幼参(0.8±0.1)g的急性毒性试验,以期为海参养殖环境监测提供理论依据。利用Bliss法,得出辛硫磷对刺参幼参在24、48、72 h半致死质量浓度分别为0.329、0.1970、.141 mg/L,并计算出安全质量浓度为0.021 mg/L。     

不同强度和颜色的光对仿刺参幼参聚集行为的影响

在水温9.0~16.0℃下,进行了2个室内受控实验,研究不同强度和颜色的光对仿刺参幼参（Apostichopus japonicus Selenka（）体质量0.10~0.17 g）聚集行为的影响。实验1：将仿刺参幼参放在覆以黑色塑料布的白色塑料水槽（50 cm×40 cm×30 cm）中,在距水槽7 cm的一端分别放置15 W、25 W、40 W、60 W和100 W的白炽灯泡,连续照射24 h,每隔2 h观察、记录仿刺参在水槽中不同区域的分布。实验2：在微流水的循环水槽中央的大方槽中放50头大小均一的健康仿刺参幼参,水槽底部有1.5 cm高的空隙与两侧的6个小方槽相通。5个小方槽中上方分别放红、黄、绿、蓝、白色的节能灯,波长分别为639、587、548和435 nm,另一个小方槽中无光照作对照。在循环水槽上方加盖不透光的厚纸板,12 h光照＋12 h黑暗,每隔3 h观察记录仿刺参在各小方槽中的数量,4 d为一个实验周期,重复8次。结果表明：在实验光照强度下,仿刺参均在距光源最远的Ⅳ区域中数目较多,其中40 W（光照强度为12~19 lx）时聚集的最多。仿刺参在红色光区的聚集数目明显高于其它光色区,其中红光与蓝光、白光差异极显著（P〈0.01）,红光与黑暗对照差异显著（P〈0.05）,白光与绿光差异显著（P〈0.05）。实验发现,红色光为仿刺参敏感的光色。     

底管微孔增氧技术对参池环境及刺参生长的影响试验

对黄河三角洲地区底管微孔增氧机在刺参养殖池塘中的应用进行了试验,对底管微孔增氧技术对参池环境和刺参生长的影响进行了研究。结果表明,在参池中合理使用底管微孔增氧机可显著增加参池溶氧,并显著提高刺参重量,是一种值得推广的新型增氧技术。     

养殖刺参早期发育阶段体内可培养细菌的菌群特征及其与环境菌群相关性分析

采用传统细菌培养方法，对养殖刺参(Apostichopus japonicus)早期发育各阶段幼体体内及环境(投入饵料及培育用水)菌群的组成与结构展开研究，对分离的优势细菌进行分子鉴定，在此基础上，进行了刺参幼体体内菌群结构与环境菌群结构相关性分析。幼体各发育期的细菌培养结果显示，在幼体开口前的各发育时期(性腺、卵、受精卵、原肠胚)均无可培养细菌，在投饵以后，耳状幼体、樽形幼体体内可分离到可培养细菌，幼体发育到稚参以后，消化道可培养细菌总数急剧增加，并在4月龄时达到108 CFU/g数量级。在幼体体内可培养细菌中，弧菌(Vibrio)占比为2.2%~77.3%。对环境菌群的细菌培养结果显示，培育用水中细菌含量变化不显著，随着幼体发育期饵料的转变，不同时期饵料中细菌含量差异显著。整个养殖系统中共分离到65株优势细菌，16S rDNA鉴定结果显示，所分离的65株优势菌鉴定为14个属43种细菌。相关性分析结果显示，随着幼体的发育，生物饵料中的细菌对消化道中的菌群结构影响越来越大。本研究结果为解析刺参消化道菌群的形成过程和演替规律以及养殖用益生菌的筛选与应用奠定了基础。     

参虾池塘高效混养技术

7-9月刺参夏眠期间正是日本对虾快速生长的季节,在对虾池中人工造礁,第1年4月放入规格为80～120头/ kg的海参苗1740 kg,每年7月放入体长0.7～1.0 cm的日本对虾虾苗1.2×105尾,将刺参与日本对虾混养.在养殖过程中,刺参不投喂,只用卤虫、人工饲料、杂色蛤和四角蛤蜊投喂日本对虾,严格控制养殖池内的杂鱼虾,保持水质新鲜,可提高日本对虾和刺参的成活率,利用两者饵料和空间互补性,可显著提高虾池的利用率和经济效益.