微卫星标记对红鳍东方鲀繁殖的指导应用及遗传分析

利用已有设计的20个具有多态性的微卫星标记对16尾红鳍东方鲀亲鱼(10尾♂,6尾♀)的有效等位基因数、观望杂合度、期望杂合度、多态信息含量、遗传相似性系数、遗传距离等进行了检测.据此设计了10对亲鱼配组,获得10个子代家系.其中母本中16和8号的平均有效等位基因数和平均期望杂合度较其他亲本高,将其分别与3个父本配组,其他则参照遗传距离进行配组.于次年,对F110个家系的体质量、体长均值进行了比对,发现16♀与11♂配组得到的子代体质量、体长均值为最大.8♀和10♂配组得到的子代体质量、体长均值最小.结果表明,红鳍东方鲀子代杂种优势与亲本个体差异有关.     

放流三疣梭子蟹遗传多样性和贡献率初步研究

近年来我国沿海三疣梭子蟹自然资源明显下降,为恢复现有资源,辽宁省自2012年开始,连续实施了4年大规模人工放流工作。在目前的增殖放流中,为检测参与繁殖的三疣梭子蟹亲本和即将放流的子代间的遗传差异以及亲本对其子代的繁殖贡献率水平,利用10对具有丰富遗传多态性的微卫星分子标记,分别对9只三疣梭子蟹雌性亲本和179只即将放流的子代进行了遗传多样性分析及亲子鉴定。结果发现,子代的平均观测杂合度、平均期望杂合度和平均多态性信息含量数值均低于参与繁殖的雌性亲本,亲本和放流子代之间在观测杂合度、多态性信息含量参数方面并无显著差异(P0.05),但期望杂合度遗传参数存在显著差异(P0.05),子代的遗传多样性较雌性亲本呈下降的趋势。使用4个微卫星分子标记时,累积排除率≥0.998,亲子鉴定的准确率为56.98%;微卫星分子标记为6个时,累积排除率≥0.9999,准确率达到97.21%;当使用8个微卫星分子标记鉴定时,准确率达100%。同时发现,9只雌性亲本对子代均有贡献,最高为29.61%,最低为3.35%,不同亲本之间的贡献率存在显著差异(P0.05)。研究表明,微卫星可以作为有效的标记手段用于三疣梭子蟹增殖放流遗传评估中。上述试验结果将为我国三疣梭子蟹增殖放流的科学发展提供基础资料。     

基于标记系谱的红鳍东方鲀生长性状遗传分析

利用分子标记辅助家系选育进行红鳍东方鲀生长性状的遗传评估,由红鳍东方鲀基础群体中选择性腺发育良好的雌雄亲本各11尾建立全同胞家系11个,每个全同胞家系随机采集10尾个体组建全同胞家系群体,从混合培育的家系中选择相对较大的个体400尾组建混合选育群体。在红鳍东方鲀遗传连锁图谱上挑选44个均匀分布于22个连锁群上的微卫星DNA标记,每个连锁群有2个标记。全同胞家系群体的遗传分析结果显示,10个高亲本排除概率微卫星标记的Excl(1)和Excl(2)为0.58~0.662和0.736~0.797,14个低亲本排除概率标记的Excl(1)和Excl(2)为0.054~0.43和0.177~0.608,剩余20个中等亲本排除概率标记的Excl(1)和Excl(2)为0.467~0.575和0.641~0.732。利用拥有高亲本排除概率的微卫星DNA标记进行混合选育群体的亲权鉴定,结果显示:不同父母本繁殖产生的子代数量存在明显差异,父本M2和母本F4产生了124个子代,占子代个体总数的32.89%。根据亲权鉴定结果建立的系谱估计主要生长性状的遗传参数,不同日龄的体质量和体长遗传力估计值为0.17~0.21和0.15~0.18。研究表明,利用具有高亲本排除概率的微卫星DNA标记能够有效建立红鳍东方鲀系谱,进行生长性状的遗传参数估计,分子标记辅助家系选育可以作为红鳍东方鲀目标性状遗传改良的新方法。     

日本对虾养殖群体两个世代遗传结构的微卫星分析

利用8对微卫星引物对日本对虾养殖群体两个世代的遗传结构进行了分析,共检测到108个等位基因,等位基因长度为196-528 bp,各位点等位基因数为6-23个。亲本和子代群体每个位点平均等位基因数目分别为8.5个和11.5个,平均观测杂合度分别为0.721和0.632,平均期望杂合度分别为0.775和0.764,平均多态信息含量分别为0.732和0.729。根据标记信息,利用最大似然法对两个世代的个体分别进行系谱结构推断,亲本群体划分为6个群体,群体间遗传距离为0.277-2.356,均值为1.510;子代群体划分为17个群体,群体间遗传距离为0-2.593,均值为1.113。亲本和子代分群体间的遗传距离变化范围为0-3.089,均值为1.238。根据各分群体间的Nei's遗传距离,用非加权组平均法(UPGMA)构建了日本对虾两个世代的遗传进化树。其中18个分群体(4个亲本群体和14个子群体)经过聚类后形成3个分支,其余5个分群体(两个亲本群体和3个子群体)明显偏离于主支。研究发现,子代的观测杂合度明显低于亲本,说明子代在继承亲本遗传信息的过程中已经丢失了一定的杂合性。     

牙鲆家系亲权鉴定的微卫星DNA标记分析

为准确进行不同家系的亲权鉴定,筛选具有高亲本排除概率的微卫星DNA标记,从牙鲆选育基础群体中挑选性腺发育良好的雌雄亲本各10尾建立全同胞家系10个,从独立饲养的每个家系中随机选取30尾个体组成系谱结构已知的家系群体,从混合培育的子代群体中随机选取200尾个体组成系谱结构未知的混合群体。48个微卫星DNA标记选自牙鲆第二代遗传连锁图谱,且均匀分布于24个连锁群上,每个连锁群2个标记。家系群体的遗传分析结果发现,10个拥有丰富遗传多态性的微卫星DNA标记表现出高的亲本排除概率,其Excl1和Excl2的范围分别为0.655~0.719和0.792~0.837。随鉴定所用微卫星DNA标记数目的增加,累计排除概率逐步升高。当使用8个微卫星DNA标记鉴定时,累计排除概率达到100%。利用这些标记开展混合群体的亲权鉴定,显示共有13个雌雄个体参与繁殖过程,不同亲本配组产生的后代数量存在差异,亲本与后代群体之间的各项遗传学统计指标不存在明显差异。研究表明,筛选出具有高亲本排除概率的微卫星DNA标记能够有效进行牙鲆家系的亲权鉴定,可以作为今后开展家系选育与DNA分子标记联合育种的候选标记。     

用微卫星标记鉴定和分析德国镜鲤的家系及遗传结构

为选育抗疱疹病毒的德国镜鲤(Cyprinus carpio var.mirror carp)新品种,2012年在F1抗病家系基础上,构建27个家系,同池养殖。本研究采集经疱疹病毒感染存活个体,应用多态性微卫星标记对构建的27个德国镜鲤家系进行鉴定和遗传结构分析。结果显示:(1)4个位点累计排除率为99.9%,亲本与子代的配对率为100%(P=0.05);(2)在27个家系的4个位点中检测到32个等位基因,每个位点7~10个等位基因,期望杂合度为0.6796~0.8019,平均期望杂合度为0.7510;(3)8个家系处于Hardy-Weinberg平衡状态下,19个家系处于不平衡状态下(P<0.05),其中有15个家系为极显著不平衡(P<0.01);(4)27个家系间遗传距离为0.1751~0.8772,平均值为0.4425,聚类分析中,27个家系主要聚在两个分支上,其它家系分散于不同分支。结果表明:27个家系具有较高的遗传多样性,家系间遗传分化明显,大部分家系因病毒选择作用偏离Hardy-Weinberg平衡。家系群体遗传结构研究结果将为下一步品种选育工作提供重要的理论依据和技术支持。     

微卫星分子标记指导镜鲤群体选育

本文用26个扩增效果好的微卫星分子标记分析了镜鲤（Cyprinus carpio L.）养殖亲本群体的遗传结构,指导其群体选育。本研究共检测到153个等位基因,片段大小为108~400 bp,平均等位基因数（A）5.8846个,平均有效等位基因数（Ne）2.8625个,平均观察杂合度（Ho）0.5063,平均期望杂合度（He）0.5602,平均多态信息含量（PIC）0.5292,表明该繁育群体处于较高的遗传多样性水平。用χ2检验和遗传偏离指数估计Hardy-Weinberg平衡,表明群体处于平衡状态,但在多个位点表现出杂合子缺失严重,显示出人工选择的痕迹。用PHYLIP3.6软件绘制基于Nei氏标准遗传距离的UPGMA聚类图,依据亲本个体间的遗传差异,以避免近亲交配为原则,建立最佳亲本配组体系,繁育获得2个选育群体,以常规群体繁育子代群体作为对照组,对子代群体的遗传结构及数量性状分析显示,选育群体保持了较高的遗传多样性水平,群体平均期望杂合度在0.5414~0.5449之间,其生长速度较对照群体快14.81%~63.71%。连续2年的生长实验证实,微卫星标记指导群体选育技术在保持群体的遗传多样性水平,避免近交衰退,快速建立优良种群方面具有一定的优势。     

微卫星DNA标记用于三疣梭子蟹家系亲子关系的鉴定

以定向交尾技术构建的4个谱系清晰的家系为材料,检测两对微卫星标记Pot17和Pot42在三疣梭子蟹家系鉴别中的应用效果。结果表明,两个位点在4个家系的5个已知父母本和98个后代中共检测出11个等位基因,其中Pot17位点6个,Pot42位点5个。分析显示,上述检出的等位基因频率在0.0291和0.3592之间,Pot17和Pot42位点的期望杂合度分别为0.7740和0.7577,观测杂合度分别为0.6214和0.6796,多态信息含量分别为0.7373和0.7129。根据已知亲本和子代基因型,推断出了4个家系全部亲本的基因型。Pot17和Pot42微卫星标记具有达0.995的较高累积个体识别率,可以用于三疣梭子蟹的亲子关系鉴定。     

微卫星分子标记辅助镜鲤家系构建

用微卫星标记辅助进行镜鲤(Cyprinus carpio L.)家系的建立及选育,通过对亲本遗传结构及遗传差异的分析,预测产生优良家系的最佳配组。用28个微卫星分子标记评估松浦镜鲤亲本群体的遗传潜力,结果显示,群体的多态信息含量(PIC)达到0.5627,处于高度的遗传多样性水平,具备进一步繁育筛选优良群体的潜质。用x2检验和遗传偏离指数(d)估计Hardy-Weinberg平衡,结果表明群体处于平衡状态,但在16个位点表现出杂合子缺失,这可能跟长期的人工选择有关。依据个体间的遗传距离,连续2年共建立1对1亲本的繁育家系70个,用网箱分别养殖,2月龄家系体长均值为7.24～10.60cm,体质量均值为14.02～40.63g,方差分析显示家系间体长、体质量差异均极显著;对其中4个家系1龄鱼种生长情况及遗传结构分析也表明家系间的遗传分化较大,近交系数(Fst)达到0.1537,家系的多态信息含量在0.3056～0.4077之间,保持中度多态水平。由子代家系的生长和遗传结构两方面的实验结果证实了微卫星在辅助家系建立尤其是亲本选配方面具有较好的预测性,所获得的家系差异较大,具备进一步选育优良家系的潜力,从而证实了用此方法对现有镜鲤种质进行遗传改良是可行的。     

利用微卫星标记进行马氏珠母贝家系遗传结构分析与系谱认证

为改良马氏珠母贝养殖群体性状,2010年4月,从马氏珠母贝选育系F3选择性腺成熟个体为亲本,建立了36个家系,按照常规技术进行幼体培育和海区养成.2010年11月,从36个家系中随机选取4个家系,每个家系取样30个个体,利用13对微卫星引物进行家系遗传结构和系谱鉴别分析.结果显示,(1) 13个微卫星引物在4个家系中共检测到39个等位基因,每个位点的等位基因数为2～5,4个家系的平均观测杂合度(Ho)为0.531 ～0.597,平均期望杂合度(He)为0.474 ～0.507；(2)根据子代基因型成功地推断出4个家系的亲本基因型,据此鉴别各个家系；用UPGMA法对120个样本进行聚类分析,98.3％的同一家系的子代个体能够聚到一起,分类结果与系谱来源基本一致.结果说明,这4个家系具有较高的遗传多样性和家系间具有明显的遗传分化；微卫星标记能有效地为马氏珠母贝群体的系谱分析提供技术支持.     

Dietary protein requirement for large‐size Songpu mirror carp (Cyprinus carpio Songpu)

Dietary protein requirements of large‐size Songpu mirror carp (Cyprinus carpio Songpu) were investigated through an an 82‐day feeding trial. Six practical diets were formulated to contain increasing crude protein levels of 240, 260, 280, 300, 320 and 340 g/kg. Six triplicate groups of fish (25 individuals per replicate with initial mean weights of 246.00 ± 17.36 g) were reared in the floating net cages. Results indicated that the highest weight gain rate (WGR), specific growth rate (SGR), protein efficiency ratio (PER) and lowest feed conversion ratio (FCR) were observed in the 260 g/kg treatment. The whole‐body crude protein content was significantly higher in the 260 and 280 g/kg treatments (p < .05). The expression of growth hormone (GH) in dorsal white muscle, Rh a glycoprotein (Rhag), Rh b glycoprotein (Rhbg) and Rh c glycoprotein 1 (Rhcg1) in gills increased significantly with increasing protein levels, while the expression of target of rapamycin (TOR), eukaryotic translation initiation factor 4E binding protein 1 (4EBP1) and S6 kinase (S6K) in muscle and intestine increased first and then decreased significantly. Based on these findings, 260 g/kg seems to be the proper level of protein in a practical diet for large‐size Songpu mirror carp (Cyprinus carpio Songpu).     

不同蛋白源饲料中添加α-酮戊二酸对松浦镜鲤抗氧化能力的影响

在水温为23℃的控温水循环系统中,采用2×2双因素方法,研究在豆粕蛋白源和鱼粉与豆粕复合蛋白源饲料(蛋白质水平为28%)中分别添加0和1.5%α-酮戊二酸(AKG)对初始体质量为(217.93±0.78)g的松浦镜鲤Cyprinus carpio Songpu抗氧化能力的影响,每组设5个重复。10周饲养结果表明:在不同蛋白源饲料中添加1.5%AKG显著提高了松浦镜鲤肠道和血清中还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性(P0.05),显著降低肠道和血清丙二醛(MDA)含量(P0.05);豆粕蛋白源中添加AKG显著提高肝脏GSH含量(P0.05);饲料中添加1.5%的AKG对肝胰脏中其他抗氧化指标和肌肉抗氧化指标无显著影响(P0.05)。蛋白源和AKG水平对血清SOD活性具有显著交互作用(P0.05)。综上所述,饲料中添加1.5%AKG可以提高松浦镜鲤的抗氧化能力。     

防治松浦镜鲤鱼卵水霉病药物的筛选

在24±1℃下研究了不同浓度的次甲基蓝、甲醛、高锰酸钾、氯化钠、孔雀石绿溶液抑制松浦镜鲤鱼卵水霉病的效果。结果表明：浸泡消毒时间10min,浓度为1100.00mg/L的次甲基蓝和6000.00mg/L的甲醛对水霉菌有较强的抑制作用,对出苗率无显著影响;在药物对水霉菌完全致死浓度（1057.54mg/L）下,浸泡10min,次甲基蓝抑菌有效时间达29.97h,致畸率最低（1.55%）,而高锰酸钾和氯化钠浓度对松浦镜鲤鱼卵水霉菌无明显抑制作用。试验表明次甲基蓝可以替代孔雀石绿防治鲤卵水霉病。     

防治松浦镜鲤鱼卵水霉病药物的筛选

在24±1℃下研究了不同浓度的次甲基蓝、甲醛、高锰酸钾、氯化钠、孔雀石绿溶液抑制松浦镜鲤鱼卵水霉病的效果。结果表明：浸泡消毒时间10min,浓度为1100.00mg/L的次甲基蓝和6000.00mg/L的甲醛对水霉菌有较强的抑制作用,对出苗率无显著影响;在药物对水霉菌完全致死浓度（1057.54mg/L）下,浸泡10m...     

松浦镜鲤与长丰鲢食用鱼混养试验

2012年5-10月,在面积为0.19hm2的试验池1中放养体质量160g的松浦镜鲤（Cyprinus carpio Songpu）117,700尾·hm^-2,混养体质量160g的长丰鲢（Hypophthalmichthys molitrix）春片、乌子头和鳙（Aristichthys no-bilis）夏花鱼种。在面积为0.19hm2的试验池2中放养体质量149.5g的松浦镜鲤3,450尾·hm^-2,只混养鲢和鳙夏花,采用常规饲养方法。2012年10月2日,试验池1平均每hm2产鱼21,025.5kg,其中松浦镜鲤平均全长34.3cm,体质量1425g,产量18,294.0kg;长丰鲢春片平均体质量674g,平均产量1,816.5kg,长丰鲢夏花平均全长18.6cm,体质量112.4g,平均产量592.5kg;鳙夏花平均全长达12.1cm,体质量39.9g,平均产量322.5kg。试验池2平均每hm2产鱼3,069.0kg,其中松浦镜鲤平均全长35.0cm,体质量1225g,平均产量2,766.0kg;鲢夏花平均全长达11.3cm,体质量24.9g,平均产量130.5kg;鳙夏花平均全长达11.1cm,体质量35.1g,平均产量172.5kg。试验表明,高密度养殖的松浦镜鲤产量显著高于密度低时,长丰鲢夏花的出池体质量是普通鲢的4.5倍,特殊生长率（6.27%·d^-1）是普通鲢（3.5%·d^-1）的1.79倍。文中还讨论了松浦镜鲤养殖池的水质和技术特点。     

烟酸诺氟沙星和乳酸诺氟沙星在松浦镜鲤体内的药动学比较

应用高效液相色谱(HPLC)技术研究以相同浓度(30mg/kg)烟酸诺氟沙星和乳酸诺氟沙星对松浦镜鲤Cyprinus carpio specularis口灌给药后,药物在试验鱼血液、肝胰脏、肾脏中的药动学特征。相同给药剂量下,烟酸诺氟沙星和乳酸诺氟沙星在松浦镜鲤血浆中的血药浓度和时间关系均为一级吸收二室开放模型,吸收半衰期(t_(1/2ka))分别为0.061h、0.043h,消除半衰期(t_(1/2β))分别为29.969h、14.972h,达峰时间(T_(max))分别为0.327h、0.272h,达峰浓度(C_(max))分别为6.247mg/L、13.423mg/L,药时曲线下面积(AUC)分别为53.015mg·h/L、89.907mg·h/L,表观分布容积(V_d)分别为4.347L/kg、2.084L/kg。结果表明:在相同给药剂量下,乳酸诺氟沙星的吸收和消除速率均快于烟酸诺氟沙星,药物种类显著影响药动学特征。     

德国镜鲤和选育镜鲤及其杂交后代的同工酶电泳比较研究

本文采用电泳方法对德国镜鲤，选育镜鲤及杂交种的肝组织Ｐｏｄ、Ｍｄｈ、Ｅｓｔ三种同工酶进行分析，三种鲤的Ｐｏｄ同工酶谱只有一种表型，Ｍｄｈ酶谱中选育镜鲤在ＭＤＨ—２出现突变。Ｅｓｔ酶谱中选育镜鲤Ｅｓｔ—１和Ｅｓｔ—６有基因多态现象，德国镜鲤Ｅｓｔ—１和Ｅｓｔ—５有多态现象，两个亲本在生化遗传上比较接近。     

Effects of α‐ketoglutarate on growth performance,antioxidant capacity and ammonia metabolization against chronic carbonate alkalinity stress in Songpu mirror carp (Cyprinus carpio Songpu)

A 3 × 2 factorial experiment was conducted to investigate the interaction between carbonate alkalinity and dietary α‐ketoglutarate (AKG) levels on the growth performance, antioxidant capacity and ammonia metabolization of Songpu mirror carp (Cyprinus carpio Songpu). Each diet (0%, 1% AKG) was randomly allotted to 0 mmol/L, 15 mmol/L, 30 mmol/L carbonate alkalinity groups with three replicate aquaria. The weight gain rate (WGR) significantly increased in the 1% AKG group and significantly decreased with increasing carbonate alkalinity (p < .05). Crude ash was significantly affected by the interaction between carbonate alkalinity and dietary AKG levels and significantly increased in the 1% AKG group (p < .05). A significant interaction between carbonate alkalinity and dietary AKG levels on superoxide dismutase (SOD) activities in hepatopancreas was observed (p < .05). The increasing carbonate alkalinities significantly decreased SOD activities in the hepatopancreas and foregut, catalase (CAT) activities in the hepatopancreas, foregut, midgut and hindgut and glutathione (GSH) contents in the hepatopancreas and foregut (p < .05). Despite AKG addition, the blood ammonia content still increased with increasing carbonate alkalinities. The gene expressions of AQP3, Rhag, Rhcg2 and Na⁺/K⁺‐ATPase (NKA) in the gills and glutamine synthase (GS) in the brain were significantly upregulated with increasing carbonate alkalinities (p < .05). In the 1% AKG group, GS gene expression significantly upregulated in the brains, whereas AQP3, Rhag, Rhcg2 and NKA gene expressions significantly downregulated in the gills (p < .05). In summary, the 1% AKG addition can enhance the gene expression of ammonia metabolization and improve the antioxidant capacity of Songpu mirror carp with chronic carbonate alkalinity stress.     

黑龙江银鲫新品系—松浦鲫的培育

以纯种方正鲫作母本、以方正鲫(♀)与鳞鲤(♂)交配获得的雌性后代经性反转的生理雄性个体作父本进行育种试验,在3个组配中,发现有一组F_1表现出新的形态特征。经过对F_1及其后代作定向培育和观测,证实F_1形态指标与方正鲫差异显著,且其后代遗传性状稳定,可作为鲫鱼属的一个新品系。     

松浦镜鲤口灌甲砜霉素对嗜水气单胞菌的PK-PD模型分析

本文采用体内药动学和体外药效学相结合的方法,应用Excel2007、药动学3p97软件和kinetica4．4软件进行数据处理和分析,研究了鲤鱼血清中甲砜霉素抗嗜水气单胞菌Aeromonashydropila的活性,为甲砜霉素在水产动物疾病预防和治疗细菌陛败血症提供理论依据。研究结果表明：给鲤单剂量口灌30mg·kg-1剂量的甲砜霉素后,药物在鲤体内吸收迅速,达峰快,消除缓慢。1．361h血药达峰（Tpeak）,峰浓度（Cmax）为39．825μg·mL-1,吸收速率（Ka）为2．58h,分布半衰期T1／2（ka）为7．317h,滞后时间（TL）为0．234h,消除半衰期T1／2（ke）为77．292h。在半效应室内,EC50为15．62h。PK-PD同步模型参数AUC／MIC血清为35．37h,Cmax/MIC血清为24．89。通过抑制效应SigmoidEmax模型得到8．52～47．94mg·kg-1为临床使用甲砜霉素（TAP）防治鲤鱼细菌性败血症的给药剂量。建议甲砜霉素在预防和治疗细菌性败血症的最佳给药方案为：药饵的治疗剂量为47．94mg·kg-1,预防剂量为8．52mg·kg-1。