孔雀鱼雌性生殖器官组织结构及卵子发生的研究

应用光镜技术研究了孔雀鱼（Poecilia reticulata）雌性生殖器官组织结构和卵子发生的特点,以期为孔雀鱼的良种繁育工作提供基础资料。结果表明,孔雀鱼雌性生殖器官由卵巢、卵子输送管和泄殖孔构成。卵子发生过程经历了6个时相：第Ⅰ时相主要为卵原细胞;第Ⅱ时相是处于小生长期的初级卵母细胞,形成生长环、卵黄核和单层扁平滤泡细胞膜;第Ⅲ时相是进入大生长期的初级卵母细胞,卵黄开始积累,形成2层滤泡细胞膜和2层卵包膜;第Ⅳ时相为发育晚期的初级卵母细胞,细胞发生了极化,卵包膜发育完善;第Ⅴ时相发育成熟,卵黄颗粒凝结呈块状,卵黄泡主要分布于细胞膜内缘,滤泡细胞膜萎缩;第Ⅵ时相是闭锁卵泡,被滤泡细胞消化和吸收转变为卵巢内结缔组织。     

葛氏鲈塘艚卵子发生的组织学观察

采用组织切片技术系统观察和描述了葛氏鲈塘鱧（Perccottus glenii Dybowski）卵巢各时相卵母细胞的形态结构、特征及变化。卵巢切面显示：卵母细胞发育分为6个时相：第Ⅰ时相卵母细胞由处于原始分化阶段的卵原细胞构成;第Ⅱ时相卵母细胞进入滤泡细胞期,胞外形成滤泡细胞膜：第Ⅲ时相卵母细胞由质膜向核膜逐渐积累皮质液泡：第Ⅳ时相卵母细胞主要形成卵黄颗粒：第Ⅴ时相卵母细胞为成熟的卵子,胞内含有丰富的卵黄;第Ⅵ时相卵母细胞是未排出的处于退化吸收阶段的卵细胞,卵膜破裂,卵黄被吸收。根据卵巢切片及性腺系数变化推测葛氏鲈塘鱧属于一次产卵类型。     

曼氏无针乌贼的卵子发生及卵巢发育

采用组织学方法对人工养殖曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)卵子发生、卵巢发育周期进行组织学、细胞学观察。根据细胞大小、胞核形态及卵母细胞与滤泡细胞的关系,将曼氏无针乌贼卵子发生划分为卵原细胞期、卵母细胞期、成熟期和退化吸收期4个阶段,并阐述了各期卵母细胞的组织学特征。曼氏无针乌贼卵子发生过程具有种的特异性,大约孵化出膜12 d的乌贼可见有卵原细胞,此后进入增殖期。卵母细胞属于典型的滤泡型,发育过程中同时存在同步性与异同步性;卵母细胞无初级卵膜,只有次级卵膜和三级卵膜,次级卵膜由滤泡细胞分泌,三级卵膜由输卵管腺、缠卵腺以及墨囊分泌物共同构成。通过对卵巢的外观形态和组织学观察,将曼氏无针乌贼卵巢发育划分为6个时期。     

四指马鲅卵巢发育和卵子发生的组织学观察

为了解四指马鲅（Eleutheronema tetradactylum）的卵巢发育和卵子发生过程，本研究运用组织切片HE染色方法对其卵巢发育的组织结构变化和卵子发生过程中各时相卵母细胞的结构进行观察。结果显示，四指马鲅卵巢为被膜型卵巢，紧贴中肾腹面，两支卵巢前端分离于后端融合，呈"Y"字形。卵子发生过程分可分为5个时相，在II时相中期卵母细胞周围开始出现滤泡细胞，II时相晚期形成单层滤泡细胞，直至III时相中期滤泡细胞层外形成鞘膜细胞层；卵黄核在II时相中期开始出现至III时相早期消失；卵黄泡在III时相早期的细胞核附近及胞质边缘出现；卵黄颗粒在III时相晚期开始出现于卵黄泡之间，并在IV时相早期填充卵黄泡，至IV时相晚期形成卵黄小板。卵巢发育过程分为6个时期，每个时期都存在不同时相的卵母细胞；V期卵巢的卵径呈双峰分布，分别在50.00~100.00 μm和300.00~350.00 μm区间出现峰值。四指马鲅卵巢发育模式为非同步发育-分批产卵类型。     

嘉陵江粗唇鮠卵巢组织学的周年变化

对嘉陵江粗唇鮠(Leiocassis crassilabris Günther)的卵巢发育、雌鱼成熟系数的周年变化进行研究。结果显示:嘉陵江粗唇鮠的卵巢发育划分为6期,其卵母细胞相应地划分为6个时相,第Ⅰ时相的卵母细胞呈原始分化状态,细胞外具一层细胞质膜,第Ⅱ时相卵母细胞外不仅具质膜,而且还有滤泡膜和结缔组织膜,第Ⅲ和第Ⅳ时相的卵母细胞分化明显,由散在的卵黄沉积逐渐形成大的卵黄颗粒。第Ⅴ时相和第Ⅵ时相分别为卵子形成和退化吸收时相。繁殖季节中雌鱼的成熟系数可达13.4%,而在其它季节有所下降。     

莱氏拟乌贼卵子发生的组织学观察

2020年8月在福建海域用底拖网捕获雌莱氏拟乌贼Sepioteuthis lessoniana 7尾，未性成熟个体2尾，平均体质量（210±43）g，已性成熟个体5尾，平均体质量为（430±76）g，用组织切片技术观察其卵巢的显微组织学结构，根据卵子的发生特征和变化规律划分卵子发生时期。结果显示：莱氏拟乌贼卵巢内的卵原细胞个体逐渐增大，细胞核由中央偏向一端直至消失；扁平状滤泡细胞和椭圆形滤泡细胞先后包裹卵母细胞，双层滤泡细胞在卵母细胞内增多并形成指状突起；卵黄物质在滤泡细胞解体时形成，最终充满卵母细胞。根据以上特征，将莱氏拟乌贼的卵子发生划分为4个阶段9个时期，即第一阶段卵原细胞期，第二阶段无滤泡细胞期、单层滤泡细胞期和双层滤泡细胞期，第三阶段滤泡细胞增生初期、滤泡细胞增生中期和滤泡细胞增生末期，第四阶段卵黄堆积期及成熟期。本研究认为莱氏拟乌贼卵子内的滤泡细胞起到合成并分泌营养物质的功能。     

四川华鳊卵子发生的显微结构观察

为探究四川华鳊(Sinibrama taeniatus)卵子的发生规律,对其卵子发生进行了显微结构观察和描述。将卵子发生分为卵原细胞(Ⅰ时相)、单层滤泡时相(Ⅱ时相)、卵黄泡出现时相(Ⅲ时相)、卵黄充满时相(Ⅳ时相)和成熟卵子(Ⅴ时相) 5个时相。观察发现,四川华鳊卵原细胞存在2种形态,分别为早期卵原细胞和有丝分裂过程中的卵原细胞;同时将早期初级卵母细胞划入Ⅱ时相,此阶段细胞核膜边缘出现多个小核仁,将其作为小生长期开始的标志;Ⅲ时相卵黄泡出现,当卵黄泡积累至3～5层时,卵黄物质即开始积累,此时多以卵黄颗粒的形式存在;进入Ⅳ时相后,卵黄物质沉积形成卵黄小板,卵黄泡被挤压至卵周,形成皮层小泡,卵子成熟后,原皮层小泡所在区域呈块状或颗粒状,经苏木精-伊红(HE)染色后呈橘红色。     

黄海高眼鲽卵巢发育特征及卵径分布

本研究通过组织学观察,描述了黄海高眼鲽(Cleisthenes herzensteini)卵母细胞发育特征及其退化过程。高眼鲽卵母细胞发育分为5个时相:第1时相为卵原细胞,细胞体积小,细胞质少,细胞核明显;第2时相卵母细胞细胞核附近出现卵黄核;第3时相由胞质外缘向内层逐渐产生液泡并生成卵黄颗粒,出现双层滤泡膜;第4时相卵母细胞内充满卵黄,细胞核向动物极移动,放射膜增厚;第5时相细胞核溶解,卵母细胞从滤泡膜中释放出来并发生水合作用;产卵期过后,卵巢发生退化,卵黄颗粒逐渐被吞噬,放射膜溶解断裂。通过比较卵巢中各时相卵母细胞组成比例,表明卵母细胞发育具有非同步性。Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ-Ⅳ'期卵巢内卵径(长径)呈单峰分布,优势粒径组分别为0.45~0.55 mm、0.60~0.65 mm和0.40~0.50 mm;Ⅴ'期卵巢,卵径分布呈双峰型,峰值分别为0.50~0.55 mm和0.90~0.95 mm,水合卵母细胞与卵径较小的小生长期卵母细胞比例增大,呈现出明显的双峰分批产卵型特征。     

嘉陵江瓦氏黄颡鱼卵巢组织学的周年变化

采用形态学和连续组织切片技术对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)卵巢的组织形态学进行了研究。结果显示:瓦氏黄颡鱼卵巢发育分为6个时期,卵母细胞发育分为6个时相。从10月至次年的2月份,卵巢处于第Ⅱ期;3—4月份卵巢处于第Ⅲ期;4—5月初卵巢处于第Ⅳ卵期;5—7月卵巢处于第Ⅴ期;8—9月卵巢处于第Ⅵ期。在第2时相的卵母细胞中出现卵黄核和滤泡细胞;第3时相的卵母细胞出现液泡,数目和层数随着卵巢的发育逐渐增加;第4时相的卵母细胞充满卵黄颗粒,并出现了受精孔和精孔细胞。瓦氏黄颡鱼是一次产卵类型。     

施氏鲟卵巢发育的组织学观察

对人工养殖施氏鲟卵巢发育的不同时期(1～8龄)进行了组织学观察,结果表明：1龄施氏鲟处于性分化早期,卵巢中卵原细胞形成增殖团;2～3龄鱼卵巢为Ⅰ期,第1时相的初级卵母细胞直径10～60μm,核大,位于细胞中央,染色质均匀分布;4～5龄卵巢为Ⅱ期,第2时相小生长期的初级卯母细胞直径60～200μm,核内含有7～26个核仁;6～7龄卵巢Ⅲ期,第3时相大生长期的初级卵母细胞直径200～1600μm,卵母细胞内出现脂肪滴、卵黄颗粒和色素颗粒。细胞膜有完整的3层结构。8龄卵巢Ⅳ期,第4时相晚期初级卵母细胞直径1600～3300μm,细胞核膜消失,核仁溶解,核由中心向动物极受精孔移动;V期卵巢的第5时相生殖细胞为成熟的卵细胞,直径3400～3750μm,从滤泡膜中释放到体腔内;Ⅵ期为产卵后的卵巢,以第2时相的卵母细胞为主：根据研究结果推测,施氏鲟卵巢再次成熟的周期为3～4年。     

花䱻卵母细胞发育的组织学和超微结构观察

2015年7月至2017年10月在河南省驻马店宿鸭湖水库采集花?(Hemibarbus maculatus Bleeker)雌鱼样本190尾,体长7.12～32.21 cm,体重10.55～330.22 g,采用组织学和扫描电子显微镜技术观察了花?卵母细胞发育各时期的特征。结果表明,花?卵母细胞发育可分为5个时相,第I时相卵母细胞处于卵原细胞增殖阶段;第Ⅱ时相卵母细胞处于初级生长阶段,出现滤泡膜;第Ⅲ时相卵母细胞出现皮质液泡,细胞质膜之间形成放射带;第Ⅳ时相卵母细胞处于大生长后期,卵黄颗粒增多。电镜下观察发现放射带表面形成微孔状结构,核仁外排,可能与卵母细胞内营养物质积累有关;第Ⅴ时相卵母细胞中细胞核消失,卵母细胞发育为成熟卵子,与卵膜脱离,准备排卵。繁殖季节,花?卵巢成熟系数达到13.78%～17.04%。研究结果可为花?人工繁殖和育种工作提供参考。     

金乌贼幼体弧菌性坏死病的病原、组织病理特征和药物敏感性

对青岛市黄岛区人工繁育金乌贼(Sepia esculenta)苗种大规模坏死病进行了病原、组织病理、传播途径和防控药物研究。发病金乌贼幼体不摄食,生长缓慢,体色发黑;体表、肌肉、口腕、触腕及内脏团大面积溃烂,死亡率高达90%;组织病理学显示:患病金乌贼皮肤色素细胞崩解,肌丝断裂,鳃丝崩解,肝细胞大量坏死脱落,肠道微绒毛脱落;从患病金乌贼分离出3株优势菌(SE-A、SE-B和SE-C),人工感染实验表明,SE-B、SE-C对金乌贼半数致死量分别为3.98×10~6 CFU/mL和8.91×10~5 CFU/mL,有较强致病力,为该病的致病菌;根据细菌形态、生理生化和16S rDNA序列分析将SE-B和SE-C鉴定为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)。分析金乌贼幼体、育苗用水和生物饵料糠虾的病原菌来源、分布和优势度,发现致病菌主要由糠虾携带进入育苗系统。分析了2株致病菌的药物敏感性,SE-B对强力霉素和氟苯尼考等敏感,对链霉素、庆大霉素等耐药;SE-C对氟苯尼考和罗美沙星等敏感,对新霉素和克拉霉素等耐药。     

池养鲻的卵巢发育和卵子发生过程

通过卵巢切片的组织学分析揭示，幼鲻在土池养殖3个月后可见线状卵巢，大约5个月后卵原细胞进入第一次成熟分裂前期的双线期转变为早期初级卵母细胞。接着卵母细胞生发泡(核)和胞质体积增加，核质比从3．5：1减少至2：1。此后卵巢中卵母细胞停滞发育持续至养殖的第3年。在第3年卵巢切片看出卵母细胞进入脂肪泡时相，在第3年秋季进入卵黄发生时相。但在人工养殖条件下卵母细胞仅能发育到卵黄发生后期，即卵母细胞胞质充满卵黄颗粒，生发泡居中而不移位。这些结果对于用人工养殖鲻为亲鱼开展人工繁殖提供重要的科学依据。并讨论了卵子发生6个时相的生物学特点及其重要的细胞器在卵黄发生中可能的生理作用。     

中华绒螯蟹卵黄发生期卵母细胞和卵泡细胞超微结构观

通过透射电镜技术观察了中华绒螯蟹第二次卵巢发育过程中卵巢的超微结构变化。结果表明：（1）中华绒螯蟹第二次卵巢发育过程中卵黄发生期可分为初期和后期；（2）卵黄发生初期（雌蟹第一次排卵后的16 d内），卵黄生成以卵母细胞内源性合成为主，此时卵母细胞胞质中存在大量内质网囊泡、高尔基体和线粒体，这些细胞器参与胞内卵黄物质的合成。内源性合成后期，卵母细胞膜形态多样，呈现触手状、波浪状和断裂状，为外源合成期做准备。此期卵泡细胞还未向卵母细胞靠近，两类细胞间存在着由淋巴细胞吐出的絮状物；（3）卵黄发生后期，首先为卵泡细胞与卵母细胞的结合阶段（排卵后16~21 d），此后，卵泡细胞胞质中含有大量内质网囊泡、卵黄颗粒和脂滴，卵母细胞与卵泡细胞膜变为链珠状便于物质交换，卵母细胞的卵黄合成能力减少，转由卵泡细胞进行外源性物质吸收和卵黄物质合成（21~36 d）；（4）卵黄发生结束后，双层卵膜形成，卵黄体和脂肪滴均匀分布在卵母细胞胞质中。     

中华锯齿米虾卵子发生过程中滤泡细胞的结构研究

利用光镜和透射电镜对中华锯齿米虾卵子发生过程中滤泡细胞的结构进行了研究。结果表明:随着卵子发生,滤泡细胞经历了发生、发育及退化的过程。在卵黄大量生成阶段,单层滤泡细胞紧贴卵母细胞,其内部蕴含着大量的内质网及线粒体。滤泡细胞与卵母细胞通过微胞饮泡和微绒毛进行物质交换。     

Ovarian re‐maturation following the first spawning in the Chinese mitten crab,Eriocheir sinensis (H. Milne‐Edwards)

The present study investigated the external and histological changes in the ovary and measured the gonadosomatic index (GSI) and hepatosomatic index (HSI) during the re‐maturation of the Chinese mitten crab Eriocheir sinensis. The results show that the ovarian re‐maturation cycle of this crab species can be divided into four stages, i.e. Stage I: the ovary had an X shape and appeared milky white or with a mottled buff colour, and the dominant gametocyte at the stage were oogonia (OG, 28.3%) and previtellogenic oocytes (PR, 31.6%); Stage II: the ovary appeared light yellow or tan in colour, dominated by endogenous vitellogeic oocytes (EN, 69.3%). The yolk globules of unreleased mature oocytes (MO) from the previous spawn were absorbed, leaving many vacuoles in the retrogressing MO; Stage III: the ovary appeared crimson red or deep purple, and although the main type of gametocyte was exogenous vitellogenic oocytes (EX), near‐mature oocytes (NO) could also be found in the late phase of the ovarian development stage; Stage IV: the ovary was ripe and filled with MO that contained large yolk globules. During the period of the second ovarian maturation cycle, the GSI increased significantly from the time just after the first spawning (P<0.01). However, although HSI appeared to decrease within days after spawning (DAS), no significant correlation was found between GSI and HSI or between HSI and DAS (P>0.05). Furthermore, the final GSI and the volume of MO of E. sinensis during the second maturation cycle were drastically lower than those of the first maturation cycle.     

Serotonin stimulates ovarian maturation and spawning in the black tiger shrimp Penaeus monodon

Serotonin (5-hydroxytryptamine, 5HT) has been reported to induce ovarian maturation and spawning in the crayfish Procambarus clarkii and white Pacific shrimp Litopenaeus vannamei. The aim of this study was to explore the role of exogenous 5HT on the reproductive performance of the black tiger shrimp Penaeus monodon. 5HT solution was injected into domesticated P. monodon broodstock at 50 μg/g body weight and ovarian maturation and spawning were recorded. The presence of 5HT in the ovary and oviduct of P. monodon was also studied by immunohistochemistry and its levels in the ovary by enzyme link immunoabsorbance assay (ELISA). The 5HT-injected P. monodon developed ovarian maturation and spawning rate at the level comparable to that of unilateral eyestalk-ablated shrimp. Hatching rate and the amount of nauplii produced per spawner were also significantly higher in the 5HT-injected shrimp, compared to the eyestalk-ablated shrimp. 5HT-positive reactions were found in the follicular cells of pre-vitellogenic oocytes, in the cytoplasm of early vitellogenic oocytes and on the cell membrane and cytoplasm of late vitellogenic oocytes. 5HT in the ovary was present at 3.53 ± 0.26 ng/mg protein level in previtellogenic stage and increased to 17.03 ± 0.57 ng/mg protein level in the mature stage of the ovary. The results suggest a significant role of 5HT, possibly directly on the ovary and oviduct, on the reproductive function of female P. monodon.