NaHCO3浓度对等鞭藻3011、等鞭藻塔溪堤品系和绿色巴夫藻生长的影响

对等鞭藻3011(Isochrysis galbana3011)、等鞭藻塔溪堤品系(Tahitian Isochrysis galbana)和绿色巴夫藻(Pavlova viridisai)3株微藻种进行培养。NaHCO     

湛江等鞭金藻培养基和培养方法的优化

在室内采用正交试验的方法,对湛江等鞭金藻(Isochrysis zhanjiangensis)氮、磷、铁、碳、维生素B1、维生素B12等主要营养成分进行了优化,获得了以天然海水为基础的优化培养基:NaNO3 60mg/L,KH2PO4 4mg/L,FeC6H5O7 0.5mg/L,NaHCO3 1.0g/L,维生素B1 150μg/L,维生素B12 200 ng/L.试验结果表明,使用优化培养基培养湛江等鞭金藻具有生长速度快、产量高、成本低的优势.应用微生物流加技术培养湛江等鞭金藻可取得较好效果.     

铜离子对湛江等鞭金藻生长的影响

在不同的Cu离子浓度下分别培养了湛江等鞭金藻。结果显示,Cu离子浓度低于10-6mol/L时,有利于藻细胞的生长繁殖,其中在10-7mol/L时藻细胞的生长相对较快;叶绿素含量及可溶性蛋白含量相对较高;细胞膜透性、丙二醛(MDA)含量及O2-产生速率相对较低;而超氧化物歧化酶(SOD)活性相对较强。结果表明,在湛江等鞭金藻的培养液中加入浓度为10-7mol/L的Cu离子时最利于其生长,其细胞内各项生理生化指标处于最佳状态。     

氮浓度对球等鞭金藻3011和8701叶绿素荧光特性及生长的影响

在温度(23±1)℃,盐度31,光照度5000 lx的条件下,研究不同氮浓度(0、55、440、880、1760、7040μmol/L)培养基对球等鞭金藻3011和8701光系统Ⅱ(PSⅡ)最大光能转化效率(Fv/Fm)、叶绿素含量以及细胞密度的影响。单因子方差分析表明,氮浓度对2株微藻的光合作用及生长均有显著影响(P<0.05)。3011的Fv/Fm、叶绿素含量及细胞密度均随着起始氮浓度的增加而增加,在7040μmol/L时达到最大值;8701的Fv/Fm、叶绿素含量及细胞密度均随着起始氮浓度的增加而增加,在440μmol/L时达到最大值,其后随氮浓度的增加其上述指标反而下降。3011和8701进行光合作用和生长的最适氮浓度分别为7040μmol/L和440μmol/L。     

等鞭金藻3011的半连续密封培养

对等鞭金藻 3 0 1 1在不同的光照、温度和接种浓度条件下进行培养 ,分为两组 :实验组是用密封袋半连续培养 ,对照组是用大型玻璃缸槽进行培养。根据其相对生长常数K′、平均日增量X和平均倍增时间G ,筛选出最佳生长条件 :光照 6 0 0 0～ 80 0 0Lx ,水温 2 0℃ ,pH 8.2～ 8.6 ,接种浓度 3 0× 1 0 4个 mL。结果表明 ,在同样条件下 ,半连续密封培养等鞭金藻 3 0 1 1相比常规玻璃缸培养 ,达到 2 0 0× 1 0 4个 mL以上的收获浓度快 2～ 3d ,日增量和倍增时间均快 3倍左右     

乙酰甲喹对小新月菱形藻、等鞭金藻3011的毒性效应

通过考察乙酰甲喹对小新月菱形藻(Nitzschia closterium f.minutissima)、等鞭金藻(Isochrysis galbana Parke3011)的生长抑制和对叶绿素a、总超氧岐化酶(T-SOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度的影响,研究了乙酰甲喹对2种微藻的毒性效应,为评价兽药乙酰甲喹的使用安全性和保护养殖环境提供基础数据。结果表明,乙酰甲喹对2种微藻的生长抑制作用随质量浓度的增加而增大,乙酰甲喹对小新月菱形藻的24 h-EC50(半数有效浓度)为4.73 mg·L~(-1)、对等鞭金藻3011的24 h-EC50为2.14 mg·L~(-1),乙酰甲喹对2种微藻均属于高毒物质,等鞭金藻3011更敏感。暴露24 h后,随着乙酰甲喹质量浓度的升高,小新月菱形藻叶绿素a浓度下降而等鞭金藻3011叶绿素a浓度基本不受影响;2种微藻的T-SOD活性随着乙酰甲喹质量浓度的升高均显著增加,各实验组MDA浓度也高于对照组,等鞭金藻3011更敏感,说明乙酰甲喹对2种微藻均能造成氧化胁迫,对细胞造成氧化损伤。     

等鞭金藻对次氯酸钠中有效氯耐受力的研究

采用不同质量分数的次氯酸钠 ,以不同的处理时间对等鞭金藻 30 11进行耐受力研究。结果表明 :在试验的取值范围内处理时间比有效氯质量分数对等鞭金藻的生长影响更显著。在实际应用中 ,次氯酸钠的质量分数 (有效氯 )以 4× 10 -6～ 8× 10 -6,处理时间约 2h为宜     

缘管浒苔对球等鞭金藻生长的克生作用

研究了缘管浒苔新鲜组织、干粉末、培养水过滤液和水溶液抽提液对球等鞭金藻生长的克生作用。结果表明,缘管浒苔新鲜组织、干粉末和水溶性抽提液对球等鞭金藻的生长具有强烈的克生作用。当培养液中缘管浒苔新鲜组织、干粉末和水溶性抽提液的浓度为5.0 gwet/L、1.2 gdry/L和1.0 g/L时,球等鞭金藻不能够维持正常的生长或全部死亡。在缘管浒苔培养水过滤液培养实验中,一次性添加缘管浒苔培养滤液,不能持久地抑制球等鞭金藻增殖,而半连续添加缘管浒苔培养滤液,其克生作用较强,说明克生物质的连续分泌是有效抑制球等鞭金藻生长的关键。经高温高压处理后的缘管浒苔培养滤液对球等鞭金藻无显著的抑制作用,说明缘管浒苔所分泌的克生物质在高温高压下不稳定和易分解。     

营养盐浓度对棕鞭藻叶绿素荧光参数、细胞密度和总脂含量的影响

利用生物化学方法和叶绿素荧光动力学分析技术,研究了棕鞭藻在一次性培养过程中,不同营养盐浓度(f/4、f/2、f、2f、4f)对其叶绿素荧光参数、叶绿素含量、细胞密度、单位体积干质量、总脂含量和总脂收获量的影响。试验结果表明,营养盐浓度为2f时,该藻的最终细胞密度、叶绿素含量、单位体积干质量、总脂含量和总脂收获量均显著高于其他各处理组,由此可以看出,在本试验条件下,最适合棕鞭藻生长和油脂积累的营养盐浓度是2f。不同营养盐浓度对棕鞭藻的叶绿素荧光参数有显著影响,培养6～10d,f/4处理组的叶绿素荧光参数(光系统Ⅱ的最大光能转换效率;光系统Ⅱ的潜在活性;光系统Ⅱ的实际光能转化效率;相对电子传递效率和光化学淬灭)最低,其次为f/2处理组(P0.05)。培养7～10d,2f处理组的光系统Ⅱ的实际光能转化效率、相对电子传递效率和光化学淬灭显著高于其他处理组(P0.05)。培养结束时(第10d),各处理组细胞密度和总脂含量依次为:2f4fff/2f/4。相关性分析结果表明,营养盐浓度为f/4～2f时,棕鞭藻的细胞密度、叶绿素含量、单位体积干质量和总脂含量与营养盐浓度均呈显著的正相关;营养盐浓度为2f～4f时,上述各值与营养盐浓度则均呈显著的负相关。     

室内袋式和管道式光生物反应器对湛江等鞭金藻生长及生化组分的比较分析

为探索湛江等鞭金藻室内大规模培养的可行性,分析比较了在管道式光生物反应器和聚乙烯袋培养模式下,湛江等鞭金藻生长密度、比生长速率、叶绿素含量及有机物含量的变化情况。试验将接种藻密度控制在10.0×10⁴ cells/mL,培养周期为16 d。结果显示,在管道式光生物反应器培养模式下,藻密度可达1.97×10⁶ cells/mL,显著高于聚乙烯袋培养模式下的藻密度（0.99×10⁶ cells/mL）(P<0.05);两种模式下,湛江等鞭金藻的比生长速率分别达到0.396 7、0.327 5/d;管道式光生物反应器模式下,叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、最高总蛋白、最大可溶性糖的质量浓度分别为0.46、0.44、0.92、107.267 7、9.587 8 mg/L,最大生物量（干质量）为0.160 1 g/L,聚乙烯袋培养模式下,叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、最高总蛋白、最大可溶性糖的质量浓度分别为0.26、0.26、0.52、62.564 5、5.559 1 mg/L,最大生物量（干质量）为0.098 6 g/L,管...     

大溪地金藻培养的生态条件研究

在实验室模拟条件下,研究了温度、光照、盐度和营养盐对大溪地金藻生长繁殖的影响,结果表明:大溪地金藻适宜温度为10～35℃,最适温度为20～30℃;适宜照度为1000～7000lx,最适照度为3000～6000lx;适宜盐度6 5～39 5,最适盐度为19 5～26 0。N、P单因子的优水平分别为N-1mg/L、P-0 1mg/L,Fe单因子作用不明显,N、P、Fe交互作用的优水平为N-1mg/L、P-1mg/L、Fe-0 1mg/L。     

球等鞭金藻生长抑制物对自身藻细胞的抑制效应

研究了生长抑制物1-羟基,丙二酸二乙酯-十二烯酸异丙酯（HDMA）对自身细胞生长、叶绿素和丙二醛（MDA）含量、胞外可溶性蛋白质和多糖含量、硝酸还原酶（NR）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性等生理指标的影响,分析HDMA对球等鞭金藻的抑制效应。结果表明,HDMA显著降低了细胞密度、叶绿素含量以及NR、SOD和POD活性,显著增大胞外可溶性蛋白质和多糖的比值,并且还明显提高MDA含量。因此,我们认为HDMA能够影响微藻细胞的某些生理生化过程。其中包括降低叶绿素含量,影响光合作用;改变胞外可溶性蛋白质和多糖的比值,增强细胞的疏水性,促使细胞絮凝;降低微藻硝酸还原酶和抗氧化体系酶的活性,影响细胞内营养平衡,并加速细胞体内活性氧的积累,导致细胞发生过氧化反应,从而影响微藻生长。     

轻、中和重稀土元素对球等鞭金藻的促生长作用

轻、中和重稀土元素对球等鞭金藻的生长有相同程度的促进作用,但其有益浓度范围不同,镧为７．２８～８７．４０μｍｏｌ／Ｌ,钆为６．３６～５７．２３μｍｏｌ／Ｌ,镱为５．７８～１７．３４μｍｏｌ／Ｌ。这３种稀土元素对球等鞭金藻的最佳浓度分别为：３６．４２～６５．５５,１９．０８～５７．２３和５．７８～１７．３４μｍｏｌ／Ｌ。可分别提高单胞藻数量２１．８％～２４．３％,１０．４％～１７．２％和１７．９％～２３．０％;叶绿素含量较对照组分别提高了２９．３％～４１．２％,２５．６％～３８．１％和３６．５％～４０．３％。     

不同氮、磷比例对球等鞭金藻生长的影响

在不同氮，磷纟（N：P＝1：1，4：1，16：1，80：1，160：1）条件下，对球等鞭金藻进行了培养。通过对其生长和营养生理特性的研究发现：在N／P比等于16：1的条件下，球等鞭金藻的生长速度最快，单位水体内的细胞数量最多。此外，在高氮，磷比（N／P＝160：1，80：1）的条件下，其生长速度要优于低氮，磷比（N／P＝1：1，4：1）状态。藻细胞内碳水化合物和蛋白质的含量也明显受到氮，磷比的影响，其含量表现为16：1＞160：1＞80：1＞4：1＞1：1。此外，细胞内物质的积累合成与细胞生长的不同阶段密切相关。     

金藻3011和8701与球等鞭金藻的18S rRNA基因研究

对金藻3011和8701的18S rRNA基因序列进行测定,分别获得1695 bp和1684 bp的DNA序列。应用DNAMAN,DNAstar和RnaViz 2.0生物软件,将获得的DNA序列与球等鞭金藻的18S rRNA基因序列进行DNA序列和RNA二级结构对比分析。DNA序列分析显示,三者的18S rRNA基因序列非常保守,相似性在99.5%以上,三者应同为球等鞭金藻;RNA二级结构分析显示,三者的RNA二级结构既存在球等鞭金藻种的特异性茎环结构,又存在明显的差异,并且从相近水域(山东)分离出来的3011和8701相对于采自挪威水域的球等鞭金藻具有更大的结构相似性;相对于3011,8701可能与球等鞭金藻具有更高的同源性。由此可见,单纯的18S rRNA基因序列分析可能不适用于球等鞭金藻种下水平的研究,但是其RNA二级结构分析对球等鞭金藻的物种鉴定,甚至是种下地理株的研究都具有非常重要的意义。     

高温胁迫对球等鞭金藻3011和8701叶绿素荧光特性的影响

摘要：本文以球等鞭金藻（Isochrysis galbana）3011和8701为实验材料,研究了高温胁迫(35-50℃)对其叶绿素荧光特性的影响。结果表明,与对照组相比,高温胁迫下2株金藻的叶绿素荧光参数Fv/Fm（PSⅡ的最大光能转化效率）、Fv/Fo（PSⅡ的潜在活性）、ΦPSⅡ（PSⅡ的实际光能转化效率）、rETR（相对光合电子传递效率）和qP（光化学淬灭）均明显降低,并且随着胁迫温度的升高,胁迫时间的延长,下降幅度也逐步增大。NPQ（非光化学淬灭）的变化趋势则与其他荧光参数不同,3011的NPQ随着胁迫温度的升高和胁迫时间的延长先上升后下降;8701的NPQ变化则与胁迫温度有关,35℃和40℃处理下NPQ随着胁迫时间的延长而逐渐上升,45℃处理下NPQ则先上升后下降。3011与8701的耐热性存在一定差异。3011在40℃下处理10min后,经过一定的时间后各荧光参数基本恢复,而在45℃和50℃下处理10min后,各参数均不能恢复。8701在35℃和40℃处理10min后,经过一定时间后,荧光参数Fv/Fm和Fv/Fo基本恢复到对照水平,而在45℃下处理10min后,各参数均不能恢复。本文还对高温胁迫下2株金藻的响应机制以及叶绿素荧光技术在筛选耐高温微藻品系中的应用进行了初步探讨。     

球等鞭金藻8701的耐低温机理

对耐低温品系球等鞭金藻８７０１在低温下与活性氧清除和伤害有关的几个生理生化指标进行了研究，探讨了其耐低温机理，并与该藻种的低温敏感品系球等鞭金藻３０１１进行了比较，结果表明，（１）球等鞭金藻８７０１在低温下（８℃）培养一周，其超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性略有下降，但仍保持极高的酶活性，因此能够及时清除低温胁迫产生的过量活性氧，使其细胞内保持较低的膜脂过氧化水平和较低的电解质外渗率,（２）球等鞭金藻３０１１在低温下胁迫一周，其细胞内的膜脂过氧化水平和电解质在率大大高于球等鞭金藻８７０１，这与其ＳＯＤ活性较低，并且在低温下其活性大幅度下降有关，（３）与ＤＯＤ相比，两种不同品系球等鞭金藻的过氧化物酶（ＰＯＤ）对减轻其低温伤害，提高其耐低能力，不起主要作用。     

不同品系球等鞭金藻在生长及脂肪酸组成上的种内差异

球等鞭金藻作为一种优良的单细胞生物饵料具有选育价值。目前我国水产养殖上使用的大多数球等鞭金藻品系都来源于同一株藻株Isochrysis galbana OA-3011,经过多年的地理隔离形成了不同的品系,为了揭示地理隔离对球等鞭金藻表型性状的影响,从而为球等鞭金藻的选育工作提供依据,我们对5个品系的球等鞭金藻(I.galbana FACHB-861,OA3011-QD,OA3011-LK,OA3011-AY和OA3011-LZ)的种属关系、生长和脂肪酸组成进行了比较分析。实验在相同条件下对5个品系球等鞭金藻培养6 d,提取基因组DNA并PCR扩增测定18S rDNA基因序列,每天定时记录各品系的OD_(660),绘制生长曲线,在进入稳定期后收获并进行生物量的测定及脂肪酸的气相色谱分析。18S rDNA基因序列的进化分析表明,OA3011-LK、OA3011-AY和OA3011-LZ具有一致的序列,而OA3011-QD因1个碱基的差异与其他OA3011出现了分离,FACHB-861与OA3011品系亲缘关系较远;对生长和脂肪酸进行对比分析后,结果显示,5个品系的球等鞭金藻在不同的时间达到稳定期,其中FACHB-861表现出了与其他品系明显不同的生长模式。FACHB-861和OA-3011品系的生物量具有显著差异,OA3011-LK、OA3011-AY和OA3011-LZ之间也有显著差异(P0.05),但特异生长率各品系间无显著差异(P0.05)。FACHB-861和OA3011-LZ的总脂肪酸(TFA)含量显著低于OA3011-LK、OA3011-QD和OA3011-AY(P0.05)。FACHB-861的脂肪酸各成分与OA-3011各品系明显不同。然而,在OA-3011各品系间脂肪酸组成也有明显差异,这表明球等鞭金藻存在广泛和频繁的数量性状表型差异。总之,地理隔离造成的这些差异为球等鞭金藻的选育提供了可行性。根据生长速度或DHA、EPA、多不饱和脂肪酸含量等筛选标准初步分析显示,可对OA3011-LK,OA3011-QD进行进一步的选育。     

Use of biomass of the marine microalga Isochrysis galbana in the nutrition of goldfish (Carassius auratus) larvae as source of protein and vitamins

The effect of the replacement of fish protein hidrolizate and vitamin premix by freeze‐dried biomass of the marine microalga Isochrysis galbana in the feed for goldfish (Carassius auratus) larvae was tested. Larvae (3.4±0.7 mg) were fed with three experimental microparticulated diets that differ from each other in the percentage of replacement of fish protein hidrolizate (25% or 100%) or vitamin premix by I. galbana biomass. The control diet and the diet containing microalgae biomass as a substitute of 25% of fish protein hidrolizate (MP₂₅) presented the highest survival, being almost 100%, with no significant differences between them. Survival in diets in which 100% of fish protein hidrolizate (MP₁₀₀) or vitamin premix (MV) had been substituted by microalgal biomass was 78% and 66% respectively. Growth, measured as weight, was lower than with the control diet in all treatments in which microalgal biomass was included, with lowest results being obtained with the MP₁₀₀ diet. Differences between treatments and control were lower when growth was measured as length. The harvesting and processing microalgae biomass is crucial to maintain the nutritive value and could be the cause for the obtained results.