蟹类养殖技术之二 陆基围塘锯缘青蟹高效生态养殖技术

锯缘青蟹(俗称黄格蟹)是畅销国内外市场的高档水产品之一.自2002年起,上虞市渔民在海涂九六丘北塘外陆基围塘养殖锯缘青蟹,至今养殖面积已达4000余亩.2006年市近海特种水产养殖基地在陆基围塘锯缘青蟹养殖中采用生态养殖技术,当年养殖的锯缘青蟹平均规格达265克以上,其中300克以上的锯缘青蟹占30%,该锯缘青蟹品质好,肉质鲜美,深受广大消费者所喜爱.     

锯缘青蟹大眼幼体与凡纳滨对虾混养试验

利用3口池塘共1.14 hm2进行锯缘青蟹大眼幼体与凡纳滨对虾的混养试验,投放锯缘青蟹大眼幼体8500只,凡纳滨对虾苗2.03×105尾,经96~129 d的养殖,收获锯缘青蟹729.1 kg,凡纳滨对虾2804.3 kg;锯缘青蟹平均312 g/只,凡纳滨对虾57.5尾/kg;锯缘青蟹大眼幼体成活率27.5%,凡纳滨对虾成活率79.4%。试验结果表明,锯缘青蟹大眼幼体可以直接投入池塘中与凡纳滨对虾混养,将为今后大规模发展锯缘青蟹养殖摸索出一条有效途径。     

低盐度地区土池培育锯缘青蟹幼体试验

锯缘青蟹(Scylla serrata)俗称青蟹或红蟳，属梭子蟹科青蟹属，是我国主要养殖经济蟹类之一。进入1980年代中后期以来，随着青蟹养殖技术的推广，青蟹养殖业在我国东南沿海各省得到了蓬勃发展。但由于锯缘青蟹的苗种尚未规模化生产，所养殖的苗种主要依靠天然捕获，因此苗种已成为抑制锯缘青蟹养殖业可持续发展的瓶颈。     

锯缘青蟹Scylla serrat(Forskal)的育肥研究

本文报导的锯缘青蟹育肥,是指选择已交配的雌性青蟹,在人工饲养的条件下,培育成为红膏蟹。论述了锯缘青蟹育肥生物学,探讨了锯缘青蟹育肥技术。     

锯缘青蟹Scylla serrata（Forskal）的育肥研究

本文报导的锯缘青蟹育肥，是指选择已交配的雌性青蟹，在人工饲养的条件下，培育成为红膏蟹。论述了锯缘青蟹育肥生物学，探讨了锯缘青蟹育肥技术。     

孵化水体pH值对锯缘青蟹胚胎发育的影响

采用组织学、光学显微镜和卵离体培育法,探讨孵化用水pH对锯缘青蟹(Scyllaserrata)胚胎发育影响。研究结果表明:锯缘青蟹胚胎发育孵化水体适宜pH值7.0~9.0,最适pH值为7.8~8.2;pH值对锯缘青蟹孵化率、畸形率和成活率的影响相对显著,但对孵化时间影响不显著;pH值范围在7.0~7.8和8.2~9.0对锯缘青蟹孵胚胎发育影响大于7.8~8.2。     

几种附着基在锯缘青蟹人工育苗中的应用比较

锯缘青蟹(Scylla serrata)是我国东南沿海地区海水养殖的主要对象之一,近十多年来,其人工育苗技术已被逐渐推广。然而,如何提高锯缘青蟹的成活率和出苗率,仍是当前育苗技术探索的主要问题。本试验着手于锯缘青蟹后期幼体所需的附着基,以网片、扇贝笼、牡蛎壳、人造草皮作为大眼幼体及幼蟹阶段的附着基,观察其附着和存活情况, 以探求出几种较好的附着基类型和一套青蟹后期     

南美白对虾和锯缘青蟹池塘混养技术

南美白对虾和锯缘青蟹同属甲壳动物，二者栖息习性、食性虽然有相同之处，但南美白对虾营游泳活动，主要生活在水的中下层，锯缘青蟹游泳能力较低，主要栖息在水的底层，营爬行活动。根据南美白对虾与锯缘青蟹的生活习性的差异，进行混养，     

锯缘青蟹养殖技术之二利用废弃虾池养殖锯缘青蟹技术

锯缘青蟹是畅销国内外市场的高档水产品之一.近年来,利用废弃虾池改养锯缘青蟹取得了较好的经济效益,以下就有关虾池如何开展锯缘青蟹养殖介绍如下:     

半滑舌鳎雌性特异扩增片段长度多态性标记的筛选与应用

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevisGünther)为东北亚特有的名贵冷温性比目鱼类,为我国养殖业的新宠。半滑舌鳎雌鱼生长速度是雄性的2~3倍,若能实现单雌化养殖将大大提高养殖业的经济效益。本研究利用扩增片段长度多态性(AFLP)技术,应用64个引物组合,检测了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevisGünther)雌雄基因组DNA的多态性,筛选与半滑舌鳎性别相关的AFLP分子标记。实验经过3轮筛选和验证,4个引物组合扩增出7个雌性个体出现频率为100%的DNA片段,我们认为这7个标记是半滑舌鳎雌性特异的AFLP标记,分别命名为CseF382、CseF575、CseF783、CseF464、CseF136、CseF618和CseF305。同时,将标记CseF382成功转化为SCAR标记,测定了该标记的DNA序列,建立了半滑舌鳎遗传性别鉴定的PCR技术,为半滑舌鳎性别决定机制的研究和性别控制奠定了重要基础。     

应用PCR方法检测患“黄水病”锯缘青蟹中的血卵涡鞭虫

"黄水病"是目前锯缘青蟹养殖过程中的主要疾病之一,病蟹主要症状表现为肌肉白浊,体液呈土黄色或浊白色牛奶状。因该病流行范围广、发病率和死亡率高,给青蟹养殖业主造成巨大经济损失,严重地影响了青蟹养殖的健康发展。本研究从病蟹体液中发现大量疑似血卵涡鞭虫的寄生原虫,应用已建立的梭子蟹血卵涡鞭虫病的PCR检测方法对患"黄水病"青蟹进行检测。结果从患病青蟹组织的DNA中扩增出产物大小为585bp的特异性目的片段,经序列分析比较,与三疣梭子蟹上发现的血卵涡鞭虫的序列同源,同源性达99.7%。综合病原流行病学调查、组织病理学、电镜观察等分析结果,初步确定血卵涡鞭虫是引起养殖青蟹"黄水病"的重要病原。     

锯缘青蟹促雄腺和胸腹神经团的直接联系

采用组织学、扫描电镜方法对锯缘青蟹(Scylla serrata)促雄腺和胸腹神经团之间的关系进行观察。结果表明，射精管末端存在促雄腺，促雄腺和胸神经团来源的支配第五步足(即游泳足)的神经紧密相连。该神经在游泳足基部的肌肉内部紧贴射精管并行，其分支支配着射精管周围肌肉，可能也是控制精荚排放的神经。本研究可为促雄腺对性别控制的机制及蟹类精荚电促排的深入研究提供理论依据。     

1种快速鉴定金钱鱼遗传性别的方法

金钱鱼(Scatophagus argus)是我国东南沿海名优养殖鱼类, 具有 XY 性别决定系统, Dmrt1 是其性别决定候选基因。金钱鱼生长具有性别二态性, 雌鱼生长快于雄鱼。目前缺乏快速鉴定金钱鱼遗传性别的分子标记, 阻碍了其性别控制育种技术的建立。本研究以公布的金钱鱼基因组数据, 在 Dmrt1 附近设计多对标记引物, 并通过 PCR 扩增验证标记的性别特异性。其中, 标记引物 Dmrt1-Marker-4-F/R 在雌鱼中仅扩增出一条 593 bp X 染色体条带, 而在雄鱼中能扩增出 593 bp 和 693 bp 两条条带, 分别来自 X 和 Y 染色体, 表明该标记为共显性标记。利用该标记检测我国南海沿岸 3 个不同地理群体 213 尾金钱鱼的遗传性别与表型性别完全一致。此外, 快速 DNA 提取试剂盒提取的片段较短 DNA 样品也可用于该对标记引物准确鉴定遗传性别。本研究建立了一种快速、准确、经济可靠的金钱鱼遗传性别鉴定方法, 将旨为促进金钱鱼性别控制育种技术的建立, 并为金钱鱼性别决定与分化机制研究提供依据。     

Screening and characterization of sex-specific DNA fragments in the freshwater fish matrinchã, Brycon amazonicus (Teleostei: Characiformes: Characidae)

The matrinch? Brycon amazonicus, a commercially important freshwater fish resource, has no heteromorphic sex chromosomes so far described. In the present study, we performed a screening of sex-associated DNA markers in this species, through the use of a random amplified polymorphic DNA (RAPD) assay and a genomic DNA restriction digestion analysis. DNA digestions evidenced no differences between sexes. Sixty-six random primers were used in pooled and individual DNA samples of males and females, and the analysis of the RAPD fingerprints revealed one female sex-associated band. Cloning and sequencing of this band led to the identification of two distinct DNA segments. While one of the isolated fragments showed a significant identity with a described protein gene (phosphatidylinositol glycan anchor biosynthesis, class W), the other fragment, composed of 535?bp, corresponds to a novel DNA marker. Further experiments were performed with this second DNA fragment in order to verify its sex-specificity. Data on dot blot hybridization, using total DNA of both sexes, confirmed its female-specificity in B. amazonicus. A primer set was designed based on its sequence data and used in PCR with DNA samples of this species, leading to diagnose the animals' sexes with a 100?% overall accuracy through a sequence characterized amplified region approach. No amplification results were found for two other species of the genus-B. orbignyanus and B. lundii. The obtained data can lead to the hypothesis that B. amazonicus may present heteromorphic sex chromosomes that should be in an early phase of differentiation.     

锯缘青蟹蜕皮抑制激素cDNA的分子克隆及其表达分析

根据近缘种类同源序列设计简并引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术,首次扩增获得锯缘青蟹(Scylla serrata)眼柄组织中编码蜕皮抑制激素(MIH)成熟肽全长cDNA序列及部分信号肽序列。将该序列克隆到pUCm—T载体上进行序列测定。结果表明,编码锯缘青蟹MIH成熟肽的cDNA由234个碱基组成,由此推测MIH成熟肽含78个氨基酸残基。该序列不仅与其它短尾类甲壳动物的MIH氨基酸序列具有高度的同源性(79％～9l％),还与该激素同一家族的性腺抑制激素、大颚器抑制激素的氨基酸序列具有较高的相似性。RNA斑点杂交结果显示,MIH基因在眼柄神经节及脑组织中均有表达,而在肌肉、中肠腺中不表达。     

条斑紫菜6个品系的SRAP分析

为鉴别条斑紫菜不同品系的种质,使用相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)标记对条斑紫菜的5个选育品系和1个野生品系进行遗传分析,结果从35对引物组合中筛选出可扩增出稳定清晰条带的组合11对,共获得131个扩增位点,其中多态性位点125个,多态性比例高达95.42%。6个品系 间的遗传距离为0.364 3～0.867 9,平均为0.593 0。用UPGMA法进行聚类分析,结果将6个品系分为2个群,所反映的亲缘关系与各品系的来源基本一致,说明SRAP 标记技术可以成为条斑紫菜品系间遗传分析的有效工具。在131个多态性位点中,选择扩增出的4个位点构建了6个品系的指纹图谱。另外,通过ME1/EM6引物组合 扩增得到耐高温品系TM-18的特异性条带,经回收测序和重新设计引物,该条带在其丝状体和叶状体DNA中均能稳定地被扩增出来,可用于该品系的种质鉴别 。     

蟹类原肌球蛋白基因的克隆与表达

原肌球蛋白是甲壳类动物的主要过敏原之一。本文通过分子生物学技术方法，分别克隆得到锯缘青蟹(Scylla serrata)、中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)和三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的原肌球蛋白基因序列。测序结果表明，三个基因的序列长度均为855 bp，编码284个氨基酸残基，三者氨基酸序列同源性为99.3%。三种蟹的原肌球蛋白基因序列与GenBank中其他甲壳类动物的原肌球蛋白具有很高的同源性。将锯缘青蟹的原肌球蛋白基因与pGEX-4T-3载体连接后，经IPTG诱导得到分子量约为61 kDa的融合表达蛋白。通过与甲壳类过敏患者血清的免疫印迹反应，证实融合表达的原肌球蛋白具有过敏原性，表明原肌球蛋白是蟹类的主要过敏原之一。该融合蛋白有望用于甲壳类食物过敏诊断试剂的开发与应用。     

鱼类环境DNA研究中通用引物的筛选验证

为了筛选一个通用性和适用性良好的能够运用于环境DNA(eDNA)研究的鱼类引物,从相关文献中选取了鱼类线粒体基因组部分片段的5对引物,分别对线粒体D-loop区、16S rRNA基因、COI基因以及Cytb基因部分片段进行扩增。对千岛湖48种鱼类基因组DNA进行扩增后比较发现,引物16s和COI均可以取得良好的扩增效果,通用性优于其他几对引物。引物16s的扩增产物经凝胶电泳检测均出现明亮的目的条带,引物COI则有3种鱼的条带经凝胶电泳检测亮度较暗。利用上述引物对环境样品eDNA扩增时发现,只有16s和COI的引物具有良好的扩增效果,能够得到明显单一的亮带。对该两种引物的PCR产物克隆后测序比对发现,16s的PCR产物均为千岛湖常见鱼类物种的基因片段,COI的PCR产物则为细菌COI基因的部分片段。综上,我们认为引物16s在通用性和适用性上都更为适合作为鱼类群落结构eDNA研究的通用引物。     

Genetic linkage map of the pearl oyster,Pinctada martensii (Dunker)

Genetic linkage maps were constructed with amplified fragment length polymorphism (AFLP) and microsatellite markers for the pearl oyster, Pinctada martensii (Dunker), the main bivalve used for marine pearl production in Asia. Twenty‐four AFLP and 84 microsatellite primer pairs were used for linkage analysis in a full‐sib family with two parents and 78 offspring. Of the 2357 AFLP fragments generated, 394 (16.7%) were polymorphic and segregating. Most (340 or 86.2%) of the markers segregated according to expected Mendelian ratios. Female and male linkage maps were constructed using 230 and 189 markers, including 15 and 10 microsatellites respectively. The female map consisted of 110 markers in 15 linkage groups, covering 1415.9 cM, with an average interval of 14.9 cM. The male map consisted of 98 markers in 16 linkage groups, with a total length of 1323.2 cM and an average interval of 16.1 cM. When unlinked doublets were considered, genome coverages were 78.5% for the female and 73.5% for the male map. Although preliminary, the genetic maps constructed here should be useful for future linkage and quantitative trait loci mapping efforts.