淇河鲫与两野生鲫鱼群体遗传多样性的ISSR分析

应用ISSR技术对淇河鲫、金堤河鲫、沁河鲫3个群体进行遗传多样性研究。结果表明:(1)筛选8个引物共得到94个扩增位点,其中多态位点82个,多态位点百分率为87.23%。(2)Popgene分析结果,淇河鲫群体的遗传多样性水平相对较低,PPB=61.70%,H=0.2036,I=0.3085。(3)3个群体间的遗传分化系数GST=0.1303,基因流Nm=3.3359。表明3个群体的遗传分化尚未达到种群的分化水平。(4)金堤河鲫和沁河鲫群体间遗传距离较近,淇河鲫有一定的遗传分化,形成了较稳定的、独立的遗传结构。     

淇河鲫与彭泽鲫的生物学性状比较研究

比较了淇河鲫和彭泽鲫的形态特征 ,存在显著差异的性状有 :侧线鳞 (分别为 2 9 7± 2 2、30 9±1 3) ,左侧鳃耙数 (分别为 4 1 7± 5 2、4 7 7± 5 7) ,全长 /体长 (分别为 1 30 0± 0 134、1 2 5 4± 0 0 6 6 ) ,尾柄长 /尾柄高 (分别为 0 80 8± 0 10 7、0 876± 0 2 4 2 ) ,体长 /体宽 (分别为 5 5 88± 0 4 2 4、5 2 33± 0 5 75 )。两种鱼的脊肉厚与体重、体长、体高、体宽的比值有极显著异 ,淇河鲫较大。两种鱼的生长速度无明显差别。相同生长环境条件下 ,淇河鲫的含肉率、肌肉中蛋白质含量及氨基酸总量均高于彭泽鲫 ,但差异不显著。淇河鲫肌肉中钠元素含量显著高于彭泽鲫 ,而肌肉中钾、钙、镁、铁、锰、铜、锌的含量相近。     

淇河鲫雌核发育克隆系鉴定与性状分析

淇河鲫（Carassius auratus）为河南省的传统优质特色水产品种之一,是我国著名的鲫地方品种。本研究利用15个微卫星标记从85尾淇河鲫样品中共鉴定出21个克隆系,在其中6个克隆系中检测到18尾雄性个体。结果表明：淇河鲫是两性型雌核发育三倍体,遗传多样性水平较高。多元统计分析显示：体高、体宽、背鳍基长等3个性状对体质量的影响达到了极显著的水平（P〈0.01）,这一结果与体高背厚的淇河鲫种质较优异的生产经验一致。本研究结果提示：可以借鉴两性型雌核发育方正银鲫育种成功经验来开展淇河鲫品种的选育,在选育过程中应关注淇河鲫体高背厚的形态特点。     

淇河鲫研究进展与开发策略

对淇河鲫(Carassius auratus in Qihe river)的生物学性状、经济和养殖性状、种质资源等研究进行了总结,概述了淇河鲫资源保护与增殖的主要措施,分析了淇河鲫发展中存在的主要问题,提出了保护和综合开发淇河鲫的建议。     

生物学指标在评定养殖鲫肝脏脂肪蓄积程度中的作用

为了了解配合饲料养殖鲫肝脏中脂肪蓄积状况,以及肥满度、体质量/体长、脏体指数、肝体指数、肠系膜脂肪指数、肠道指数等6项生物学指标在评定养殖鲫肝脏脂肪蓄积程度中的作用,分别采用物理方法和索氏抽提法对30尾野生鲫和60尾配合饲料养殖鲫的生物学指标和肝脏脂肪含量进行了检测;采用HE染色法制作和观察了鲫肝脏组织切片;采用SPSS 19.0软件对生物学指标和肝脏脂肪含量的相关关系进行了统计分析.结果表明,养殖鲫的肥满度、体质量/体长、脏体指数、肝体指数、肠系膜脂肪指数、肠道指数、肝脏脂肪含量平均值均高于野生鲫;其中野生和养殖鲫肝脏脂肪含量平均值分别为2.11％±0.69％和19.49％±4.31％.肝脏组织学检查发现野生鲫肝细胞形态正常,肝细胞轮廓清晰,且沿肝细胞索有序排列,无脂肪空泡;养殖鲫的肝脏细胞形态大小不一,细胞核萎缩、溶解以及偏移细胞中央的现象比较严重,肝细胞轮廓不清,脂肪严重蓄积时可见明显脂肪空泡.养殖鲫的肥满度、体质量/体长、肠道指数均与肝脏脂肪含量之间无显著相关;但脏体指数(X1)、肝体指数(X2)、肠系膜脂肪指数(X3)均与肝脏脂肪含量(Y)存在显著中等正相关,多元线性回归方程为Y=8.085 +0.282X1+3.726 X2 +0.505X3(R =0.562,F=3.995,P=0.018).养殖鲫肝脏中脂肪蓄积现象严重,并且蓄积程度随脏体指数、肝体指数、肠系膜脂肪指数的增加而加重.     

鲤鲫杂交(♀)×鲫(♂)回交子代的形态特征研究

利用雌性鲤鲫杂交与雄性鲫鱼回交,制备了鲤鲫杂交回交子代鱼,并对其1龄鱼的形态特征和内部器官结构进行了测定。其主要性状为：回交子代的背鳍条Ⅲ,15～18；臀鳍条Ⅲ,4～6；侧线鳞27～36；侧线上鳞和侧线下鳞同为5～6；鳃耙28～33；体长为体高的(2.35±0.11)倍,为头长的(3.33±0.13)倍,为尾柄长的(6.36±0.54)倍；头长为眼径的(4.54±0.20)倍；为眼间距的(1.74±0.07)倍；为尾柄高的(1.96±0.10)倍；尾柄长为尾柄高的(0.90±0.28)倍；体高为头高的(1.59±0.09)倍。结果表明,该回交子代鱼在可数和可量性状上都有个别性状产生变易,但大多数性状相对比较稳定。     

淇河鲫肌肉生长抑制素基因的克隆与表达

肌肉生长抑制素(MSTN)是动物肌肉发育和生长过程中的负调控因子。为了明确淇河鲫MSTN基因序列及其在肌肉生长发育中的调控功能,本研究利用RACE方法克隆淇河鲫MSTN全长c DNA序列,q RT-PCR分析其在不同组织和胚胎发育阶段的表达情况。结果显示,淇河鲫MSTN c DNA序列全长2094 bp(no.KC851952.1),包含86 bp 5′非编码区、880 bp 3′非编码区和1128 bp开放阅读框,编码375个氨基酸残基,前22个氨基酸残基为信号肽,34~256位氨基酸残基为TGF-β前肽域,281~375是TGF-β结构域,具蛋白酶水解位点RIRR和C端生物活性区的9个保守半胱氨酸残基。蛋白同源分析发现淇河鲫MSTN与鲤形目鱼类相似性较高,与哺乳动物和鸟类的相似性最低。系统进化分析显示,淇河鲫MSTN与鲫、鲤、鳡等鲤科鱼类亲缘关系较近。实时定量PCR分析表明,淇河鲫MSTN基因在各个组织中均有表达,脑中表达量最高,其次为肌肉和肝脏,肠道表达量最低。淇河鲫胚胎发育的各阶段MSTN基因均有表达,受精卵表达量最高,其次为囊胚期,神经胚期表达量最低。推测MSTN与淇河鲫肌肉发育生长具有一定的相关性,可能参与"双背鲫"特征的形成。     

大阪鲫生物学的研究

本文对大阪鲫的生物学特性进行了研究，主要内容包括：(1)形态特征、生活习性、繁殖习性、食性和胚胎发育的研究；(2)生长速度、起捕率、疾病的试验；(3)丰满度、肌肉的营养成份和氨基酸的测定；(4)染色体、血清蛋白电泳的分析等。同时还将上述各项同东北鲫、本地鲫进行了比较。大阪鲫的性比为1：1，与东北鲫、本地鲫不同。大阪鲫的鳃耙个数多(最多可达120个)，且长而密，其侧突而长分枝，鳃耙与鳃丝等长。成鱼的肠管长度为体长的5．6倍，管细、壁薄、迂回盘曲。大阪鲫的食性广阔，是属于兼食浮游植物的杂食性鱼类。大阪鲫的染色体与本地鲫相同，都是2n=100。大阪鲫具有明显的生长优势，比本地鲫生长快12—46．2％。它的起捕率很高，可达90％以上，比东北鲫(50％)、本地鲫(5％)高得多。大阪鲫的丰满度为3．07—3．24，空体壳占体重的百分比为85—86％，具有较好的经济性状。肌肉中蛋白质、脂肪的含量与本地鲫、东北鲫相近，而水份含量略高于东北鲫，本地鲫。丝氨酸、精氨酸、谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸等的含量均比东北鲫、本地鲫略高。大阪鲫的生长速度快，群体产量高，食谱广，经济性状良好，是一种淡水养殖的优良品种。     

基于微卫星标记的洞庭青鲫倍性鉴定

洞庭青鲫产于湖南省澧县北民湖,因个体大且背部青灰而得名,其快速生长的特性和异于普通鲫的体型令作者怀疑前人报道的"二倍体群体"结果。为此,从银鲫微卫星文库中筛选9个位点构建微卫星鲫倍性鉴定体系,同时采用流式细胞术和染色体核型分析完成了洞庭青鲫倍性鉴定。结果显示,建立的微卫星鲫倍性鉴定体系能够100%区分二倍体、三倍体和四倍体鲫,微卫星基因分型结果显示136尾洞庭青鲫均为三倍体,各位点的等位基因数为1～3,样本基因型包括AAA、AAB/ABB、ABC 3种类型;洞庭青鲫血细胞DNA平均含量为159.42±5.64,与二倍体红鲫的血细胞DNA平均含量(102.43±3.54)比值(DI)为1.56∶1;流式细胞术与微卫星体系判定结果匹配度100%;染色体核型分析显示洞庭青鲫染色体数为3n=156±,核型公式为3n=39m+36sm+81sta,NF=231。建立了适用于鲫倍性鉴定的微卫星标记体系,且系统地证实了洞庭青鲫为三倍体鲫品种。     

黄芪多糖对淇河鲫生长性能、抗氧化功能及抗病力的影响

将淇河鲫(Carassius auratus)随机分为 4 组, 分别以普通饲料、黄芪多糖添加量为 500 mg/kg、1000 mg/kg、 1500 mg/kg 的饲料进行投喂, 42 d 后检测其生长性能、脏器指数和肝脏抗氧化酶活性(总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶)及嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒后淇河鲫的存活率。实验结果显示, 不同剂量的黄芪多糖可显著(P＜0.05)增加淇河鲫增重率和特定生长率; 黄芪多糖添加后淇河鲫肾脏指数和脾脏指数无变化, 仅 1000 mg/kg 黄芪多糖添加组肝脏指数显著高于对照组(P＜0.05); 黄芪多糖能显著增加淇河鲫肝脏 SOD、 CAT 和 GPx 活性, 降低肝脏 MDA 含量(P＜0.05); 不同剂量黄芪多糖添加后均可提高淇河鲫在嗜水气单胞菌攻毒后的存活率, 且 1000 mg/kg 添加组抗菌效果最好, 96 h 后淇河鲫存活率为 75%。上述结果表明, 黄芪多糖可促进淇河鲫生长, 增强其抗氧化能力, 从而提高其抵御细菌感染的抗病力。综合分析和评估, 在水产养殖淇河鲫幼鱼饲料中黄芪多糖适宜添加量为 1000 mg/kg, 可有效防控鱼类感染嗜水气单胞菌疾病的发生。     

淇河鲫不同组织器官溶菌酶与抑菌活性比较

选择天然三倍体淇河鲫(Carassius auratus in Qihe River),通过试验研究其不同组织器官溶菌酶和抑菌活性,以了解淇河鲫不同组织器官的抗菌能力。结果表明,淇河鲫不同组织器官溶菌酶和抑菌活性存在差异,溶菌酶活性测定值依次为:肝胰脏肾脏鳃脑肠脾脏;抑菌活性测定值依次为:肝胰脏肾脏脑鳃肠脾脏(P0.01);淇河鲫抗菌活性较高的组织为肝胰脏和肾脏,且肝胰脏又极显著高于肾脏(P0.01),肾脏和鳃的抗菌能力极显著高于脾脏(P0.01);表明鱼类不同组织器官免疫能力和抗菌活性存在差异,这种差异与组织器官的生理功能和抗病响应机制不同有关;同时说明鱼类不同组织器官在致病菌干预过程中将发挥不同的作用。     

怀山药皮对淇河鲫血清生化、免疫指标及组织结构的影响

为探究怀山药皮(Chinese yam peel,YP)对淇河鲫免疫的影响,选取平均体重为(106.76±3.74)g的淇河鲫240尾,随机分为对照组(NC)、0.5%怀山药皮添加组(LYP)、1%怀山药皮添加组(MYP)、2%怀山药皮添加组(HYP)4组,养殖8周,检测实验鱼生长指标、血清生化指标及免疫相关基因的表达情况。结果显示:添加怀山药皮对淇河鲫生长指标没有显著性影响;血液生化指标中谷草转氨酶活性在MYP组显著性降低,碱性磷酸酶的活性显著升高;与NC组相比,怀山药皮添加组肝脏细胞膜与核膜完整性增强,胞质破碎,核溶解、偏移现象减轻;与NC组相比,添加怀山药皮上调了抑炎因子(IL-10)、紧密连接蛋白基因(Claudin-1)、抗氧化基因(CAT和GST)和TLR通路基因(TLR4)mRNA表达量。以上结果表明,饲料中添加怀山药皮,能在一定程度上增强鱼体免疫力。     

鲫微卫星标记与几个生长性状的相关性分析

鲫(Carassius auratus)遗传多样性丰富,具多种不同倍性的亚种,是研究鱼类进化的独特材料。本研究利用79个SSR标记和22个EST-SSR标记检测了鲫自交F2代的181尾个体的基因型,对体重、体长、体高和体厚4个生长性状进行了单标记回归分析。Permutation检验(10000次)结果显示:有22个标记分别与体重、体长、体高和体厚具有显著相关性(P0.05),其中,HLJYJ15和HLJYJ244与4个性状均呈极显著相关(P0.01)。本研究筛选的101个微卫星标记丰富了鲫分子标记数量,可用于鲫连锁图谱的构建和QTL定位研究;获得了4个与鲫性状相关的标记及基因型,为鲫的分子标记辅助育种(MAS)和生长性状的遗传机制研究提供了工具。     

转基因鲤放流试验湖鲫的年龄与生长

以鳞片作为年龄鉴定材料,研究转基因鲤(Cyprinus carpio)放流试验的人工湖中鲫(Carassius auratus)的年龄组成、大小与生长特性。结果显示:鲫种群由4个年龄组(1 a~4 a)构成。体重(W,g)与体长(L,mm)的关系式为:W=2.597×10-5L3.0133;体长与鳞径(R,mm)的关系式为:L=7.4+29.8R。生长模式可用von Bertalan-ffy生长方程描述:Lt=28.8[1-e-0.254(t+0.307)],Wt=668.9[1-e-0.254(t+0.307)]3.0133,体重生长拐点年龄ti=4.04 a。还对转基因鲤放流人工湖泊中鲫的生长数据同其它湖泊中的作了比较。这些数据为今后探讨转基因鲤种群的建立对鲫生长的影响积累了背景资料。     

淇河鲫IL-8原核表达系统的构建及多克隆抗体的制备与鉴定

为揭示淇河鲫(Carassius auratus var.Qihe)白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)的功能,本研究构建了原核表达系统,并制备了兔抗鲫IL-8多克隆抗体。首先采用RT-PCR法扩增淇河鲫IL-8基因编码序列中不含信号肽的基因片段,克隆到pET-32a(+)载体后转化入Rosetta菌株构建原核表达系统。经IPTG诱导表达出相对分子质量约27.8 kD的目标融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,效价达1︰10~5。经免疫亲和层析纯化的抗体能特异性识别重组和天然的淇河鲫IL-8蛋白。比较不同组织的免疫组化和荧光定量PCR结果,IL-8蛋白量和mRNA的表达量在不同组织间变化趋势一致,在肌肉、脾和头肾均检测到较高的表达量,肠道的表达量较低。本研究为进一步探讨淇河鲫IL-8的生物学功能奠定了基础。     

银鲫与普通鲫群体遗传结构的比较分析

利用15个微卫星多态性分子标记,对黑龙江省方正县双龙水库和双凤水库两个水体的雌核发育银鲫(Car-assius auratus gibelio)和二倍体普通鲫(Carassius auratus(L))的群体遗传多样性进行比较分析。结果显示:平均每个多态性位点获得银鲫10.39个有效等位基因,普通鲫11.82个有效等位基因;双龙水库三倍体银鲫和二倍体普通鲫的平均观测杂合度分别为0.6035和0.6300,双凤水库中的三倍体银鲫和二倍体普通鲫的平均观测杂合度为0.5311和0.5885;相似性与遗传距离分析结果显示:相似性最大的是双凤水体内的银鲫和普通鲫(0.8127),远大于两个水体间的银鲫群体间的相似性。结果表明,银鲫与普通鲫存在着明显的遗传物质交流,较高的遗传相似性不仅与传统的银鲫起源于普通鲫的观点一致,也暗示银鲫与普通鲫存在经常性地遗传物质交流。     

鲫体长和体高相关的EST-SSR标记的筛选

鲫作为研究鱼类进化的独特材料,具有丰富的遗传多样性和多种不同倍性的亚种。采用一般线性回归模型（GLM）,对286个EST-SSR标记与鲫鱼自交F2代181尾个体的体长、体高及其比值进行单标记回归分析。Permutation检验（10 000次）结果显示：共有53个标记分别与体长、体高及体长/体高具有显著相关性,其中与体长显著相关的标记有24个（P〈0.05）,极显著相关的标记有6个（P〈0.01）;与体高显著相关的标记有30个（P〈0.05）,极显著相关的标记有9个（P〈0.01）;与体长/体高显著相关的标记有23个（P〈0.05）,极显著相关的标记有9个（P〈0.01）。本研究获得的53个与3种性状相关的标记为分子辅助育种（MAS）提供了理论基础。     

利用鲫鱼监测水环境中汞污染的研究

为科学利用鱼类等水生动物监测并评价水环境中汞污染的程度,试验在松花江、黑龙江、乌苏里江等河流的特定区域设置5个采样点,先监测对应水环境中汞含量,然后在禁渔期前采集监测区域内的鲫鱼(Carassius auratus),测定体重和肌肉中的汞含量.结果发现,同一水域中鲫鱼肌肉汞含量与其体重明显正相关(r>0.765),当鱼体大小不统一时,可用线性回归方法拟合计算相同规格的鲫鱼肌肉汞含量,经拟合计算的同一规格的鲫鱼肌肉汞含量与其栖息水环境中汞的污染水平极显著正相关(p<0.01).利用线性回归方法拟合计算的鲫鱼肌肉汞含量可以定量评价和比较水环境受汞污染的程度和大小.