一株鳙源鲁氏耶尔森氏菌的分离鉴定及其感染的肠道病理损伤

为确定患病鳙鱼致病菌及筛选敏感药物,通过平皿划线法从患病鳙鱼血液及体表溃烂组织中分离到1株革兰氏阴性的短杆菌JL9510,该菌株在电镜下呈短杆状,在LB固体培养基上呈透明状菌落。VITEKMS全自动快速微生物质谱检测结果证明,该菌株为鲁氏耶尔森氏菌的置信度为99.9。通过16S rRNA及系统发育树构建分析,发现菌株JL9510与已知菌株JQ657818.1 Yersinia ruckeri聚为一支,确定其是一株鲁氏耶尔森菌。人工回归感染试验结果证明,该菌株为患病鳙鱼的致病菌。VITEK 2 Compact自动化细菌鉴定和药物敏感性分析系统结果显示,鲁氏耶尔森氏菌JL9510有较高的致病力,且对氟苯尼考敏感,对环丙沙星耐药。试验的抗生素表现出良好的治疗效果,为鲁氏耶尔森氏菌的防治奠定了基础。     

大口黑鲈鲁氏耶尔森氏菌的分离鉴定、主要毒力基因及致病性研究

为探明2021年3月福建某水库养殖大口黑鲈疾病暴发的原因,实验从患病大口黑鲈肝脏、肾脏、脾脏中分离优势菌,通过人工感染实验确定病原菌,并综合16S rDNA基因序列分析、生理生化和质谱特征等技术对该病原菌进行种属鉴定,同时,进行毒力基因检测、药物敏感性实验以及组织病理学观察。结果显示,从病鱼脾脏中分离获得1株优势菌并鉴定为鲁氏耶尔森氏菌;该菌株对大口黑鲈的半致死剂量为3.8×10⁵ CFU/尾;该菌株携带yrP1、yhl A、yhl B等毒力基因,对恩诺沙星、盐酸多西环素、氟甲喹、硫酸新霉素、氟苯尼考等5种药物相对敏感。组织病理学观察发现,鲁氏耶尔森氏菌的感染造成大口黑鲈肝脏、肾脏、脾脏不同程度的损伤,表现为明显的变性、坏死及炎症细胞的浸润等。本研究首次报道了鲁氏耶尔森氏菌对养殖大口黑鲈的致病性,可为养殖大口黑鲈鲁氏耶尔森氏菌病的诊断和药物防治提供参考依据。     

斑点叉尾鮰鲁氏耶尔森氏菌病的发生与诊治

2008年3～4月，四川简阳三岔湖网箱养殖的斑点叉尾鮰暴发了一种急性传染性疾病，在发病10天左右时间就造成了大批斑点又尾鮰死亡，死亡率高达85％，造成严重的经济损失。本研究中心对该地区网箱养殖发病的斑点叉尾鮰进行了现场调查采样，经实验室检测确认为鲁氏耶尔森氏菌感染，本文就此病诊疗情况介绍如下，以期对今后斑点叉尾鮰鲁氏耶尔森氏菌病的防治提供参考。     

氟苯尼考在感染鲁氏耶尔森氏菌的西伯利亚鲟体内的药效学

通过构建鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)感染西伯利亚鲟(Acipenser baeri)病理模型,设立阴性对照组(不攻菌不给药)及阳性对照组(攻菌不给药),比较研究了高(50 mg.kg-1)、中(20 mg.kg-1)、低(5 mg.kg-1)氟苯尼考剂量治疗组和氯霉素(10 mg.kg-1)对照组西伯利亚鲟体内的药效学。连续给药3天后,阴性对照组和阳性对照组累计死亡率分别为0%和50%,表明病理模型构建成功;而氟苯尼考低、中、高剂量组和治疗对照组累计死亡率分别为30%、0%、0%、10%。愈后各实验组鱼血液中均无细菌感染;除阴性对照组外,鱼肝、肾组织中均可分离到鲁氏菌,但不致鱼死亡。实验结果表明,氟苯尼考对感染鲁氏耶尔森氏菌的西伯利亚鲟有较好的治疗作用,药效优于氯霉素,可用于治疗鱼类细菌性疾病。     

氟苯尼考对鲁氏耶尔森氏菌体外药效研究

本文研究了氟苯尼考对鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)体外药效学,测定了最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、生长动力学曲线和杀菌动力学曲线和抗菌后效应(PAE)及四种培养因子对氟苯尼考体外抑制鲁氏菌活性的影响。结果表明:MIC、MBC和MBC/MIC分别为0.5μg.mL-1、1μg.mL-1和2;鲁氏菌在液体培养基中1h后进入对数生长,大约持续7h;在用药4～6 h达到最大药效。由杀菌曲线可知,氟苯尼考的杀菌功效具有浓度依赖性;在2 MIC、4 MIC和8 MIC时,PAE分别为3.71±0.11、4.54±0.27和5.52±0.23;氟苯尼考对鲁氏菌作用最适pH值为6～8,且二价阳离子(Mg2+)、血清含量及细菌数量小于108时对药效无显著影响。因此,保证药物浓度和作用时间,并配合最适培养条件,是氟苯尼考发挥最高药效的前提条件。     

鲁氏耶尔森菌qPCR快速检测方法的建立和应用

鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)是导致虹鳟(Oncorhynchus mykiss)肠炎红嘴病的病原。本研究以鲁氏耶尔森菌毒力因子rup A基因为靶标设计1对特异性引物,以含有rup A基因部分序列的重组质粒为标准品构建标准曲线,优化建立检测鲁氏耶尔森菌的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对腹腔注射鲁氏耶尔森菌菌悬液的虹鳟肝、肾、脾、血液样品进行检测。结果显示,设计的引物具有良好的种间特异性,标准曲线线性方程为y=–3.3766x+40.012(R~2=0.9958);最低检测限为57 copy/μL,较常规PCR的灵敏度高出约100倍。应用检测结果表明,本方法可准确检测被鲁氏耶尔森菌感染的虹鳟样品。研究表明,所建立的qPCR方法具有特异、灵敏、快速、定量的优点,可用于快速诊断虹鳟肠炎红嘴病早期病症及定量检测鲁氏耶尔森菌。     

中华鳖台湾群体耶尔森氏菌病的研究

从中华鳖台湾群体病鳖的肝脏分离到菌株９７－７－２Ｃ,９７－９－２Ａ‘,用这两种菌株人工感染１０－１５ｇ稚鳖,发病率和死亡率均为１００％,经菌体形态特征,培养特性和生理生化反应测定,鉴定９７－７－２Ｃ为小肠结肠炎耶尔森氏菌,９７－９－２Ａ’为结核耶尔森氏菌,这两种菌都会引起鳖败血症。     

中草药与复方对鲁氏耶尔森菌的体外抑菌作用

采用试管二倍稀释法测定了16种中草药单方及5种复方制剂对鲁氏耶尔森菌（Yersinia ruckeri）的最小抑菌浓度（MIC）。结果表明,黄芩（Radix Scutellariae）和诃子（Fructus Chebulae）对鲁氏耶尔森菌的抑菌作用最强,MIC均为0.028g·mL^-1,可作为防治水产养殖动物耶尔森菌病害的主要备选中草药;大黄（Radix et Rhizoma Rhei）的抑菌作用较强,其MIC值为0.227g·mL^-1,也可作为候选药物;青蒿（Herba Artemisiae）、金樱子（Fructus Rosae Laevigatae）、连翘（Fructus Forsythiae）、茵陈（Herba Artemisiae Scopariae）、五倍子（Galla Chinensis）及金银花（Flos Lonicerae）的抑菌作用较弱,其MIC值均为0.455g·mL^-1。5种复方制剂中,大黄、黄柏（Cortex Phel-lodendri）和黄芩3种中草药以5：3：2的比例配伍对鲁氏耶尔森菌具有最佳抑菌作用,其MIC值为0.057g·mL^-1,抑菌效果弱于黄芩,但远强于大黄单独使用,可为该细菌性疾病的防治提供复方配伍参考。     

虹鳟肠炎红嘴病病理模型的构建

为探讨鲁氏耶尔森菌侵染虹鳟的致病机制,本实验建立了鲁氏耶尔森菌感染虹鳟引起的肠炎红嘴病的病理模型,制定相应的临床症状及组织病理学评分系统,并对该模型进行研究。将43尾平均体质量约为12 g的健康虹鳟随机分成5组:3个实验组(n=30)、对照组(n=10)和哨兵组(n=3)。3个实验组分别采用2.0×106、2.0×107和2.0×108 CFU/m L的鲁氏耶尔森菌感染浓度,通过腹腔注射方式进行人工感染试验。对感染鲁氏耶尔森菌的虹鳟肠、肝脏、脾脏和肾脏组织进行镜检及临床症状、剖检病变判断,结合细菌学检测,按制定的评分系统评价各组肠炎红嘴病造模效果,确定最佳造模方案。结果显示,各攻毒组虹鳟感染后72 h均出现不同程度死亡,临床症状表现为红嘴、肛门红肿、鳍(胸鳍、腹鳍、臀鳍)等出现不同程度充血,下颌部、腹部出现出血点等。组织病理学可见肝脏、脾脏、肾脏及肠组织均有炎性细胞浸润现象出现,肝细胞、肠上皮细胞和肾小管上皮细胞等实质细胞变性、坏死,脾脏部位淋巴细胞减少、红细胞死亡堆积。综合各组得分发现,2.0×107 CFU/m L组的鲁氏耶尔森菌感染虹鳟造模效果最佳,患病虹鳟的临床症状显著且组内差异较小,病程迁延较长,便于研究。研究表明,对体质量约12 g的虹鳟幼鱼腹腔注射0.1 m L浓度为2.0×107 CFU/m L的鲁氏耶尔森菌可成功构建肠炎红嘴病病理模型。     

中草药添加剂对鲁氏耶尔森菌感染虹鳟血液生化指标的影响

为研究复方中草药对鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)感染虹鳟(Oncorhynchus mykiss)后其血液生化指标的影响,在虹鳟饲料中分别添加两种复方中草药(复方1组、复方2组),持续投喂28 d。在第28天感染鲁氏耶尔森菌,检测感染后72 h的血清生化指标,并统计各组存活率。结果显示:复方中草药组对虹鳟增重无抑制作用。添加复方中草药可提高虹鳟感染鲁氏耶尔森菌后的存活率,其中复方2组的保护效果最好。感染72 h后,复方2组总蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯、总胆固醇含量和碱性磷酸酶活性均高于对照组。复方2组谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性低于对照组,乳酸脱氢酶活性显著低于对照组。复方1组和复方2组尿酸含量显著低于对照组。复方中草药组总胆红素、尿素氮、肌酐和血糖含量与对照组相比无显著性差异。结果表明,添加复方中草药能提高鲁氏耶尔森菌感染后虹鳟的存活率,其中复方2组的保护效果最好。     

黄颡鱼小肠结肠炎耶尔森氏菌16SrDNA及系统发育分析

从发病黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)心脏中分离到1株细菌GM 2402,进行了分离培养、形态学观察、生理生化试验与16S rDNA基因的PCR扩增及序列分析.结果表明,菌株GM 2402为革兰氏阴性杆菌,具动力性,V-P试验、水杨酸、过氧化氢酶、脲酶等阳性,不发酵鼠李糖、乳糖等,硫化氢、枸椽酸盐等阴性.16S rDNA序列长1 417 bp,GenBank的登录号是JX 101598,且与数据库中小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)的相似性高达99.6％,系统发育树显示与小肠结肠炎耶尔森氏菌聚为一个分支.综合菌株的生化特性及分子生物学分析结果,判定菌株GM2402为小肠结肠炎耶尔森氏菌.     

中国对虾中抗菌短肽的分离纯化与功能分析

以水产病害的病原菌为目标菌，从中国对虾（Penaeuschinesis）体液中分离筛选抗菌肽，通过Sephadex G-50、RP-HPLC等分离纯化技术，得到一种抑制水产病原菌的抗菌肽PC-V-2。经初步鉴定，该抗菌肽具有广谱抗性，不仅抗鲁克氏耶尔森氏菌（Yersinia ruckeri），而且对金黄色葡萄球菌（Staphyloccus auleus）、枯草杆菌（Bacillus subttilis）等革兰氏阳性菌，大肠杆菌（Escherichia coli）等革兰氏阴性菌和白色念珠菌（Candida albicans）等真菌也有较强的抗性。另外，该抗菌肽还有一定的抑制凝血的活性，但没有检测到溶血和丝氨酸蛋白酶抑制活性。经MALDI-TOF质谱分析，其分子量为1848D，但其序列及其他生物特性还有待进一步研究。     

采用酶免疫技术检验鱼的细菌病原体

美国得克萨斯州学院的科学家认为酶免疫技术可发展用来检验鱼的细菌病原体。他们采用斑点叉尾鲴为实验材料，以酶免疫技术检测了鱼体的耶尔森氏菌的轻度不正常传染病，并且由此技术鉴别了来自运动型产气单胞菌的败血症的急性细菌。研究发现酶免疫技术检验和鉴别斑点叉尾鲴的耶尔森氏菌和嗜水气单胞菌病原体在培养程序方面与萤光免疫技术相似。     

细菌性败血病（暴发性出血病）的综合防治

一、病原嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、弧菌、鲁克氏耶尔森氏菌等。二、危害鲫、鳊、鲂、鲢、鳙、鲮等,水温9～36℃时暴发流行。细菌性败血病是近年来大量出现的流行病。此病     

斑点叉尾鮰冬季大规模死亡病原分离与鉴定

2016年1—2月湖南安化地区网箱养殖的斑点叉尾鮰暴发大规模死亡,死亡率接近80%,发病鱼体重为1.5~2.0 kg。本研究从患病濒死鱼肝、脾、肾分离到1株致病菌,对其进行常规理化特性、分子生物学、人工感染实验以及药敏性检测。结果显示,分离菌株理化特性与鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)特征相符,与NCBI中登录的鲁氏耶尔森氏菌的16S rDNA基因同源性达99%以上,在系统发育树上与鲁氏耶尔森氏菌聚为一族。人工感染鱼出现与自然发病相似症状,并能够从发病鱼组织中再次分离到相同病原菌,表明鲁氏耶尔森氏菌为斑点叉尾鮰该病病原菌。该分离菌株对氟苯尼考、多西环素及新霉素等药物高度敏感,本研究为斑点叉尾鮰暴发性出血病防控提供了理论依据。     

鱼类爱德华氏菌病的诊断与防控（上）

随着我国水产养殖业的发展，爱德华氏菌属细菌对水产养殖鱼类特别是鲇形目鱼类危害日益凸显。被认为是鱼类的一类重要病原。其中迟缓爱德华氏菌还是一种重要的人畜共患病的病原菌，对人类健康也造成威胁。因此，积极开展关于鱼类爱德华氏菌病的病原生物学、流行病学和诊断治疗技术研究具有重要意义。目前，国内外已对爱德华氏菌开展了大量研究，但其治病机理仍没有彻底理清，     

鲟源鲁氏耶尔森菌多位点序列分型及耐药谱测定

2019年7—8月,甘肃省刘家峡某鲟鱼养殖场杂交鲟[体质量(160±20) g]大批死亡,死鱼泄殖孔红肿出血,偶见吻部出血。自60尾病鱼肝脏分离出的60株优势菌株的16S rRNA基因序列检测结果显示,分离菌株均为鲁氏耶尔森菌。生物型检测和多位点序列分型结果表明,60株鲁氏耶尔森菌为生物2型,获得ST1、ST2、ST3、ST5、ST8和ST13 6个已知ST型;在此基础上,对鲁氏耶尔森菌6个管家基因串联的系统发育分析显示,同一来源地分离株存在差异。对60株鲁氏耶尔森菌进行了10种抗生素药物的耐药谱测定,共获得9种耐药谱。本试验结果可为刘家峡养殖杂交鲟鲁氏耶尔森菌的耐药状况提供数据支撑,并为鲟鱼鲁氏耶尔森菌病的防治和疫苗研制提供理论依据。     

淡水养殖鱼类暴发性出血病的防治

淡水养殖鱼类暴发性出血病是我国水产养殖业中近年来危害鱼的种类最多、流行面积最广、流行季节最长的一种传染性病。该病主要由嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鲁克氏耶尔森氏菌等细菌引起。一、流行原因这种严重的暴发性流行病在全国20多个省、市广泛流行,主要原因如下:1.放养密度及单位水体产量均大幅度提高,而鱼病预防工作未能同步加强。2.饲养管理工作差、底质恶化,有害物质多,鱼类长期生长在这种不良环境下,导致鱼体抵抗力下降。3.长期近亲繁殖,引起体质下降。4.商品饲料多投喂价格便宜的菜饼、霉烂变质的小麦等,造成鱼类营养不全,且易…     

鲁氏耶尔森氏菌外膜蛋白ompF基因的分子克隆、生物信息学与免疫原性分析

为筛选潜在的保护性抗原基因研制鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)基因工程疫苗,实验利用特异性引物扩增分离自斑点叉尾(Ictalurus punctatus)的Y.ruckeri外膜蛋白omp F基因并对其进行分子克隆,应用相关软件和程序对其核苷酸及氨基酸序列进行生物信息学分析,并进行了omp F蛋白的表达和免疫原性检测。结果显示,omp F基因全长1 095 bp(Gen Bank登录号KP159420),包含一个编码364个氨基酸的完整开放阅读框,其氨基酸序列具有极高保守性,与Y.ruckeri外膜穿孔蛋白omp F(Gen Bank登录号ADK27779.1)亲缘关系最近,序列一致性为99.2%,进化树聚为一支;具有1个革兰氏阴性菌穿孔蛋白保守结构域,存在1个信号肽和1个跨膜区,是一种跨膜蛋白;具有12个与免疫相关的抗原决定簇区域。SDS-PAGE分析发现该蛋白主要以包涵体形式表达在沉淀,经Western-bolt显示omp F蛋白具有较好的免疫原性。以上结果表明omp F基因可作为Y.ruckeri基因工程疫苗的候选抗原基因。     

常见病害防治方法

淡水鱼类细菌性败血症 病原：嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鲁氏耶尔森菌、豚鼠气单胞菌和产碱假单胞菌等多种革兰氏阴性杆菌。