中华绒螯蟹颤抖病的一种病原特性初步研究

病毒球状、无囊膜,大小为５５ｎｍ左右,病毒核酸有１２个基因组片段,为３／３／６型,总分子量２０ｋｂ左右。推测病毒核酸为ＲＮＡ,初步确定为呼肠孤病毒样病毒（Ｒｅｏｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ Ｖｉｒｕｓ）。实验提示该病毒对温度有较强的敏感性。     

异源四倍体鲫鲤肝组织线粒体DNA的研究

用密度梯度离心和DNaseI、RNase消化法从异源四倍体鲫鲤(R8)和鲫鲤F2肝组织中提取和纯化线粒体DNA(mtDNA).用9种限制性内切酶对异源四倍体鲫鲤和鲫鲤F2的mtDNA进行了分析,结果表明XbaI和BglⅡ两种限制性内切酶在异源四倍体鲫鲤mtDNA上存在酶切位点多态性.通过凝胶电泳测得异源四倍体鲫鲤mtDNA相对分子量平均约10.29×106道尔顿,分子大小为16.20kb;鲫鲤F2mtDNA相对分子量为10.18×106道尔顿,分子大小为16.02kb.根据单酶解和双酶解的片段数目和分子大小,构建了异源四倍体鲫鲤mtDNA的7种限制性内切酶(KpnI、PstI、SalI、XhoI、BglⅡ、BamHI和XbaI)酶切图谱.     

克氏原螯虾白斑病毒株(WSSV-Cc)基因组的一个印迹

从自然感染、濒死的克氏原螯虾中分离出的白斑病毒株(Cambarus clarkii whispovirus,WSSV-Cc或Cc株)是一株基因组较小的新毒株。为寻找白斑病毒进化过程在基因组中留下的印迹,进行了显微和超微观察、基因组架构与系统发育分析及相关基因扩增等研究。选择Cc株74L、86L、87R、88R、92R和95R的6个基因,与8个白斑病毒株的同源基因所编码蛋白序列构建进化树,结果可分为克氏原螯虾病毒(Cc株、CN02株、Pc株)和海水对虾病毒(CN株、CN01株、CN03株、CN04株、TW株和KR株) 2支。再对不同毒株的同源蛋白进行多重序列比对,显示Cc-87R是与海水对虾病毒株同源蛋白差异显著、缺失跨膜区(TMD)及其相邻287 aa序列、但仍有完整PI3K_rbd结构域的病毒膜蛋白。进一步设计和使用87R-F/87R-R和238-F/87R-R两对引物,分别以淡水小龙虾病毒Cc株和海水对虾病毒CN株的基因组为模板进行核酸扩增,结果从Cc株模板中扩增到大小为709 bp,含Cc-87R全部序列的核酸片段;而从CN株的模板中却扩增到大小分别为1 600和4 810 bp,仅含Cc-87R部分序列的核酸片段,为Cc-87R是Cc株基因组中一个序列结构独特的印迹提供了实验证据。这一发现将有助于克氏原螯虾白斑病毒病原的检测及其流行趋势预警。     

7种消毒剂对对虾白斑综合症病毒(WSSV)DNA作用效果的比较

将中国对虾白斑综合症病毒 (WSSV)病毒液与万福金安含氯消毒剂、高锰酸钾、甲醛、过氧化氢、甲酚皂、酒精、氯仿作用。不同浓度消毒剂与病毒液作用不同时间后提取 DNA作病毒核酸斑点杂交检测。经分析比较表明 ,上述消毒剂中含氯消毒剂在有效氯含量高于 2 .975× 10 -3、高锰酸钾浓度高于 5 .0 0 0× 10 -3 ,5 min内 ;有效氯含量高于 1.190× 10 -3、高锰酸钾浓度在 5 .0 0 0× 10 -3 ,30 min即可破坏核酸     

“克虫王”对大口鲶鱼苗的急性毒性试验

为了验证新药“克虫王”在水产养殖中对鱼类的毒性,选用“克虫王”两种剂型渔用杀虫剂对大口鲶鱼苗进行了急性毒性试验。试验结果表明:B_2型“克虫王”对全长4.9cm大口鲶鱼苗的24h、48h、72h半致死浓度(TLm)分别为1.20×10~(-6)、0.88×10~(-6)、048×10~(-6),安全浓度为0.14×10~(-6)。C型“克虫王”对大日鲶鱼苗的24h、48h、72h半致死浓度(TLm)分别为4.65×10~(-6)、3.60×10~(-6)、1.15×10~(-6),安全浓度为0.64×10~(-6)。     

大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus, GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp 的片段, 克隆到 pMD19-T载体上, 构建重组质粒 pMD19-T-MCP。经PCR鉴定确认正确后, 以10倍梯度稀释 pMD19-T-MCP重组质粒, 作为标准模板进行 TaqMan实时荧光定量PCR扩增, 制作标准曲线, 建立了大鲵虹彩病毒的 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系, 且线性范围宽, 相关系数为0.990 19。组内重复试验的CT值标准偏差为0.52%。检测结果显示, 该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性, 与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应, 特异性好, 检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数, 约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸, 较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍。研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强, 对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。     

鱼类越冬池细菌的初步研究

越冬池总菌教在1.2×10~6～28.5×10~6个/毫升水,其中异养菌为0.4×10~6～10.0×10~6个/毫升水.细菌数量波动与浮游生物、鱼池施药及水层悬浮有机质环境因子有关。表水层细菌数量及昼夜波动幅度均高于底层。总菌数昼夜变化不大,经24小时后又恢复到原来水平。     

对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒的精细结构、核酸、多肽及血清学研究

对纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）进行了超微结构、紫外吸收、核酸类型及多肽ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的研究。同时用单克隆抗体对ＨＨＮＢＶ的两分离株和ＭＢＶ进行了血清学比较研究。用ＴＭＶ作为内标定物测得病毒粒子大小为１５０ｎｍ×４５０ｎｍ，其衣壳为两个帽状物端夹１３圈螺旋对称的园柱体结构。病毒在２６０ｎｍ处吸光系数为０．１１７ｍｇ／ｍＬ／ＯＤ２６０。病毒核酸为双链ＤＮＡ，分子量大于３５×１０６ｄ。病毒囊膜有１２种主要多肽。病毒衣壳有两种主要多肽。从寿光（ＨＨＮＢＶ—９３７）和青岛（ＨＨＮＢＶ—９３８）分离到的病毒种在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和抗ＨＨＮＢＶ—９３７单抗ＥＬＩＳＡ反应上没有显著差异。ＨＨＮＢＶ与斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）在抗原决定簇上存在差别。     

一株锯缘青蟹呼肠孤病毒的分离纯化及鉴定

在研究锯缘青蟹病害的过程中,从广东某养殖场分离到一株呼肠孤病毒(命名为SsRV)。病毒粒子为球状,直径约45 nm。病毒粒子基因组为12个节段的双链RNA;在1%琼脂糖电泳中SsRV基因组呈1/5/6带型,其分子量分别为3.8,2.5,2.4,2.0,1.9,1.8,1.3,1.2,1.1,1.1,1.0,1.0 kbp。根据病毒的宿主范围、基因组节段数及电泳型,此病毒很可能与地中海滨蟹呼肠孤病毒P和W 2共同构成呼肠孤病毒科一个新的属。     

甲鱼几种常见病的防治

一、腐皮病。甲鱼受损伤后,四肢、颈部、尾部及周边皮肤糜烂、组织变白、发黄、坏死,严重时骨骼外露,爪脱落。 防治:①控制甲鱼饲养密度,及时分养,经常更换池水。②每周用1×10~(-6)～2×10~(-6)漂白粉全池泼洒消毒。③及时隔离病甲鱼,用2×10~(-6)～3×10~(-6)生石灰或漂白粉反复药浴5～6天,确认痊愈后,放回原池饲养。④用鳖速康20×10~(-6)～40×10~(-6)全池泼洒,每     

中华鳖（Trionyx sinonsis Wiegmann）十种常见病的防治

1、腐皮病 中华鳖俗称甲鱼,甲鱼受损伤后,四肢、颈部、尾部及周边皮肤组织变白、糜烂、坏死,严重时骨骼外露,爪脱落。 防治:①控制甲鱼饲养密度,及时分养,经常更换池水;②每周用1×10~(-6)～1×10~(-6)漂白粉全池泼洒消毒;③及时隔离病甲鱼,用2×10~(-6)～3×10~(-6)生石灰或漂白粉反复药浴5～6d,确认痊愈后,放回原池饲养;④用鳖速康20×10~(-6)～40×10~(-6)全池泼洒,每天一次,并常换水,病甲鱼2～3d后即可停止死亡。     

细胞生物反应器大规模培养草鱼细胞和病毒

应用细胞生物反应器微载体悬浮培养法,对草鱼胚胎细胞 CP-80 进行大规模培养,同时增殖草鱼出血病病毒。细胞经培养6天后,细胞量可达到8.4×10~6cells/ml,较始接量(2×10~5cells/ml)提高了41倍。接入草鱼出血病病毒后,经5天培养增殖,毒力达到8.0LgTCID_(50)/0.1ml,较始接毒力(3.75LgTCID_(50)/0.1ml)增加了4.25个对数值。     

嗜水气单胞菌J-1株丝氨酸蛋白酶基因克隆与序列分析

根据已发表的气单胞菌胞外蛋白酶基因核苷酸序列，设计和合成了一对引物，以嗜水气单胞菌AhJ—1的基因组DNA为模板，通过PCR技术，扩增到约900bp的丝氨酸蛋白酶基因片段，并克隆到质粒载体pGEM—T中进行测序和分析，结果表明扩增的丝氨酸蛋白酶基因片段与已发表的嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶Ahe2的同源性有87％，扩增片段编码343个氨基酸，推测的分子量为35700，计算机软件分析表明编码的氨基酸有较高的抗原性，可作为核酸疫苗的侯选基因片段。     

草鱼呼肠孤病毒873株逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法研究

为提高草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)的检测效率,根据GCRV-873株VP5基因片段,设计了2对特异性引物,建立了检测GCRV-873株的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。结果显示:该方法使用25μL反应体系,经优化后的反应温度为65℃,反应时间1 h,检测限可达10个拷贝数的病毒核酸,比传统的RT-PCR方法要高10倍。且不与鲤春病毒、传染性造血器官坏死病病毒、传染性胰脏坏死病毒和病毒性出血性败血症病毒RNA产生交叉反应。在反应体系中加入染料后,反应结果肉眼直接可见,是一种特异性强、方便快捷的检测方法,适合GCRV-873株的现场初筛和核酸检测工作。     

蛤蟆通水库渔业潜力及开发对策

蛤蟆通水库地处完达山北麓,挠力河支流蛤蟆通河的上游,是一座集农业灌溉,调蓄防洪,水产养殖和旅游等综合效益于一体的大型丘陵水库。该水库于1958年动工修建,1979年竣工。控制流域面积505km~2,总库容1.628×10~8m~3,兴利容7.8×10~7m~3死库容2.55×10~7m~3,正常水位86.5m,相应水面2030hm~3,可养鱼水面1421ha,最大水深13.5m,平均水深5m,年径流量为9.7×10~7m~3。 该库区属大陆性季风气候,年平均气温2.3℃,最高24℃,平均日照2233小时,日照率为50.9％,≥15℃水温约127天(积温2775.9℃),无霜期120天左右,结冰期长达6个月。年     

草鱼呼肠孤病毒NS79蛋白多克隆抗体制备

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)隶属于呼肠孤病毒科,水生呼肠孤病毒属,该病毒引起草鱼鱼种出现严重的出血病。GCRV基因组由11个分节段的双链RNA构成,NS79是由草鱼呼肠孤病毒GCRV-HN14株S4节段编码的蛋白。根据草鱼呼肠孤病毒编码NS79的c DNA序列,经PCR扩增NS79基因部分片段,将目的基因片段插入原核表达载体p ET-32a(+),构建重组表达质粒NS79E-p ET-32a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达出来融合蛋白分子量约为35k Da,表达的重组蛋白用Ni-IDASefinose(TM)树脂纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用ELISA法测定其效价大于1:64000。这些结果为NS79蛋白功能的深入研究提供基础。     

敌杀死对几种海水桡足类的毒性实验报告

实验研究了敌杀死对几种常见海水桡足类的毒性。查明敌杀死对中华哲水蚤24小时半致死浓度为0.036×10-6,全致死浓度为0.07l×10-6;48小时半致死浓度为0.03l×10-6,全致死浓度为0.060×10-6;72小时半致死浓度为0.028×10-6,全致死浓度为0.044×10-6;96小时半致死浓度为0.026×10-6,全致死浓度为0.039×10-6。敌杀死对几种小型桡足类的96小时最低全致死浓度均不超过0.0055×10-6。以0.08×10-6作为该药的使用浓度时.解毒时间为7天。     

两种药物对脊尾白虾各期(氵蚤）状幼体的毒性试验

采用静水实验法进行甲醛和孔雀石绿对脊尾白虾 (Exopalaemoncarinicauda)各期状幼体 (Z1～Z6)的急性毒性研究。结果表明 :在pH值为 7 9± 0 5、水温 (2 6 0± 0 5 )℃的条件下 ,甲醛对脊尾白虾Z1～Z6的半致死浓度 (48hLC50 )分别为 176× 10 -6,16 7× 10 -6,15 0× 10 -6,16 7× 10 -6,113× 10 -6,5 5× 10 -6,安全浓度 (Cs)分别为 30× 10 -6,17× 10 -6,32× 10 -6,11× 10 -6,4× 10 -6,9× 10 -6;孔雀石绿对脊尾白虾Z1～Z6的 4 8hLC50 分别为 0 4 5 1× 10 -6,0 4 4 8× 10 -6,0 5 91× 10 -6,0 4 4 0× 10 -6,0 380× 10 -6,0 15 8× 10 -6,Cs分别为 0 0 6 9× 10 -6,0 0 5 8× 10 -6,0 10 2× 10 -6,0 0 90× 10 -6,0 0 71× 10 -6,0 0 34× 10 -6。其中Z5和Z6对以上药物的敏感性较高     

一个与大鲵蛙病毒 (ADRV) 感染相关基因 —6R的克隆、原核表达及其产物分离

在新近报道大鲵蛙病毒(Andriasda vidianus ranaviurs,ADRV)基因组的基础上,我们对ADRV 6R进行了克隆、原核表达及其产物的分离,这是一个经生物信息分析表明与病毒感染相关的功能基因。先经PCR扩增长到711 bp的ADRV6R,构建含扩增片段的克隆质粒p MD18-T-6R。再构建原核表达质粒p ET-32a-6R,进行测序,并与水生动物蛙病毒相关基因同源序列进行比对,该扩增片段与预期一致,其编码分子量约为27 k D、含236个氨基酸的蛋白,与水产动物病毒US22蛋白家族(US22 family protein)成员有很高的同源性。然后对p ET-32a-6R进行转化、诱导表达,并利用Ni-NTA His-Bind亲和层析及不同浓度咪唑洗脱液对表达产物进行分离、电泳分析,结果显示,获得与预测分子量相符的45 k D融合蛋白(27 k D目的蛋白与18 k D His标签)。这为后续制备抗体、并开展大鲵蛙病毒与宿主的相互作用研究提供了有用的实验材料。     

闽南—台湾浅滩渔场鲐鲹鱼类群聚资源生产量和允许总渔获量

以海洋生态系营养动力学为基础,采用Steele模式估算闽南—台湾浅滩渔场中上层鱼类资源年生产量为86.14×10~4t,进而以鲐鲹鱼类群聚资源在中上层鱼类资源的比例,估算鲐鲹鱼类群聚资源的年生产量为51.76×10~4t。Gulland和MSY简单模式估算鲐鲹鱼类群聚资源的最大持续产量分别为25.00×10~4t和25.88×10~4t。Schaefer和Fox剩余产量模式估算鲐鲹鱼类群聚资源的最大持续产量分别23.60×10~4t和23.41×10~4t,最大持续捕捞力量分别为1140.41×10~4kw·d和1266.66×10~4kw·d。折算为福建灯光围网渔船分别为424和471组,并从开发现状和种群生态学及捕捞死亡等参数分析鲐鲹鱼类群聚资源的开发前景。