雌核发育草鱼的遗传结构分析和微卫星鉴别方法的建立

采用微卫星标记检测草鱼群体的遗传多样性,并根据纯合度的变化建立了雌核发育草鱼的鉴别技术。结果显示,8个位点共扩增出33个等位基因;在普通草鱼中,平均纯合度和PIC分别为0.203 1和0.552 8;在雌核发育群体中,则为0.716 1和0.357 2;2个群体间遗传相似度为0.873 3。其中,5个位点在雌核发育草鱼中纯合度明显提高,雌核发育草鱼在这5个位点的扩增总条带数为5~7个,普通草鱼则为8~10个,由此可100%区分2个草鱼群体。通过概率计算,理论鉴别概率达到99.92%。研究表明,雌核发育技术对草鱼的群体遗传结构改变较大,是快速建立纯系、固定优良性状的有效手段;根据群体遗传纯合度的改变、扩增条带数目差异,应用多态性微卫星分子标记可以简单、有效地区分雌核发育群体(或与之相似的高度近交群体)与普通群体。     

团头鲂“浦江1号”一个RAPD标记的SCAR转化

从100个10bp寡核苷酸引物的扩增带中，筛选出了3个RAPD特异扩增带，即团头鲂“浦江1号”群体所具有的S37^277bp、S11^2660bp带，以及对照群体所具有的S28^946bp带。该3条RAPD特异扩增带经回收、克隆和测序，并根据部分序列信息分别设计了3对各20bp的正向引物和反向引物。用3对引物分别在“浦江1号”群体和对照群体中进行PCR扩增，分别产生了Sc-1(248bp)、Sc-2(540bp，460bp)和Sc-3(320bp)4个SCAR扩增带。其中，Sc-2(540bp，460bp)和Sc-3(320bp)3个SCAR扩增带在“浦江1号”和对照群体中均呈阳性，不能有效地区分这2个群体；而Sc-1产生的248bp带仅在“浦江1号”群体中出现，对照群体中未出现此扩增带。采用大样本对该Sc-1标记(248bp)进行验证，结果发现，在团头鲂“浦江1号”良种群体的分布频率高达91．1％(82／90)以上，而在淤泥湖原种群体中的分布频率为14．3％(8／56)，Sc-1标记在良种群体中的高频率，可作为检测团头鲂“浦江1号”良种的一个重要的分子遗传特征指标；另外，该Sc-1标记在团头鲂“浦江1号”群体中的高出现频率，也说明了在长期(16年)和高强度(0．03％～0．04％选择率)的选育过程中，团头鲂“浦江1号”已大大提高了某些优良性状基因的等位基因频率。     

雌核发育草鱼群体及两个普通草鱼群体的微卫星遗传分析

以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)养殖群体(YZ)为母本,以紫外线灭活的鲤鱼精子激活草鱼卵子,冷休克抑制第二极体排出的方法诱导获得异精雌核发育草鱼群体(CH)。利用12对微卫星引物对YZ群体、YS (扬州广陵长江系家鱼原种场引进草鱼群体)群体、CH群体进行PCR扩增并分析,共检测出194个等位基因,其中75.8个有效等位基因。YZ群体、YS群体、CH群体的平均等位基因数依次为13.0、12.6、4.7;平均有效等位基因数依次是7.7、6.6、2.3;平均期望杂合度依次为0.87、0.82、0.56;平均多态信息含量依次为0.84、0.79、0.49。从每个个体在微卫星位点的纯合率看,YZ群体中个体的纯合度在0.00～0.33, YS群体r中个体的纯合度在0.00～0.42, CH群体中个体的纯合度在0.42～0.92。这表明与YZ群体和YS群体相比,CH群体的遗传多样性显著下降,并且在每个位点的纯合率CH群体均高于普通草鱼群体,表明人工诱导减数雌核发育可加速草鱼大多数基因位点的纯合,是快速建立高纯品系的有效手段。同时,本研究筛选并利用微卫星位点组合建立了雌核发育草鱼子代不同家系及其母本亲缘关系的简易、高效鉴别技术,旨在为雌核发育草鱼标记辅助育种打下基础。     

基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan Real-Time PCR检测方法的建立及应用

为了建立和应用可检测基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的荧光定量检测方法,实验根据基因Ⅰ型GCRV的S6保守序列,分别设计扩增目的条带661 bp普通引物(P1、P2)、扩增目的条带159 bp荧光定量引物(F1、F2)和一条探针;同时构建含有目的片段的PVAX1-S6作为标准质粒,10倍梯度稀释构建质粒拷贝数与Ct值的标准曲线(Y=-3.389X+38.076)。结果表明,此方法在3.9×107~3.9×101拷贝/μL之间相关性较好,R2为0.992,最小检测量为4拷贝/μL;且与基因Ⅱ型、Ⅲ型GCRV以及其他病原核酸无交叉反应。运用该方法检测16份草鱼出血病疑似样品,阳性结果为4份;而普通PCR检测仅2份显示阳性。本研究建立了针对基因Ⅰ型GCRV的荧光定量检测方法,具有高效、特异、灵敏、可重复性强的优点,适合于目前基因Ⅰ型GCRV的临床快速检测和病毒定量分析。     

一个奥利亚罗非鱼雌性特异性SCAR标记的建立

以奥利亚罗非鱼Oreochromis aureus为实验材料,通过对800多条随机引物的筛选,获得了1个奥利亚罗非鱼雌性特异性的、长度为1 488 bp的RAPD标记片段RAPD71699-1488,经琼脂糖凝胶电泳后回收、克隆、测序,并根据测序结果设计PCR特异引物,再经PCR条件优化,成功地将该RAPD标记片段转化为实验结果稳定、操作简便的SCAR标记,即SCAROaF1488。采用双重PCR技术,以mtDNA 16S rRNA基因片段为PCR扩增阳性对照,对该标记的有效性在两个群体共200个个体(雌、雄各100个)中进行验证。结果显示,标记检测结果与表型性别的符合度为100%。SCA-ROaF1 488标记的获得为奥利亚罗非鱼遗传性别鉴定及标记辅助选择提供了有效工具,为深入研究鱼类性别相关基因及性别决定机制提供了重要线索和新的思路。     

草鱼野生群体和人工繁殖群体遗传结构的比较研究

采用新型分子标记SRAP(Sequence-related amplified polymorphism)对草鱼(Ctenopharyngodon idella)1个野生群体(来自邗江草鱼国家级原种场)和2个人工繁殖群体(分别来自淡水中心良种场和无锡前洲水产良种场)进行遗传多样性分析,从不同引物组合中筛选出8组条带清晰、多态性丰富的引物组合,每个引物组检测到的位点数为12～21个,在3个草鱼群体中共检测到120个位点,其中多态性位点有92个,多态位点比例为76.67%,显示了较高的多态性。野生群体与2个人工繁殖群体多态位点比例分别为67.62%、59.81%、53.33%,平均杂合度分别为0.214 3、0.211 0、0.172 2;邗江野生群体与2个人工繁殖群体间的遗传距离分别为0.098 0、0.115 9,两个人工繁殖群体间遗传距离为0.095 9。结果表明,草鱼人工繁殖群体遗传多样性有所下降。比较各扩增位点显性基因型频率在不同区间的分布发现,人工繁殖群体低频位点明显减少而隐性纯合基因位点显著增加。     

中华绒螯蟹一个种质鉴定相关RAPD标记的SCAR转化

通过克隆测序获取了中华绒螯蟹Opp17目的片段,分析其长度、碱基组成等序列特征。序列测定结果表明,克隆片段的准确大小为1170bp,G+C含量为50.34%,Opp17(TGACCCGCCT)引物与所测序列中的引物结合位点完全匹配。在GenBank中对序列进行BLast检索,未找到任何同源序列。在此基础上,在原有随机引物Opp17的基础上向3’端延伸13～19个nt以设计SCAR引物,最终设计了1对中华绒螯蟹特异性SCAR(sequence characterized ampLified regions,序列特征化扩增区)引物SCAR-1(F-TGACCCGCCTCAGCACCCGAACG;R-TGACCCGCCTCTCAGCCACACACC)。利用这对引物对长江天然群体中华绒螯蟹基因组DNA进行PCR扩增,结果表明所有个体均能扩增出预期大小1170bp的特异性条带。对目的条带进行回收测序,结果与之前的测序结果完全一致,表明本研究已成功获取了中华绒螯蟹种质鉴定国家标准中Opp17目的条带的SCAR标记。     

中国对虾生长性状相关遗传标记的筛选与克隆

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对中国对虾“黄海1号”快速生长的第6代群体同一养殖池中生长性状发生分离的两个极端群体、海捕的中国对虾对照群体,进行生长相关遗传标记的筛选。采用240个RAPD引物,共产生标记数2156个。筛选出与生长性状相关的遗传标记65个,其中正相关标记55个,负相关标记10个。依据这些标记在群体中出现的频率和变化规律,筛选出9个特异性标记,其中正相关标记7个,负相关标记两个。对这些特异性标记进行序列测定,获得了6个完整的DNA序列(Genebank注册号DQ185932-DQ185937),并将测序结果进行BLAST分析,发现测得DNA的序列与数据库中已注册序列的相似性较低,未能找到同源性较高的功能基因。根据每一序列重新设计引物,已有两个RAPD标记成功转化为稳定的SCAR标记。     

大黄鱼(♀)与(鱼免)( ♂)杂交的遗传分析

用大黄鱼(♀)和(鱼免)( ♂)进行属间杂交,获得了56.25%的受精率,45.24%的孵化率和0.65%的鱼苗成活率.对杂交亲本与子代进行了微卫星和AFLP标记的比较分析,结果表明:4个微卫星位点(LYC0003,LYC0006,LYC0007,LYC0008)都可扩增出清晰的亲本差异条带,26个F1个体中均未出现雄鱼特有条带;4 对选择性扩增引物(E-ACC/M-CAG,E-AAC/M-CAT,E-AAC/M-CTA,E- AGC/M-CTC)共检出326个AFLP条带,143条母本特异性条带中有132 条出现在子代中,94 条父本特异性条带中只有18 条出现在子代中,子代中另出现了33 条非亲条带.F1个体之间的遗传相似系数为0.891,与母本、父本间的遗传相似系数分别为0.853、0.271;F1个体之间的遗传距离为0.116,与母本、父本间的遗传距离分别为0.159、1.307,表明杂交子代与母本大黄鱼之间具有极高的遗传同质性,属异精雌核发育个体.     

鲮原种群体的AFLP分析

运用AFLP技术,对广东鲮鱼原种场保存的鲮原种2个子群体(子群体h、q)各29个个体进行遗传多样性分析。25对AFLP引物组合中的6对引物扩增共产生173条条带,其中多态位点数为72,多态位点比例为41.5%。在6对引物产生的173条扩增条带中,有一条扩增条带在子群体h中的出现频率远远高于其在子群体q中的出现频率(72.4%>20.6%),编号为E2M4-1。遗传多样性分析结果表明,子群体h的遗传多样性指数高于子群体q(0.1367>0.0998)。该研究为筛选鲮原种群体2个子群体间的特异性分子标记做了初步尝试。     

甲壳素发酵液养殖草鱼、鲢鱼幼鱼试验

为研究甲壳素发酵液对草鱼和鲢鱼幼鱼养殖效果,用商品壳聚糖作参比,基础饲料为对照组,分析甲壳素发酵液对鱼体生长和水质环境等影响。试验结果表明,甲壳素发酵液处理组草鱼和鲢鱼幼鱼质量相对增长率比对照组高36.25%和122.47%(P0.05),草鱼体内脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶3种消化酶分别比对照组高144.39%、29.53%和29.75%,鲢鱼体内消化酶比对照组高48.06%以上(P0.05)。与对照组比较,甲壳素发酵液显著降低水中亚硝态氮(61.84%)、氨态氮(30.06%)、总磷含量(52.43%),提高了草鱼对嗜水气单胞菌抗性。在试验条件下,甲壳素发酵液对草鱼和鲢鱼幼鱼起到一定的促生长作用,并能改善水质环境,甲壳素发酵液具有作为微生态制剂开发应用的潜力。     

关于鲤、鲫、草鱼对苹果渣离体消化率的比较研究

采用消化道粗酶提取和体外孵育消化的方法,测定了鲤、鲫、草鱼对苹果渣的离体消化率,并以麸皮、棉籽粕为对照,评价3种鱼类对苹果渣的消化利用能力。试验结果表明,鲤、鲫、草鱼对苹果渣干物质、粗蛋白、粗脂肪消化率均低于棉籽粕,与麸皮相比,除粗脂肪消化率略低外,干物质和粗蛋白消化率差异不明显,尤其是草鱼对苹果渣可以较好地消化,苹果渣有可能作为能量饲料部分替代麸皮,成为杂食性及草食性鱼类的饲料源。     

草鱼集约化养殖中的磷循环

理解养殖生态系统中的磷循环途径可为提高养殖效益和降低磷排放提供理论依据,为此,开展不同磷含量饲料对草鱼生长、饲料效率及系统中磷循环的影响试验。设置两个试验处理组,并分别投喂含磷量为1.02%和0.52%的配合饲料,进行为期10周的观测。试验结果表明,含磷量1.02%组的饲料效率为68.4%,草鱼质量增加率为72.3%;含磷量0.52%的饲料组的饲料效率为77.3%,草鱼质量增加率为74.3%;低磷饲料组比高磷饲料组具有更高的饲料转换率,且收获更高的渔获量。低磷饲料组中观测到更高的浮游植物生物量,表明浮游植物可能存在对沉积物中磷的泵吸作用,并通过食物链加速了水体中物质循环效率,这释明低磷饲料处理是具有更高饲料利用率并获得更高渔获量的原因。草鱼集约化养殖过程中,单纯增加饲料磷含量并不利于渔获量的提高,反而导致沉积物磷滞留和养殖水体磷污染;合理的磷含量(0.52%)可以更好的发展水体中浮游植物的生长,提高饲料利用率,达到养殖增产和保护环境的双重效益。     

Induced Breeding of Grass Carp in England

Experimental work has shown that the use of grass carp for aquatic weed control in the U.K. is promising and larger scale field trials are planned. Supplies of fish, however, are a problem because of stringent import regulations and this has highlighted the need for home-produced fish. Brood stock obtained from Holland in April and kept under quarantine conditions were successfully spawned in July by means of injections of common carp pituitary gland material. Water temperatures were maintained at 23–25°C for about 9 weeks before spawning was attempted and the eggs were hatched and fry reared at the same temperatures. Survival to late fry (0.1 g) was of the order of 5% which is judged reasonable under the conditions prevailing.     

草鱼皮胶原的提取及性能的初步研究

测定了草鱼皮的部分基本化学组成成分,比较了用酶法提取草鱼皮胶原的提取工艺,并对所提草鱼皮胶原的氨基酸组成、分子量分布、变性温度等进行了分析测定。结果表明:用酶法提取草鱼皮胶原是可行的,但应加强皮的预处理;草鱼皮胶原氨基酸组成中,亚氨基酸(脯氨酸和羟脯氨酸)含量低于猪皮胶原中亚氨基酸含量;差式扫描量热计测定草鱼皮胶原变性温度约为20℃;电泳结果显示所提胶原大部分保持了其天然的三股螺旋结构,但可能有部分胶原发生了变性。     

池塘商品草鱼养殖技术

草鱼又名鲩，是我国传统淡水养殖品种之一，在我国各地均有分布。过去由于本地区市场需求量小，把草鱼做为搭配品种养殖，产量和生产能力都较低。近年来市场多样化的需求使得草鱼的需求量逐年递增，价格稳中有升，再加上青饲料养殖草鱼成本低，效益高，符合人们对天然食品的需求，因此颇受欢迎，值得推广。2003年我们在一个5亩池塘进行了池塘主养草鱼的试验，亩产量达817kg，投入产出比1：2．7，取得了较好的经济效益。现总结如下。     

池塘主养草鱼种高产试验

在３００５ｍ＾２的池塘里,高密度培养大规格草鱼种,且塔养鲢,鳙,鲤种。采取的技术措施是：草鱼种入池先喂芜萍,２０天后改喂浮萍并驯喂粗蛋白含量较高的小颗粒配饵。草鱼种长到１０ｃｍ后,改喂粗蛋白含量较低的配饵;定期注入新水,增氧,泼洒药物,投喂药饵,高温季节,使池水保持长流水。结果：共产草鱼种５０３２ｋｇ,平均规格８０．１ｇ;鲢鳙鱼种２６６０．６ｋｇ,鲤种５３６．３ｋｇ,纯利４８９２８．６元,投入产出     

新三黄液在草鱼体内的药动学研究

以新三黄液中黄柏的主要成分小檗碱,大黄的主要成分大黄酸、大黄素、大黄酚为指标,通过建立高效液相色谱法对新三黄液在健康草鱼(Ctenopharyngodon idellus)体内的药代动力学过程进行了研究。结果显示,健康草鱼单剂量灌服新三黄液后,小檗碱、大黄酸、大黄素、大黄酚在草鱼体内的药动学过程均符合一级吸收一室模型(权重=1/CC)。4种成分在草鱼体内的吸收良好,分布较广泛。     

草鱼鱼种的病害防治

近几年来，草鱼鱼种培育过程中，发病率、传染率和死亡率较高，致使许多养殖生产者培育的草鱼种死亡严重，部分池塘草鱼鱼种的死亡率高达80％以上，经济损失惨重。为此，笔者结合草鱼鱼种培育的经验，将几种草鱼鱼病综合防治措施介绍如下。