两种罗非鱼及其杂种血清蛋白和酯酶同功酶的电泳研究

蛋白电泳技术在鱼类生物学研究中已得到广泛的应用。酯酶同功酶是一类在遗传效应上具有较好稳定性的蛋白酶，由于在电泳特征上呈现显著的种间差异性，而种内差异性很小，所以可作为种的生化鉴定标记。     

聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳在鱼类分类及雌雄鉴别上的初步研究

<正> 聚丙烯酰胺凝胶电泳这项技术,兼有电泳和分子筛层析的双层作用,电泳系统的不连续性,大大提高了分离物质的分辨力和敏感性,是分离和分析蛋白质及核酸等高分子物质的一种好方法。这项技术发展很快,自1959年首次被应用后,广泛应用于生物学的各个领域,当前已成为研究分子生物学、分子遗传学、医学等不可缺少的工具。用聚丙烯酰胺凝胶电泳研究人、动物以及鱼的血清,国内外已有不少报道。至于加利略罗非鱼和莫桑比克罗非鱼的血清的比较研究,尚未见报道。本文用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳对这两种罗非鱼的血清进行对比分析,并观察血     

两种罗非鱼及其杂交种血清蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及其雌性特异蛋白氨基酸的分析

本实验应用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳方法对莫桑比克罗非鱼(Tilapia mossambica)和尼罗罗非鱼(Tilapia milotica)及其杂交种——福寿鱼(T.missambica ?×T.nilotica ?)的血清蛋白进行了分离,同时对其雌性特异蛋白进行了氨基酸组成分析。莫桑比克罗非鱼的血清蛋白电泳图型具有 12—14条蛋白质带,尼罗罗非鱼有12—13条蛋白质带,杂交种—福寿鱼有12—15条蛋白质带;三种鱼血清蛋白电泳图型在雌、雄性别上有明显的差异。莫桑比克罗非鱼和尼罗罗非鱼的成熟雌鱼有两条新的蛋白质带,这些带都比同种的雄鱼所显示的颜色深。杂交种——福寿鱼的血清蛋白电泳图型,为其亲本的中介型。 此外,本文还对雌性特异蛋白的蛋白质带,进行了氨基酸组成分析。     

用梯度聚丙烯酰胺凝胶垂直板型电泳法对雌、雄梭鱼血清蛋白的研究

实验采用梯度和单一浓度聚丙烯酰胺凝胶垂直板型电泳的方法，对梭鱼血清蛋白进行分析，其中梯度浓度(4．75％ 7％)凝胶分离梭鱼血清蛋白得30条区带，比单一浓度(4．75％、7％、10％)凝胶分离的效果好，区带清晰，带数明显增加。同时发现0号、2号、5号、8号和12号雌梭鱼血清蛋白电泳图型中发现有一明显深带，此深带在雄鱼的血清蛋白电泳图型中则没有发现。在数次的重复实验中，结果完全一致。作者认为此深带可能与雌性特异血浆蛋白有关。     

国产琼脂糖简介

1．琼脂糖是凝胶层析，凝胶电泳免疫技术的优良载体。本文阐述以我国的水产资源石花菜、江篱等红藻制品琼脂作原料而制造的琼脂糖，并介绍其质量标准、检查方法与应用效果。2．本琼脂糖应用在层析、分离纯化核酸、e抗原试验等方面都获得满意的结果。且它的某些主要性能优于英国BOH同类产品。3．本琼脂糖进一步做成珠状琼脂糖凝胶也获得成功。制品已在凝胶过滤、亲和层析等技术中应用。     

几种添加剂对宽体舌鳎盐溶蛋白凝胶特性的影响

鱼肉盐溶蛋白的凝胶特性与鱼糜制品的质地密切相关,而盐溶蛋白的凝胶特性又受到许多因素影响。为研究添加转谷氨酰胺酶(TGase)、海藻酸钠、卡拉胶、魔芋胶对宽体舌鳎盐溶蛋白凝胶特性的影响,本实验通过四元二次通用旋转试验设计,采用响应面法建立了宽体舌鳎盐溶蛋白凝胶保水性(Y)和凝胶强度(y)与各添加剂用量的二次多项回归方程,确定了TGase、海藻酸钠、卡拉胶、魔芋胶的适宜添加量分别为0.36%,1.00%,1.00%,0.71%,添加后舌宽体鳎盐溶蛋白凝胶网状结构致密均匀,保水性和凝胶强度分别为60.36%和55.20 g,比对照组分别增加了36.41%和351.80%。结果说明,合适的添加剂组合可以显著的增加宽体舌鳎盐溶蛋白凝胶的保水性和凝胶强度。     

草鱼鳃组织蛋白双向电泳技术的建立及优化

为建立并优化草鱼鳃蛋白质组双向电泳的技术体系,实验将草鱼鳃经裂解处理后,通过固相p H梯度胶条进行一向等电聚焦和SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳进行蛋白分离,对不同的裂解液配方、蛋白纯化方法、IPG胶条的分离范围、上样量和染色方法等进行了探索和优化,并应用lmage Master 2D Platinum 7.0软件对电泳图谱进行了分析。结果表明:采用裂解液中添加DTT来取代Tris和TBP、选择分离范围为pH4-7的IPG胶条和150μg的主动水化上样,电泳结束后对凝胶进行硝酸银染色,获得了覆盖范围广、低背景、高分辨率、适合差异蛋白分析的双向电泳参考图谱。     

不同添加物对微山湖四鼻鲤鱼糜凝胶性的影响

鱼糜制品的凝胶强度是评价鱼糜制品质量的重要指标,本研究以微山湖四鼻鲤(Cyprinus carpio L.)为原料,经过一定的处理后,探讨添加物玉米淀粉、蛋清蛋白、卡拉胶对鱼糜凝胶品质的影响。实验结果表明,通过单因素实验,确定了玉米淀粉、蛋清蛋白和卡拉胶对改良鱼糜凝胶性的最佳添加量为玉米淀粉25%、蛋清蛋白6%、卡拉胶2.0%。通过正交实验确定了玉米淀粉、蛋清蛋白和卡拉胶对鱼糜凝胶性最佳添加组合为玉米淀粉25%、蛋清蛋白6%、卡拉胶1.8%,此组合对鲤鱼糜凝胶品质的改善作用最强。本研究可为今后制备高品质的四鼻鲤鱼糜制品提供一定的参考。     

丁(鱼岁)不同组织的同工酶研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳,对丁的晶状体、心脏、脑、肾脏、肝脏、肌肉等6种组织进行了8种同工酶(LDH、MDH、α-AMY、G6PDH、ADH、AKP、EST、POD)的电泳研究,分析了各种酶的同工酶基因位点表达、亚基组成及酶谱表型,讨论了8种同工酶在组织中分布特异性的生理意义。结果表明:8种同工酶都存在不同程度的组织特异性;与其他硬骨鱼类相比,丁的8种同工酶具有明显的种属特异性。     

蟹源拟态弧菌外毒素酶活性的分析

采用琼脂平板扩散法和指示凝胶技术对蟹源拟态弧菌HX-4菌株外毒素的酶活性及稳定性等特性进行了系统研究。结果显示:该菌外毒素具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、溶血素、卵磷脂酶和几丁质酶活性,不具有血浆凝固酶、脂酶和DNase酶活性。外毒素具有相对的稳定性,除热外,其它环境因素改变对其酶活性影响不大。指示凝胶技术试验结果表明:外毒素含有3种蛋白成份,相对分子量分别为154 KD、143 KD和117 KD,同时具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、溶血素活性。     

琼胶制造中石花菜预处理的研究

一、前言石花菜的预处理方法,对琼胶的颜色、凝胶强度、出胶难易和出胶率均有很大影响。我们用机械去杂质、连二亚硫酸钠、过氧化氢和次氯酸钠等几种预处理方法,且加以对比。同时也和以前进行过的酸预处理方法作了比较。证明用次氯酸钠加酸对石花菜进行预处理的方法最为理想。实验中我们注意到用不同预处理方法,所得胶浆的pH值分别稳定在5.6、6.0和6.6,对此,我们作了分析探讨。     

鲤鱼单卵微量蛋白电泳的研究

本文利用微量蛋白电泳方法，通过对3个鲤鱼不同养殖品种单个卵粒全蛋白和酯酶同工酶的电泳研究，分析了鲤鱼单卵酯酶同工酶特点。实验结果表明，不同鲤鱼品种酯酶同工酯有明显差异，这种差异不仅表现在酯酶酶带的有无，也表现在酯酶酶带相对活性的高低。另外，本文还探讨了微量蛋白电泳方法和显色技术对于研究鱼类胚胎发育和鱼类育种学的意义及应用价值。     

沙丁鱼肉凝胶特性值及其冷冻鱼糜的研究

目前,某些学者已报道过构成鱼肉主要蛋白质的肌原纤维蛋白质的温度稳定性因鱼种不同有显著的差异,因此鱼肉凝胶特性值也因鱼种不同而异。这个问题在鱼糜制品材秆质量管理方面不仅被认为是很重要的,而且从生理的和生物化学的观点来看也是很有趣的。因此,众多学者对各种鱼肉的凝胶特性值已做了不少的研究,但是我国在这方面(尤其是红色鱼肉)的研究报道甚少。基于这一点,本人从开发我国的多获性红色肉鱼冷冻鱼糜及其制品的构想出发,对沙丁鱼肉凝胶特性值及其冷冻鱼糜作了实验。本文就实验结果叙述如下。     

TG酶催化过程中鲢肌原纤维蛋白凝胶性能的变化

为探究转谷氨酰胺酶（TG酶）催化过程中,鲢肌原纤维蛋白凝胶性能的变化,进一步提升鲢鱼糜制品特性和营养价值。对不同催化时间（0、15、30、60 min）后鲢肌原纤维蛋白凝胶的交联度、凝胶强度、白度、持水性、微观结构及消化特性变化进行了分析。实验结果表明,TG酶诱导蛋白胶凝后,蛋白凝胶交联度显著提高。在TG酶催化过程中,随交联时间的延长,白度值增加、持水性提高。通过扫描电镜分析发现凝胶网络孔径变小,结构变得更加致密。在催化时间30 min下,交联度、白度值及持水力显著提高,弛豫时间T22显著减小。TG酶催化后的蛋白凝胶在消化初始阶段水解程度较低,因为交联度提升,蛋白网络结构越来越致密,降低了胃蛋白酶对其水解位点的可及性。蛋白消化90 min后,网络遭到破坏,导致其水解速率明显提高。以上结果说明,在适当的交联时间下,有助于提升蛋白凝胶的凝胶特性。该研究为TG酶对鱼肉制品品质及消化特性的改善提供了实验依据。     

用鼠红细胞膜纯化中华绒螯蟹血清凝集素的方法

本研究建立鼠红细胞膜吸附法纯化中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素的方法,并与硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等其他提取方法进行比较。实验结果表明,中华绒螯蟹血清经鼠红细胞膜吸附后,再由EDTA把结合的凝集素从膜上解离,可以获得纯化的高活性凝集素。该纯化物在PAGE中出现2个清晰的区带,一个是大分子的b带,另一个则是由3种大小相近的小分子组成的c区带;在SDS-PAGE中,则显示出3个分子量接近、约为100 000的条带。经50％饱和硫酸铵盐析或用Sephadex G200凝胶过滤层析法可浓缩但不能纯化中华绒螯蟹血清凝集素。经DEAE-Sephadex A50离子交换层析法可获得2个蛋白峰,其中只有1个峰有凝集活性,在PAGE中表现为a蛋白带。凝集活性较高、分子量较大的蛋白带。上述实验结果表明,应用鼠红细胞膜法可纯化中华绒螯蟹血清凝集素。     

pH和色谱柱对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果的影响及抗菌活性检测

为了能够快捷地分离纯化出单一的抗菌肽,实验采用不同pH值(离子交换流动相pH3.0、4.0、5.0;反相液相层析流动相pH 2.0、4.5、7.0)缓冲液,不同色谱柱(离子交换和凝胶过滤层析柱分别与反相液相层析柱)联用对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果进行了比较,并分析了琼脂板扩散法和微孔液体培养法检测抗菌活性的优缺点.结果显示:pH 4.0缓冲液为最佳离子交换流动相,蛋白提取率为16.43％,得到2个洗脱峰;反相液相层析3种pH缓冲液分离效果均不理想,凝胶过滤层析柱与反相液相层析柱联用能明显改善日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果,洗脱峰数量较多,峰形单一且尖锐狭窄,基线平而低.琼脂板扩散法检测抗菌活性操作简单,实验结果直观,但所需蛋白量较多,可用于蛋白粗提物抗菌活性的检测;微孔液体培养法检测抗菌活性灵敏,所需蛋白较少,可用于后期色谱分离纯化蛋白抗菌活性的检测.     

黄河高原鳅乳酸脱氢酶同工酶研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳,对黄河高原鳅的鳃、性腺、肝脏、心脏、肾脏、肌肉、眼、脑和肠等种组织器官的乳酸脱氢酶同工酶进行了研究,其表现出组织间的特异性.分析认为黄河高原鳅是二倍体鱼类.     

尼罗罗非鱼(♀)、奥利亚罗非鱼(♂)及其杂种(F_1)酯酶(EST)同工酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶平板电泳方法研究两种罗非鱼及其杂种 F_1的血清、肝脏、肌肉组织的 EST 同工酶表明:两种罗非鱼各自有其特定的酶谱;杂种 F_1的酶谱中出现了双亲所没有的“新杂种酶带”和双亲的“互补酶带”。     

同工酶影响因素的探讨

同工酶技术是生物化学和分子生物学不断发展的产物。早在1895年,Fischer就提出了同工酶的概念。195 7年Hunter和Markert发明了酶谱技术,即:将凝胶电泳与组织化学染色方法相结合来鉴定分离酶类。这种技术的特点是对多种酶的同工酶的鉴定具有很强的解析能力。它打开了真正认识同工酶的大门,促进了各国学者对同工酶的广泛研究。同工酶技术经过几十年的发展,已经比较成熟,在遗传育种、生理学、病理学、系统分类学等学科方面都有广泛的应用。应用范围包括植物、动物和细菌等。但它也同其它学科一样是一门正在不断发展尚需不断完善的学科。1　影…     

超声时间对鲢鱼糜凝胶特性和蛋白结构的影响及相关性

为探究超声预处理对鱼糜凝胶特性的影响，并进一步阐明凝胶特性变化与蛋白二级结构之间的相关性规律，本实验对鲢鱼糜进行超声预处理，探究超声过程中(0～50 min)凝胶强度、色泽、水分分布、微观结构、蛋白分子量以及二级结构的变化。结果显示，超声波处理10 min，鱼糜凝胶强度显著提高，束缚水的能力增强，凝胶网络结构更为致密；但随超声时间的增加，凝胶劣化，不易流动水转变为自由水。凝胶电泳及红外光谱结果显示，随着超声时间增加，鱼糜中蛋白未发生降解或聚集；二级结构中α-螺旋相对含量降低，β-折叠、无规则卷曲和β-转角相对含量增加。通过皮尔逊相关性分析可知，超声预处理促进蛋白质结构展开，更利于鱼糜在加工过程中形成均匀的网络结构，提高凝胶强度以及保水能力。研究表明，适量超声预处理可以通过改变鱼糜蛋白结构，改善鱼糜凝胶特性。本研究可为超声波技术在鱼糜制品加工中的应用提供参考。