嗜水气单胞菌对几种抗生素耐药性的形成及消失速率

3株嗜水气单胞菌经药物浓度递增继代培养10代后，对土霉素的最小抑菌浓度（MIC）由0．10μg／ml上升到0．39μg／ml，上升4倍；氟霉素的MIC由0．05μg／ml上升到0．39μg／ml，上升8倍；链霉素的MIC由0．05μg／ml上升到0．10μg／ml，上升2倍；红霉素的MIC由0．20μg／ml上升到1．56μg／ml，上升8倍。而将已获得耐药性的菌株经元添加药物继代培养10代后，上霉素和氯霉素的MIC降到0．10μg／ml，链霉素的MIC降到0．05μg／ml，红霉素的MIC降到了0．39μg／ml。     

氟苯尼考对六种海洋致病弧菌的体外抗菌活性研究

测定了氟苯尼考等4种抗菌药对6种常见海洋致病弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。测试结果显示，氟苯尼考对6株弧菌的MIC值范围为2～4μg／mL，氯霉素为1～32μg／mL，土霉素为4～128μg／mL，恩诺沙星为0．125～1μg／mL；对多数弧菌氟苯尼考与氯霉素的抗菌活性相似。氟苯尼考对6株弧菌的MBC／MIC值范围为2-4，而氯霉素为2～16，表明氟苯尼考的杀菌效果优于氯霉素。对照药物恩诺沙星、土霉素的MBC／MIC值分别为1-2和2-8，恩诺沙星显示出优良的抗菌和杀菌活性。随着接种菌量增加，所测3种抗菌药的MIC随之升高；当接种量达到10^7ufu／mL时．药物对多数弧菌显示出微弱的作用。     

二氧化氯和三氯异氰脲酸对鱼类3种致病菌的杀灭试验

对肠型点状产气单胞杆菌，嗜水气单胞菌和柱状曲桡杆菌进行复壮．将分离纯化的3种菌用二氧化氯和三氯异氰尿酸进行抑菌、杀菌效果研究。结果表明：二氧化氯对肠型点状气单胞菌、嗜水气单胞菌、柱状曲桡杆菌的最小抑菌浓度分别是0．17、0、17、0．06μg／mL，最小杀菌浓度分别是0．23、0．23、0．17μg／mL；三氯异氰脲酸对上述3种菌的最小抑菌浓度分别是6．25、12．5、6．25μg／mL，最小杀菌浓度分别是12．5、25．0、6．25μg／mL。     

中华绒螯蟹的致病菌及抗菌药物的筛选

对河蟹育苗场各期蚤状幼体(Z1～Z5)、大眼幼体至Ⅴ期幼蟹进行了病原菌的分离采样。采用"细菌生化鉴定编码"对育苗期的中华绒螯蟹的致病菌进行鉴定,主要为溶藻弧菌(V.alginolyticus)、霍乱弧菌(V.cholerae)、荧光假单胞菌(P.fluorescens)、豚鼠气单胞菌(A.caviae)和梅氏弧菌(V.metschnikovii)。采用扩散法(K-B法)对上述菌株进行了药物敏感性试验,结果表明:上述各菌株对庆大霉素、氟哌酸、头孢哌酮、丙氟哌酸、氟嗪酸、复方新诺明、环丙沙星具有较高的敏感性,抑菌直径>16mm。同时选择氟哌酸和环丙沙星对荧光假单胞菌、溶藻弧菌进行了最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC)的测定。氟哌酸对荧光假单胞菌和溶藻弧菌的MIC分别为25μg/mL和0.78μg/mL;环丙沙星对荧光假单胞菌和溶藻弧菌的MIC分别为6.25μg/mL和0.025μg/mL。氟哌酸对荧光假单胞菌和溶藻弧菌的MBC均为6.25μg/mL;环丙沙星对荧光假单胞菌和溶藻弧菌的MBC分别为50μg/mL和0.1μg/mL。     

几种水产动物病原菌对壳聚糖碘的敏感性研究

以聚维酮碘为对照，试验了7种水产动物常见病原菌，包括柱状曲桡杆菌、荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、肠型点状气单胞菌、迟钝爱德华菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等对壳聚糖碘的药物敏感性。结果表明：这几种病原菌对壳聚糖碘的MIC为0．3762-0．5029mL／m^3之间，MBC为0．4732～0．839ML／m^3之间。几种病原菌对聚维酮碘的MIC为0．4724～0．5349mL／m^3之间，MBC为0．610-0．900mL／m^3之间。壳聚糖碘的抗菌活性比聚维酮碘强。     

恩诺沙星对嗜水气单胞菌的体外药效学研究

研究了恩诺沙星对嗜水气单胞菌体外药效学。主要包括:最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定、生长动力学曲线、杀菌动力学曲线、抗菌后效应、四种培养因子对恩诺沙星体外抑制嗜水气单胞菌活性影响的体外药效学研究。结果表明:MIC、MBC和MBC/MIC分别为0.16μg/mL、0.32μg/mL和2,嗜水气单胞菌在液体培养基中培养2h后进入对数期生长,大约持续10h;在用药4~8h时达到最大药效,由杀菌曲线可知恩诺沙星具有浓度依赖性;浓度为4MIC的抗菌后效应大于8MIC的对应值,但它们之间无显著差异(P0.05);恩诺沙星对嗜水气单胞菌作用的最适pH值为7~8;二价阳离子(Mg2+)对恩诺沙星药效影响较大;随着Mg2+浓度增大,药效降低;血清可降低恩诺沙星的药效;细菌数量对其抗菌活性影响不显著。     

氟苯尼考在鲫和草鱼体内的药代/药效动力学联合参数及其临床给药方案的研究

为研究氟苯尼考在鲫和草鱼体内的药代学、药效动力学联合参数,并制定氟苯尼考对鲫、草鱼的精确用药方案,本实验结合氟苯尼考对致病性嗜水气单胞菌CAAh01的体外药效学研究和口灌不同剂量的氟苯尼考在鲫、草鱼体内药代动力学研究,确定了氟苯尼考防治该致病菌引起的鲫和草鱼细菌性败血症的给药方案。研究结果显示,氟苯尼考对CAAh01菌株的最小抑菌浓度(MIC)为0.5μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为1.0μg/mL,防细菌耐药突变浓度(MPC)为6.0μg/mL,防耐药突变选择窗(MSW)为0.5~6.0μg/mL。按10、20、30 mg/kg体质量剂量对鲫、草鱼口灌氟苯尼考后,在鲫体内,血药浓度大于MPC的维持时间分别为5、8、24 h;AUC24/MIC分别为177.06、265.90、426.50;Cmax/MIC分别为15.59、21.32、31.24。在草鱼体内,血药浓度大于MPC的维持时间分别为0、0、3 h;AUC24/MIC分别为38.60、75.08、121.94;Cmax/MIC分别为4.75、10.08、19.99。研究表明,综合血药浓度维持MPC以上的时间、AUC24/MIC或Cmax/MIC指标,氟苯尼考适用于鲫细菌性疾病的防治,其防突变用药方案为剂量30 mg/kg,每日1次给药,休药期不低于20 d。对于草鱼细菌性疾病的防治,氟苯尼考不宜连续使用。     

盐酸沙拉沙星在中华绒螯蟹体内药动学及药效学研究

研究了盐酸沙拉沙星(Sarafloxacin hydrochloride)在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)雄蟹和雌蟹体内药动学,检测了盐酸沙拉沙星对致病性气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),建立了药动/药效(PK/PD)关系。盐酸沙拉沙星以30 mg.kg-1单剂量口灌给药中华绒螯蟹,雌蟹和雄蟹血浆沙拉沙星浓度-时间关系曲线均符合一级吸收的二室开放动力学模型。雌蟹和雄蟹血药达峰时间(Tmax)为4 h,达峰浓度(Cmax)分别为5.619±1.192 mg.L-1和7.775±1.426 mg.L-1。沙拉沙星在雌蟹和雄蟹体内分布广泛,其表观分布容积(Vd)分别为3.801 L.kg-1和2.871 L.kg-1;消除半衰期(t1/2β)分别为51.982 h和55.956 h,总体清除率(CLs)为0.138 L.(kg.h)-1和0.087 L.(kg.h)-1,曲线下面积(AUC)分别为209.1 mg.(L.h)-1和325.5 mg.(L.h)-1。中华绒螯蟹扣蟹致病菌嗜水气单胞菌HX1b1、维氏气单胞菌CMX313和CMX4对盐酸沙拉沙星的最小抑菌浓度分别为0.5μg.mL-1、0.25μg.mL-1和0.25μg.mL-1。以30 mg.kg-1单剂量给药,嗜水气单胞菌HX1B1的Cmax/MIC值分别为15.55(雄蟹)和11.24(雌蟹)、AUC0-24/MIC值分别为197(雄蟹)和145.4(雌蟹),维氏气单胞菌CMX313和CMX4的Cmax/MIC值分别为31.1(雄蟹)和22.48(雌蟹)、AUC0-24/MIC值分别为394(雄蟹)和290.8(雌蟹)。由此可见,盐酸沙拉沙星在雌雄蟹体内的药动学数据有一定差异,但不是很大。以30 mg.kg-1剂量拌料给药,即可以有效防治上述气单胞菌引起的细菌性疾病。     

氢化物原子荧光法测定水产品中的砷、汞

采用氢化物原子荧光法测定水产品中的砷、汞。在0～12μg／mL浓度范围内As、Hg标准曲线相关系数达0．999。As检出限为0．2μg／L，Hg为0．3μg／L，As回收率在100％-162％之间，Hg回收率在124％～152％之间。     

恩诺沙星控制草鱼维氏气单胞菌的用药方案

从四川成都一养殖场大规模发病死亡的草鱼(Ctenopharyngodon idella)病灶处分离一株病原菌CiAV01,结合形态学和16S rDNA序列分析,鉴定该菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。回归感染实验结果表明,分离菌株感染草鱼致死率为100%,出现了局部出血、腹腔积水等症状。采用琼脂平板扩散法研究了16种抗生素对分离菌株CiAV01的体外抑菌作用,在供试的抗生素中,恩诺沙星对该分离菌株CiAV01最为敏感。选择恩诺沙星对分离菌株进行体外药效学研究表明,恩诺沙星对分离菌株CiAV01的最小抑菌浓度(MIC)为0.25μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为0.50μg/mL,MBC/MIC为2。结合其药物动力学参数和MIC、MBC、防突变浓度(MPC)、突变选择窗(MSW)和抗菌后效应(PAE)制定防突变给药方案为:剂量20 mg/kg、每日一次给药、连续给药3～5 d。     

五倍子对三种致病菌的体外抑菌试验和对鲤鱼的急性毒性研究

采用试管两倍稀释法测定五倍子水煎煮液对鱼类三种常见致病菌的最小抑茵浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)，并进行了对鲤鱼的急性毒性试验。结果表明，五倍子煎煮液对温和气单胞茵、爱德华氏茵、柱状屈桡杆菌的最小抑茵浓度分别为6．250mg／ml、3．125mg／ml、0．781mg／ml；最小杀茵浓度分别为12．500mg／ml、12．500mg／ml、3．125mg／ml。五倍子对鲤鱼的48h半致死浓度为1、1015g／kg，安全浓度为0．1102g／kg。五倍子具有较好的杀茵防病效果。     

21种中草药及复方制剂对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用

采用试管二倍稀释法,研究了黄芩等16种中草药以及5种复方制剂对4株嗜水气单胞菌(Aeromonas hy-drophila)的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,黄芩、诃子以及复方制剂三黄汤对于嗜水气单胞菌株(AH2)的抑菌效果最好,MIC值分别为0.057、0.114、0.114g/mL,大黄、五倍子的MIC值均为0.227g/mL,金银花、茵陈、连翘以及青蒿的抑菌效果较差;诃子对嗜水气单胞菌株(AH15)的抑菌效果最好,MIC值为0.057g/mL,连翘、五倍子、金银花以及三黄汤的MIC值均为0.455g/mL;黄芩和诃子对嗜水气单胞菌株(AH43)的抑菌效果最好,其MIC值均为0.114g/mL,三黄汤、五倍子、连翘的抑菌效果较差;黄芩、诃子以及三黄汤对于嗜水气单胞菌株(AH32)的MIC值依次为0.057、0.114、0.227g/mL,连翘、大黄、五倍子的MIC值均为0.455g/mL。     

黄颡鱼源温和气单胞菌的分离鉴定及中草药体外抑菌效果研究

为探明遵义金鼎镇合江源养殖场患病黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)的致病原因,通过对患有腹水、鳍条充血和游动缓慢等症状的黄颡鱼进行了病原菌分离纯化,得到纯培养菌株MLT-1,经过回归感染证实其为黄颡鱼的致病菌,经生理生化和16S rDNA鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。同时采用乙醇提取法获得30种中草药醇提物,固体培养基打孔测试中药醇提物对MLT-1的抑菌作用,结果显示：诃子、大黄、烟叶、樟叶、桑白皮5种中草药对MLT-1的抑菌效果较好,诃子和大黄的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)均为0.49 mg/mL,烟叶的MIC和MBC均为0.98 mg/mL,樟叶和桑白皮抑杀温和气单胞菌效果相同,MIC和MBC分别为0.195 mg/mL和3.91 mg/mL。结果表明诃子、大黄、烟叶、樟叶、桑白皮5种中草药可用于防治黄颡鱼温和气单胞菌细菌病。     

洞庭湖水域网围河蟹健康生态养殖的研究

2008年和2009年在洞庭湖的巴南湖主持了200hm^2网围河蟹健康生态养殖试验，取得较好效果。2008年商品蟹产量58574kg，平均规格163g／ind，回捕率43．4％，鱼产量128348kg，蟹鱼销售收入598．64万元，总利润286．00万元，投产比1：1.91，平均每hm^2河蟹产量、蟹鱼销售收入和利润分别为292．87kg、29932．0元和14300．0元；2009年商品蟹产量68567kg，平均规格192g／ind，回捕率46．5％，鱼产量137783kg，蟹鱼销售收入757．25万元，总利润401．78万元，投产比1：2．13，平均每hm^2河蟹产量、蟹鱼销售收入和利润分别为342．84kg、37862．5元和20089．0元。本文从健康生态养殖的角度，对洞庭湖水域网围养殖河蟹的场地选择、网围布设、放养方式、饲喂方法、经营模式、资源利用等方面问题进行了探讨。     

100种中草药体外抑杀嗜水气单胞菌的药效研究

用琼脂扩散法(打孔法)测定了诃子等100种中草药对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的抑制作用,并用二倍稀释法测定抑菌效果较强的48种中草药对嗜水气单胞菌的最小抑菌(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示∶大部分中草药对嗜水气单胞菌有抑制作用,诃子和秦皮的抑杀效果最好,其抑菌圈直径达20 mm以上,MIC和MBC相同,都为3.91 mg/mL(诃子)和7.81 mg/mL(秦皮);红藤、仙鹤草和覆盆子等13种中草药有中等强度的抑菌和杀菌效果;雷公藤等33种中草药抑菌作用弱;而牛蒡子等52种中草药无抑菌作用。     

16种中草药提取物对2株草鱼致病菌的体外抑杀菌作用

用纸片扩散法测定受试物的抑菌作用和二倍稀释法测定受试物最小抑菌质量浓度(MIC)及最小杀菌质量浓度(MBC)的方法,研究地肤子、小茴香、茯苓、蛇床子、牡丹皮、黄芪、陈皮、藿香、猪苓、高良姜、黄柏、苦参、昆布、肉桂、姜黄和丁香16种中草药提取物对2株草鱼致病性嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和类志贺邻单胞菌Plesiomonas shigelloides的体外抑菌作用。结果显示,茯苓对嗜水气单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达20mm以上,MIC为15.63 mg/mL,小茴香、昆布和姜黄次之,MIC均为31.25mg/mL;丁香对类志贺邻单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径为(18.93±0.37)mm,其MIC为31.25 mg/mL,黄芪次之,其MIC为62.5 mg/mL。     

高度耐药嗜水气单胞菌的定向诱导及其交叉耐药性分析

为了分析比较不同抗生素对耐药嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的诱导效率,从五大类抗生素中各挑选出一种代表性的抗生素,在针对嗜水气单胞菌菌株AH10的防耐药突变浓度(mutant prevention concentration,MPC)的琼脂平板上,分别筛选出五株耐药菌株,并对筛选的耐药菌株进行交叉耐药性分析,制定出这些耐药菌株对常用抗生素的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC)图谱。结果显示:四环素、氟苯尼考、磺胺嘧啶、硫酸新霉素、诺氟沙星对AH10的MIC分别为:1.0、0.5、8.0、8.0、0.25μg/m L;MPC分别为4.0、3.0、128、88、2.0μg/m L,分离的耐药菌株对所使用抗生素的MIC均提高100倍以上。4℃划线平板冰箱保存条件下,一个月内个别耐药菌株耐药性下降。在药物筛选压力下,菌株耐药性随着传代次数增多而表现出递增的趋势。同属一类抗生素耐药相关性较高;不同大类抗生素压力下筛选出来的耐药菌株表现出不同的交叉耐药性。     

瓯江蟹的生长性能及评价

用人工放流及围网养殖的方法对巨江蟹的生长进行观察研究。放流巨江蟹平均规格0.5263g／只，收获成蟹规格平均145.87g／只，回捕率6．84％，群体增重18．70倍。围网放养规格平均0．4466g／只，收获成蟹规格99．4g／只，回捕率872％，群体增重19.13倍。     

气相色谱法测定鸡蛋中氯霉素残留量

研究了鸡蛋中氯霉素残留的气相色谱测定方法。样品经乙酸乙酯提取后，用Sylon BFT衍生化，进电子捕获检测仪（ECD）测定，外标法定量．结果表明，方法的线性范围在1．0～300ng／mL之间，平均回收率达93．4％，平均相对标准偏差5．5％，检测限为0．1μg／kg。     

12 种中草药对嗜水气单胞菌杀伤能力的研究

用琼脂扩散法和二倍稀释法测定了嗜水气单胞菌(AB98037)菌株对12种中草药的敏感性。结果表明:五倍子、大黄、乌梅、黄连的抑菌作用明显,最小抑菌浓度(MIC)<50μg/ml;地榆、黄柏、野菊有一定的抑菌作用,MIC为50~100μg/ml;而白头翁、山豆根、贯众的抑菌作用不明显,MIC均<500μg/ml。