三株AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

为分离获得AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体,并鉴定及研究其生物学特性,本研究以AHPND致病型副溶血性弧菌为宿主菌,采用双层平板法分别从中国福建及墨西哥海水样本中对其噬菌体进行分离;通过噬菌斑形态、限制性内切酶、全基因组测序构建系统发育树及透射电镜观察对所获噬菌体进行分类鉴定;同时对供试噬菌体裂解谱及其生物学特性进行测定,包括最佳感染复数(MOI)、pH稳定性、热稳定性、过氧乙酸稳定性及不同储存温度下的存活稳定性等。结果显示,本研究分离获得3株AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体P46、P48及VP7,3株噬菌体的噬菌斑均呈透亮圆形,P46噬菌斑直径4～5 mm,P48与VP7噬菌斑直径5～6 mm。3株噬菌体核酸均为双链DNA,电镜下观察其头部均呈二十面立体结构,直径约60 nm,尾部宽约8 nm,长约18～20 nm,属于短尾噬菌体科。3株供试噬菌体对AHPND型副溶血性弧菌裂解率达91.5%,对非AHPND型副溶血性弧菌裂解率为92.3%,且无法识别除副溶血性弧菌外其他种属的细菌;噬菌体P46、P48及VP7感染AHPND致病型副溶血性弧菌的最佳MOI分别为0.001、0.1及0.001;P46与VP7最适pH为6～8,P48最适pH为6～9;3株噬菌体对60°C的温度耐受力较强,在4°C条件下存放50周后仍具有较高的存活率;对通用杀菌浓度的过氧乙酸具有一定耐受性。将噬菌体P46、P48及VP7保守蛋白序列在NCBI数据库中比对后发现,3株供试噬菌体与其他噬菌体同源性较低,因此,噬菌体P48与P46及VP7很可能为3株新发现的短尾科噬菌体,这是中国首次报道AHPND致病型副溶血性弧菌短尾科噬菌体。本研究丰富了AHPND致病型副溶血性弧菌噬菌体的菌种资源,并为其应用于噬菌体生物防治制剂的开发奠定了理论基础。     

野生银鲳消化道内潜在产酶益生菌产酶条件的初步研究

采用酶学分析法研究了单因子(温度、p H、发酵时间)变化对野生银鲳(Pampus argenteus)消化道内同时分泌蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶中两种以上的5株菌株产酶活力的影响,即通过测定酶活力的大小找到每株菌最适产酶条件范围。结果显示,在温度31~37℃、p H 7~8、发酵时间3 d的条件下,5株产酶菌的蛋白酶活力最大;在不同温度和p H条件下,5菌株分泌的淀粉酶活力各不相同,但都随发酵时间的延长而增大,3~5 d达最大值;4株分泌纤维素酶的菌株纤维素酶活力受环境影响总体变化不大,在温度31~37℃、酸性条件(p H 5)和发酵时间4 d的条件下为活力最大;2株分泌脂肪酶的菌株在28~31℃、中性(p H 7)、发酵时间1 d条件下其脂肪酶活力最大,最大可接近180 U·m L-1,但活力都随发酵时间而显著下降。结果表明,不同产酶菌所分泌的消化酶活力所需的最适条件有很大不同,了解和掌握银鲳肠道中菌群的产酶条件,对开发潜在产酶益生菌有着积极的作用。     

进出口猪肉及其产品中5种致病菌检测试剂盒芯片的保存试验

为了探索沙门氏菌、单增李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲菌和大肠杆菌O157:H7检测试剂盒芯片保持其稳定性及活性的期限,对进出口猪肉及其产品中该5种致病菌检测试剂盒芯片进行了保存试验,其结果:该试剂盒芯片能在37℃下稳定保存7d,即在20℃下保持其稳定性及活性的期限超过10.5个月。     

2株溶藻弧菌烈性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

为寻找并丰富溶藻弧菌噬菌体资源,实验以溶藻弧菌VAHN1为宿主菌,采用双层平板法从海南虾塘水样及福建海产品样本中分离溶藻弧菌噬菌体。通过透射电镜、限制性内切酶及构建发育树等方法对所获溶藻弧菌噬菌体进行分类鉴定;同时分析其生理生化性能。结果显示,本研究分离获得2株溶藻弧菌噬菌体VAP9与VAP21,其噬菌斑均清晰透亮,直径约1.5～2.0 mm。2株噬菌体核酸均为双链DNA,于透射电镜下可见其头部均呈正二十面体结构,2株噬菌体均属肌尾噬菌体科。噬菌体VAP9与VAP21对理化环境具有良好的耐受性;VAP9最适pH为6～8,VAP21最适pH为7～11;2株噬菌体可耐受通用杀菌浓度的过氧乙酸,且对氯仿与乙醚不敏感,同时对紫外线具有一定耐受性。2株噬菌体的最佳感染复数均为0.001,对供试溶藻弧菌的裂解率达95.2%,可裂解部分副溶血性弧菌,但无法裂解除溶藻弧菌与副溶血性弧菌外的弧菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属等其他种属的供试细菌。噬菌体VAP9与VAP21可高效抑制溶藻弧菌VAHN1的生长,且2株噬菌体的混合制剂对溶藻弧菌的抑制效果优于单株噬菌体。将噬菌体VAP9及VAP21保守蛋白序列于N...     

利用大西洋鲑内源酶酶解加工废弃物制取抗氧化肽的研究

大西洋鲑(Salmo salar)加工废弃物中含有丰富的蛋白质,具有较高的开发利用价值,直接遗弃会造成资源浪费和环境污染,探索利用自身内源蛋白酶酶解制取抗氧化肽具有重要的意义。对大西洋鲑内脏所含内源蛋白酶的性质进行了初步研究,测得主要含有3种内源蛋白酶,最适p H为2.0、6.0、9.0,p H 9.0的碱性蛋白酶具有最高的酶比活力。以水解度和总抗氧化活性为指标,通过单因素试验确定大西洋鲑内源蛋白酶处理鲑鱼的加工废弃物干粉料的最适条件,再用正交实验L16(45)对其酶解条件进行优化,确定影响酶解液总抗氧化活性的主要影响因素(P﹤0.05)为温度、p H和酶解时间,比较后得到最佳酶解条件为:温度35℃、加酶量0.7 m L/50 m L、料液比0.7 g/50 m L、p H 9.0、酶解时间7 h,该条件下酶解液的总抗氧化活性为258.29 U,大西洋鲑加工废弃物干粉料水解度为15.00%。研究表明,采用大西洋鲑内源蛋白酶酶解鲑鱼加工下脚料并制取抗氧化肽,具有一定的可行性。     

草鱼体表嗜水气单胞菌拮抗细菌S190的分离鉴定及生物学特性研究

由采集的草鱼体表细菌中，分离筛选到1株抗嗜水气单胞菌较强的菌株S190。通过对该菌株个体和群体形态特征观察、生理生化特征测定及16SrDNA序列分析，初步确定为Jeotgalicoccus psychrophilus S190。杯碟法拮抗试验表明，S190对嗜水气单胞菌有较强的抑制作用；最适作用条件为25℃、pH8．0。该菌株对葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌也表现出一定程度的抑制作用。生物学特性研究表明：S190生长最适碳源为1％的糊精，氮源为0．01％的酵母粉，磷源为0．01mol／L的K2HPO4；培养温度25℃，pH10，NaCl浓度5％（m／V），接种量3％（V／V），装液量以250ml三角瓶装250ml生长最好。     

自生物絮团养殖池分离具有亚硝酸盐去除功能的细菌及其鉴定和特性

从凡纳滨对虾生物絮团养殖池排水渠中分离出一株对亚硝酸盐具有高效去除能力的菌株(201107290102),16S r RNA序列分析结果显示,该菌株与美丽盐单胞菌(Halomonas venusta)的相似度高达99%,初步鉴定为美丽盐单胞菌。其去除亚硝酸盐最适条件为碳氮比(C/N)=15、温度37℃、初始p H 10.0、盐度40,最高去除率达91.7%。研究结果表明,该菌株能高效利用亚硝酸盐,可改良生物絮团养殖环境。     

高活性光合细菌荚膜红假单胞菌培养特性初探

从洛河水中进行了光合细菌的分离，得到一株细胞活性高的荚膜红假单胞菌JM12，并对其培养条件进行了初步摸索。结果表明：该菌适宜在pH值6～7，盐浓度0％～3％，温度25℃～35℃以及有光照条件下生长。     

黄颡鱼蛋白酶活性的研究

研究了不同pH值和温度条件下黄颡鱼蛋白消化酶活性的变化。结果表明：pH2．2～8．2时，随pH的升高，胃蛋白酶活性逐渐降低，在肝胰脏、前肠、中肠、后肠蛋白酶的最适pH分别为7．4、7．4、7．8、7．8；温度可显著影响蛋白酶活性，胃蛋白酶、肠道蛋白酶及肝胰脏蛋白酶的最适温度分别40℃、40℃和30℃，在最适温度及同等温度条件下，胃蛋白酶活性高于中肠、前肠、后肠和肝胰脏。     

南极微生物产低温蛋白酶菌株的筛选、分子鉴定及部分酶活特性

从南极获得的260株低温细菌中筛选到107株具有蛋白酶活性菌株，其中5株菌所产蛋白酶的活性高于45U／mL。对其进行16S rRNA基因序列的同源性和系统发育分析，结果表明，菌株NJ276、NJ5—9、NJ16—70、NJ345属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)，NJ341属于科尔韦尔氏属(Colwellia)。对其中NJ276、NJ341、NJ16—70、NJ345这4株产蛋白酶南极嗜冷菌的生长及分泌蛋白酶的部分酶活特性进行研究，结果表明：(1)4株菌最适生长、产酶温度均为10℃左右；培养2～5d，嗜冷菌生长、产酶量一直处于较高的状态。(2)4株南极嗜冷菌分泌的蛋白酶的酶活反应最适pH值为9。(3)菌株NJ276、NJ5—9分泌的蛋白酶最适酶活温度为50℃；菌株NJ341、NJ345分泌的蛋白酶最适酶活温度为40℃；在0℃时蛋白酶活性是最高活性的30％左右，蛋白酶热稳定性较差，因此菌株NJ341、NJ345分泌的蛋白酶属于低温蛋白酶。