异育银鲫造血器官坏死症病鱼体内鲤疱疹病毒Ⅱ型的电镜观察与超微病理学特征

为分析患鲫造血器官坏死症异育银鲫Carassius auratus gibelio体内不同器官组织中鲤疱疹病毒(CyHV-2)粒子的形态结构、分布和发生过程,采集患病异育银鲫体肾、脾脏、头肾、肝胰脏、肠道、鳃各组织样本,利用透射电镜观察疱疹病毒和组织细胞超微病理学。在所采集器官组织中均观察到鲤疱疹病毒Ⅱ型的DNA内核、空衣壳、实心核衣壳、含包膜成熟病毒共4种不同成熟时期的病毒粒子,不同时期的病毒粒子直径分别为65~90nm、90~180nm、90~180nm、170~220nm;体肾和脾脏中含有大量的Cy HV-2病毒,而头肾、肝胰脏、肠道和鳃中病毒粒子较少;CyHV-2病毒主要感染体肾、头肾、脾脏的吞噬细胞,导致机体免疫机能改变;组织细胞病理学观察发现吞噬细胞核边缘化,核内染色质变性,核膜溶解,线粒体嵴断裂,出现空泡,个别细胞溶解坏死。通过PCR检测和电镜观察病毒粒子结构特征,确诊异育银鲫感染Cy HV-2病毒,主要器官组织细胞中均有CyHV-2病毒,且在细胞核中完成复制和组装,在细胞质中获得外膜。感染Cy HV-2病毒的异育银鲫主要器官组织均受到一定的损伤。     

牙鲆淋巴囊肿病的病理和病原分离

应用常规显微和亚显微技术观察和分析患淋巴囊肿病养殖牙鲆(Paralichthys olioaceus)的病理学变化，利用差速离心和蔗糖密度梯度离心技术分离其病原——淋巴囊肿病毒，并利用牙鲆细组织细胞系FG—9307为感染基质，观察淋巴囊肿病毒引起的细胞病理变化。结果表明，患病牙鲆的囊肿组织是一些淋巴囊肿细胞的集合体，这些囊肿细胞排列紧密，直径为10—100μm，细胞近圆形，细胞质内散布有大量的嗜碱性包涵体，且多数集中在细胞的边缘部分；囊肿细胞内含有大量病毒粒子，其衣壳外形呈六角或五角形，直径为150—230nm，大多数病毒粒子中央有一致密的核，核外周包围着一双层核衣壳，核衣壳的表面可见一圈把手样亚单位。以患病牙鲆囊肿物制备的上清液接种细胞，7d内未见细胞异常，经盲传2—3代后，细胞出现较明显的细胞病变效应。     

“红肉病”文蛤中发现的一种球形病毒的形态发生与细胞病理学

在患“红肉病”文蛤的消化盲囊上皮细胞中发现了一种球形病毒及其发生基质。病毒粒子呈球形，无囊膜，直径约50－80nm，在细胞质内形成多泡状的包涵体并进行病毒粒子的装配。受感染的细胞具有明显的病理变化，主要表现为核固缩或肿胀并出现核空泡，内质网膨胀、大部分转化泡状，线粒体溶解或固缩，溶酶体数量增多等。     

刺参一种囊膜病毒的分离及其超微结构观察

利用电镜负染技术检测发病的养殖刺参[Apostichopus japonicus（Selenka）]组织提取液。观察发现，提取液中存在大量病毒样粒子，该病毒粒子近似球形，具有囊膜。囊膜内可见高电子密度的核心结构。完整的病毒粒子直径为80～100nm，囊膜厚6～10nm，核心结构直径35-45nm，呈六边形。应用超薄切片技术对刺参的触手顶部、触手臂、疣足、呼吸树、背肠血管、肠等组织的病毒感染状况进行观察，发现该种病毒粒子大量存在于所检测各组织内。感染细胞超微结构表现为大量细胞器崩解形成空泡结构，并出现“髓袢样”结构等病理变化。根据观测结果，该病毒是一种无包涵体病毒。     

栉孔扇贝大规模死亡致病病原的研究

对2000-2002年山东沿海6个疫区患病栉孔扇贝进行电镜观察，在消化腺、外套膜、肾和肠的结缔组织细胞和间质细胞中发现一种球形病毒．并引起相直的病理学变化。该病毒具囊膜，直径为130～170nm，核衣壳直径为90～140nm。病毒分离纯化后．观察到的病毒囊膜表面覆有长20nm的纤突。病毒在细胞质中的囊泡样结构内完成装配，其内未发现包涵体存在。从发病疫区栉孔扇贝组织中分离出病毒毒种对键康扇贝进行人工感染。结果显示，各感染实验组发病扇贝表现出与自然海区发病扇贝相同的临床症状。病毒注射组死r二率为?5％，病毒浸浴组死亡率为68．7％．灭活病毒注射组和空白对照组死亡率皆为12．5％。病毒注射、浸浴组与灭活病毒注射组、空白对照组死亡率差异显著。电镜复检结果显示，各感染实验组发病扇贝组织中分布有大量病毒粒子，与自然海区发病扇贝组织所观察到的病毒粒子在形态特征和病理学特征上完全一致。以上结果证明，病毒是导致栉孔扇贝大规模死亡的直接病原。     

中国对虾1种球形病毒及肝胰腺病变的电镜观察↑（*）

在１９９４年山东地区对虾暴发性流行病研究中,在未检出杆状病毒的中国对虾样品中首次发现１种球形病毒,电镜下观察到该病毒外有囊膜,直径２００ｎｍ左右,在细胞质中形成球形包涵体,以宿主肝胰腺和心脏为主要靶器官;受其感染的肝胰腺细胞的细胞器出现一系列病理变化：线粒体从增生、肿胀、内嵴溶解到出现纤维化,最后崩解;糙面内质网也明显增生、脱颗粒、排列紊乱,严重感染时,肿胀成泡状,甚至分解;细胞核出现病变较晚且较轻。人工感染实验证明该病毒可引起中国对虾暴发性流行病的症状,１３ｄ累积死亡率可达９０％。     

杆状病毒性的皮下及造血组织坏死─对虾暴发性流行病的病原和病理学

１９９３年对虾暴发性流行病的患病对虾经光镜组织病理学研究和电镜观察，在对虾的皮下组织（包括前肠上皮、后肠上皮、真皮和鳃等）、结缔组织、造血组织、触角腺及血淋巴细胞等的细胞核均发现核肿大和深的嗜酸性着色。在电镜下，病变组织的细胞核内为一种杆状病毒充满，病毒大小为１２０ｎｍ×３６０ｎｍ，有囊膜，在细胞内不形成核型多角体或颗粒体类包涵体，属于杆状病毒属的无包涵体型杆状病毒亚群，即Ｃ型杆状病毒亚群。根据该对虾暴发性流行病的症状、病毒感染的靶组织和病毒的特征，该病毒被认为是一种新的对虾病毒，暂定名为皮下及造血组织坏死杆状病毒。     

中国对虾淋巴组织培养中的病毒及病理观察

通过对中国对虾的淋巴器官和经过培养的养殖、海捕中国对虾的淋巴组织细胞进行电镜观察 ,均发现在细胞内存在一种形状为球形 ,有囊膜 ,平均直径为 136nm的病毒 ,病毒分布于细胞质内 ,或成团存在 ,似为一种虹彩病毒 ;在养殖对虾淋巴器官及培养过的组织细胞中还发现另一种病毒 ,病毒粒子为正二十面体 ,无囊膜 ,平均直径为 33nm ,分布于细胞质中 ,似为一种小RNA病毒。在体外培养淋巴组织过程中 ,病毒在细胞内没有明显增殖迹象。感染病毒的细胞呈现细胞核固缩 ,细胞质空泡化 ,线粒体内嵴模糊 ,粗面内质网水肿等一系列病理变化。对淋巴组织切片进行光镜观察 ,发现淋巴器官组织部分坏死 ,有些细胞核肿大 ,苏木精深染 ,严重的细胞核结构已经被破坏。     

鲤病毒病原的感染性测定

为查明养殖鲤（Cyprinus carpio）突然大批发病死亡的原因，对鲤病样品进行了细胞攻毒、空斑测定、电镜观察，以及鱼体感染等实验。先以患病鲤的组织匀浆液，经过滤后，分别接种到草鱼鳍条细胞（GCF）、鲤上皮瘤细胞（EPC）等14种培养细胞中。利用倒置显微镜观察显示，在1-2d内，该病鱼组织匀浆液可使其中9种细胞出现典型的细胞病变。收集出现病变的细胞液（即病毒悬液），进一步进行病毒滴度检测、空斑测定和鱼体感染实验。结果显示，在GCF细胞上的病毒滴度为10^7.3TCID50／mL；在FHM，TSB和GCO等细胞中可产生直径1～4mm的圆形空斑，空斑的大小与宿主细胞的种类和接种的病毒浓度有关。通过对感染细胞制备的超薄切片和病毒负染样品进行电镜观察，显示这是一类呈典型子弹头样的弹状病毒颗粒。感染了病毒悬液的鲫和鲤先后在第2天和第3天开始出现病症，间隔1～2d后发病的鱼开始死亡，至第14天，两种感染鱼的死亡率均达到83．3％。收集人工感染后濒死的鲫和鲤，分别制备组织匀浆液，回接感染鱼类培养细胞，24h内能使其出现与原发病鲤组织匀浆液所引起的类似的细胞病变。因此证实患病鲤是由病毒病原感染所致。[中国水产科学，2006，13（4）：617—623]     

江苏启东文蛤大面积死亡原因调查

采集启东文蛤发病地区的养殖海水样品进行水质分析,并对感染文蛤做了细菌分离和电子显微镜超薄切片.结果表明,此次文蛤大面积死亡非化学污染和细菌感染所致;发病文蛤外套膜电镜超薄切片中发现了病毒包涵体和散在病毒颗粒,病毒颗粒呈球形,直径约60～80 nm,无囊膜.其他感染组织也有明显的病理变化,如核固缩、线粒体溶解、微绒毛脱落、细胞器空泡化.     

中华绒螯蟹小核糖核酸病毒病及其组织病理学

本文对所谓“抖抖病”的中华绒螯蟹病蟹病因进行了分析研究。经电镜观察,病蟹的心脏、了、鳃、肠和肝脏胰腺中存在着球状病毒粒子,病毒无囊膜,直径为２８－３２ｎｍ左右,分布在细胞浆内,不形成包涵体。从病毒形态和染色反应特性确定该病毒为小ＲＮＡ病毒科病毒。经人工注射病蟹组织浆除菌上清液,被感染的健康蟹出现在自然发病蟹足严重抖动等一样的症状,表明病囊中的小ＲＮＡ病毒为该病原。病蟹病理特征为：细胞肿大,核溶解七     

鲈脾肿大症的病原及细胞病理学的初步研究

首次报道了鲈脾肿大症的发病情况。病鱼以脾脏肿大为主要症状，死亡率高达50％以上。对病鱼进行显微镜检查和细菌分离培养，未见寄生虫和病原菌。经电镜检查，在脾、肝等组织中发现大量病毒颗粒。该病毒颗粒为六边形，没有囊膜，衣壳直径180-220nm，认为该病毒屑虹彩病毒(Iridoviridae)。细胞病理变化表现为感染细胞肿胀，细胞超微结构破坏，细胞质出现大面积空泡。血细胞中出现大量异形淋巴细胞，占淋巴细胞总数的50％以上。     

军曹鱼淋巴囊肿的病理学研究

应用病理组织学和电镜方法,对患疑似淋巴囊肿病的军曹鱼(Rachycentron canadum)的各器官进行观察.结果表明,患病军曹鱼的皮肤囊肿组织由一些淋巴囊肿细胞集合体组成,这些囊肿细胞排列紧密,直径为10～150 μm,细胞呈圆形、锥形不规则状;细胞外有一层厚的囊膜;细胞质内散布有大量的嗜碱性包涵体,且多数集中在细胞的边缘部分;电镜观察到囊肿细胞质中有大量二十面体的病毒粒子,病毒颗粒直径220 nm.据此确认该病为病毒性淋巴囊肿病.其他器官主要组织病理学变化有:在心脏、肝脏、脾脏和头肾中也存在囊肿细胞,心肌纤维水肿;肾间质淋巴细胞增生,巨噬中心出现,肾小管上皮细胞变性和坏死;脾淋巴细胞增生,脾髓质出血;肝脂肪变性;鳃上皮肿胀.根据观察结果可以认为,该病毒不仅损伤鱼的皮肤,致使病鱼外观异样而严重影响其商品价值,而且对鱼的内脏和免疫器官也造成严重的致命损伤.     

Morphogenesis of koi herpesvirus observed by electron microscopy

Koi herpesvirus (KHV or cyprinid herpesvirus 3) was inoculated onto three fish cell lines derived from carp, Cyprinus carpio L., and the process of virion formation observed with electron microscopy. Essentially, similar features of virus particles were observed in all three cell lines. The nucleus of infected cells was characterized by margination of chromatin and often contained many capsids of about 110 nm in diameter with varying morphology. The morphological variation of the capsids was very similar to that of mammalian herpesviruses. Some capsids protruded from the inner nuclear membrane, and others, with envelopes, were located in the perinuclear space between the inner and outer nuclear membrane, suggesting budding of capsids at the inner nuclear membrane. Naked capsids and envelopment of capsids by budding into vesicles were also observed in the cytoplasm. Mature, enveloped virions 170-200 nm in diameter were seen in cytoplasmic vesicles or outside the cell. These observations suggest KHV virions mature through a complex morphological pathway including two distinct envelopments, which have been found only in herpesviruses. These observations support the inclusion of KHV in the family Herpesviridae.     

Studies of the ultrastructure and morphogenesis of fish pathogenic viruses grown in cell culture

A birnavirus (infectious pancreatic necrosis virus, IPNV), three rhabdoviruses (viral haemorrhagic septicaemia virus, VHSV; infectious haematopoietic necrosis virus, IHNV; and spring viraemia of carp virus, SVCV) and an iridovirus (isolate from a sheatfish) were investigated with regard to their morphogenetic interactions with cells in culture. In cells infected with birnavirus, a granular viromatrix, single virions randomly distributed in the cytoplasm, viral particles aggregated in pseudocrystals and cytoplasmic tubuli similar in diameter to that of the virus were found. Rhabdoviruses entered the cells by viropexis and replicated within the cytoplasm. Maturation occurred predominantly at the cell membrane and sporadically at membranes of the Golgi cisternae. Inclusion bodies were found partially consisting of viral nucleocapsids. After budding, new virions were found adsorbed to the cell membrane. Viral haemorrhagic septicaemia virus, known to exhibit an atypical shape because of preparative procedures, could be identified by immunostaining using two monoclonal antibodies directed against G- and N-proteins and colloidal gold. Iridoviruses entered the cells by viropexis. Viral particles were found in coated vesicles. Subsequently, vesicles without a clathrin coat were detected. Replication occurred within prominent cytoplasmic inclusion bodies. Isometric viral nucleocapsids were transported in an unknown manner to the cell membrane and matured by budding.     

A dual infection by infectious cuticular epithelial necrosis virus and a Chlamydia-like organism in cultured Litopenaeus vannamei (Boone) in Ecuador

During 1996, microscopic examinations of post larvae and juveniles of moribund Litopenaeus vannamei showed multifocal necrosis in the cuticular epithelial tissues. In addition to these severe degenerative alterations in the epithelial cells typical of infectious cuticular epithelial necrosis virus (ICENV), columnar cells of the epithelium displayed small round intracytoplasmic inclusions in the necrotic tissue. Examination by electron microscopy of affected tissues demonstrated prokaryotic organisms in the cytoplasm of epithelial cells delineated by a distinct cytoplasmic vesicle; the prokaryotic organisms were morphologically similar to the genus Chlamydia. The necrotic tissue also showed the presence of particles of ICENV; the double infection by two different organisms in cuticular epithelial cells has not been reported previously. Two distinct stages in the intracellular development of a Chlamydia‐like organism were recognized: (1) pleomorphic elementary bodies (EBs) that were spherical to oval were often observed in the process of division or in forming a common chain of three cells, the cells were surrounded by a rigid cell envelope and the presence of a cap or plaque hexagonally arrayed; (2) the reticular bodies (RBs) were forms often in the process of division. These cells had an electron‐dense cytoplasm and contained a loose network of nuclear fibrils and a more fragile cell envelope. Regardless of the development stages of the Chlamydia‐like organism within the cytoplasmic vesicles, ICENV particles were observed, either dispersed or in clusters, surrounded or inside the vesicles. The potential adverse impact of this dual infection on shrimp culture should be considered, especially in high‐density operations.     

海湾扇贝一种球形病毒的形态发生及细胞病理学观察

2001年3-5月,青岛海区养殖海湾扇贝发生外套膜"糜烂病"并导致约50%亲贝死亡,主要表现为外套膜糜烂;严重者,约2/3的外套膜溃烂呈胶水状.电镜检测发现病贝体内感染有病毒等病原微生物.本文报道了该病毒粒子的形态、发生及宿主细胞由此所产生的细胞病理学变化.成熟的病毒粒子近球形,直径150～180nm,具囊膜,在细胞核附近的溶酶体内发生和增殖.发生初期溶酶体内形成板层髓样结构,随后形成块状、泡状、絮状等多形态的病毒发生基质及具有正方形花样的蛋白质晶格结构.最后,大量的病毒粒子装配形成,填充在溶酶体内.该病毒粒子主要存在于消化盲囊上皮细胞及结缔组织细胞的胞质中.受感染的宿主细胞线粒体肿胀、嵴溶解,内质网肿胀、核糖体脱落,溶酶体数量增多,核膜膨胀、溶解等,大部分细胞器受损.