防治胡椒瘟病的生物农药和新型低毒化学农药筛选

胡椒瘟病是危害我国胡椒产业的首要病害，目前基本依赖使用化学农药防治。筛选应用生物农药是减少化学农药用量的有效途径。本文采用生长速率法测定胡椒瘟病病原菌对12种生物农药和新型低毒化学农药的敏感性。结果表明：70%烯酰?嘧菌酯WG、木霉菌WP和枯草芽孢杆菌WP对胡椒瘟病病原菌的抑菌效果好且敏感性高，EC50分别为0.211 3、0.49和0.78 μg/mL。     

9种生物农药对人参立枯病菌的室内毒力测定

为筛选出防治人参立枯病的有效药剂,采用菌丝生长速率法测定了9种生物农药对人参立枯病菌(Rhizoctonia solani)的室内抑菌效果。结果表明:50亿CFU/g多粘类芽孢杆菌WP对人参立枯病菌的室内抑菌效果最好,其EC50为5.12E-09 mg/L;另外,300亿/g内生芽孢杆菌WP、10亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌WP、1000亿芽孢/g枯草芽孢杆菌WP和10%多抗霉素WP 4种生物农药对人参立枯病菌也表现出了较好的室内抑菌效果,EC50分别为0.0001、0.0017、0.0177和0.0260 mg/L。该研究筛选出了能有效抑制人参立枯病菌菌丝生长的生物农药,对人参立枯病的科学防治具有指导意义。     

几种杀菌剂对甜叶菊枯萎病防治效果

针对甜叶菊生产中枯萎病(Fusarium solani)危害严重,杀菌剂多、乱、杂现状,对几种杀菌剂开展室内抑菌效果和田间防效试验。室内抑菌试验结果表明,杀菌剂处理6(哈茨木霉菌WP+50%多菌灵WP)500倍、处理4(枯草芽孢杆菌WP+50%多菌灵WP)500倍和处理2(50%多菌灵WP)500倍对甜叶菊枯萎病病原菌有较好抑制作用;田间试验结果表明,处理6(100倍浸根及500倍灌根)、处理4(100倍浸根及500倍灌根)对甜叶菊枯萎病防效最好(分别为75.9%、72.4%)。     

48株枯草芽孢杆菌对棉花黄萎病防治效果评测

目前,枯草芽孢杆菌已广泛应用于防治棉花黄萎病,但不同菌株的防治效果（防效）参差不齐,有待进一步筛选验证。前期,本课题组从健康棉花植株和根际土壤中分离获得了48株枯草芽孢杆菌。为明确这些菌株对棉花黄萎病的防效,筛选具有优异防效的枯草芽孢杆菌菌株,采取对峙培养法、对扣培养法测定其对棉花黄萎病菌的抑制作用,并通过温室试验验证其对棉花黄萎病的防效。通过对峙培养和对扣培养筛选出18株拮抗效果较好的菌株。温室试验结果显示：无论浸种或灌根处理,EBS03、EBS07、EBS10和BS04菌株对棉花黄萎病的防效均大于55％,其中EBS03防效最好,浸种与灌根处理对棉花黄萎病的防效分别为76.31%、87.10%;此外,播种后60 d EBS03和EBS10菌株浸种处理的棉苗株高、地上部鲜物质质量、总鲜物质质量较对照分别提高78.08%和77.77%、113.33%和108.00%、107.23%和103.61%。综上,EBS03和EBS10菌株具有较好的促生长作用,并对棉花黄萎病有一定的防效,具有进一步开发应用的潜力。     

生防菌株Bacillus velezensis Z全基因组测序分析

生防菌株Bacillus velezensis Z对胡椒瘟病等多种植物病害具有良好的生防效果;全基因组测序能够为其分子机理研究和开发应用提供信息基础。本研究开展该菌株全基因组测序,并进行比较基因组学和抑菌次生代谢产物合成基因簇预测研究。结果表明：B. velezensis Z菌株的基因组中含有1条4 054 780 bp大小的环形染色体DNA和1个17 122 bp大小的环形质粒,总基因组的GC含量为46.24%,共编码基因4173个;包含27个rRNA,86个tRNA基因,34个sRNA;含有串联重复序列179个,其中13个微卫星DNA,138个小卫星DNA;通过比较基因组学分析,结果发现该菌株与贝莱斯芽孢杆菌模式菌株FZB42同源性极高,与枯草芽孢杆菌模式菌株168之间具有一定的遗传距离;同时发现B. velezensis Z基因组中共编码次生代谢产物合成基因簇13个,其中8个与表面活性素（surfactin）、泛革素（fengycin）、溶杆菌素（bacilysin）、macrolactin H、bacillaene、difficidin、plantazolicin、amylocyclicin等已知基因簇完全相似或高度相似,其他5个基因簇皆功能未知。总之,本研究揭示了B. velezensis Z的全基因组遗传信息,明确其与贝莱斯芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的比较基因组学关系,预测了抑菌产物合成编码基因簇,为该生防菌株及其抑菌产物的机理研究和开发应用奠定基础。     

甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂防治马铃薯黑痣病的室内及田间试验

进行了4种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对马铃薯黑痣病菌的室内毒力测定,防治马铃薯黑痣病的室内盆栽试验及田间药效试验。采用菌丝干重法测定4种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂室内毒力结果表明,烯肟菌胺、唑菌酯、唑胺菌酯及烯肟菌酯对马铃薯黑痣病菌毒力相当,与嘧菌酯无明显差异。室内盆栽试验结果表明,相对于其他测试药剂,烯肟菌胺与唑胺菌酯对马铃薯黑痣病防效相对更好,分别为74.3%和77.1%。田间药效试验结果表明,播种时,沟施烯肟菌胺或唑胺菌酯对马铃薯黑痣病有较好抑制作用,推荐剂量均为187.5 g/hm~2。     

小麦纹枯病化学防治药剂的筛选

为了筛选小麦纹枯病的高效防治药剂,对多种化学药剂进行了室内毒力测定、盆栽试验和田间防效试验.室内毒力测定结果表明,烯唑醇、井冈霉素、敌力脱、适乐时对小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealia)抑菌效果较好,EC50均小于1 mg/kg;敌萎丹、立克秀、甲基托布津、扑力猛、五氯硝基苯、三唑酮和退菌特对小麦纹枯病菌也有较好的抑菌效果,EC50均在10 mg/kg以下.盆栽试验结果表明,21%复方适乐时FS1 : 500包衣和2.5%适乐时FS 1:500包表处理防效最好,分别达到84.23%和83.52%;其次为12.5%烯唑醇WP 1 : 625拌种和2%立克秀WS 1 : 500拌种,为81.49%和77.23%;3%敌萎丹FS 1:500包衣、2.5%扑力猛FS 1:500包衣、15%三唑酮WP 1:500拌种和20%井冈霉素SP 1:500拌种也有较好的防效,平均防效均大于60%.大田试验结果表明,返青期3%敌萎丹FS 1:500包衣和12.5%烯唑醇WP 1:625拌种防效最好,防效分别为55.43%和51.51%;收获期白穗率调查结果发现,12.5%烯唑醇WP 1:625拌种防效最好,达84.63%;其次为3%敌萎丹FS 1:500包衣和15%三唑酮WP 1:500拌种,防效分别达到73.36%和72.31%.收获期产量调查结果表明,3%敌萎丹FS 1:500包衣、21%复方适乐时FS 1:500包衣和2.5%适乐时FS 1:500包农处理增产效果较好,分别达到13.81%、12.34%和11.50%.从防治效果和增产效果综合考虑,敌萎丹、复方适乐时、适乐时是较好的种子处理剂.     

枯草芽孢杆菌防治大豆菌核病效果初报

本文应用枯草芽孢杆菌ZH-2菌株的发酵菌剂,在桦南县进行了生防菌剂防治大豆菌核病的田间防效试验,结果表明生防菌剂100倍稀释液浸种和喷洒处理对大豆菌核病的田间防效达67.9%。     

3种植物生长调节剂对杀菌剂防治棉花枯萎病效果的影响

为筛选出在温室育苗情况下能有效防治棉花枯萎病的化学药剂组合，解决棉花温室育苗苗病频发问题，保障温室内培育出棉花壮苗和后续的分子生物学试验，选取5种杀菌剂嘧菌环胺、宁南霉素、吡唑醚菌酯、乙蒜素和春雷霉素，分别对棉花枯萎病菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum 7号生理小种菌株进行室内毒力测定和室内盆栽试验防治效果（防效）测定；筛选出防效较好的宁南霉素和乙蒜素分别和乙烯利、萘乙酸、苄氨基嘌呤3种植物生长调节剂混配拌种，进行室内盆栽试验测定防效。毒力测定结果表明：宁南霉素毒力最强，致死中浓度（EC₅₀）为8.034 mg·L^－1；乙蒜素次之，EC₅₀为16.048 mg·L^－1。盆栽试验的防效测定结果也表明，单用杀菌剂拌种时，宁南霉素和乙蒜素的防效较好（出苗后7 d时分别为68.24%和50.88%）。在与3种生长调节剂混配时，出苗后15 d时组合防效达到高峰，其中萘乙酸与宁南霉素组合的防效最好，可达84.65%，且具有很好的增效作用。综上，在温室育苗时可使用萘乙酸与宁南霉素组合拌种防治棉花枯萎病。     

枯草芽孢杆菌生物菌剂对人参病原菌室内抑菌实验研究

本研究采用了两种方法测定了枯草芽孢杆菌菌悬液及发酵液对3种人参病原菌抑菌效果,结果证明:枯草芽孢杆菌菌悬液对人参疫病,人参黑斑病的抑菌效果强于枯草芽孢杆菌发酵液,枯草芽孢杆菌发酵液对立枯病的抑菌效果强于枯草芽孢杆菌菌悬液。     

防治大豆疫霉根腐病的药剂筛选

采用实验室测定和温室盆栽方法研究了8种杀菌剂对大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)菌丝生长和繁殖的影响及它们对大豆疫霉根腐病的接种防治效果。结果表明,50%烯酰吗啉可湿性粉剂、97%甲霜灵可湿性粉剂和58%甲霜灵锰锌可湿性粉剂对大豆疫霉菌的菌丝生长和繁殖具有很好的抑制作用,该3种药剂能够明显抑制菌丝生长,抑制中浓度(EC50)值依次为0.1208μg/mL、0.1563μg/mL和0.3603μg/mL。浓度为10.0μg/mL时,对孢子囊形成和萌发的抑制率均为100%,对卵孢子形成抑制率分别为64.5%、59.5%和55.0%。接种防治试验结果显示,以上3种药剂喷药后7d防效依次为73.4%、68.8%和60.5%,其余的5种杀菌剂防治效果相对较差。     

中国胡椒疫霉种及交配型的研究

1982—1990年,从海南、云南、广东省13个县(市)的60多个发生胡椒瘟病的胡椒园采集大量带菌材料的样本,经分离获得65个疫霉菌株,并鉴定为寄生疫霉(Phytophthara parasitica Dast.)和竦淑疫霉(P.capsici Leon.)两个种。这是国内首次报道。在65个菌株中,寄生疫霉为34株,辣椒疫霉为31株,两者的比例接近1:1。这两个种对中国主要胡椒植区的胡椒瘟病具有同等的重要性。所有菌株的支配型中,两个种都以A~2占大多数,而且都存在个别同宗配合和中性菌株。     

广东花生黑腐病病原菌鉴定及防治药剂的室内毒力测定

花生黑腐病是花生的重要病害,对生产造成严重影响,被列为我国进境植物检疫性病害。为明确花生黑腐病的病原菌种类和筛选有效防治药剂,采用形态学特征与分子生物学技术相结合的方法,对花生黑腐病害进行了病原菌鉴定,同时采用菌丝生长速率法测定了8种杀菌剂对花生黑腐病菌的抑制作用。结果表明：花生黑腐病害的病原菌为冬青丽赤壳Calonectria iliciola。8种杀菌剂室内毒力测定结果显示,10%戊唑醇EC对花生黑腐病菌的毒力最强,EC₅₀值为1.12 μg/mL;300 g/L苯甲·丙环唑EC、29%吡萘嘧菌酯SC、25%咯菌腈SC、15%吡唑嘧菌酯SC和22.5%啶氧菌酯SC对花生黑腐病菌也有较好的抑制作用,EC₅₀均低于10 μg/mL;30%精甲恶霉灵的抑制作用最差,EC₅₀值为76.71 μg/mL。以上研究结果可为花生黑腐病的防治提供理论依据。     

海南岛菠萝疫霉种及交配型的研究

从海南岛的菠萝植区发生根腐病或心腐病的菠萝上收集大量病组织样本,经纯化获得40个疫霉分离菌株,全部鉴定为寄生疫霉(Phytophthora parasitica Dast.)一个种。所有菌株均为A~2交配型。     

化学诱变结合离体选择选育胡椒抗瘟病无性系

在胡椒(PipernigrumLinn.)茎尖丛生芽增殖技术的基础上,以印尼大叶种“LampongType”无菌实生苗作外植体源,采用EMS(ethylmethanesulphonate)对胡椒茎尖进行化学诱变处理,并结合辣椒疫霉(Phytophthoracapsici)培养滤液对胡椒茎尖及其增殖形成的丛生芽进行离体选择。结果表明,利用EMS在胡椒茎尖接种前进行化学诱变可提高抗瘟病变异体的产生频率。利用EMS不同浓度和不同时间对胡椒实生苗茎尖处理后接种,不经离体选择,直接在再生植株上进行抗病检测,抗性植株频率在4.3%￣26.67%之间,而不施用化学诱变的处理则未获得抗性植株。利用不同浓度EMS和不同诱变处理时间结合不同浓度的辣椒疫霉培养滤液离体选择,各种组合所获得的抗性植株比率在33.33%￣100%范围,但各种组合均较EMS和辣椒疫霉培养滤液单独处理的要高,其中以1.0%EMS处理60min结合25%辣椒疫霉培养滤液处理的最好。     

胡椒瘟病生防菌 Bacillus subtilis VD18R19 全基因组测序及 比较基因组学分析

Bacillus subtilis VD18R19 具有促进胡椒生长和防治胡椒瘟病的效果,全基因组测序是其分子机理研究和开发 利用的重要基础。本研究采用第二代 Illumina 平台与第三代 PacBio 平台相结合的测序技术,对生防菌 VD18R19 进行 全基因组测序,并进行比较基因组学分析。结果发现,VD18R19 全基因组大小为 4 123 380 bp,GC 含量为 43.80%, 编码基因 4 245 个;含有 tRNA 85 个、rRNA 30 个、sRNA 33 个;含有串联重复序列 60 个,其中小卫星 DNA 43 个、 微卫星 DNA 1 个;共线性分析、core-pan 基因分析及基因家族分析结果均显示 VD18R19 与模式菌株 B. subtilis 168 具 有高度的同源性;antiSMASH 软件预测及同源序列比对结果显示,VD18R19 菌株中含有 6 个抑菌次生代谢产物合成基 因簇,编码 surfactin、plipastatin、bacillibactin、bacilysin、bacillaene、subtilosin A 等抑菌物质,其合成途径涵盖了核 糖体途径、非核糖体途径和聚酮合酶途径。本研究为深入研究生防菌 VD18R19 的分子机理奠定生物信息学基础,有利 于生防菌株及其抑菌次生代谢产物的开发和利用。     

Translocation and distribution of P labelled potassium phosphonate in black pepper (Piper nigrum L)

The aim of this project was to study the translocation of potassium phosphonate within black pepper (Piper nigrum L.) and to elucidate the amount of chemical distributed through out the plant based on a tracer technique. Potassium phosphonate is a potential fungicide used against the pathogen Phytophthora capsici, which causes Phytophthora foot rot (Quick wilt) in the plant. Reports indicate that translocation of phosphonate is ambimobile, but there is no visual evidence for this. Potassium phosphonate labelled with radioactive phosphorus, ³²P, was applied to the black pepper vine and bush pepper and its translocation to different parts of the pepper plant was studied using an autoradiography technique. The chemical which migrated to different parts of the plant was quantitatively estimated by measuring ³²P on a liquid scintillation spectrometer following Cerenkov counting. Only traces of the chemical were lost to the soil through root systems. These results indicate that foliar sprays of potassium phosphonate to pepper could be a viable method of application for soil and foliar pathogens.     

枯草芽孢杆菌Czk1与化学杀菌剂协同防治橡胶树根病

为探究枯草芽孢杆菌与化学杀菌剂协同防治橡胶树根病的可行性,为橡胶树根病的可持续防治提供依据。采用抑菌圈法和平板菌落计数法分别测定7种杀菌剂和枯草芽孢杆菌Czk1菌株对橡胶树红根病菌、褐根病菌的毒力以及杀菌剂与Czk1菌的生物相容性,并用Horsfall法确定复配方案。结果表明："根康"对橡胶树红根病菌和褐根病菌的EC₅₀分别为0.6253、0.0522 μg/mL,EC₅₀均最低且与Czk1菌有很好的生物相容性。"根康"（EC₅₀=0.6253 μg/mL）与Czk1(EC₅₀=6.46×10 ⁷ CFU/mL)混配,体积比V(Czk1)∶V("根康")=7∶3时,对红根病菌的增效比率值I_R值为1.60;"根康"（EC₅₀=0.0522 μg/mL）与生防菌Czk1（EC₅₀=2.33×10 ⁸ CFU/mL）混配,体积比V(Czk1)∶V("根康")=7∶3时,对褐根病菌I_R值为1.51。研究表明,"根康"可与Czk1联用协同防治橡胶树根病,菌药复配剂的防效明显优于单剂"根康"和单剂生防菌Czk1的防效,且混配剂中"根康"使用量只有单剂的1/3,大幅降低了化学药剂的使用量。     

油梨根腐病病原菌的鉴定、生物学特性及室内药剂筛选

根腐病是油梨的毁灭性病害之一,该病害为害根部,引起根部变黑腐烂,严重时导致植株死亡。从发病典型的植株根部分离、纯化菌株,并开展致病性测定、形态学特征和多基因位点（ITS、LSU和COXⅡ）系统发育树分析相结合的病原菌鉴定。结果表明,引起海南油梨根腐病的病原菌为樟疫霉（Phytophthora cinnamomi）。还研究了不同培养条件和10种药剂对病原菌菌丝生长的影响。结果表明,病原菌在PDA培养基上生长较好,最适生长温度为28 ℃,最适pH为8,黑暗条件更适合病原菌的生长;烯酰吗啉对病原菌的抑制作用最强,EC₅₀为0.0929 μg/mL。本研究结果为油梨根腐病的田间防控提供了一定的理论依据。     

胡椒瘟病菌（Phytophthora capsici）孢子囊诱导及发育过程观察

孢子囊的产生和发育过程是研究胡椒瘟病菌（Phytophthora capsici）及其病害防控的重要基础。本研究分析不同诱导条件下胡椒瘟病菌孢子囊的产生情况,并通过光学显微镜和共聚焦显微镜观察孢子囊及其内部游动孢子的发育过程。结果发现：（1）3种诱导方法均能诱导出大量孢子囊,其中在V8-A平板上光照和抹伤双重诱导法获得的孢子囊数量最多,其次是在V8-A平板上光照诱导法,获得孢子囊数量最少的是V8液体光照诱导法,但仅差异最大的2个处理间达到显著水平;（2）显微镜观察发现,孢子囊由气生菌丝顶端逐步膨大形成,初始为近球形逐渐发育成倒洋梨形,孢子囊成熟后从顶端排出大量游动孢子,偶尔可见孢子囊顶端直接发育出芽管;（3）共聚焦显微镜观察发现,首先孢子囊内部原生质体被膜结构隔裂成大约数十个独立小格,然后在每个格子中积累数倍于细胞核的DNA,最后每份细胞核DNA发育成一个游动孢子。本研究从微观角度揭示P. capsici孢子囊发育外观及内部的形态特征,为胡椒瘟病菌后续致病机制研究和胡椒瘟病田间防控提供技术基础。