一种茶树新害虫 ——贡山喙蓟马Mycterothrips gongshanensis的鉴定

为明确一种在贵州广泛发生为害的茶树芽叶害虫种类,本文在形态鉴定的基础上,通过提取DNA、PCR扩增和测序获得其线粒体COI序列.结果表明:该害虫种类为贡山喙蓟马Mycterothrips gongshanensis(Li,Li&Zhang,2017),是一种茶树新害虫;实验获得的贡山喙蓟马的15个个体线粒体COI序列种内遗传距离为0.00％ ～0.46％.研究结果可为该害虫的准确鉴定和科学防控提供基础信息.     

PCR技术在茶树病害检测中的应用展望

我国茶区气候温暖，雨量充沛，茶树病害容易滋生。病害侵染不仅使茶叶产量降低，还会使茶叶品质受到严重影响，如以感染了茶白星病的芽叶制成干茶，其味奇苦，且有异味。据美国对亚、非主要产茶国的调查统计，每年由于病害造成的损失约占茶叶总产量的15％，与虫害相当。因此，科学、及时地防治茶树病害，是建设与管理无公害茶园、有机茶园的必要措施。聚合酶链式反应（PCR）技术用于病原检测，无需进行病原物的分离和培养，具有灵敏、快速、准确等优点，为茶树病害的早期快速诊断和科学防治提供了可能。近年来，PCR技术在国内植物病害检测中的应用十分普遍，但尚未见用于茶树病害检测的报道。本文分析了茶树病害检测的研究现状，提出运用PCR技术进行茶树病害检测的必要性和可行性，并对该项工作的前景进行了展望。     

茶树基因组DNA提取纯化技术研究

本研究以福鼎大白茶，云南在叶种为材料，设计了六种茶树基因组DNA提取纯化方案，以纯品DNA的OD260／OD280比值1．8为标准，参考基因组DNA的制率及分子量大小，确定了茶树基因组DNA最佳提取纯化方法，实验表明，不溶性聚乙烯吡咯烷酮和饱和酚对提高茶树基因组DNA纯化质量是十分有益的。     

DNA分子标记检测方法及在茶树中的研究进展

DNA分子标记检测方法是分子标记研究中的一项重要技术,直接关系到分子标记研究的效率、准确性和成本等.本文概述了现有DNA分子标记检测方法的种类及技术原理、特点和应用情况,综述了DNA分子标记检测方法在茶树中的应用并探讨了其发展前景,为茶树DNA分子标记检测方法的研究提供参考.     

DNA分子标记技术在茶树遗传多样性研究上的应用

本简述了目前国际上几种主要的DNA分子标记技术，着重讨论了RAPD技术在茶树遗传多样性研究上的应用现状和前景。     

玉米耐热DNA聚合酶基因表达载体构建与花粉介导转化

实验构建热稳定性聚合酶的基因表达双元载体,利用花粉介导法将热稳定性DNA聚合酶基因导入玉米幼胚,获得耐热转基因玉米株系。用热稳定性DNA聚合酶基因构建表达载体;然后利用花粉介导法进行转化,花粉收集自仲恺自交系玉米甜1号和自交系糯2号,将花粉与构建好的基因表达载体混合,利用花粉介导法进行转化;将收集到的T1代种子用PCR凝胶电泳技术和Southern杂交技术进行检测,选出阳性的转化株;在T2代经过田间耐热压力试验结合测定的玉米生理指标,筛选出9个具有良好耐热性玉米株系。     

一种同时适用于水稻种子叶片的简单快速DNA提取方法

本文报道了一种同时适用于水稻种子和叶片的简单快速DNA提取方法。该方法通过简单的碾磨、加热、离心等步骤便能制备适合PCR的DNA模板。用该方法单人每小时可以提取48个样品的DNA模板。本研究用该方法提IRT132个水稻种子DNA样品及1096个不同生长阶段的水稻叶片DNA样品,用13对PCR引物进行扩增,种子DNA样品PCR扩增成功率为91．0％,3个不同时期取材的叶片DNA样品PCR扩增成功率均在97．0％以上。该方法提取的DNA也可以进行高分辨率熔解曲线分析。     

DNA分子标记在茶树种质资源鉴定中的应用

分子标记具有多态性高、检测手段简单迅速、无基因多效性、能够明确辨别等位基因、实验重复性好等优点。目前最常用的分子标记技术主要有限制性片段长度多态性技术（restriction fragment length polymorphism，简称RFLP）、随机扩增多态性DNA技术（randomom amplified polymorphic DNA，简称RAPD），微卫星DNA技术（inter—Simple Sequence Repeat，简称ISSR）、扩增片段长度多态性技术（Amplified Fragment Length Polymorphism，简称AFLP）等。分子标记技术在茶树研究中得到了广泛的应用，在茶树遗传多样性、种质资源保护、遗传图谱的构建、基因定位与辅助选择育种、指纹图谱应用于作物品种鉴定等研究方面均取得较好的应用效果。     

一种可用于PCR分析的水稻DNA简易提取法

 以水稻黄化苗为材料，用NaOH溶液抽提DNA，对其用于基于PCR技术的DNA标记中的效果进行了分析。结果发现，用0.5 mol/L NaOH对黄化苗进行直接处理，并用等量1 mol/L Tris-HCl进行稀释、中和，离心所得的上清液即可直接用于各种PCR扩增和随后的DNA标记鉴别，包括转基因PCR片段检测、微卫星标记多态性分析(琼脂糖电泳法或毛细管电泳法)，用这种方法提取的DNA可以在短期内保存，在PCR分析中其效果与用常规CTAB法提取的DNA相当。     

茶树DNA分子标记及基因工程研究进展

综述了近年来DNA分子标记在茶树品种（系）鉴定和分类、茶树遗传图谱构建、茶树遗传多样性分析等方面的应用,以及茶树目的基因（片断）的分离克隆、茶树遗传转化等基因工程方面的研究状况,并对茶树DNA分子标记及基因工程研究中存在的问题进行了总结,分析了今后的发展趋势。     

利用聚合酶链式反应技术研究单粒古代稻谷(公元800年)离体DNA片段的扩增

 在东南亚地区已发掘出很多古代稻谷，如果能从这些古稻谷中把DNA提出加以分析，可以得到有关栽培稻的系统分化和地理传播方面的直接信息。古代稻种的基因型相当复杂，必须要能从单粒种子开始分析，方能得到有价值的资料。为此，我们进行了从单粒古稻谷中提取DNA的研究工作。本研究采用通常提取植物组织中DNA的方法，从在日本挖掘出的古代稻谷单粒种子中提取出了50-100 ng左右的DNA片段。以这些DNA作为模扳，用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)技术将DNA加以扩增．由其中几个DNA片段初步合成了相当于水稻光敏色素基因的DNA序列。     

一种叶片直接作用PCR扩增的新方法及其应用

以水稻为模式植物研究了利用碱处理叶片直接用作PCR扩增的模板，并应用于水稻品种种性和纯度鉴定以及分子标记辅助田间育种材料的选择中。该方法具有快速、简便、结果可信度高，重复性好，对待测植株的损伤小等特点，它无需高速冷冻离心机及相应的提取DNA的试剂，故试验成本低，检测所需的时间短。尤其是群体较大时，此种方法更是显得经济有效，利用此种方法在1d内可检测300份样品。     

基于4300 DNA分析系统的茶树SSR发掘方法优化与建立

简单序列重复（Simple sequence repeats, SSR）在茶树遗传与育种研究中具有重要的作用,基于4300 DNA分析系统的SSR发掘具有通量高、准确和灵敏等特点,已被用于许多物种的分子标记研究,但在茶树的相关研究中尚未见报道。本研究应用单因素试验和L₉(3⁴)正交设计试验对影响茶树SSR-PCR的主要参数进行优化,建立了适合于4300 DNA分析系统的茶树SSR-PCR反应体系：1.0 μL DNA（25 ng·μL^-1）,0.2 μL M13F-F、0.2 μL R和0.4 μL IR-M13F,0.8 μL dNTPs（25 mmol·L^-1）,1.0 μL 10×Buffer（含Mg²⁺）,0.1 μL Ex-Taq聚合酶（5 U·μL^-1）,无菌水定容至10 μL。所有引物浓度均为1 μmol·L^-1。同时,本研究还证明,可以以自行配制的6.5%聚丙烯酰胺凝胶溶液（acry:bis=29:1）替代4300 DNA分析系统指定凝胶溶液,检测SSR位点。     

茶树种质资源的遗传变异与DNA分子多态性

本文综述了遗传多样性的概念,研究意义及分子标记在茶树种质资源中的应用,并肯定了DNA分子标记技术在茶树种质资源研究的应用前景。     

茶树挥发物的生态功能与茶树害虫食诱剂研发策略

植物挥发物对调节植物—害虫间关系、害虫种群消长起着重要作用。基于害虫偏好食源挥发物研制的食诱剂（也称“植物源引诱剂”），是一类重要的害虫绿色防控产品。文章总结了虫害诱导茶树挥发物的释放特征、生态功能，分析了茶树害虫食诱剂研发与应用过程中的经验，并对今后茶树害虫食诱剂研究进行了分析和展望，以期促进茶园害虫绿色防控技术的创新发展。     

茶树SRAP反应体系优化及引物筛选

以茶树叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶、模板DNA 5种因素5个水平,对茶树SRAP反应体系进行了研究,建立了茶树SRAP最佳反应体系。结果表明,茶树SRAP最佳反应体系为:Mg+22.0mmol/L、引物各0.5μmol/L、dNTP 0.1mmol/L、TaqDNA聚合酶0.5U/μL、模板DNA 4ng/μL,总体积为10μL。运用该体系,从128个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的56个引物组合。这一体系的建立及引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行茶树分子遗传学研究提供了理论依据。     

利用聚合酶链式反应技术研究单粒古代稻谷(公元800年)离体DNA片段的扩增

在东南亚地区已发掘出很多古代稻谷,如果能从这些古稻谷中把DNA提出加以分析,可以得到有关栽培稻的系统分化和地理传播方面的直接信息。古代稻种的基因型相当复杂,必须要能从单粒种子开始分析,方能得到有价值的资料。为此,我们进行了从单粒古稻谷中提取DNA的研究工作。本研究采用通常提取植物组织中DNA的方法。从在日本挖掘出的古代稻谷单粒种子中提取出了50—100ng左右的DNA片段。以这些DNA作为模板,用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术将DNA加以扩增。由其中几个DNA片段初步合成了相当于水稻光敏色素基因的DNA序列。     

基于已有序列信息快速获得花生目的序列的方法

提出了一套基于已有DNA序列信息快速获得花生目的序列的技术流程。运用花生籽仁未成熟叶片简单预处理PCR技术，根据一个种子中特异表达的基因cDNA序列设计特异性引物，用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增，4个花生基因型中有3个得到预期长度的产物。随后取其中育种品系02-B4籽仁未成熟叶片，简单预处理后采用Pyrobest DNA聚合酶作高保真扩增，得到产物后直接测序。结果表明，该基因片段与已报道的花生PSC33羽扇豆球蛋白cDNA序列表现出高度同源性。本研究为分离其编码区上下游序列奠定了基础。     

AFLP分子标记及其在茶树遗传育种中的应用

AFLP是发展起来的一种新的DNA分子标记技术，该技术原理简单，既具RFLP技术的可靠性，又具有RAPD技术的高效性，可广泛应用于植物遗传标记分析和分离植物基因等研究。本文介绍了AFLP分子标记的基本原理和技术流程。对AFLP分子标记在茶树领域中的应用做了综述并对其应用前景做了展望。     

微卫星DNA分子标记技术及其在茶树研究中的应用

本文阐述了微卫星DNA的结构及其多态性分析原理和微卫星标记DNA技术的实践方法,并简要介绍了近年来微卫星DNA分子标记技术在茶树遗传多样性、亲缘关系、种质鉴定、遗传图谱构建、目的基因的定位等方面的应用.