对三种苹果病原菌具抑制作用的新疆野苹果内生真菌的分离与鉴定

【目的】通过分离鉴定对苹果枝干病害有抑制作用的新疆野苹果枝干内生真菌,为苹果病害生物防治提供新型菌种资源。【方法】采用组织分离法从新疆野苹果枝干中分离内生真菌,平板对峙试验筛选对苹果树3种致病菌均具有显著抑菌作用的菌株,结合形态学、分子生物学分析,确定菌株的分类地位。【结果】共分离获得内生真菌75株,从其中筛选出对苹果树3种病原菌均具较强抑菌作用的菌株5株(E-m6、S-p5、S-m2、S-p6、E-p5)。对葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的最高抑菌率为73.39%,对胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides的最高抑菌率为73.52%,对苹果拟茎点霉Phomopsis mali的最高抑菌率为82.19%。结合形态学和ITS序列和TUB基因序列分析,菌株E-m6和S-p5为黑曲霉Aspergillus niger,S-m2为黄曲霉Aspergillus flavus,S-p6为Rosellinia sp.,E-p5为球毛壳菌Chaetomium globosum。【结论】从新疆野苹果枝条中筛选出具生防潜力的内生真菌菌株5株,为苹果枝干病害的生物防治提供了新的微生物资源,同时也为新疆野苹果内生菌研究奠定了基础。     

柠条根际产铁载体促生菌的分离鉴定及其促生特性

以柠条根际土壤为试材,采用CAS(铬天青S)选择性培养基分离筛选具有产铁载体功能的根际促生菌株,通过16S r DNA序列分析进行菌株鉴定,并测定菌株解磷、固氮、产IAA(吲哚乙酸)和ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)脱氨酶等促生活性,通过盆栽试验分析验证菌株Fe11对柠条幼苗生长的影响。结果表明:共分离出14株产铁载体根际促生菌,其中6株菌具备较强的产铁载体能力。所有菌株的16S r DNA序列同源性与假单胞菌达到99%~100%,假单胞菌属细菌是柠条根际产铁载体的优势菌群。多数菌株兼具2种以上促生活性,菌株Fe9、Fe11和Fe13表现出多种促生潜能。回接试验证实,接种菌株Fe11使柠条幼苗的株高、根长、叶片数、鲜质量和干质量分别增长17.25%、6.68%、17.75%、42.51%和20.67%,表明菌株Fell对柠条的生长具有良好的促进效果。     

黄瓜耐盐根际促生菌的筛选及评价

为获得具有较高耐盐能力的根际促生菌并探究其对黄瓜幼苗耐盐性的影响,对5株菌株的生化特性进行测定,并通过耐盐盆栽试验初步筛选出HG15-7、NSY1、NSY50等3株耐盐促生菌株,进一步通过盆栽试验比较了3株耐盐促生菌株对黄瓜幼苗生长、光合作用及抗氧化代谢的影响。结果表明,耐盐促生菌株均具有较高的ACC脱氨酶活性和IAA合成能力,接种耐盐促生菌株均可不同程度提高盐胁迫下黄瓜幼苗的株高、茎粗、叶片数、叶绿素含量和净光合速率,其中耐盐促生菌株NSY50处理效果最佳,150 mmol·L-1NaCl处理下分别较对照提高49.63%、8.27%、25.00%、17.19%和9.29%,相对电导率及丙二醛含量分别较对照降低21.81%和22.22%,减轻盐胁迫对黄瓜幼苗的氧化伤害,进而增强黄瓜幼苗耐盐性。NSY50具有进一步研究开发利用的潜力。     

辣椒种子中拮抗青枯病菌内生细菌的促生功能分析

以拮抗青枯病菌的辣椒种子内生细菌为对象,研究并了解其促生功能多样性、促生效应等,为辣椒种子内生细菌的开发利用提供理论支撑。测定了6株内生细菌的多样化生物学功能,进行种子催芽和盆栽促生试验。结果表明,产IAA、溶磷、固氮、产嗜铁素是供试菌株中普遍具备的功能,6株内生细菌中有5株具有3种及3种以上的促生功能。所有内生细菌菌悬液均能显著地促进辣椒种子萌发和植株生长,增强种子活力,提高壮苗指数,具有较好的促生效果。辣椒种子内生菌菌株对辣椒具有较好的防病促生效果,具有开发微生物农药和菌肥的巨大潜力。     

贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌的抑制活性及其促生作用

【目的】探究内生菌贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病的防治效果，以及对草莓的促生作用，为该拮抗菌在草莓病害生物防治中的应用奠定基础。【方法】通过平板对峙实验分析菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌落生长以及菌丝形态的影响，并利用离体草莓叶片鉴定菌株P2-1对草莓褐色叶斑病的防治效果。同时，分析菌株P2-1对草莓植株生长的影响。【结果】菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌具有强烈的拮抗活性，抑制率达到66.38%，抑菌带为0.76 cm。菌株P2-1代谢产物具有蛋白酶和纤维素酶活性。菌株P2-1能在草莓叶片定殖，处理10 d后仍可维持在4.07×108CFU左右。菌株P2-1对草莓褐色叶斑病具有良好的防治效果，同时能促进草莓植株生长，使草莓株高、根长、湿质量和干质量分别提高24.83%、40.74%、28.88%和55.69%。【结论】贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病具有较好的防治效果，并具有草莓促生作用，表现出潜在的应用价值。     

梨树腐烂病拮抗真菌JK2的分离和鉴定

【目的】分离鉴定对梨树腐烂病具有拮抗活性的内生真菌,为梨树腐烂病生物防治提供新的资源菌。【方法】利用组织分离法从梨树腐烂病发病枝条中分离内生菌,通过平板对峙实验筛选对梨树腐烂病菌具有拮抗作用的菌株。结合形态学和分子生物学手段,分析和确定拮抗菌株的种属。利用离体梨树枝条鉴定拮抗内生真菌对腐烂病的防治效果。【结果】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株对梨树腐烂病菌具有强烈拮抗活性的菌株JK2,抑制率超过95%。JK2上清液对梨树腐烂病菌同样具有抑制活性。经鉴定,菌株JK2为青霉属产紫青霉。离体梨树枝条鉴定结果显示,JK2对梨树腐烂病具有良好的防治效果。【结论】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株具有拮抗活性的内生真菌JK2,该菌株是一株新的梨树腐烂病生防菌资源,具有潜在的应用价值。     

复合促生菌株筛选及其对油菜、黄瓜幼苗的促生效果

为了筛选获得复合型功能微生物(PGPR)菌株材料,进而从功能微生物的角度理解稻—油轮作制度的优势,以稻—稻、稻—油轮作制度下耕层水稻土壤作为筛选源,采用选择性培养基传统培养法对可培养细菌、固氮菌、解磷菌以及产IAA菌株进行分离和筛选,并利用人工气候箱培育试验验证了对部分筛选获得的复合型促生菌株对油菜、黄瓜幼苗早期生物促生效果。结果表明:稻—稻轮作耕层土壤可分离固氮菌35株、解磷菌3株;稻—油轮作耕层土壤可分离固氮菌38株、解磷菌35株;具有固氮、解磷以及较强生长素分泌能力的复合型促生菌株6株,其普遍对油菜和黄瓜早期幼苗株高生长具有一定的促生效果,可分别提高25.45%～111.96%和4.45%～18.22%;此外,DD-69和DY-111菌株对黄瓜根长、DY-6和DD-79菌株对黄瓜鲜质量具有显著的促生作用。     

五唇兰非致病真菌的特性及对组培苗生长的影响

以从野生五唇兰植株上分离筛选到的非致病真菌为研究对象,根据形态特征进行种类鉴定,用羧甲基纤维素钠培养基和无机磷培养基进行培养,筛选出具有解纤维和解磷能力菌株,再将菌株接种到五唇兰组培苗上。结果表明:在14株五唇兰非致病真菌中,同时具有解纤维和解磷能力的菌株共10个;除R06和R09菌株外,其余菌株对五唇兰组培苗生长均有促进作用,其中RH18、R03和R14菌株处理的五唇兰组培苗鲜重增长率极显著高于未接菌对照,RH19、R02和S02菌株处理的五唇兰组培苗鲜重增长率显著高于未接菌对照,R05和R002菌株处理与未接菌对照无显著差异。     

葡萄霜霉病拮抗细菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

【目的】分离获得对葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)具有明显拮抗效果的菌株,优化其产生抑菌活性物质的发酵条件,为葡萄霜霉病菌的生物防治提供潜在的资源菌。【方法】从染病葡萄植株健康叶片中分离内生菌,采用离体叶片防效试验筛选拮抗菌。根据菌株的形态与生理生化特征、16S r DNA序列分析对其进行鉴定,并采用单因素试验优化培养基组分及发酵条件。【结果】从健康叶片中共分离得到56株内生细菌,其中编号为CS5的菌株对葡萄霜霉病菌的拮抗效果最佳,7 d后对葡萄离体叶片霜霉病防治效果达96.23%,初步鉴定该菌株属于芽孢杆菌属。其最佳发酵碳源为可溶性淀粉,氮源为酵母膏,初始p H值为6.0。【结论】经鉴定,拮抗菌株为Bacillus amyloliquefaciens。在优化的发酵条件下,该菌株对葡萄霜霉病具有更好的拮抗作用。     

基于转录组测序筛选新疆野苹果组培苗应答冻害谷胱甘肽代谢相关的基因

【目的】探索新疆野苹果组培苗谷胱甘肽代谢对冻害胁迫的响应，筛选新疆野苹果谷胱代谢相关应答冻害基因，解析新疆野苹果组培苗抗冻的可能作用方式。【方法】以单株系的新疆野苹果组培苗为研究对象，在-3℃模拟冻害条件下，观察及检测CK、T6h、T12h、T36h、HF24h处理新疆野苹果组培苗的形态、荧光参数F_v/F_m值、相对电导率及丙二醛、过氧化氢、还原性谷胱甘肽含量，并对对照、T6h、T12h 3个处理的幼苗叶片进行转录组测序分析。【结果】使用-3℃模拟冻害对新疆野苹果组培苗进行胁迫，处理12 h时新疆野苹果组培苗叶尖卷缩，处理36 h时整个植株完全萎蔫，在HF24h时萎蔫的植株完全恢复；与对照相比，随着冻害处理时间的延长，相对电导率及丙二醛、过氧化氢、还原性谷胱甘肽含量显著上升，荧光参数F_v/F_m值显著下降。在HF24h，相对电导率、丙二醛、过氧化氢的含量相比T36h呈现下降趋势，荧光参数恢复到与对照相当，还原性谷胱甘肽含量相比T36h没有显著变化。利用KEGG数据库对转录组数据进行分析，筛选到18个谷胱...     

果树真菌病害拮抗细菌的筛选、鉴定及拮抗机制初探

【目的】分离获得对果树真菌病害[苹果轮纹病(Botryospuaeria dothidea)、苹果斑点落叶病(Alternaria alternaria)、葡萄炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)、葡萄白腐病(Coniella diplodiella)和葡萄霜霉病(Plasmopara viticola)]具有明显拮抗作用的菌株,初步研究其作用机制,为果树真菌病害的生物防治提供潜在的材料菌株。【方法】从不同植物上分离内生菌,采用平板对峙法、菌落生长速率法及叶盘法等试验筛选拮抗菌;根据菌株的形态、生理生化特征、16S rDNA序列分析、gyrA基因序列分析等对其进行鉴定;通过测定拮抗菌发酵液对温度、pH值的敏感度分析拮抗物质的稳定性;通过测定拮抗菌发酵液对菌丝的影响,初步分析其拮抗机制。【结果】从不同植物根、茎、叶中共分离得到58株细菌,其中编号为YTB1407的细菌菌株对上述5种植物病原真菌有较好的拮抗作用,经鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,且该菌株发酵液的拮抗活性在温度为20~100℃、pH为2.0~10.0,比较稳定。经该菌株发酵液处理后的病原菌菌丝畸形。【结论】该拮抗菌株为Bacillus amyloliquefaciens;温度和pH值对该菌株拮抗物质活性影响不大;该拮抗菌株可以通过影响病原菌菌丝正常生长发挥其拮抗作用。     

羊耳蒜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性筛选

以兰科野生植物羊耳蒜为试材,采用常规无菌培养技术分离其根部的内生真菌,同时采用平板对峙的方法,研究了所获得的内生真菌菌株对常见植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:从羊耳蒜的根中共分离获得43株内生真菌,经形态学鉴定分属于7个属,其中丝核菌属占优势。筛选得到4株具有较强抑菌活性的菌株,占分离菌株总数的9.3%,抑菌活性集中在油菜菌核病菌。结合分子生物学鉴定发现,这4株菌株分别为腐皮镰孢菌Fusarium solani、柱孢霉属菌株Cylindrocarponsp.、轮枝菌属菌株Lecanicilliumsp.和胶膜菌属菌株Tulasnella sp.。     

西北地区溶磷真菌对‘红地球’葡萄促生效应因子分析

 以盆栽‘红地球’葡萄为试材,对筛选自甘肃莫高、陕西泾阳、陕西杨凌和山西永济等地葡萄园土壤中的3 株菌根真菌和5 株溶磷真菌促生能力进行考察,测定了目标菌株对‘红地球’葡萄株高、干质量、叶绿素含量、植株含磷量和土壤有效磷、蒸腾速率、气孔导度和净光合速率等11 个相关指标,利用SPSS 软件对这些促生效应指标进行相关分析和因子分析,并利用因子得分进行综合评价。提取4 个公因子作为新的综合指标来代替原来的11 个指标,并命名为：生物量因子（F1）、蒸腾作用因子（F2）、土壤有效磷因子（F3）和光合作用因子（F4）。其中生物量因子（F1）对原指标体系的方差贡献率最大,因此,F1 因子所包含的植株株高、植株干质量、含磷量及叶绿素含量是评价真菌促生效应最重要的生物量指标。综合分析结果得出,3 株菌根真菌的促生能力明显高于5 株溶磷真菌。而溶磷真菌中,MG-（1）的促生能力最高,其余真菌虽有一定的促生作用,但促生能力低于平均水平,其能力大小依次为YL-D >JY-B > YL-F > YJ-7。     

‘富士’苹果幼树叶片内源激素与矿质营养年动态变化分析

【目的】探究无土栽培条件下不同砧木类型‘富士’苹果幼树叶片植物激素和矿质元素含量的年动态变化,明确不同砧木类型‘富士’苹果幼树叶片内源激素和养分周年变化特性,为‘富士’苹果砧木矮化性预测和叶片营养诊断提供参考。【方法】以3 a生T337自根砧、T337中间砧和乔砧‘富士’苹果幼树为试材,每小区分别选取长势一致的6株幼树作为1次重复,共3次重复。【结果】3种砧木类型‘富士’苹果幼树生长势强弱为乔砧T337中间砧T337自根砧。‘富士’苹果幼树定植后60~90 d,叶片IAA/ABA和(IAA+GA+ZR)/ABA比值均为乔砧T337中间砧T337自根砧,叶片ABA含量为T337自根砧T337中间砧乔砧,幼树生长势越强,叶片IAA/ABA和(IAA+GA+ZR)/ABA比值越大,叶片ABA含量越少。3种砧木类型‘富士’苹果幼树叶片N和P含量定植后90~150 d变化平稳,K、Ca和Mg含量定植后60~120 d变化较小,表明‘富士’苹果幼树定植后90~120 d叶片矿质元素含量变化较平稳。‘富士’苹果幼树叶片ABA与Ca含量存在极显著正相关关系,(IAA+GA+ZR)/ABA比值和IAA/ABA比值与Ca含量呈极显著负相关关系,相关系数均大于0.8。【结论】年周期内‘富士’苹果叶片内源激素和矿质营养含量呈波动变化趋势,且不同砧木类型间存在一定的差异,取样时间不同,分析结果存在差异。通过激素含量预测‘富士’苹果砧木矮化性的适宜采集叶样时期为定植后60~90 d,而‘富士’苹果叶片营养诊断较合理的采样时期为定植后90~120 d。     

萝芙木内生真菌的分离及发酵产物抑菌活性的研究

从萝芙木的果实中分离得到5株内生真菌:LG-A、LG-B、LG-C、LG-D与LG-E,以5株内生真菌为试验材料,采用微量滤纸片法,研究了5株内生真菌发酵乙醇粗提物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌与苹果果实链格孢菌的抑菌活性,以期筛选出具有农用抗植物病原真菌的活性菌株。并采用菌丝生长速率法,进一步测定了菌株LG-B与LG-D乙醇粗提物的不同溶剂萃取物的抑菌活性。结果表明:菌株LG-B与LG-D对3种苹果病原真菌均有明显的抑制作用。LG-B与LG-D发酵产物的乙酸乙酯萃取物抑菌活性较好,菌株LG-B对苹果腐烂病菌的EC50仅为16.2mg·L~(-1),LG-D对苹果腐烂病菌与苹果轮纹病菌的EC50分别为21.0mg·L~(-1)和52.8mg·L~(-1)。     

接种内生真菌对蓝莓幼苗生长生理效应的影响

为研究接种不同内生真菌对蓝莓幼苗生长生理效应的影响,初步筛选出对蓝莓幼苗促生较好的菌株。从毕节赫章和花溪高坡2个蓝莓栽培地采集不同品种根系进行分离纯化鉴定,并回接到1年生蓝莓盆栽苗上,测定接种后蓝莓幼苗侵染率、生长及生理效应指标。结果表明：与CK相比,接种不同菌株的蓝莓幼苗侵染率、苗高、地径、总生物量差异显著,其中1号和2号菌株的促生效果最好;接种不同菌株的蓝莓叶片吸收光谱、反射光谱和透射光谱均在470、550、670、780、880 nm处出现峰值,其中叶片吸收率的峰值均大于CK,叶片反射率的峰值均小于CK,而叶片透射率与CK相比无明显的变化规律;接种不同菌株对蓝莓苗快速光响应主要参数的影响差异显著,以接种4号菌株对蓝莓苗叶片电子传递速率快,对强光的耐受能力强于其他菌株处理。此外,接种不同菌株对蓝莓幼苗叶绿素总含量与CK相比差异不明显,增幅为1.08%～51.35%,而蓝莓根系活力指标与CK相比差异显著,其增幅为32.46%～129.07%。隶属函数综合评价结果表明,对蓝莓幼苗生长生理效应有显著促进作用的菌株有1号、2号、4号和6号,可初步筛选为蓝莓幼苗生长较好的促生菌株。     

施用不同根际促生菌对辣椒生长和土壤微生物群落的影响

以辣妹子和新羊角为试材,采用盆栽试验方法和高通量测序技术,研究了施用根际促生菌对辣椒生长和根际微生物群落的影响.结果表明,P1贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株对2个品种辣椒植株株高、干质量、叶片叶绿素含量、植株全氮和全磷含量的促进作用均显著高于其它4个菌株处理,并改变了根际土壤细菌和真菌群落...     

不同苹果砧木组培苗抗旱性的比较研究

【目的】为了提供苹果耐旱育种及栽培材料,【方法】以5种苹果砧木组培苗为试材,PEG-6000作为胁迫剂,模拟室外干旱进行处理,运用模糊隶属函数抗旱性综合分析,比较了5个苹果砧木组培苗的耐旱性。【结果】结果表明,在PEG-6000胁迫条件下,不同苹果砧木的叶绿素含量总体均呈下降趋势,叶片的相对电导率和MDA含量随PEG-6000胁迫质量分数的升高逐渐升高。在整个胁迫过程中,各苹果砧木组培苗叶片内蛋白质含量随胁迫质量分数的升高而增大。SOD活性随PEG-6000胁迫质量分数的升高呈先升高后下降趋势,且在20%PEG-6000胁迫条件下SOD活性达到了最大。POD活性随胁迫质量分数的升高呈现出逐渐升高的趋势。【结论】5种苹果砧木的抗旱性顺序依次为:新疆野苹果>平邑甜茶>八棱海棠>‘M26’>‘M9’。     

甜樱桃根际IAA产生菌的筛选、鉴定及最佳产素条件优化

为了给甜樱桃微生物肥料的研制和生产提供优良菌株资源,本文从马哈利樱桃根际土壤中分离获得52株细菌,通过保绿法和萝卜子叶增重法进行初筛,筛选具有促生作用的菌株,进一步进行IAA产生菌的筛选,并经形态观察、生理生化特征及16SrDNA序列分析明确分类地位,利用分光光度法测定产IAA的能力,并对最佳碳氮源、产素条件进行了筛选。结果表明,52株菌中B20产IAA能力最强,经鉴定为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai),其最佳产素的培养条件为:采用30%的装液量在温度为30℃、转速为150r·min-1的条件下培养44h,最佳碳、氮源分别为果糖和酵母粉。研究发现菌株B20具有IAA产生能力,具有作为功能微生物肥料研发的潜力,可进一步对其进行开发研究。     

香樟根际促生菌的筛选与促生特性研究

以香樟根际土壤为试材,采用PVK平板检测法、亚历山大平板检测法、CAS平板检测法、JNFb培养基检测法、Salkowski比色法,分别研究了从香樟根际土中随机挑取的22株细菌的解磷、解钾、产铁载体、固氮、产吲哚-3-乙酸(IAA)能力,采用16S rDNA对产铁载体和产IAA能力较强的菌株进行了分子鉴定,以期为探讨香樟速生、耐贫瘠等机制,同时也为香樟及其它植物研制微生物菌肥提供一定的参考依据。结果表明:挑取的22株细菌中,有7株具有解磷能力,8株具有固氮能力,11株能产铁载体,16株能产IAA。对初步分离的具有产铁载体和产IAA的菌株进行进一步的定量测定发现,菌株XZ3和XZ22产生的铁载体活性单位明显高于其它菌株,分别为78.4%和74.6%。XZ11和XZ13产IAA的能力最强分别为46.82、46.19μg·mL~(-1)。经16S rDNA分子鉴定,XZ3和XZ22分别隶属短小芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)和芽孢杆菌(Bacillus sp.),XZ11和XZ13分别隶属假单胞菌(Pseudomonas sp.)和短小芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)。