辣椒种子拮抗青枯病菌内生细菌的分离、鉴定

为了探究抗青枯病辣椒品种种子中拮抗青枯病菌内生细菌的种群组成及其在青枯病防治中可能发挥的生态学功能,从抗青枯病辣椒品种种子中分离、筛选出拮抗青枯病菌的内生细菌,对其进行抑菌广谱性分析,测定其对青枯病的生防效果。结果表明,从抗青枯病辣椒品种种子中分离出14株内生细菌,通过平板对峙,筛选出6株拮抗青枯病菌的内生细菌,初步鉴定它们分别为假单胞菌(Pseudomonas)、苍白杆菌(Ochrobactrum)和微杆菌(Microbacterium)。对6株内生细菌进行抑菌广谱性研究,所有内生细菌均至少对1种病原真菌有拮抗作用;将6株内生细菌的菌悬液分别对辣椒种子进行浸种处理后育苗,辣椒苗抗青枯病能力显著提升。辣椒种子中拮抗青枯病菌的内生细菌具有多样性,用其菌悬液处理辣椒种子后,植株对青枯病具有较好的抗病能力,为开展辣椒青枯病微生物防治提供了理论依据及菌种资源。     

复合促生菌株筛选及其对油菜、黄瓜幼苗的促生效果

为了筛选获得复合型功能微生物(PGPR)菌株材料,进而从功能微生物的角度理解稻—油轮作制度的优势,以稻—稻、稻—油轮作制度下耕层水稻土壤作为筛选源,采用选择性培养基传统培养法对可培养细菌、固氮菌、解磷菌以及产IAA菌株进行分离和筛选,并利用人工气候箱培育试验验证了对部分筛选获得的复合型促生菌株对油菜、黄瓜幼苗早期生物促生效果。结果表明:稻—稻轮作耕层土壤可分离固氮菌35株、解磷菌3株;稻—油轮作耕层土壤可分离固氮菌38株、解磷菌35株;具有固氮、解磷以及较强生长素分泌能力的复合型促生菌株6株,其普遍对油菜和黄瓜早期幼苗株高生长具有一定的促生效果,可分别提高25.45%～111.96%和4.45%～18.22%;此外,DD-69和DY-111菌株对黄瓜根长、DY-6和DD-79菌株对黄瓜鲜质量具有显著的促生作用。     

柠条根际产铁载体促生菌的分离鉴定及其促生特性

以柠条根际土壤为试材,采用CAS(铬天青S)选择性培养基分离筛选具有产铁载体功能的根际促生菌株,通过16S r DNA序列分析进行菌株鉴定,并测定菌株解磷、固氮、产IAA(吲哚乙酸)和ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)脱氨酶等促生活性,通过盆栽试验分析验证菌株Fe11对柠条幼苗生长的影响。结果表明:共分离出14株产铁载体根际促生菌,其中6株菌具备较强的产铁载体能力。所有菌株的16S r DNA序列同源性与假单胞菌达到99%~100%,假单胞菌属细菌是柠条根际产铁载体的优势菌群。多数菌株兼具2种以上促生活性,菌株Fe9、Fe11和Fe13表现出多种促生潜能。回接试验证实,接种菌株Fe11使柠条幼苗的株高、根长、叶片数、鲜质量和干质量分别增长17.25%、6.68%、17.75%、42.51%和20.67%,表明菌株Fell对柠条的生长具有良好的促进效果。     

苹果内生促生真菌筛选及其促生特性

【目的】从苹果不同部位内生真菌中筛选具有促生潜力的菌株，为开发苹果益生真菌储备菌种资源，为探究苹果内生真菌与宿主互利共生关系提供试验基础。【方法】采用组织分离法获得内生真菌，基于ITS序列鉴定到属种；筛选、比较菌株产IAA、铁载体等促生能力；回接潜力菌株于苹果组培苗，50 d后观察组培苗生长情况。【结果】共分离获得内生真菌51株鉴定为29种。促生潜力筛选后，选取IAA含量高、兼具促生功能多的5株菌（LG06、PG06、LG12、LY09、PJ09）回接苹果组培苗。结果表明其中4株内生真菌对苹果组培苗的促生效果明显，与对照相比，菌株PG06的叶片数量、叶绿素含量、叶片总氮含量增高最多（p<0.05），依次增加了61.17%、44.08%、42.56%。【结论】苹果内生真菌PG06、LG12、LG06、LY09对苹果组培苗均具有显著促生作用，可进一步探索田间试验。研究为苹果生物肥料的研发提供了实验依据。     

甜瓜枯萎病拮抗内生细菌筛选研究

从长势健壮的黄瓜、南瓜和甜瓜苗的根部及茎部分离获得294株内生细菌,与枯萎尖孢镰孢菌进行对峙培养,获得具有抑茵活性细菌18株,占总茵株数的6.1%.再利用生长速率法、孢子萌发法对其进行体外生物活性检测,结果表明,H-2、H-4、H-6、N-7、T-16、T-18 等 6 个菌株的发酵滤液对枯萎镰孢菌的桔抗作用较强,但H-1与H-4对种子萌芽有强烈的抑制作用.H-5、H-6 和 N8 等菌株对甜瓜幼苗具有促生作用,对甜瓜枯萎病的防效分别为75.6%、60.1%和66.7%.H-5 菌株对甜瓜枯萎病可能具有潜在的生防功能.     

羽毛针禾内生细菌分离鉴定及系统发育树分析

以羽毛针禾根和种子组织为试材,采用传统培养方法和免培养方法研究了组织中分离纯化出的内生细菌,对分离得到的纯菌株进行形态学观察、生理生化鉴定,并结合菌株的16S rRNA基因序列在RDP在线数据库中鉴定其属水平。将测序结果与GenBank中已知序列进行BLAST比对,查找相似性最高的菌种序列进行同源性分析,再通过软件MEGA 7.0构建系统发育树确定菌株的系统分类学地位。结果表明:从羽毛针禾种子和根中分别分离鉴定出4株和7株内生细菌,初步将这些细菌归为2门2纲2目2科2属,种子和根中的优势属分别为泛生菌属和假单胞菌属。在羽毛针禾根和种子中的内生细菌群落结构具有较为丰富的种群多样性,且菌群优势度存在差异。该研究成果为羽毛针禾内生菌资源库信息的积累和羽毛针禾内生微生物的后续开发提供了有利指导和参考依据。     

果树内生拮抗细菌的筛选鉴定及其生防作用研究

通过组织分离法,在不同健康果树的木质部中分离到235株内生细菌。通过平板对峙法对所得菌株进行了初筛和复筛,得到6株拮抗作用较强的菌株。用过滤和高温灭菌得到的菌株发酵液进行抑菌谱试验,最终获得拮抗作用较强的内生细菌X8。对X8菌株在植物体内定殖、分类鉴定和防治作用的深入研究。结果表明：X8菌株可以在杏、辣椒等植物中定殖。X8菌株发酵液对辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）抑制作用最强,达80.3%,对3种链格孢菌（Alternaria）病原菌的抑制作用达到75%以上,对番茄灰霉病和辣椒疫病的防效达到75.4%和79.3%,显著高于50%腐霉利和25%甲霜灵的防效。经16S rDNA序列分析,X8菌株与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的16S rDNA序列的同源性达99%。综合形态特征、生理生化特性,最终将X8鉴定为B. subtilis,在GenBank中序列登录号为HQ647257。     

甘蓝霜霉病内生拮抗细菌的筛选鉴定及防效研究

以感染霜霉病和健康的甘蓝叶片为试材,研究筛选了对甘蓝霜霉病菌有拮抗作用的内生细菌。结果表明:从健康的甘蓝幼苗中分离到18株内生细菌;用离体叶法进行测定,发现其中2株内生细菌对甘蓝霜霉病菌有拮抗作用,对其中一拮抗效果较好的菌株AC8进行田间防治试验,其防效达61.4%;通过形态观察、培养特征和生理生化特性鉴定,菌株AC8属于蜡状芽孢杆菌。     

无土栽培辣椒促生菌的筛选及苗期促生效果

采用种子和苗期筛选方法,从40种待选菌种中筛选出4种对辣椒生长有明显促进作用的促生菌G15-7、A21-4、R2-1、L24-1,并验证了这4种促生菌的促生效果。结果表明:这4种菌对辣椒苗期的形态指标和生理指标有显著促进作用,其中R2-1的影响效果最显著;L24-1和A21-4分别对辣椒苗期的形态指标和生理指标影响显著;G15-7对辣椒苗期生长也有明显促进作用,但显著性不及其它3种菌。     

草莓病害拮抗细菌的筛选及其对草莓褐色叶斑病的防效

通过组织分离法和稀释分离法从草莓根、茎、叶和根际土壤中分离内生细菌183株及根际细菌55株，其中9株拮抗菌对草莓褐色叶斑病病原菌（Pilidium concavum）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、链格孢菌（Alternaria alternate）4种草莓病原菌具有广谱拮抗效果。结合病原菌形态学特征、生理生化特性和分子生物学鉴定结果，将拮抗菌株G3-23、J3-20、G3-29鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,J6-1、J1-4、G2-12、G3-k2和J1-11鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,G3-20鉴定为耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans）,G3-17鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。菌株G3-23能够分泌蛋白酶和纤维素酶，对由P. concavum引起的草莓褐色叶斑病具有良好的防治效果，并且该菌株能在离体草莓叶片上成功定殖，表现出较好的生防潜力。     

苦豆子内生放线菌的分离鉴定及其拮抗菌筛选

采用3种消毒时间对健康苦豆子植株体内的内生放线菌进行分离。结果表明：消毒3 min消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离内生放线菌的数量,根部比茎、叶部多。经初步鉴定,苦豆子内生放线菌以链霉菌属和诺卡氏菌属为最多,分别占分离总数的35%和27%;其次为小多孢菌属,占12%;而类诺卡氏菌属、小单孢菌属、孢囊放线菌属和分枝杆菌属分离较少。26株纯化菌株对茄子枯萎病菌进行平板对峙培养,筛选出3株抑菌带宽度达到10 mm以上的菌株,其中菌株KDS22发酵液抑菌效果最好。     

六株扁枝衣内生真菌的抗病原真菌活性

以采自大兴安岭的3份扁枝衣(Evernia mesomorpha)为试材,采用刮皮层法,分离获得6株内生真菌,通过菌落形态观察和ITS序列分析,并以5种病原真菌为拮抗指示菌,采用平板对峙培养法,研究了6株内生真菌的抗病原菌活性。结果表明:6株内生真菌全部属于子囊菌门(Ascomycota)粪壳菌纲(Sordariomycetes),其中菌株FF-3、FF-4为紫棕炭团菌(Hypoxylon fuscum),菌株FF-7为白色侧齿霉菌(Engyodontium album),菌株FF-2为炭团菌属(Hypoxylon sp.),菌株FF-6为炭角菌属(Xylariasp.),菌株FF-9为毛壳菌属(Chaetomiumsp.);菌株FF-2(Hypoxylon fuscum)和FF-6(Xylariasp.)均对多枝横梗霉(Lichtheimia ramosa)有抑制作用;菌株FF-6对黄瓜萎蔫病菌(Plectosphaerella cucumerina)有抑制作用。其中,FF-6抑制病原真菌的活性较好,形成明显的拮抗条带,最大宽度为7.00mm。菌株FF-2、FF-6有望成为植物病原真菌的候选生物防治菌。     

拮抗炭疽病的柑橘内生细菌的分离与筛选

从不同品种柑橘果实中分离出16株内生细菌。对内生细菌的潜在致病性、抗真菌病原作用和促生作用进行的研究,结果表明,有2株可产生烟草过敏性坏死反应,15株能对1种或多种植物病原真菌产生不同程度拮抗作用,14株可降低柑橘果实的柑橘炭疽病发病率。研究筛选出4株对柑橘炭疽病有较好防治作用的具有应用前景的拮抗内生细菌,其中1株具有显著促进柚苗生长作用。     

苦豆子内生拮抗放线菌的筛选及活性菌株鉴定

以6种植物病原真菌为靶标菌,采用皿内对峙培养法,对126株苦豆子内生放线菌进行了抗菌活性筛选。结果表明:15株菌具有较高的抑菌活性,占总菌株数11.9%,其中菌株YWZKDS4和NDZKDS65对稻瘟病病菌和黄瓜枯萎病菌的抑菌带宽度最大,分别为15.12mm和18.54mm;菌株NDZKDS22具有广谱抗菌活性,它们的抑菌带宽度均大于10mm以上;根据形态特征和16SrRNA基因序列同源性分析,3株活性菌株YWZKDS4、NDZKDS22、NDZKDS65分别与Streptomyces scabiei、Streptomyces albospinus和Streptomyces capillispiralis亲缘关系最近,序列相似性分别为99.1%、96.4%、98.8%。试验结果表明,苦豆子内生放线菌对6种植物病原真菌具有较好的抑菌活性。     

施用不同根际促生菌对辣椒生长和土壤微生物群落的影响

以辣妹子和新羊角为试材,采用盆栽试验方法和高通量测序技术,研究了施用根际促生菌对辣椒生长和根际微生物群落的影响.结果表明,P1贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株对2个品种辣椒植株株高、干质量、叶片叶绿素含量、植株全氮和全磷含量的促进作用均显著高于其它4个菌株处理,并改变了根际土壤细菌和真菌群落...     

芍药灰霉病拮抗细菌的筛选及生防机制研究

以芍药灰霉病发病典型叶片为试材,采用组织分离法进行病原菌的分离,平板对峙法筛选拮抗芍药灰霉病原菌的内生细菌,结合形态学特征和分子生物学手段进行病原真菌和拮抗细菌菌株的鉴定;采用离体叶片法测定拮抗细菌菌株对芍药灰霉病的防治效果,明确引起洛阳地区芍药灰霉病的病原菌种类,并获得防治芍药灰霉病的内生细菌菌株,以期为芍药灰霉病的防治提供参考依据。结果表明：引起洛阳地区芍药灰霉病的病原菌种类为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea),筛选获得3株对灰葡萄孢菌具有显著拮抗作用的内生细菌菌株SY5、SY15和SY30,其中菌株SY5抑菌效果明显,抑菌率为84.44%。芍药离体叶片防治结果发现,3个菌株均对芍药灰霉病具有良好的防治效果,菌株SY5的防治效果可达67.66%。菌株SY5、SY15和SY30均被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。初步探讨3个菌株的生防机制,结果表明3个菌株均可合成脂肽类物质,且对灰霉病菌菌丝有较强的致畸作用,其中菌株SY5脂肽类物质对灰葡萄孢菌的抑制率最高,为88.89%。     

甜樱桃根际IAA产生菌的筛选、鉴定及最佳产素条件优化

为了给甜樱桃微生物肥料的研制和生产提供优良菌株资源,本文从马哈利樱桃根际土壤中分离获得52株细菌,通过保绿法和萝卜子叶增重法进行初筛,筛选具有促生作用的菌株,进一步进行IAA产生菌的筛选,并经形态观察、生理生化特征及16SrDNA序列分析明确分类地位,利用分光光度法测定产IAA的能力,并对最佳碳氮源、产素条件进行了筛选。结果表明,52株菌中B20产IAA能力最强,经鉴定为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai),其最佳产素的培养条件为:采用30%的装液量在温度为30℃、转速为150r·min-1的条件下培养44h,最佳碳、氮源分别为果糖和酵母粉。研究发现菌株B20具有IAA产生能力,具有作为功能微生物肥料研发的潜力,可进一步对其进行开发研究。     

不同产地沙棘种子内生菌群落组成与多样性分析

以新疆、内蒙古、山西、陕西、甘肃6个产地的沙棘种子为试材,采用高通量测序及生物信息学分析方法,基于16S rRNA和ITS2序列,研究了沙棘种子内生细菌和真菌的菌群结构与多样性,以期为后续研究沙棘种子内生菌的生物活性,探寻沙棘内生功能菌群提供参考依据。结果表明：沙棘种子内生菌组成较为单一,内生细菌主要为变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)等,内生真菌为子囊菌门(Ascomycota)、被孢霉门(Mortierellomycota)和担子菌门(Basidiomycota);Alpha物种多样性分析结果表明,陕西志丹与新疆阿勒泰样品内生细菌的Shannon指数与Simpson指数存在显著差异;山西吕梁与陕西志丹样品内生真菌的Shannon指数和Chao1指数达到显著差异;NMDS分析显示不同样品的内生菌组成存在一定相似性;KEGG分析内生细菌共获得6个一级代谢系统和26个二级代谢通路。综上,不同产地沙棘种子内生菌多样性与群落组成存在差异性,这可能与其栖息地的环境因子密切相关。     

芝麻立枯病拮抗菌的筛选方案优化

通过对峙培养法,利用PDA、KBM和MYG等3种培养基分别测定399株内生细菌对立枯丝核菌的拮抗作用.结果表明:在3种培养基上均表现出一定拮抗作用的菌株95株,拮抗率为23％.温室条件下测定399株内生细菌对芝麻立枯病的生防效果,共筛选到25株茵可有效降低芝麻立枯病发病率和严重度.优化后的筛选方案为:首先利用3种培养基对内生细菌的拮抗性进行体外初筛,选择3种培养基上均有拮抗性的菌株为目标菌株(95株),再将初筛的拮抗性菌株进行体内复筛,选择可有效降低芝麻立枯病发病率和严重度的生防菌株(22株).     

辣椒疫霉病生防细菌的筛选鉴定及其防效

以筛选、获取优良辣椒疫霉病害生防菌株材料为目标，通过平板稀释法与对峙法对水稻土壤耕层可培养细菌进行 分离和筛选，成功从167 株可培养细菌中分离、筛选获得1 株拮抗菌LRS-1，并被鉴定为多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）。该拮抗菌对辣椒疫霉菌具有68% 左右的室内持久抑菌率以及63.4% 的温室病害防效；Realtime-PCR 检测结果表 明该拮抗菌对根围疫霉菌侵染数量具有显著的抑制效果。