转化CaMV基因芸薹属蔬菜植株抗病性鉴定及其遗传分析

 以转化CaMV 弱株系Bari1 基因􀀂 的大白菜、菜薹、紫菜薹和花椰菜植株为试材, 研究了CaMV 弱株系Bari􀀁1 基因􀀂 所提供的遗传工程交叉保护及其遗传规律。结果表明,在转化CaMV 弱株系Bari􀀁1 基因􀀂 的大白菜、菜薹、紫菜薹和花椰菜植株中, 48. 08%对CaMV强株系CABB􀀁BJI 具有较强的抗性, 51. 92%表现为敏感。抗性基因( CaMV Bari􀀁1 基因) 在自交代( S1) 中大多数( 76%) 表现为典型的孟德尔单基因显性遗传, 部分株系的抗性出现了15 1, 1 1, 1 3 和1 95 的非孟德尔遗传现象。     

RNAi沉默BcMF3基因对菜薹花粉发育的影响

根据从白菜(Brassica campestris ssp. chinensis var. communis) 核雄性不育两用系中分离到编码果胶甲酯酶( PME) 的雄性不育相关基因BcMF3 cDNA序列设计引物, 从白菜花蕾cDNA中扩增出一短一长两个片段, 分别反向和正向连接至双元载体pB I12 l中, 得到了RNAi (RNA interference) 植物表达载体pB I2B3R, 并导入农杆菌LBA4404菌株中; 通过组织培养途径转化菜薹(B. campestris ssp. chinensis var.parachinensis) , 分子检测证明B cM F3片段单拷贝整合到转基因菜薹的基因组中; 50%转基因菜薹植株的花粉畸形, 花粉离体萌发率为32。3% , 出现畸形花粉植株的花药PME活性降低了13。5%。这一结果从转基因植株后代的表型和酶活性上证明, 采用RNAi技术沉默BcMF3基因, 可能通过影响PME活性而引起转基因菜薹植株部分花粉的败育, 从而证明BcMF3基因在普通白菜和菜薹等植物的花粉发育中起着重要作用。     

利用DAD1反义片段转化创建菜薹可调控雄性不育材料

 菜薹因为没有好的雄性不育材料或自交不亲和系，至今尚无一代杂种用于生产，根据拟南芥及白菜型油菜的花药不开裂基因DAD1的保守序列设计引物，扩增菜薹的DAD1基因片段（DAD1F），构建反义DAD1F植物表达载体，用农杆菌介导法转化菜薹，对转基因植株进行分子检测，鉴定其雄性不育性并进行育性恢复试验.克隆得到的菜薹的DAD1基因片段大小为678 bp，命名为BrcpDAD1F，其序列与拟南芥和白菜型油菜的DAD1高度同源，同源率分别为88％和99％；共得到了12株转基因植株，有6株在转录水平上得到表达，表现为雄性不育，花器官畸形，花粉活力低，萌发率不到10％，且开花后不能结角果或结空角果，或者得到极少种子但种子不萌发；用对照的花粉给转基因植株授粉可使其正常结实.以500 μmol·L^-1茉莉酸甲酯处理可使其雄性不育得到恢复，花粉可以在柱头和培养基上萌发，具有受精能力。T₁代可育株与不育株的比例都呈1:3分离, T₂代不同株系的育性分离比例不同，有些株系继续呈1:3的分离，有些株系全是可育株或全是不育株，说明反义抑制呈单基因稳定遗传。     

芥蓝菜薹发育与品种,花芽分化和生长的关系

本文以芥蓝4个品种的分期播种试验探讨了不同品种、花芽分化期和植株生长与菜薹发育的关系。结果表明,早、中、晚三个品种在广州地区7-12月播种都能形成菜薹,以10月以前播种的植株生长良好,菜薹产量较高。7-8月播种,植株和菜薹都较发达,菜薹质量不是越早播越好。11月以后播种,生长和菜薹发育都不很理想。 4个品种分期播种的花芽分化和菜薹发育的变化表明,适时的花芽分化,才能使菜薹发育良好,否则对菜薹的发育不利。 植株重量,叶面积大小与菜薹重量的相关系数分别为0.8767和0.3598呈显著的正相关,因此,花芽分化后,特别是过早或过迟花芽分化后,菜薹的发育因菜薹形成过程的生长程度而不同。     

菜心生长发育及产品器官形成的研究——菜薹形成与生长发育

菜心的菜薹有薹茎和薹叶两方面生长,前期以薹叶生长为主,以后则薹茎生长占优势。菜薹的横径和高度同时增长,以高度增长为主。菜薹重量随着菜薹发育不断增加,以采收前增长最快。菜薹的内部结构主要由表皮、具有特别发达的薄壁组织的皮层和维管柱组成。适期采收的菜薹,在发达的维管束内外厚壁组织尚不显著,因而成为肉质柔嫩的食用器官。花芽分化期主要影响菜薹发育的迟早,菜薹发育程度决定于花芽分化后植株的生长程度。植株重量与菜薹重量、叶面积与菜薹重量的相关系数均达到显著程度。菜薹形成受品种的生长发育特性所制约。     

真空渗入法转pinⅡ基因菜薹外源基因的遗传与表达

 本研究对利用真空渗入法获得的转bar基因及pinⅡ基因菜薹，进行了外源基因的遗传及表达情况分析。结果表明通过该方法获得的转基因植株，外源基因能够稳定遗传。bar基因在 代的分离大部分符合孟德尔遗传规律，但也有不符合的群体；pin II基因在 代中稳定表达，但各个株系之间的表达水平差异较大，因而各个株系的抗虫效果也具有显著差异，即使具有相同外源基因拷贝数的各个株系，其PIN I／蛋白表达量和抗虫效果也具有显著差异。     

菜心的栽培技术

菜心的栽培技术菜心，又名菜薹、广东菜薹、广东菜等，是小白菜的一个变种，为十字花科芸苔属白菜亚种一二年生草本植物。原产我国。菜心品质柔嫩，别有风味，可供炒食、做汤等。一、特征特性菜心植株直立，茎短缩，绿色。叶宽卵圆形或椭圆形，叶柄狭长。花茎圆，绿色，总...     

过量磷对菜心植株生长和产量及品质的影响

采用营养液水培法,研究过量磷对菜心(Brassica parachinensis)植株生长、产量和品质的影响.结果表明:与正常磷浓度处理(1 mmol/L H2PO4-)比较,3～7mmol/L H2P04-处理植株生物量和产量均显著降低,5和7 mmol/L H2PO4-处理植株根冠比显著增加;随着磷浓度的增加,菜薹表皮花色苷含量和菜薹可溶性糖含量逐渐增加,菜薹硝酸盐含量逐渐降低,三者与营养液磷浓度均呈显著线性关系.     

橘红色花菜薹突变体的发现和研究

以橘红色花菜薹突变体11A-47 与黄色花菜薹联记特选34 号甜菜心杂交获得的F₁,F₂ 及
BC₁、BC₁′ 群体为试材。将6 个世代的种子经4 ℃低温春化处理15 d 后调查子叶颜色,研究菜薹橘红色花
的遗传规律;同时,采用与大白菜橘红心球色基因紧密连锁的分子标记对控制菜薹橘红色花的基因进行分
析,鉴定菜薹橘红色花与大白菜橘红心球色基因or 之间的关系。结果 表明,橘红色花菜薹11A-47 与黄色
花菜薹杂交F₂ 群体中,橘红色子叶与绿色子叶的分离比例符合1∶3,χ²=1.938 9 ＜ χ²
0.05=3.841;BC₁′ 群体
中,橘红色子叶与绿色子叶的分离比例符合1∶1,χ²=1.369 7 ＜ χ²0.05=3.841。说明菜薹的橘红色花为质量
性状,由1 对隐性等位基因控制。分子标记结果表明,控制菜薹橘红色花的基因与控制大白菜橘红心球色
的基因可能不同。     

菜薹BcAMT1;4启动子的克隆及活性分析

以菜薹（Brassica campestris L. ssp. chinensis var. utilis Tsen et Lee）为材料，利用染色体步移法获得了铵转运蛋白基因BcAMT1;4的ATG上游长度为2 086 bp的启动子序列。生物信息分析表明，该启动子中包含多个光信号、激素信号、逆境应答、组织特异表达等顺式作用元件。构建该启动子与GUS基因的融合表达载体，并用农杆菌介导法转化拟南芥。通过对T3代转基因拟南芥植株GUS活性分析发现，GUS染色主要集中于叶片，而在根、茎、花中染色较浅。此外，不同氮源也影响BcAMT1;4启动子的活性，缺氮处理提高了转基因拟南芥GUS表达活性，而分别供0.25 mmol ? L-1 NO3-、NH4+和NH4NO3的处理在一定程度上抑制其表达活性。研究结果表明，BcAMT1;4可能对菜薹叶片铵态氮营养具有重要调控作用。     

异戊烯基转移酶基因导入番茄及转基因植株再生

通过根癌农杆菌（Ａgrobacteriens）介导,利用特异启动子Ｐsag12与异戊烯基转移酶（Ｉsopenyl transferase,ipt）基因构建的嵌合基因Ｐsag12－ipt对５个番茄品种进行遗传转化,结果共获得来自３１个不同外植体的４４株转化再生植株。感染子叶的分化再生及转化植株田间生长正常。对其中部分转化再生植株进行ＰＣＲ检测证明为转基因植株,并且在田间表现出生长旺盛及抗叶片衰老的特性。     

PEG介导枸杞内生真菌NQ8GⅡ4遗传转化及转化子评价

通过聚乙二醇（PEG）介导原生质体转化法将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）表达载体转入枸杞内生轮状镰刀菌（Fusarium nematophilum）NQ8GⅡ4菌株中，通过生物学测定和PCR检测，获得与野生型NQ8GⅡ4菌株无明显差异的转化子57株，转化效率（单位质量的DNA转化子数）为2 850 株 • mg-1。通过遗传稳定性、表型、荧光性、拮抗性和致病性对比，获得1株与野生型NQ8GⅡ4菌株无差异的转化子。该转化体系的建立为枸杞内生真菌在宿主植物中的侵染定殖规律和生防作用研究奠定基础。     

芜菁花叶病毒CP基因反向重复植物表达载体的构建及遗传转化

 针对芜菁花叶病毒外壳蛋白基因构建反向重复表达载体,利用农杆菌介导法将其导入四九菜心,PCR检测共获得13个阳性转化株,遗传转化效率为2%。     

硼钼镁对菜心产量及养分吸收的影响

以菜心为试材,研究了硼钼镁不同施肥水平对菜心产量和养分吸收的影响。研究结果表明,施用硼钼镁能够提高菜心的产量和经济效益,当B,Mg,Mo施用量分别为0.03,0.032,1.741 kg/667 m2时,效益最大,增幅分别为14.27%,13.1%,14.51%。施硼可促进菜心对N,P,K及B的吸收,但过量的硼会抑制菜心对P的吸收;施钼可以提高可食部分和全株对于N,P,K及Mo的吸收,降低菜心不可食部分对于N,P,K的吸收;施镁促进菜心对N,K,Mg的吸收,促进可食部分P的吸收的同时降低不可食部分及全株P的吸收,高浓度的Mg会降低菜心可食部分对于N,Mg的吸收。     

芥蓝与菜薹杂种后代对TuMV的抗性

研究了芥蓝以及芥蓝×菜薹种间杂种后代对芜菁花叶病毒(TuMV)油菜株系的抗性。结果表明,芥蓝对广州地区TuMV油菜株系具有近于免疫的抗性。芥蓝×菜薹种间杂种回交后代抗TuMV油菜株系的选择效应受回交亲本影响很大:用抗病品种与杂种回交的后代,经两次系统选择后,已获得16个经济性状较好的白菜抗病品系;但用感病品种与杂种回交两代之后,抗病性明显下降,经两代系统选择未能获得抗病的菜薹品系。     

蓝猪耳启动子捕获系统的建立

为了分离基因启动子,构建了陷阱植物表达载体pHAHCA,用农杆菌介导的无启动子GUS方法转化蓝猪耳,经抗性筛选和PCR检测,获得82株转基因植株,转化率达12.5%.12株GUS染色呈阳性,其中10株GUS在叶脉表达,2株在茎和叶脉表达.对转基因植株进行盐胁迫处理,有1株根部出现GUS染色蓝色斑点.通过TAIL-PCR扩增和测序,获得5个T-DNA侧翼序列.     

草莓果胶裂解酶RNA干扰表达载体构建

为提高草莓果实硬度,延长货架期,利用草莓果胶裂解酶(PL)382bp的一段保守序列构建了RNA干扰植物表达载体;利用农杆菌介导将其成功转入到草莓中,通过PCR检测出2株阳性转化植株。     

柑桔钙离子结合蛋白基因克隆及植物表达载体构建

以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600bp、含钙离子结合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合。设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA为模板扩增到2个CsCaBP片段,并连接到TA克隆载体pMD-19T上;经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pFGC5941的查耳酮合成酶(CHSA)内含子两侧,构建成功CsCaBP的RNA干扰载体,但未获得转基因植株。将CsCaBP的正向片段定向克隆到具有CaMV35S启动子的pF-GC5941表达质粒上,构建成功CsCaBP过量表达载体。将构建好的表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,转化酸橙下胚轴,经PCR检测,获得9株过量表达转基因植株,荧光定量PCR验证发现目的基因在转基因植株中有不同程度的表达。     

农杆菌介导的Cas9基因转化金针菇的研究

将酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9序列(SpCas9序列,Addgene#43802)根据金针菇(Flammulina velutipes)的密码子偏好性进行优化,并构建FvCas9双元表达载体,利用农杆菌介导法转化金针菇单核体Dan3,经抗性培养基筛选以及潮霉素和Cas9基因PCR扩增验证,结果显示Cas9基因已经成功转入金针菇菌丝体中,转化率为6.84%。     

运用基因枪法进行蛹虫草遗传转化的研究

采用蛹虫草[Cordyceps militaris（L.）Link]野生型菌株CM01为供试材料,以金粉包裹质粒pDHt-gpdA-GFP-bar,运用基因枪法转化,经草铵膦抗性筛选,最终在靶距离6 cm或9 cm,氦气压力7.58 × 106 Pa或8.96 × 106 Pa条件下,获得2个遗传稳定的转化子Gfp2与Gfp3,转化效率为0.4 cfu ? μg-1。PCR鉴定与Southern杂交分析显示,草铵膦抗性基因Bar已经以单拷贝或者多拷贝方式整合到蛹虫草转化子的基因组中。蛹虫草转化子的菌丝在荧光显微镜下可以观测到绿色荧光,表明载体携带的绿色荧光蛋白基因在蛹虫草转化子中得到表达。研究结果表明可以把基因枪法应用于真菌蛹虫草,建立了一种简便有效的遗传转化方法,而转化效率需要通过优化基因枪参数设置、受体材料制备等途径进一步提高。