LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的建立

[目的]采用脂多糖(LPS)作为刺激源,建立奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)氧化损伤模型.[方法]体外培养BEEC并进行细胞鉴定,用不同浓度的LPS刺激细胞,在不同时间点用CCK-8法测定细胞存活率,以确定BEEC氧化损伤模型条件.倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT).[结果]与空白对照组相比,当LPS浓度为80μg/mL,作用时间为12 h时,造成细胞损伤,其细胞凋亡率、ROS产生量和MDA含量明显高于对照组,SOD和CAT活性显著低于对照组.[结论]建立奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的条件为LPS作用浓度80 μg/mL,作用时间12 h.     

五味子木脂素类成分中护肝主活性成分的体外筛选

目的:比较五味子木脂素成分对CCl4致L02肝细胞损伤的保护作用,筛选出护肝作用最大的主活性成分。方法:体外培养L02细胞,分别以不同浓度五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲对细胞加以保护,CCl4体外诱导细胞损伤;MTT法测定细胞存活率;通过试剂盒的方法分别检测各组细胞上清液中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力。结果:CCl4最佳造模浓度为80mmoL·L-(1P0.01);5～20μmoL·L-1的五味子木脂素单体均能增加L02肝细胞存活率(P0.01);考察浓度为20μmol·L-1时,均可抑制CCl4引起ALT、AST活性的升高(P0.05或P0.01);结论:通过比较得出五味子乙素护肝作用最强。     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6细胞的增殖作用

[目的]为了研究紫锥菊多糖对LPS损伤后小肠上皮细胞株IEC-6细胞增殖的影响。[方法]以IEC-6细胞为研究对象,将LPS 10μg/ml分别与EPS 50、100、200、500μg/ml先后加入培养液,采用MTT方法检测细胞增殖率,观察紫锥菊多糖对该细胞增殖的影响。[结果]紫锥菊多糖100、500μg/ml对LPS损伤后的IEC-6细胞分别在48、72 h具有促增殖作用,因此紫锥菊多糖对LPS损伤后的IEC-6细胞具有保护作用。[结论]紫锥菊多糖预处理能增强LPS损伤后IEC-6细胞的增殖活性,能降低LPS对IEC-6细胞的损伤而显现出对细胞的保护作用。     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6分泌TNF-αmRNA的影响

[目的]研究紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)时对肿瘤坏死因子(TNF)表达的影响,以探讨 EPS对损伤细胞的作用机制。[方法]采用 TRIzon试剂提取总RNA,RT-PCR扩增 TNF-α mRNA,琼脂糖凝胶电泳,并进行电泳及图像分析。[结果]50μg/ml EPS 可以部分抑制 LPS 刺激 IEC-6产生的TNF-α mRNA水平,而200、500μg/ml EPS随着浓度的增加,其抑制 TNF-α mRNA的水平逐渐增加;将 IEC-6分别用50、100、200及500μg/ml EPS预处理24 h,然后用10μg/ml LPS刺激达1、4 h,采用 RT-PCR方法分析得, LPS诱导 TNF-α mRNA表达被 EPS有效地抑制,4 h的抑制率高于1 h的抑制率。[结论]EPS通过抑制 LPS刺激细胞分泌 TNF-α mRNA的产生而起到肠道粘膜的保护作用,且 EPS对这种抑制作用具有浓度及时间依赖性。     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6分泌TNF-α mRNA的影响（英文）

[目的]研究紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)时对肿瘤坏死因子(TNF)表达的影响,以探讨EPS对损伤细胞的作用机制。[方法]采用TRIzon试剂提取总RNA,RT-PCR扩增TNF-αm RNA,琼脂糖凝胶电泳,并进行电泳及图像分析。[结果]50μg/ml EPS可以部分抑制LPS刺激IEC-6产生的TNF-αm RNA水平,而200、500μg/ml EPS随着浓度的增加,其抑制TNF-αm RNA的水平逐渐增加;将IEC-6分别用50、100、200及500μg/ml EPS预处理24 h,然后用10μg/ml LPS刺激达1、4 h,采用RT-PCR方法分析得,LPS诱导TNF-αm RNA表达被EPS有效地抑制,4h的抑制率高于1 h的抑制率。[结论]EPS通过抑制LPS刺激细胞分泌TNF-αm RNA的产生而起到肠道粘膜的保护作用,且EPS对这种抑制作用具有浓度及时间依赖性。     

γ-亚麻酸在RAW264.7细胞中的抗炎症作用机制（英文）

[目的]探讨γ-亚麻酸（GLA）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞产生炎症介质的影响及其机制。[方法]采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞,待细胞生长至融合状态后加入不同浓度（0、12.5、25、50μmol/L）的GLA预孵4h,利用100ng/ml的脂多糖（LPS）刺激12h或0.5h,同时设空白对照和LPS对照,利用蛋白印迹法检测诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、环加氧酶-2（COX-2）蛋白的表达以及对IκBα、p-JNK/SAPK（Thr183/Tyr185）、p38MAPK、p-p38MAPK（Thr180/Tyr182）、ERK1/2、p-ERK1/2的影响。[结果]GLA可以显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS和COX-2的蛋白表达（P〈0.05）,且在0～50μmol/LGLA浓度范围内存在剂量依赖关系。GLA可以显著抑制IκBα的降解（P〈0.05）,从而抑制NF-κB的激活。GLA可以显著抑制LPS诱导的JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化（P〈0.05）,对p38的磷酸化没有显著的影响。[结论]GLA具有很好的消炎功效。抑制JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化、抑制NF-κB的激活可能是其发挥生物学效应的重要机制。     

猕猴桃根提取物抗氧化及保肝作用的研究

[目的]研究猕猴桃根不同极性溶剂的提取物在体外抗氧化活性及对CCl4肝损伤小鼠血浆转氨酶活性的影响。[方法]采用FTC法进行体外抗氧化试验,并用CCl4建立小鼠急性肝损伤模型,以不同的提取物和阳性对照药甘草酸二铵灌胃治疗,测定小鼠血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性。[结果]猕猴桃根经乙酸乙酯萃取部分的抗氧化活性较强,其用量为60 mg/kg时,对CCl4造成的小鼠急性肝损伤ALT、AST活性升高具有显著的降低作用。[结论]乙酸乙酯萃取部分对肝脏损伤有保护作用。     

三叶香茶菜的保肝作用及其作用机制研究

[目的]比较三叶香茶菜地上部分和地下部分的保肝降酶作用,研究其可能的保肝作用机制。[方法]采用四氯化碳（CCl4）小鼠急性肝损伤动物模型,卡介苗（BCG）和脂多糖（LPS）诱导的小鼠免疫性肝损伤模型,观察三叶香茶菜地上部分和地下部分水提物对小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）活力、谷草转氨酶（AST）活力、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力和脂质过氧化物（MDA）、白细胞介素6（IL-6）含量的影响。[结果]三叶香茶菜地上部分和地下部分可明显降低CCl4急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活力和MDA含量,提高T-SOD活力（P〈0.01,P〈0.05）,能显著降低BCG＋LPS诱导的免疫性肝损伤小鼠血清ALT活力和MDA含量,明显提高小鼠血清T-SOD活力（P〈0.01,P〈0.05）;三叶香茶菜地上部分和地下部分对ALT、AST活力和MDA含量的影响无显著性差异（P〉0.05）。[结论]三叶香茶菜地上部分和地下部分具有明显的保肝作用,两者的作用效果相当。     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6分泌IL-6mRNA的影响（英文）

[目的]探讨紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤后IEC-6分泌IL-6m RNA的影响。[方法]采用Trizon试剂提取总RNA,经RT-PCR扩增后,进行琼脂糖凝胶电泳及图像分析。[结果]当LPS刺激IEC-6细胞时,IL-6m RNA分泌增加。而EPS可以抑制这种作用,并且具有剂量依赖性,50μg/ml EPS可以部分抑制LPS刺激IEC-6产生的IL-6水平,而100、500μg/ml EPS随着浓度的增加,其抑制IL-6的水平逐渐增加;将IEC-6用50、100、200、500μg/ml EPS预处理24 h,然后用LPS(10μg/ml)刺激1、4h,采用RT-PCR方法分析得,LPS诱导IL-6m RNA表达被EPS抑制且具有时间依赖性。[结论]证实了LPS作用于小肠上皮细胞后,其分泌的细胞因子IL-6m RNA产生增多,而EPS可以抑制LPS刺激细胞分泌的IL-6m RNA的产生从而起到肠道粘膜的保护作用,并且这种抑制作用具有浓度及时间依赖性。     

毛木耳多糖对乙醇性肝损伤的保护作用

采用乙醇诱导正常人肝细胞L02形成乙醇性肝损伤的体外模型,通过检测细胞内甘油三酯(TG)、活性氧(ROS)含量、胞外谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性等指标,评价毛木耳多糖提取物对乙醇性肝损伤的的保护作用及机理。结果表明,毛木耳多糖提取物的最佳作用浓度为40μg/m L时,与模型组相比较,细胞的存活率提高了26.84百分点,细胞内甘油三酯的含量显著下降,胞外转氨酶ALT和AST的活性降低。这一结果说明毛木耳多糖提取物能够提高损伤细胞的存活率,降低乙醇引发的肝内脂肪堆积,减少细胞凋亡,同时游离活性氧的检测结果显示毛木耳多糖提取物能够显著降低细胞内活性氧的含量,从而可推断其可能是通过抗氧化途径发挥防护作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人肝细胞氧化损伤的保护作用

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人肝细胞（L02）损伤的保护作用。[方法]通过测定细胞存活率及细胞培养上清液中转氨酶（ALT、AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、MDA含量及SOD活性,研究EGCG对L02损伤的保护作用。[结果]与对照组相比,肝细胞损伤模型组的SOD活性显著降低,MDA含量极显著升高,EGCG各剂量组均可显著降低MDA含量,其培养上清液中ALT和LDH含量显著升高。与模型组相比,EGCG 1.25×10^-5、2.50×10^-5、5.00×10^-5和1.00×10^-4mol/L剂量组的细胞培养上清液中ALT含量显著降低,且EGCG 2.50×10^-5、5.00×10^-5和1.00×10^-4mol/L剂量组的细胞培养上清液中LDH含量显著降低;EGCG 1.25×10^-5和2.50×10^-5mol/L剂量组可使SOD活性极显著增加,EGCG 5.00×10^-5和1.00×10^-4mol/L剂量组可极显著降低MDA含量。[结论]EGCG可减轻CC l4及H2O2所致的肝细胞氧化损伤,对肝细胞具有保护作用,并具剂量依赖性。     

鹊肾树叶石油醚萃取物及其组分抗肿瘤作用研究

[目的]研究鹊肾树（Streblus asperLour.）叶石油醚萃取物及其组分的体外抗肿瘤活性。[方法]采用MTT法检测鹊肾树叶石油醚萃取物以及经硅胶柱层析分离各组分的体外抗肿瘤活性。[结果]80μg/ml鹊肾树叶石油醚萃取物对宫颈癌细胞Hela、人胃癌细胞SGC-7901、口腔上皮癌细胞KB作用48 h的抑制百分率分别达到58.6%、53.5%和75.5%。进一步分离纯化鹊肾树叶的石油醚萃取物,所得的FrⅡ组分（80μg/ml）对Hela、SGC-7901和卵巢癌细胞Ca-cell的48 h抑制率分别达到69.7%、64.6%和60.2%,FrⅢ组分对Hela、SGC-7901和Ca-cell的48 h抑制率分别达到73.1%、66.1%和52.8%。[结论]鹊肾树叶石油醚萃取物具有一定的抗肿瘤作用,经进一步分离所得的FrⅡ、FrⅢ组分对体外肿瘤细胞增殖呈明显的抑制作用。     

MiR-155在脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应中的表达研究

[目的]探讨miR-155在脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应中的表达及糖皮质激素(GCs)的干预影响。[方法]体外培养RAW 264.7巨噬细胞,分别用浓度为10.0、1.0、0.1μg/ml LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞,于2、6、12、24、36 h 5个时间点收集上清用ELISA检测白介素-6(IL-6)蛋白浓度;实时定量-PCR检测miR-155在2、6、12、36 h 4个时间点的表达变化。[结果]IL-6在各浓度LPS处理组、各时间点其含量均高于对照组(CK);miR-155的表达在各时间点LPS组均高于LPS+GCs和CK。[结论]LPS可以诱导RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,炎症反应时miR-155高表达,糖皮质激素可抑制miR-155的表达。     

氟化物对体外培养猪小肠上皮细胞的影响

[目的]研究氟对体外小肠上皮细胞的影响。[方法]以小肠上皮细胞为研究对象,对猪小肠上皮细胞进行分离后,添加2.5、5.0、10.02、0.0μg/ml的氟进行培养,测定小肠上皮细胞的增殖率和碱性磷酸酶的活性。[结果]当氟添加量<10.0μg/ml时,细胞的增殖、碱性磷酸酶活性与对照组之间无显著差异;而高氟组(20.0μg/ml)小肠上皮细胞的增殖、碱性磷酸酶活性则受到显著抑制,并且小肠上皮细胞的形态由多角形变为圆形,细胞核溶解,大部分细胞死亡。[结论]该研究为进一步研究氟对体外小肠上皮细胞的危害机理奠定了基础。     

磺胺二甲氧嘧啶钠对斑点叉尾鮰血清生化指标和组织的影响

采用灌喂方法,研究不同剂量磺胺二甲氧嘧啶钠(SMS)100、200、400mg/kg对斑点叉尾鮰门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(CRE)、尿素(UREA)等血清生化指标以及肝脏和肾脏组织的影响。结果表明:连续灌药5d后,对照组与给药组斑点叉尾鮰血清中的AST、ALT、ALP、LDH和UREA均无显著性变化,按400mg/kg体质量给药组的肌酐存在显著性变化(P<0.05)。连续灌药10d后,与对照组相比,给药组AST、ALT、ALP、LDH、CRE、UREA均有显著性变化。SMS可导致肝细胞核溶解或细胞溶解,肾脏肾小管上皮细胞局部坏死,且浓度越高,损害越大。试验表明,100mg/kg的剂量对斑点叉尾鮰在较长时间的使用过程中毒副作用较小,在5d内使用是安全的;200mg/kg的剂量在较短时间内使用是安全的,但是不能长时间使用,否则会对肝脏及肾脏造成损伤;而高剂量的400mg/kg对斑点叉尾鮰在较短时间内仍具有较大的毒副作用,表现在肾脏上的损伤。     

不同盐离子对单核细胞炎症反应的影响

[目的]研究NH4＋引起炎症反应的机制。[方法]利用倒置显微镜观察不同盐离子引起单核癌细胞THP-1形态的变化,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞培养上清中LDH,台盼蓝染色检测细胞形态和存活情况,Western blot检测炎症反应相关细胞因子的产生和分泌。[结果]通过体外研究发现NH4＋能够激活caspase-1和下游的IL-1β,IL-1β是炎症反应的重要细胞因子;K＋能够抑制NH4＋引起的caspase-1和IL-1β的激活。[结论]Na＋、SO24-、Cl-都不引起炎症反应,对THP-1细胞没有影响;NH4＋能够引起单核细胞的炎症反应,并且可以被K＋抑制,为氨基酸代谢紊乱引起的疾病的治疗提供了一定的依据。     

扇贝多肽对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用

[目的]建立H2O2诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的体外模型,探讨扇贝多肽(PCF)对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用及其作用机制。[方法]采用不同浓度的H2O2(50、100、200、300、500μmol/L)作用HaCaT细胞12 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;用不同浓度(1.42、2.84、5.68 mmol/L)的PCF分别处理细胞12 h后,加入H2O2(300μmol/L)继续作用12 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用酶生化法法测定细胞上清液中LDH活性以及细胞质中GSH-Px、T-AOC和CAT水平。[结果]与正常组相比,50~500μmol/L浓度的H2O2依赖性地引起HaCaT细胞氧化损伤,300μmol/L的H2O2使存活率降低到56%(P0.01);与模型组相比,不同浓度的PCF均可保护H2O2诱导的氧化损伤,增加细胞存活率,降低细胞LDH的释放量,提高GSH-Px、T-AOC和CAT含量,增强细胞抗氧化作用。[结论]扇贝多肽能对抗H2O2诱导的氧化应激,对细胞受损具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活力有关。     

豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的体外联合抑瘤作用研究

［目的］研究豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的降毒增效作用。方法］分别采用6种不同浓度的豆类丝核菌次级代谢产物（苦马豆素含量分别为10.00、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31 μg/ml）处理人肝癌细胞HepG2,测量其IC50;然后用此代谢产物与2种不同浓度（60、6 μg/ml）阿霉素（ADR）联合处理HepG2,分析两者的增效作用。结果］豆类丝核菌次级代谢产物可抑制肝癌细胞HepG2生长,其对HepG2细胞作用72 h的IC50为1.25 μg/ml;ADR可显著抑制肝癌细胞HepG2生长,加入豆类丝核菌次级代谢产物后HepG2细胞的形态和存活率变化不大。结论］豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素体外联合不具有增效作用。