基于细菌全基因组的大口黑鲈源维氏气单胞菌AV040株致病性与耐药性解析

2021年7月安徽某养殖场的大口黑鲈(Micropterus salmoides)苗在下塘期发生了爆发性死亡。在排除寄生虫和病毒感染后，从患鱼脾脏和肾脏分离到多株细菌，经鉴定，血平板单菌落β-溶血试验和回归感染筛选出一株致病力较强的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)AV040株。AV040全基因组测序(GenBank ID:CP095841)显示，253个编码序列为毒力基因，其中编码的黏附(adherence)分子156个、分泌系统(secretion system)85个、毒素(toxin)12个。腹腔注射AV040株对大口黑鲈(约10 g)和昆明白小鼠(约20 g)的半数致死浓度(median lethal dose, LD₅₀)分别为6.53×10⁶ CFU·g^-1和2.97×10⁷ CFU·g^-1;受染大口黑鲈表现为胸鳍、腹鳍、肛门、肝胰腺、脾脏和幽门垂出血；受染小鼠表现为蜷缩、眯眼和颤抖，肝脏和肠道出血。AV040全基因组中有5个耐药基因，并采用K-B...     

大口黑鲈鰤诺卡菌的分离鉴定及其感染的病理损伤研究

【目的】近年来,四川养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)流行一种以体表溃疡、内脏器官出现白色结节为主要病症的疫病。本研究对其病因及病理损伤特点进行分析。【方法】进行病原菌分离、人工感染、病原菌理化特性分析和16S rDNA与hsp65基因(65-ku heat shock protein gene)序列分析,同时进行药敏试验与病理损伤观察。【结果】从病鱼内脏分离到3株具有弱抗酸性的G~+丝状杆菌,人工感染试验证实了分离菌的病原性,其理化特性与鰤诺卡菌(Nocardia seriolae) ATCC43993一致;在以16S rDNA序列与hsp65序列构建的系统发育树上,分离菌与鰤诺卡菌聚为一族,3株分离菌都被鉴定为鰤诺卡菌。3株分离菌对多西环素、红霉素和庆大霉素均敏感,对青霉素和头孢噻呋均耐药,但在对恩诺沙星、氧氟沙星与复方新诺明的敏感性上存在一定差异。鰤诺卡菌感染大口黑鲈的组织病理损伤主要表现为:全身多组织器官内出现大小不等的慢性肉芽肿结节,尤以鳃、肝、脾、心、肾和头肾损伤严重,且组织切片革兰氏染色显示肉芽肿中有大量病原菌分布。【结论】鰤诺卡菌感染是此次大口黑鲈发病的病因,造成大口黑鲈多组织器官形成肉芽肿结节,且结节内有大量病原菌。     

2019年浙江省水生动物病原菌耐药情况分析

为规范浙江省水产养殖用药和保障水产品质量安全,2019年对杭州、湖州、嘉兴、宁波、温州等地区部分养殖点患病中华鳖、大口黑鲈、大黄鱼等主养品种中分离的病原菌进行恩诺沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、盐酸多西环素、氟甲喹、磺胺间甲氧嘧啶钠、磺胺甲噁唑+甲氧苄啶等抗生素最低抑菌浓度(MIC值)测定,比较各药物对菌株最小抑菌浓度的中位值(MIC50).结果表明,淡水品种中华鳖、大口黑鲈体内分离的143株病原菌中以气单胞菌(62.2％)为主,海水品种大黄鱼体内分离的56株病原菌以假单胞菌(55.4％)和哈维氏弧菌(17.9％)为主,均对恩诺沙星、盐酸多西环素、硫酸新霉素等药物的耐受浓度较低,而对磺胺类、氟甲喹、甲砜霉素等药物的耐受浓度较高;但在氟苯尼考药物上呈现不同的耐受性.淡水养殖地区间病原菌的耐药性一致,海水养殖宁波地区病原菌耐药性高于温州地区.总体而言,2019年浙江地区绝大部分水生动物病原菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、硫酸新霉素等药物较为敏感,可作为多数病原菌用药首选,但必须严格按照药敏试验结果和药代动力学原理确定剂量和药程.     

2015—2017年广西鸡源沙门氏菌耐药性与致病性的相关性分析

[目的]明确鸡源致病性沙门氏菌耐药表型与致病性的相关性,为有效防控鸡沙门氏菌病提供科学依据.[方法]采用玻片凝集试验对55株鸡源沙门氏菌广西分离株进行血清型鉴定,以纸片扩散(K-B)法和PCR分别测定其耐药表型及耐药基因,通过小鼠攻毒试验检测其致病性,并分析鸡源沙门氏菌广西分离株耐药表型与致病性的相关性.[结果]55株沙门氏菌广西分离株以鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌为主,对青霉素G、阿莫西林、苯唑西林、头孢噻吩、红霉素和利福平的耐药率均达100.00%,而对庆大霉素和大观霉素较敏感(耐药率在10.00%以下).55株沙门氏菌广西分离株中有1株(占1.82%)携带7种耐药基因、6株(占10.91%)携带6种耐药基因、20株(占36.36%)携带5种耐药基因、12株(占21.82%)携带4种耐药基因、13株(占23.64%)携带3种耐药基因、3株(占5.45%)携带2种耐药基因;16种耐药基因中,blaTEM、tetX、sul3和aadA1基因检出率较高,qepA、blaCMY和tetB基因检出率较低,而qnrA、qnrB、Aph(3)-IIa、blaPSE和aadA2基因等未被检出.55株沙门氏菌广西分离株对昆明小白鼠均具有致病性,致死率为20%~100%;随机选取10株分离株对昆明小白鼠的半数致死量(LD50)为4.00×107~3.18×108 CFU/mL.沙门氏菌分离株耐药种类数量与LD50对数值的线性回归方程为y=-0.086x+8.971(R2=0.9329),耐药基因数量与LD50对数值的线性回归方程为y=-0.148x+8.673(R2=0.5748),即沙门氏菌的耐药性与其致病性呈正相关.[结论]2015—2017年从广西发病鸡分离获得的致病性沙门氏菌以鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌为主,普遍存在耐药性,且多重耐药现象严重.鸡源致病性沙门氏菌的耐药表型与其致病性间呈正相关,因此,生产上要加强临床用药管理,加大细菌耐药监测与防范.     

大口黑鲈弹状病毒的分离与鉴定

为探明广东省韶关市某大口黑鲈（Micropterus salmoides）养殖场的大口黑鲈幼鱼大量死亡的原因,对患病鱼进行临床观察,并从细菌学、寄生虫学、病毒学三方面进行检测,排除细菌和寄生虫感染的可能性后,通过RT-PCR检测、细胞分离培养、人工感染、组织病理切片苏木精-伊红（H&E）染色、超薄切片透射电镜观察、系统发育树分析,初步确定分离得到1株大口黑鲈弹状病毒（micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV）,命名为大口黑鲈弹状病毒韶关株（MSRV-SG01）。人工感染试验结果显示,试验鱼2 d内出现死亡,并伴随出血、烂尾、拖便等临床症状,7 d内死亡率达100%,通过组织病理学切片观察到病鱼的肝脏、脾脏均呈现大面积坏死,与自然患病鱼症状相符。根据G蛋白氨基酸序列,将分离到的MSRV-SG01毒株与GenBank中已报道的其他的弹状病毒进行系统发育树分析比对,结果显示, MSRV-SG01毒株与MSRV-FJ985、MSRV-YH01、SCRV聚为一类,且与已报道的MSRV-FJ985毒株、MSRV-YH01毒株同源性高达97%以上。通过以上的试验分析,确定幼鱼大量死亡的原因为MSRV感染。     

中国养殖大口黑鲈的亚种分类地位探讨

采用形态学方法和微卫星特异分子标记两种方法鉴定了中国养殖大口黑鲈Micropterus salmoides的分类地位。结果表明：中国养殖大口黑鲈的侧线鳞为58～68片,肋骨数为15对,这与原产地大口黑鲈北方亚种较一致;选择鉴别两亚种的特异性微卫星标记（Md06、Msal21）对中国养殖大口黑鲈进行特异性扩增,并以原产地大口黑鲈佛罗里达亚种和大口黑鲈北方亚种样品作为对照,结果为中国养殖大口黑鲈的特异性扩增片段大小和原产地北方亚种扩增条带相同。综合形态学和分子标记两方面的结果,表明中国养殖大口黑鲈应属于大口黑鲈北方亚种Micropterus salmoides salmoides。     

大口黑鲈池塘养殖常见病害及其防治

大口黑鲈是我国重要的淡水养殖鱼类,但池塘养殖中大口黑鲈病害不断发生,常见病害主要为细菌性疾病、病毒性疾病和寄生虫病.对以上疾病的临床症状、病原及其特征、流行特性进行分析,提出针对当前大口黑鲈常见病害的有效防治技术和方法.     

大口黑鲈感染温和气单胞菌抗氧化功能的研究

剖取由温和气单胞菌感染后发病的大口黑鲈及健康大口黑鲈的心脏、脾脏、肾脏、鳃、肌肉、肠、肝7种组织,分别采用氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光还原法和硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量.研究结果表明,发病大口黑鲈的心脏、脾脏、肾脏、鳃、肝5种组织的SOD活性显著(P＜0.05)低于健康大口黑鲈,而MDA含量显著(P＜0.05)高于健康大口黑鲈.发病大口黑鲈的肌肉、肠组织SOD活性与MDA舍量与健康大口黑鲈相比差异不显著.研究结果提示温和气单胞菌可导致大口黑鲈的心脏、脾脏、肾脏、鳃和肝等组织SOD活性降低,MDA含量升高,进而使其抗氧化功能降低,组织受损,甚至发病.     

维生素C对大口黑鲈生长与非特异性免疫的影响

用添加不同剂量维生素C(分别为0、0.5、1、2、4 g/kg)的饲料喂养初始体重为19 g左右的大口黑鲈Micropterus salmoides 2个月,研究维生素C对大口黑鲈生长及非特异性免疫的影响.结果显示:饲料中添加维生素C＞1 g/kg,能显著促进大口黑鲈的生长,提高其脾体指数(P＜0.05),然而对大口黑鲈的饲料系数、成活率、肥满度、内脏比指数以及肝体指数等的影响均不显著(P＞0.05);试验前50 d,饲料中添加维生素C能显著提高大口黑鲈血清中溶菌酶的活力(P＜0.05),第60 d,饲料中添加维生素C为2g/kg以上时,能显著提高大口黑鲈血清中溶菌酶活力(P＜0.05);试验前30 d,饲料中添加维生素C能显著提高大口黑鲈血清中超氧化物歧化酶活力(P＜0.05),后30 d大口黑鲈血清中超氧化物歧化酶活力下降;随着饲料中维生素C添加水平的提高,大口黑鲈肝脏中维生素C的积累量显著升高(P＜0.05).试验证明,维生素C能有效地提高大口黑鲈的生长与非特异性免疫能力.     

大口黑鲈两个地理群体形态差异及其对体质量的影响

随机选取广东和台湾两个不同地理群体大口黑鲈（Micropterus salmoides），采用多元分析方法分析了两地理群体间形态性状差异及其对体质量的影响.结果表明，广东和台湾两地理群体间的大口黑鲈形态差异主要集中于躯干中部和尾部.前3个主成分累积贡献率达到95.8%.前2主成分因子得分散点图中两地理群体重叠区域较小，可以完全区分.广东群体和台湾群体的形态性状对体质量具有相似的影响效果，其中体高、胸鳍基点至背鳍基点长度、臀鳍基点至背鳍基点长度、臀鳍基点至背鳍末端长度和背鳍末端至尾鳍基点长度对体质量的直接作用达到了显著水平，是影响两地理群体大口黑鲈体质量的关键形态指标.研究结果可为大口黑鲈体质量选种提供基础资料.     

临床分离粪肠球菌的毒力基因和耐药基因检测及其耐药性研究

分离女性阴道中的粪肠球菌（Enterococcus faecalis）,通过PCR和Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法探究其毒力基因、耐药基因及其耐药表型,为揭示粪肠球菌感染机制及其临床治疗提供科学依据。结果表明:从157个样品中共分离出22株粪肠球菌;在这些粪肠球菌中:毒力基因检出率为efaA (100%)、asa1 (90.9%)、cylA (90.9%)、fsr (90.9%)、cpd (90.9%)、acm (86.4%)、gelE (81.8%)、esp (68.2%)、ace (54.5%)和hyl (0);耐药基因的检出率为vanA (0)、vanB (0)、vanC (18.2%)、aac (40.9%)、ant(6)-1 (59.1%)、ermB (68.2%)、mefA (54.5%)、tetM (72.2%)和tem (81.8%);药敏结果显示粪肠球菌对万古霉素、呋喃妥因、利奈唑胺、替考拉宁敏感;对其他抗菌药物具不同程度的耐药。由此得出,阴道易受粪肠球菌感染,体外实验支持糖肽类抗菌药物可用于粪肠球菌感染的临床治疗。     

Catalysis and sulfa drug resistance in dihydropteroate synthase

The sulfonamide antibiotics inhibit dihydropteroate synthase (DHPS), a key enzyme in the folate pathway of bacteria and primitive eukaryotes. However, resistance mutations have severely compromised the usefulness of these drugs. We report structural, computational, and mutagenesis studies on the catalytic and resistance mechanisms of DHPS. By performing the enzyme-catalyzed reaction in crystalline DHPS, we have structurally characterized key intermediates along the reaction pathway. Results support an S(N)1 reaction mechanism via formation of a novel cationic pterin intermediate. We also show that two conserved loops generate a substructure during catalysis that creates a specific binding pocket for p-aminobenzoic acid, one of the two DHPS substrates. This substructure, together with the pterin-binding pocket, explains the roles of the conserved active-site residues and reveals how sulfonamide resistance arises.     

鸡致病性大肠杆菌耐药性检测

从河南省4个地市（区）商品肉鸡病料中分离了15株大肠杆菌（E．coli）,在对其进行生化鉴定的基础上,采用微量倍比稀释法测定了17种抗菌药物对它们的体外最小抑菌浓度（MIC）,并按照美国临床实验标准化委员会（NCCLS）的抗菌药物敏感性标准（2009年第十九版）进行耐药性判断和耐药谱比较分析。结果显示：15株鸡E．coli对17种抗菌药物中的16种药物均有不同程度的耐药性,其中对头孢唑林、恩诺沙星、新霉素、环丙沙星的耐药性比例达90％～100％,对阿莫西林、头孢曲松、庆大霉素、阿奇霉素的耐药性比例达到80％以上,对多西环素、大观霉素、左氧氟沙星的耐药性比例达到60％以上。17种抗菌药物敏感性比例达到60％以上的有多粘菌素B、阿米卡星、氟苯尼考,其余药物的敏感性比例均在40％以下。15株鸡E．coli均为多重耐药菌株,耐药谱最多的药物达到14种,耐药谱最少的药物有6种。说明鸡E．coli对常用抗菌药物已产生比较普遍的耐药性,而且耐药谱较宽。     

Chloroquine: physiological basis of drug resistance in Plasmodium berghei

Mouse erythrocytes, parasitized by chloroquine-sensitive plasmodia, concentrate this drug in vivo to levels over twice as high as erythrocytes parasitized by chloroquine-resistant plasmodia; nonparasitized red cells accumulate little chloroquine. Selective toxicity of this drug may depend upon a special drug-concentrating mechanism of plasmodic impairment of such mechanism.