徐薯55-2的胚性细胞悬浮培养

为优化胚性愈伤的培养条件,建立甘薯高效胚性悬浮培养试验操作体系,以徐薯55-2、徐薯18、徐薯22、徐薯28、徐薯29和徐紫薯5号等6个甘薯品种(系)茎尖诱导的胚性愈伤组织为材料,通过比较不同品种的胚性愈伤组织诱导率、愈伤状态等的差异,筛选出愈伤诱导率高,愈伤状态好,体胚诱导率及成苗率高的品种徐薯55-2。通过测定细胞沉降体积(SCV)研究徐薯55-2胚性细胞悬浮系的接种密度、接种量、摇床转速对胚性悬浮细胞生长的影响。结果表明,徐薯55-2胚性细胞悬浮系适宜培养条件为接种密度1∶25,接种量1.4mL,摇床转速100r/min。     

香蕉雄花和组培苗假茎胚性愈伤组织诱导的初步研究

从外植体来源、生长调节剂种类及浓度等方面研究影响巴西蕉胚性愈伤组织诱导的因素。结果表明,以未成熟雄花为外植体,MS培养基+1 mg/L 2,4-D+1 mg/L IAA+1 mg/L NAA较适宜胚性愈伤组织诱导,26℃暗培养条件下,未成熟雄花的胚性愈伤组织诱导率为3%～4%。在MS培养基+0.7 mg/L 2,4-D+4 mg/L 6-BA中,以不同品种假茎为外植体的脱分化愈伤组织诱导率最高可达75%,但只有巴西(青杆)和海南本地米蕉可以诱导出胚性愈伤组织,诱导率分别为0.1%和0.5%.     

香蕉、大蕉、粉蕉胚性愈伤组织的诱导

本文分别以大蕉、香蕉、粉蕉的未成熟雄花为材料,取其幼嫩花序和花序轴薄片作外植体,研究了不同浓度的2,4-D、6-BA、KT、IAA、NAA对其胚性愈伤组织的诱导和增殖的影响及诱导过程的一系列反应。结果表明,前胚性性愈伤的诱导难易程度为:大蕉难于香蕉,粉蕉最难,胚性愈伤组织相似。诱导前胚性愈伤组织适宜的培养基配方,大蕉为:MS 6-BA4.0 2,4-D1.;香蕉为:MS BA6.0 2,4-D2.0;粉蕉的配方和香蕉一样。诱导胚性愈伤组织适宜的培养基配方MA IAA1.0 2,4-D4.0 NAA1.0。增殖适宜的培养基,大蕉为:MS 6-BA3.0 2,4-D0.5。香蕉为:MA IAA1.0 2,4-D4.0 NAA1.0粉蕉的配方和香蕉一样。     

巴东红三叶胚性细胞悬浮系的建立

以红三叶(Trifolium pratense)野生品种巴东红三叶的叶片为外植体,在MB-1至MB-9的固体培养基上诱导愈伤组织,筛选出最佳培养基MB-9.愈伤组织形成以后,均经MB-9固体培养基上继代培养3～4次后,获得胚性愈伤组织,然后转至改良的MB-9液体培养基中,经强化培养两个月后,获得胚性细胞悬浮系.结果表明,缩短换液时间,每隔3～4d换液1次,可加快胚性细胞悬浮系的建立.     

龙眼胚性细胞系的建立与保持

本研究比较了生长调节剂、ＡｇＮＯ３、活性炭、碳源、基本培养基、光照度、胚发育时期以及基因型等对龙眼幼胚培养诱导愈伤组织的影响。从幼胚培养中，诱导出多种类型的愈伤组织，经继代培养并筛选，获得松散、生长旺盛、胚胎发生能力极强的松散型胚性愈伤组织。该类型胚性愈伤组织适宜建立悬浮细胞系和分离原生质体，并且转移至含体积分数为０．０５椰子汁的ＭＳ固体培养基上，形成大量的胚状体。采用在附加１ｍｇ·Ｌ＾－１２，４     

快速建立胚性细胞悬浮系的培养程序初探

为了缩短建立胚性细胞悬浮系的进程，快速获得松脆胚性愈伤组织，以普通小麦，大麦和多花黑麦草为材料，采用能促进植株再生的高浓度铜离子作为毒害筛选因子，以MSD培养基为基本配方，2．5mg/L的2，4－D浓度，不同梯度浓度的铜离子处理愈伤组织。结果表明，0．1mmol/L的Cu^2 对愈伤组织具有较好的筛选作用，能使松脆胚性愈伤组织保存下来，而其它类型愈伤组织褐化死亡，产生的松脆性愈伤组织能很快适应悬浮培养，从而使快速建立胚性细胞悬浮系。用密实细胞体积及其斜面高度评价细胞悬浮系的特点，发现悬浮细胞不仅具有很强的生长势，提高了愈伤对营养缺乏的忍受度，而且保持了高分化潜能的胚性。     

龙眼胚性愈伤组织的高频率体细胞胚胎发生

比较了龙眼不同类型胚性愈合伤组织，品种，蔗糖质量浓度，有机附加物，生长调节剂，光照度等因素对龙眼胚性愈组织体胚诱导的影响，结果表明，在优经的体胚发生条件下，选择适宜的胚性愈伤组织类型，可获得龙眼胚性愈伤组织的高频率体细胞胚胎发生，在低质量浓度蔗糖（≤３０ｇ．Ｌ＾－１）和黑暗条件下，松散型胚性愈伤组织的体胚分化频率为１００％，并且发生数量可达每克１万个左右。     

龙眼胚性细胞系的建立与保持

本研究比较了生长调节剂、ＡｇＮＯ３、活性炭、碳源、基本培养基、光照度、胚发育时期以及基因型等对龙眼幼胚培养诱导愈伤组织的影响．从幼胚培养中，诱导出多种类型的愈伤组织，经继代培养并筛选，获得松散、生长旺盛、胚胎发生能力极强的松散型胚性愈伤组织．该类型胚性愈伤组织适宜建立悬浮细胞系和分离原生质体，并且转移至含体积分数为０．０５椰子汁的ＭＳ固体培养基上，形成大量的胚状体．采用在附加１ｍｇＬ－１２，４－Ｄ的ＭＳ培养基与附加１ｍｇＬ－１２，４－Ｄ、０．５ｍｇＬ－１ＫＴ和５ｍｇＬ－１ＡｇＮＯ３的ＭＳ培养基交替继代培养，该类型胚性愈伤组织可长期保持     

ZT、KT和2,4-D对香蕉胚性愈伤组织诱导的影响

以香蕉未成熟雄花序为外植体,以MS为基本培养基,对外植体进行表面消毒、不同切割长度处理、不同植物生长调节剂(ZT、KT、2,4-D)在不同浓度情况下进行胚性愈伤组织诱导的试验。结果表明:外植体表面消毒以选用10%H2O2溶液处理效果最好,成功率为83.3%;切割长度以1.0 cm较为合适;胚性愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L ZT+0.5 mg/L KT+4.0 mg/L 2,4-D,胚性愈伤组织诱导率为12.3%。     

大蒜胚性细胞悬浮系的建立

以中牟 5号大蒜根尖为外植体 ,在 1 1种固体培养基上诱导愈伤组织 ,筛选出最佳培养基MS + 2 ,4-D 0 .5mg/L和MS + 2 ,4-D 2 .0mg/L +KT 0 .5mg/L。愈伤组织形成后在上述1 1种培养基上继代 3～ 4次 ,获得胚性愈伤组织后再转至液体培养基中 ,经强化培养 3个月后获得胚性细胞悬浮系。试验结果表明 :缩短换液时间 (每隔 3～ 4天换液 1次 ) ,可加快胚性细胞悬浮系的建立     

荔枝、龙眼胚性愈伤组织的细胞组织学观察

通过石蜡切片观察荔枝、龙眼胚性愈伤组织的结构和胚性细胞分裂生长的方式 .结果表明 :荔枝胚性愈伤组织中具有旺盛分裂能力和再生能力的胚性细胞主要分布在外缘 ,胚性愈伤组织的增殖生长为单细胞外起源 ;而龙眼胚性愈伤组织的胚性细胞大多处于内部 ,胚性愈伤组织的增殖生长为内起源 .还对荔枝、龙眼胚性愈伤组织应用于遗传转化等问题进行了探讨     

高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究:Ⅱ.不同因素对胚性愈伤组织继代发生的影响

以从4个草坪型高羊茅品种成熟种子直接诱导获得的初始愈伤组织为起始材料，研究3种因素对胚性愈伤组织继代发生的影响。结果表明，继代培养基中添加BAP和硫酸铜以及提高蔗糖浓度均能促进胚性愈伤组织形成，提高胚性愈伤组织频率，其适宜浓度分别为：BAP0．1～0．2mg/L，硫酸铜2．5mg/L，蔗糖60g／L。这3种因素中，又以添加BAP的效果最好，添加硫酸铜次之。4个供试品种间胚性愈伤组织发生能力存在明显差异。     

提高水稻成熟种胚愈伤组织诱导率及再生率的研究

以 4个来源不同的粳稻品种为材料 ,不同培养基和激素相组合 ,对影响水稻成熟种胚愈伤组织诱导率和愈伤组织质量的多种因素进行了研究。结果表明 :选择适宜的培养基是提高愈伤组织诱导率及愈伤组织质量的基础 ;不同的激素处理 ,对于提高愈伤组织诱导率和愈伤组织质量有一定的作用 ,但这种作用又因品种的基因型和所选择培养基的不同而呈现显著的差异 ,各影响因素间存在显著的相关性。将经不同处理所获得的 4个品种的高质量的愈伤组织转到高浓度琼脂粉固化的分化培养基上 ,愈伤组织分化率均在 80 %以上 ,经多效唑 (MET)处理后每块愈伤组织可获再生植株数达 5株以上。     

Somatic embryogenesis and plant regeneration in glandless upland cotton (<Emphasis Type="Italic">Gossypium hirsutum</Emphasis> L.)

Glandless upland cotton has an important economic value. Embryogenic calli and regenerated plants were obtained from the hypocotyl explants of glandless upland cotton seedlings, cultivar Jisheng1. The results indicated that somatic embryogenesis was significantly influenced by the types of auxin and cytokinin. 2, 4-D was advantageous to induce cotton callus, but embryogenic callus could not be obtained on the 2, 4-D medium. Embryogenic calli were also not obtained on the MSB sold medium with the combination of IBA and BA. However, embryogenic calli were induced when the hypocotyl explants were cultured on the IBA and KT medium. More than 31% of the hypocotyl segments produced embryogenic calli when the MSB medium was supplemented with 1.0 mg·L⁻¹ IBA and 0.5 mg·L⁻¹ KT. Embryogenic calli with somatic embryos could be observed within three months. Somatic embryo germination and maturation occurred on the hormone-free MSB medium with 1.0 g·L⁻¹ Gln and 0.5 g·L⁻¹ Asn. A number of regenerated plants could be obtained in six months. In the present study, a simple and efficient system was established to induce a number of embryogenic calli and regenerate plantlets from hypocotyl explants.     

玻璃化法超低温保存匍匐翦股颖胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对匍匐翦股颖愈伤组织进行超低温保存条件及植株再生进行初步研究.结果表明:将继代2次的愈伤组织接种到预培养基上,4℃低温预培养5 d.预培养后的愈伤组织在常温下用装载液过渡10 min,再于0℃下用玻璃化溶液PVS2处理50 min后,加入新鲜的PVS2迅速投入液氮中保存1 h以上,取出后在30℃水浴中解冻,用MS+1.0 mol.L-1蔗糖溶液洗涤3次,每次10 min,细胞存活率可达85.6%,接种在恢复培养基上培养,胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

Effect of Different Hormone Combinations on Somatic Embryogenesis in Cotton Cultivar Xinluzao 33(Gossypium hirsutum L.)

[Objective] This study was conducted to evaluate the efficiency of somatic embryogenesis and plant regeneration for an upland cotton cultivar Xinluzao33 under the induction of different hormone combinations and thus to determine the optimal hormone combination. [Method] Calli of Xinluzao33(Gossypium hirsutum L.) were induced from seedling hypocotyl tissue by a range of DK and BK combinations. Embryogenic calli and embryos were induced on callus-inducing medium(CIM) without any hormones. Callus appearance and quality were compared to determine which medium was the optimal for callus induction. Embryogenesis ratio was calculated to determine which medium was the best for somatic embryogenesis and plant regeneration. [Result] Callus induction rate was 100% in all the 12 hormone combinations.The calli were yellow or kelly, and their texture was loose or soft under low concentrations of DK combinations, green or white, variably compact under high concentrations of DK combinations. The calli induced by BK combinations were kelly or green, covering creamy white substance. The best medium for callus induction was DK6(0.05 mg/L 2, 4-D and 0.10 mg/L KT). Embryogenic calli were successfully induced from all the combinations. The efficiency of embryogenic callus induction,embryogenesis, and plantlet regeneration were significantly different among the 12 combinations. The result showed that the embryogenesis ratio was the highest in BK3 combination(0.50 mg/L IBA and 0.50 mg/L KT), 72.86% of embryogenic calli differentiated into somatic embryos after being cultured on CIM for 80 d, and80.93% of the somatic embryos finally regenerated into plants on SEM(somatic embryo induction medium). [Conclusion] These results indicate that hormone combination BK3(0.50 mg/LIBA and 0.50 mg/L KT) was the best medium for somatic embryogenesis and plant regeneration from Xinluzao33.     

甘草花丝的胚性愈伤组织诱导及其体细胞胚的发生

甘草花丝通过离体培养,在MS培养基上形成无结构的愈伤组织。通过调整生长素和细胞分裂素的配比,使其由无结构的愈伤组织转化为胚性愈伤组织,进而发育成完整的体细胞胚。胚胎学观察表明,由体细胞胚发育成的小植株,其最初的来源是单个细胞。     

幼胚和花药培养诱导荔枝胚性愈伤组织

以福建荔枝主栽品种元红的幼胚为外植体，优化了离体培养诱导胚性愈伤组织（ＥＣ）的培养基．对ＥＣ的诱导，较高质量浓度的蔗糖（５０ｇＬ－１）和２，４－Ｄ（２～４ｍｇＬ－１）优于较低质量浓度的蔗糖（３０ｇＬ－１）和２，４－Ｄ（０．５～１．０ｍｇＬ－１）．ＢＡ和活性炭（ＡＣ）对ＥＣ的诱导有抑制作用．适当的硫代硫酸银（ＳＴＳ）（２９．４μｍｏｌＬ－１）可以抵消ＢＡ的抑制作用．在ＭＳ附加质量浓度为５０ｇＬ－１的蔗糖和２ｍｇＬ－１的２，４－Ｄ培养基上，下番枝、乌叶、元红和陈紫幼胚诱导ＥＣ的频率分别为２２％、１４．５％、１７．２％和１６．８％．在上述培养基中，元红花药产生ＥＣ的频率为０．１％～０．６％，而加入ＳＴＳ（２９．４μｍｏｌＬ－１）可提高至１．２％～５．６％．对影响ＥＣ的诱导因素和它们的相互关系进行了讨论     

福州部分荔枝古树花药胚性愈伤组织的诱导与保持

以福州"宋荔"等部分荔枝古树花药为试材,进行胚性愈伤组织诱导。结果表明,胚性愈伤组织诱导与植物激素的类型、浓度及其组合密切相关,大部分荔枝古树单株花药在M2中诱导率比M1高;同一培养基,不同荔枝古树单株间花药愈伤组织诱导率差异较大,在M1中,X11诱导率高达79.55%,H3的诱导率为0;刚诱导的愈伤组织胚性强,同一荔枝古树单株在不同培养基中体胚发生量不同。诱导出来的胚性愈伤组织在M1和M2培养基上,黑暗中交替培养4代后,转接到M1和M2激素减半的培养基中,于弱光下交替培养,可长期保存。     

陆地棉愈伤诱导及胚胎发生能力的遗传分析

 在特定培养条件下对62个陆地棉（Gossypium hirsutum L.）品种进行了离体培养研究。结果表明，基因型对愈伤组织的诱导率没有明显影响，但对体细胞胚胎发生能力影响很大。仅27.4%的品种有体细胞胚胎发生能力，其中胚胎发生能力较强的品种占11.3%,多数品种(72.6%)在本试验中未观察到胚状体形成。在含有IAA及KT的培养条件下，基因型对愈伤组织的生长速度有明显影响。双列杂交结果表明，基因型间愈伤组织生长速度和体细胞胚胎发生能力存在显著差异。愈伤组织生长速度的一般配合力、特殊配合力和反交效应都达到极显著水平。无胚胎发生能力的品种与有胚胎发生能力的品种杂交所得20个组合都不能形成胚状体，且F#-2代呈3:1的分离比例，表明体细胞胚胎发生受一对隐性主效基因控制。在有胚胎发生能力的基因型中，胚胎发生能力还存在量的差异，这种差异可能受一些修饰基因的控制。