不同时间间隔进行激活处理对猪早期ICSI胚发育的影响

[目的]探讨不同激活方法对胞质内显微受精（ICSI）猪卵母细胞原核形成及其早期发育的影响。[方法]以体外成熟44~48 h的猪卵母细胞为试材,通过用ICSI法对其进行受精,然后用不同激活方法激活,研究了不同激活方法对ICSI卵母细胞原核形成和早期胚胎发育的影响。[结果]化学激活处理组的猪卵母细胞的原核形成率显著高于没有经过激活处理组,Ion（5 min）＋6-DMAP（4 h）组的原核形成率为38.08%,Ion（5 min）＋NCSU23（3 h）＋6-DMAP（4 h）组的原核形成率为47.78%。各处理组的分裂率差异不显著,但2个激活处理组的分裂率较高。不经激活处理组的囊胚率为3.82%,Ion（5 min）＋6-DMAP（4 h）组的囊胚率为15.49%,Ion（5 min）＋NCSU23（3 h）＋6-DMAP（4 h）组的囊胚率为10.70%。[结论]2种激活方法的原核形成率和囊胚率差异不显著,都可用于ICSI猪卵母细胞的激活。     

不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

采用胞质内精子注射法（ICSI）构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精（ICSI）卵体外发育的影响。结果显示：成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%（175/185）、97.2%（173/178）和96.4%（189/196）（P〉0.05）;成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率（73.4%和70.9%）和囊胚发育率（31.8%和29.6%）显著高于成熟培养20 h的卵母细胞（61.1%和20.6%）（P〈0.05）。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率（72.7%和31.4%）高于未获能精子组（69.4%和29.3%）和不运动精子组（71.5%和30.4%）,但无统计学差异（P〉0.05）。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率（73.2%和66.9%）和囊胚发育率（32.7%和29.7%）差异不显著（P〉0.05）,但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率（51.0%和16.3%）（P〈0.01）。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。     

猪冷冻精子的体外受精与单精子胞浆内注射

用猪冷冻精子进行体外受精和单精子胞浆内注射(ICSI),并研究添加L-半胱氨酸及不同成熟培养法对猪ICSI胚胎发育的影响。结果表明:用猪冷冻精子生产的ICSI胚胎卵裂率及囊胚发育率分别为68.3%和11.4%,均低于用冷冻精子进行体外受精(IVF)所获得的卵裂率和囊胚发育率(分别为76.9%和19.2%,P<0.05)。在培养液中添加1.71mmol·L~(-1) L-半胱氨酸培养3 h,无论是卵裂率、桑椹胚发育率,还是囊胚发育率,均未得到明显改善(P>0.05);采用含0.4%BSA的NCSU-23培养液进行猪卵母细胞成熟培养,ICSI胚胎卵裂率虽明显高,但各组所获胚胎发育率均无显著差异(P>0.05),表明所用卵母细胞的成熟方法并未对ICSI胚胎发育产生明显的影响;用颗粒细胞或卵丘细胞共培养ICSI胚胎后,卵裂率有明显提高(P<0.05),但各组囊胚发育率无统计学差异。     

培养液对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎早期体外发育的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟质量,优化猪早期胚胎体外培养体系。[方法]以改良TCM199,NCSU-23培养液为基础液,分别添加10%的猪卵泡液（PFF）和10%的优质胎牛血清（FBS）进行卵母细胞体外成熟培养,以成熟率、孤雌胚胎体外发育率等为指标,研究不同培养液对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响。[结果]猪卵母细胞在TCM199,TCM199＋FBS和TCM199＋PFF组成熟42 h的成熟率分别为（54.2±3.5）%、（68.5±3.2）%和（69.3±3.7）%,在NCSU-23,NCSU-23＋FBS和NCSU-23＋PFF组成熟42 h的成熟率分别为（51.6±3.3）%、（63.2±3.1）%和（65.5±3.5）%,添加10%的FBS和PFF在0.05水平上显著提高了卵母细胞成熟率;6组不同成熟培养液得到的成熟卵母细胞在孤雌激活后囊胚发育率差异不显著,但TCM199＋PFF组的囊胚细胞数（36.5±4.8）在0.05水平上显著高于TCM199和NCSU-23组的囊胚细胞数（18.7±3.2和15.5±2.4）。[结论]改良TCM199,NCSV-23培养液中添加10%PFF和10%FBS可显著促进猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎早期体外发育。     

不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨体外受精时不同精子浓度对精子穿入成熟卵母细胞及后续发育的影响。[方法]以冷冻-解冻精子为材料,以1×106、1×107个/ml 2种精子浓度进行体外受精,研究不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响。[结果]当精子浓度为1×106、1×107个/ml时,精子穿入率分别为83.18%、88.23%,单精入卵率分别为40.55%、9.02%,多精入卵率分别为59.45%、90.98%,平均每个卵母细胞中的精子数分别为2.03、3.26个,雄原核形成率分别为84.10%、86.40%,单精入卵率、多精入卵率有显著差异(P<0.05),其他指标无显著差异(P>0.05)。[结论]该研究为应用冷冻-解冻精子建立猪卵母细胞的体外生产系统提供了依据。     

SrCl2联合CB及DMSO对小鼠卵母细胞孤雌激活试验

[目的]研究SrCl2联合CB及DMSO对小鼠卵母细胞孤雌激活及激活后胚胎发育的影响。[方法]选择不同浓度的SrCl2分别联合一定浓度的CB和DMSO对小鼠卵母细胞作用不同的时间,检测其卵母细胞的激活率及激活后卵母细胞的体外发育率。[结果]SrCl2联合DMSO对小鼠卵母细胞的孤雌激活率显著高于SrCl2联合CB（P〈0．05）,但激活后胚胎的囊胚发育率极低;SrCl2联合CB对小鼠卵母细胞的激活率〉80％,2mmolSrCl2,5μg／mlCB激活1h的囊胚发育率达45．5％,与其他组差异显著（P〈0．05）。[结论]2mmolSrCl2,5μg／mlCB作用1h对小鼠卵母细胞孤雌激活及激活后胚胎发育效果较好。     

猪单精注射胚与孤雌胚激活后的发育

用猪的冷冻精液,以不同的激活方法进行猪单精注射(ICSI)胚胎的生产.结果表明,联合应用电激活和化学激活所获ICSI胚卵裂率(79.28%)明显高于单纯电激活组卵裂率(58.77%),但两组桑囊胚发育率无统计学差异(31.58%对22.67%),电化学联合激活较单纯的电激活更有利于ICSI胚胎的发育.通过比较孤雌电激活胚与ICSI胚胎的发育情况,发现孤雌激活胚与ICSI胚在卵裂率、桑囊胚发育率上均无显著差异,表明现有实验电激活参数完全适用于猪ICSI胚胎的体外生产.     

显微操作时间对猪ICSI胚胎早期发育的影响

为了进一步优化现有的猪卵胞质内精子注射(ICSI)体系,探讨了ICSI操作时间对猪ICSI胚胎早期发育的影响情况.结果表明,囊胚形成率随着ICSI操作时间的延长而呈现明显下降趋势,其中卵母细胞在体外4 h内完成ICSI组的囊胚形成率(5.90 %)显著低于其他3个处理(P<0.01).可见,ICSI操作时间越长,其胚胎早期发育率越低.     

猪卵母细胞胞质内单精子注射影响因素的研究

探讨了猪卵母细胞胞质内单精子注射(ICSI)的有关影响因素。结果表明:在本实验室条件下,在体外成熟液中添加30 ng/mL的EGF可以明显促进ICSI胚胎的后续发育(P<0.05);当精子操作液中PVP浓度为20%时可以显著促进ICSI胚胎的后续发育(P<0.05);操作液中添加5μg/mL的CB对ICSI胚胎的发育没有显著影响。     

牛卵胞质内显微受精中第一极体位置与激活方法研究

【目的】探讨牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)操作中,卵母细胞第一极体位置以及受精卵化学激活方法对ICSI卵体外发育的影响。【方法】采集牛卵巢,成熟培养卵母细胞后,调整其第一极体分别位于相当于时钟6点和12点的位置,进行牛卵母细胞胞质内显微受精,以ICSI卵不进行激活处理为未激活组,分别采用乙醇、离子霉素及离子霉素联合6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)激活ICSI卵,统计ICSI卵的形态完整率、卵裂率和囊胚发育率。【结果】第一极体分别位于相当于时钟6点和12点的位置时,所获得的ICSI卵形态完整率(92.9%和94.0%)、卵裂率(37.1%和40.0%)和囊胚发育率(12.9%和12.2%)均无统计学差异(P>0.05)。未激活组ICSI卵的卵裂率较低,不能发育到囊胚;用乙醇或离子霉素激活时,ICSI卵的卵裂率(25.7%和27.6%)和囊胚发育率(3.3%和3.4%)均显著高于未激活组(7.5%和0)(P<0.05);用离子霉素与6-DMAP联合激活时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率分别为38.9%和13.9%,显著高于乙醇激活组、离子霉素激活组及未激活组(P<0.05)。【结论】对牛卵母细胞进行ICSI操作时,第一极体分别位于相当于时钟6点和12点位置时,对ICSI卵的发育无显著影响;采用离子霉素和6-DMAP联合激活,有利于ICSI卵的体外发育。     

Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子活力的影响

[目的]明确水体介质参数与高体雅罗鱼精子活力的关系,解决高体雅罗鱼人工繁殖受精率低及鱼苗鱼种生产效率低的技术难题.[方法]以快速运动时间(FT)、寿命时间(LT)和精子激活率为评价指标,探究Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子活力的影响.[结果]Na+浓度为135 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为71 s,LT为1020 s,精子激活率为95%;K+浓度为5 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为52 s,LT为280 s,精子激活率为80%;葡萄糖浓度为180 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为78 s,LT为1200 s,精子激活率为95%;甘油浓度为180 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为79 s,LT为1380 s,精子激活率为90%.[结论]适宜浓度的Na+、K+、葡萄糖及甘油具有单独提高高体雅罗鱼精子活力的作用,但高浓度Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子的激活率呈明显抑制作用.实际生产中,可选择135 mmol/L Na+、5 mmol/L K+、180 mmol/L葡萄糖或180 mmol/L甘油作为高体雅罗鱼精子的激活液,提高其人工繁殖生产效率.     

超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的研究(英文)

[目的]该研究旨在观察超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的影响。[方法]通过精子运动度、膜完整率及顶体完整率评价4种冷冻保护剂、冷冻时距液氮面3种不同高度及添加物(SDS和Vc)对精子超低温冷冻效果的影响;在此基础上,在扫描电镜和透射电镜下观察超低温冷冻对精子超微结构的影响。[结果]试验1表明,EG作为冷冻保护剂获得了最好的冷冻效果,解冻后精子运动度、膜完整率及顶体完整率分别为36.3%、38.0%和42.0%。但EG和甘油作为冷冻保护剂并无显著差异存在(P>0.05)。试验2表明,距离液氮面5cm冷冻时冷冻效果最好。但除顶体完整率外,冷冻高度2和5cm间不存在显著差异(P>0.05)。试验3表明,稀释液中单独或共同添加十二烷基磺酸钠(SDS)和维生素C(Vc)均能改善精子冷冻-解冻效果。单独添加SDS或Vc时,除单独添加Vc组表现精子冷冻-解冻后运动度更低外(P<0.05),其它指标并无显著差异存在(P>0.05)。共同添加SDS和Vc时,精子冷冻效果最好,精子解冻后运动度、膜完整率和顶体完整率分别为44.1%、48.0%和48.2%。超微结构显示超低温保存引起藏獒犬精子不同程度的损伤,顶体损伤更严重,如顶体肿胀、囊泡化,甚至顶体消失。[结论]冷冻保护剂EG、距液氮面5cm高度及共同添加SDS和Vc可提高精子超低温保存效果,但超低温对精子超微结构仍具有一定损伤作用。     

绵羊精子提取物对卵母细胞的孤雌激活作用

研究了绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞的孤雌激活作用,确定了绵羊精子提取物的最佳注射剂量,并将其孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果进行了比较。结果表明,绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞有孤雌激活作用,最佳注射剂量为每个绵羊卵母细胞注入2~4 pL浓度5~6 m g/mL的绵羊精子提取物;绵羊精子提取物的孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果差异不显著。     

pH、葡萄糖以及金属离子对翘嘴红鮊精子活力的影响

[目的]为翘嘴红鲌人工繁殖中最佳受精激活介质的选择提供理论依据。[方法]采用平板载片法,研究了pH、葡萄糖和Na＋、K＋、Ca2＋、Mg2＋等金属离子及河水、瀑气自来水、去离子水和蒸馏水对翘嘴红鮊精子活力的影响,探讨翘嘴红鮊精子在不同溶液中的活力变化。[结果]翘嘴红鮊精子活力受pH和葡萄糖、Na＋、K＋、Mg2＋、Ca2＋浓度的影响。Na＋是激活翘嘴红鮊精子的主要因子。Mg2＋是抑制翘嘴红鮊精子活力的主要因子。4种水体中翘嘴红鮊精子活力的顺序依次为河水〉瀑气自来水〉去离子水〉蒸馏水。[结论]翘嘴红鮊人工授精的激活溶液宜采用河水配制,pH 8.5,且应含75 mmol/L Na＋、0.7 mmol/L K＋、3 mmol/L Ca2＋和1 g/L葡萄糖。     

计算机辅助精液分析系统对食蟹猴精液的分析

[目的]用计算机辅助精液分析系统（CASA）对食蟹猴精液进行分析,以揭示食蟹猴的精液生物学特性。[方法]采用CASA系统对29例雄性食蟹猴精液样本进行分析。[结果]静态特性：食蟹猴的精子密度为（2 134.53±2 052.87）M/ml;活动精子密度为（1 955.36±1 939.59）M/ml,活动精子百分率为（88.79±9.09）%;前向运动精子密度为（1 263.98±1 271.13）M/ml,前向运动精子百分率为（59.58±16.43）%;快速相细胞百分率为（82.76±13.10）%。食蟹猴精子的平均路径速度为（133.78±58.22）μm/s,直线速度为（121.43±56.64）μm/s,曲线速度为（169.78±52.39）μm/s,精子头侧摆幅度为（4.19±0.72）μm,平均摆跨频率（鞭打次数）为（29.79±4.30）Hz,前向性为（84.62±5.46）%,直线性为（63.62±13.07）%。②食蟹猴精子的快速相浓度为（1 844.97±1 875.96）M/ml,百分率为（82.76±13.10）%;中等相浓度为（110.18±139.33）M/ml,百分率为（5.93±5.26）%;慢速相浓度为（85.74±144.32）M/ml,百分率为（3.62±2.90）%;静止相浓度为（93.99±72.85）M/ml,百分率为（7.69±8.20）%。食蟹猴精子的头长比为（61.93±4.4.14）%;头部面积为（7.33±1.22）μmsq。[结论]该研究为在人工饲养食蟹猴的繁殖实践中进行精液品质鉴定提供依据。     

高体革鯻精子超低温保存方法研究

[目的]对高体革鯻（Scortum barcoo）精子的超低温保存技术进行研究。[方法]首先,用精子活力为标准确定稀释液中NaCl和KCl的最佳浓度;然后,使用二甲亚砜和甘油分别作为抗冻剂,进行超低温保存试验,测定高体革鯻精子复活率和活力。[结果]稀释液中含0.750%NaCl和0.025%KCl时,效果最佳。当二甲亚砜浓度为10%,葡萄糖为5%时,精子复活率和活力分别达到了68.2%和60.7%,保存效果最佳。[结论]稀释液中NaCl和KCl的浓度,对精子活力有明显影响;使用二甲亚砜作为抗冻剂进行低温保存的效果优于甘油;在抗冻保护剂中加入适量葡萄糖会提高保存效果。     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

微滴中胚胎数量对猪孤雌胚早期体外发育的影响

[目的]优化猪早期胚胎培养体系,为单精子显微受精及体细胞核移植等研究提供依据。[方法]以猪的早期孤雌胚胎为材料,分别将人工激活后的70、50、30、15和5枚卵母细胞放入100μlNCSU-23培养液的微滴中进行培养,探讨了胚胎培养数量对猪早期孤雌胚发育的影响。[结果]100μl的培养微滴中培养30、50和70胚胎组,其分裂率分别为64.0%、65.2%和67.1%,显著高于5胚胎组,而与15胚胎组的差异不显著 在囊胚率方面,70胚胎组的最高,为3.0%,与50胚胎组的（1.7%）无显著差异,与5、15和30胚胎组的差异显著 各组的囊胚细胞数之间没有显著差异。[结论]在该研究条件下,当微滴体积为100μl时,培养50~70枚猪孤雌胚胎的效果最好,即,胚胎数∶培养滴体积=（1∶1.43~2.00）。