拮抗细菌对烟草黑胫病的防治效果研究

采用温室盆栽试验测试5株芽孢杆菌属生防细菌对烟草黑胫病的拮抗作用。结果表明,拮抗细菌芽孢杆菌1205对苗期烟草黑胫病有较稳定的防治效果,其分泌物还有促进烟株生长的作用,经鉴定1205菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。     

烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选和鉴定

为寻找防治烟草黑胫病新途径，2001至2003年，从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株，共分离到内生细菌株120株，经测定，8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用，这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示，55y，NN-3，YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑茵效果均在66%以上．根据内生细菌形态特征和生理生化性状，初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌，NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌，YN-4，YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌，且这4菌株均为烟草内生细菌．     

烤烟K326种子可培养内生细菌的分离与鉴定

采用NA、KB、R2A和TSA 4种培养基分离烟草品种K326种子中的可培养内生细菌,并选择其中的50株外观形态特征有显著差异的菌株进行了16S r DNA测序与分析。结果表明,烟草K326种子中携带有大量可培养内生细菌,培养获得菌落总数约为8.1×105cfu/g;主要分为假单胞菌属、寡养单胞菌属、芽孢杆菌属、贪铜菌属和杆菌属等5个属,其中优势内生菌为嗜麦芽寡养单胞菌、假单胞菌和芽孢杆菌,分别占菌种总数的34%、32%和26%。     

烟草黑胫病拮抗细菌的筛选及鉴定

从毕节8个县市种植烟草的田地采集土壤样品122份,共分离到细菌菌株630株,经平板对峙培养初筛到31株对烟草疫霉有拮抗作用的菌株,再次筛选表明5株细菌菌株在室内有较强的拮抗作用.通过形态特征观察、生理生化特征测定及16SrDNA序列分析,鉴定拮抗细菌1107为芽孢杆菌属短小芽孢杆菌,7403、1205、1601、5801为芽孢杆菌属.     

菌株SYT-SF的筛选鉴定及生防效果验证

为筛选拮抗烟草黑胫病病原烟草疫霉（Phytophthora parasitica var. nicotianae）的生防菌资源,本研究对连作烟田烟草黑胫病发病地块的健康烟株根际土壤中的细菌进行了分离培养、筛选,并对抑菌效果较好的菌株进行了鉴定及生防效果试验。结果表明：从根际土壤中共分离到35株菌,其中菌株SYT-SF对烟草疫霉的拮抗作用最强,抑菌率达到77.15%;菌株SYT-SF具有较好的抑菌广谱性;依据菌株SYT-SF的形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列及gryA基因序列分析,将SYT-SF归属于假单胞菌属（Pseudomonas）,暂定名为Pseudomonas sp. SYT-SF。盆栽试验表明,菌株SYT-SF预防组和治疗组对烟草黑胫病的生防效果分别达到71.97%和65.05%。菌株SYT-SF在烟草黑胫病生防菌剂及植烟土壤保育菌剂开发方面具有良好的应用潜力。     

烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选

采用稀释分离法从黔南州采集的健康烟草组织中分离获得烟草内生细菌153株,通过平板对峙试验,从中筛选出2株对烟草黑胫病菌具有明显抑制作用的菌株LPN07和LPN09,其对黑胫病菌菌丝生长的抑制率分别为68.99%和65.97%。经16S rDNA序列分析,菌株LPN07和LPN09被鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)细菌。     

烟草黑胫病菌拮抗细菌的筛选与鉴定

从烟草根际土壤分离到107个细菌分离物,通过室内平板对峙培养筛选,筛选到13株对烟草黑胫病菌有拮抗作用的菌株,其中,LZ-7菌株的室内平板抑菌效果最好,抑菌圈直径达27.82 mm。经盆栽试验,LZ-7、A3控病作用较好,防治效果分别达59.12%和55.84%。通过16 S rDNA序列测定与分析,LZ-7与Bacillus pumilus的同源性为99%,初步鉴定证明该菌株属于短小芽孢杆菌。     

烟草黑胫病拮抗细菌的筛选及其发酵条件优化

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从四川省凉山州5个县(市)烟草种植田地采集10份土壤样品,通过稀释平板法分离得到112株细菌。采用平板对峙法获得39株对烟草黑胫病病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)拮抗效果较好的细菌。选取拮抗效果最好的GC-38菌株进行进一步研究,结果显示,菌株GC-38对烟草黑胫病病菌抑制率为81.81%,经鉴定菌株GC-38为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliauefaciens)。优化后得到其最佳发酵条件:碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨,pH值为9.0,温度在30~35℃范围内。可见,GC-38菌株对烟草黑胫病有明显的拮抗作用,是具有较大开发潜能的生防菌株。     

烟草赤星病拮抗生防菌BS06-1的筛选

[目的]筛选对烟草赤星病具有明显拮抗作用的细菌。[方法]应用平板对峙培养法对从烟草根际分离到的细菌进行烟草赤星病拮抗性鉴定,对其中对烟草赤星病菌拮抗性较高的一株细菌利用细菌16S rRNA通用鉴定引物进行PCR扩增、测序和田间抗病性试验。[结果]共从烟草根际分离120份细菌,有6份对烟草赤星病病原菌具有一定拮抗作用,其中1份细菌拮抗作用明显,定名为BS06-1。将该细菌的16S rRNA测序结果登录NCBI网站进行Blastn序列比对,结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌BSD-2同源性达到96%,与枯草芽孢杆菌BCRC 14718同源性达到95%,证明该菌属于枯草芽孢杆菌。田间试验证明该菌株BS06-1对烟草赤星病具有显著的抑菌效果。[结论]BS06-1细菌对烟草赤星病具有明显拮抗作用。     

基于宏基因组学16S rDNA测序对烟草根际土壤细菌群落组成分析

为了研究烟草根际土壤细菌多样性,了解其细菌群落的组成和结构,从而为健康植烟土壤生态系统的构建和保持提供理论依据和指导。以2014年四川凉山州健康烟株现蕾期根际土壤为研究样本,利用Illumina平台Miseq高通量测序技术对烟草根际土壤细菌16S rDNA进行高通量测序分析。结果表明:烟草根际土壤微生物多样性水平较高,不同样品间主要菌落分布结构相对稳定。在门分类水平上,共检测分类25个菌门,其中变形菌门占有明显优势(39.04%~53.71%),其次为拟杆菌门、酸杆菌门、疣微菌门;在属分类水平上,共检测分类576类菌属,鞘脂单胞菌属、Flavisolibacter、Ohtaekwangia为烟草根际土壤细菌明显优势菌属。大部分主要菌群之间存在明显正相关关系,对烟草根际土壤细菌影响较大的环境因子为土壤速效氮、含水量和pH。运用宏基因组学16S rDNA测序技术获取的烟草根际土壤细菌信息较为丰富,为健康植烟土壤机制研究提供新的理论参考。     

烟草根黑腐病不同发病程度与土壤养分及微生物群落的关系

【目的】分析烟草根黑腐病发病程度对土壤养分及微生物群落结构的影响,探究不同病害发生条件下土壤环境、微生物群落间的关系,为烟草根黑腐病防控提供理论依据。【方法】以贵州省安顺烟区为调查区域,收集烟草根黑腐病不同发病程度(0、1、3、5级)烟株根际土壤,测定土壤理化性质;采用16S rDNA和ITS基因测序技术进行分析,探讨不同发病程度下烟株根际土壤养分、细菌及真菌群落结构差异。【结果】与正常土壤相比,随着病害程度的加重,土壤细菌群落的均匀度和丰富度降低,而真菌群落的均匀度和丰富度升高。与正常土壤相比,发病土壤中细菌群落鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、Candidatus_Udaeobacter、苔藓杆菌属(Bryobacter)和芽单胞菌属(Gemmatimonas)相对丰度下降,而芽孢杆菌(Bacillus)丰度上升;同时真菌群落镰刀菌属(Fusarium)、柱孢属(Cylindrocarpon)、毛霉属(Mucor)丰度下降,而Nicotiana、茎点霉属(Setophorna)、亡革菌属(Thanatephorus)、锥毛壳属(Coniochaeta)、织球壳菌属(Plectosphaerella)和四枝孢属(Tetracladium)丰度上升。指示物种分析结果表明,芽单胞菌属、织球壳菌属和四枝孢属可能是不同发病程度土壤细菌、真菌群落属水平差异的主要物种。冗余分析(RDA)和方差分解分析(VPA)结果表明,土壤铵态氮(NH-N)和有机质(SOM)是细菌、真菌群落结构发生变化的主要驱动因子。【结论】根际土壤中细菌芽单胞菌属丰度的下降和真菌四枝孢属丰度的上升是烟草根黑腐病严重发生的关键微生物因素,提高土壤SOM和NH-N含量能有效降低烟草根黑腐病发病程度。     

健康与感染黑胫病烟株根际土壤细菌群落结构与多样性

[目的]探究健康与感染黑胫病烟株根际土壤的细菌群落结构差异,为该病害的早期预防或生态调控提供科学依据.[方法]利用Illumina MiSeq高通量测序技术分析健康烟株与感染黑胫病烟株根际土壤细菌群落结构差异.[结果]健康和患病烟株根际土壤样品中细菌OTU数分别为4763个和4653个.感染黑胫病烟株根际土壤OTU总数...     

烟草黑胫病拮抗链霉菌筛选及田间防效试验

筛选用于防治烟草黑胫病的拮抗链霉菌,并可作为化学药剂补充或替代品。采用稀释平板法分离土壤链霉菌,采用平板对峙法筛选拮抗链霉菌,通过形态观察、生理生化试验及16S rRNA序列分析鉴定目标菌株,通过田间小区试验评价目标菌株的生防潜力和对烤烟的促生效果。从贵州省湄潭县采集烤烟根际土壤,分离到放线菌73株。从中筛选获得1株对烟草黑胫病菌拮抗效果良好的菌株MT35,该菌鉴定为郝氏链霉菌(Streptomyces halstedii)。结果表明,施用MT35后烟株茎围、茎高和叶宽均有增加,对烟草黑胫病的防效良好,相对防效为75.3%。筛选到1株对烟草黑胫病菌有强拮抗作用的郝氏链霉菌(S.halstedii)MT35,该菌对烟草黑胫病具有良好的田间防效且对烟株具有促生效果。     

抗重金属铜细菌的分离鉴定和吸附性能研究

从土壤中分离具有抗重金属铜的细菌,用于去除废水中的重金属铜。对保定近郊炼铜厂排污口处的土样中进行分离,得到15株形态不同的细菌,经鉴定,分别属于芽孢杆菌属(Bacillus),假单胞菌属(Pseudomonas),节杆菌属(Arthrobacter),短波单胞菌属(Brevundimonas),寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和盐单胞菌属(Halomonas)。这15株细菌都具有铜吸附能力,其中吸附能力最好的是菌株764。     

烟草连作病害土壤与连作非病害土壤的细菌群落差异性比较

通过对烟草连作病害土壤、连作非病害土壤及新垦植烟土壤细菌群落结构间的差异性比较，为以微生物手段减少烟草连作病害提供一定的理论依据。采用宏基因组高通量测序技术，测定分析三类土壤的细菌群落结构。结果表明，连作病害土壤细菌总OTUs与独有OTUs最多，群落结构相似，同源性高；连作病害土壤中的蓝细菌门（Cyanobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、假单胞菌属（Pseudomonas）、铁矿沙单孢菌属（Arenimonas）、厌氧绳菌属（Bellilinea）、节杆菌属（Arthrobacter）、黄杆菌属（Flavobacterium）、类诺卡氏菌属（Nocardioides）占比显著高于连作非病害土壤和新垦土壤。连作非病害土壤样本间细菌群落结构差异较大，同源性较低。新垦土壤细菌慢生根瘤菌属（Bradyrhizobium）、酸土单胞菌属（Aciditerrimonas）、分枝杆菌属（Mycobacterium）、鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）、红游动菌属（Rhodoplanes）5个属所占比例较高，但硝化螺旋菌属（Nitrospira）占比较低，细菌群落结构...     

烟草黑胫病拮抗菌XA-1的筛选·鉴定及其抑制作用研究

[目的]有效预防和控制恩施种植区域烟草黑胫病害。[方法]通过表面消毒分离、平板共培养、分子生物学鉴定、室内盆栽方法筛选、鉴定及评价菌株抑制活性。[结果]从恩施健康烟草植株中分离筛选出一株对烟草黑胫病病原菌有显著拮抗活性的菌株XA-1,该菌株的胞外分泌物对病原菌菌丝有强烈的抑制作用,通过Biolog微生物系统和分子生物学分析,初步鉴定该菌株属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliauefaciens),经室内盆栽试验评价,拮抗菌XA-1能有效地降低烟草黑胫病的病情指数,在第20天时相对防效最高为52.38%。[结论]菌株XA-1在防治烟草黑胫病方面效果明显,具有潜在的生物防治应用价值。     

烟草疫霉生防菌的筛选及鉴定

为了筛选对烟草疫霉菌具有拮抗作用的生防放线菌菌株,从烟草黑胫病病田采集健康烟株的根际土样,采用稀释涂布分离法与对峙培养法筛选得到32株对烟草黑胫病具有拮抗作用的放线菌菌株,其中编号为F-7的菌株对烟草疫霉菌的抑制作用最强且效果稳定,抑菌率为83.11%；经形态学观察、生理生化测定以及16S rDNA基因序列分析,将该菌株鉴定为波卓链霉菌；通过光学显微镜观察,F-7菌株对烟草疫霉菌丝生长和孢子萌发都具有显著的拮抗作用。     

烟草黑胫病生防茵筛选及防效初探

为筛选出烟草黑胫病生防菌,探索烟草黑胫病有效防治方法;采集了云南省9个地州29个县的141个采集土样,采用土壤稀释平板法进行微生物分离和平板对峙培养法进行筛选：分离筛选出280个对黑胫病菌有拮抗作用的菌株,其中抑菌半径大于17mm的拮抗菌有19株。盆栽和田间防效试验表明,以HJ01912表现最好,田间防效达到73．8％;综合以上结果得出：各生防菌株对黑胫病均表现一定的防效,有些生防菌田间防效与化学药剂相当,能有效控制烟草黑胫病。     

烟草青枯病拮抗菌TBWR1的筛选鉴定及防病促生能力

【目的】分离对烟草青枯病菌具有拮抗作用的细菌并对菌株进行分类、鉴定,以丰富烟草青枯病生防菌菌种资源。【方法】从健康烟株根际土壤中筛选拮抗菌株,测定其形态、生理生化特征及16S rDNA序列等,并对菌株进行分类鉴定,通过盆栽试验验证拮抗菌对烟草青枯病菌的拮抗活性及其对烟株的促生作用。【结果】在烟株根际土壤中分离获得1株对烟草青枯病有明显抑制作用的菌株TBWR1,序列基因登录号为EF562603,菌株TBWR1与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KC849252和Bacillus subtilis MN062963在同一分支上且同源性达85%,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株对烟草青枯病的生防效果达71.1%,并能显著促进烟草株高、叶长、茎围生长和根系生物量增加。【结论】枯草芽孢杆菌TBWR1可作为烟草病害生物防治的候选菌株,在烟草青枯病防治中具有潜在价值。     

烟草内生细菌多样性研究

为了揭示烟草内生细菌多样性,选择K326、云85 和红花大金元3 个烤烟品种进行内生细菌的 分离和16S rDNA 序列分析鉴定,获得不同品种烟草内生细菌的多样性特征。结果显示,27 株内生细菌分 别属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（33%）、蕈状芽孢杆菌Bacillus mycoides（4%）、芽孢杆菌属Bacillus sp.（11%）、肠杆菌属Enterobacter sp.（4%）、寡养单胞菌Stenotrophomonas sp.（4%）、热带根瘤菌Rhizobium tropici（4%）、假单胞菌属Pseudomonas sp.（4%）、土地芽孢杆菌属Terribacillus sp.（4%）,芽孢杆菌属 Bacillus sp. 为优势细菌类群。3 个品种的 Shannon index（H′）以K326 最高、为2.02,其次是云85、为1.48,红 花大金元最低、为1.3。