多花水仙花朵全长cDNA文库的构建

采用SMART技术,以多花水仙‘黄花水仙2号’盛开期花朵为材料,构建其全长cDNA文库,并对文库质量进行鉴定．结果表明,所构建初始文库的滴度为6.30×10^5 cfu·mL^-1,扩增后文库的滴度为1.58×10^8 cfu·mL^-1,重组率为84％,插入片段大小集中在500-2000bp之间,平均长度约970bp,符合eDNA文库的质量标准．可见,所构建的文库比较完整,能够反映黄花水仙花朵盛开期基因的表达情况．     

双低油菜华双3号幼苗全长cDNA文库的构建

利用RNA5′端模板转换技术,以甘蓝型双低油菜华双3号幼苗为材料,构建了其全长cDNA文库。结果表明:文库的原始滴度为1.25×106pfu·mL-1,重组率为87.3%;扩增后的文库滴度为1.13×109pfu·mL-1。随机挑取12个噬菌斑,利用PCR扩增插入片段,电泳结果显示其长度在0.6～1.5kb之间。     

缺刻缘绿藻cDNA文库的构建

缺刻缘绿藻（Myrmecia incise）富含花生四烯酸（arachidonic acid,AA）,是迄今为止所知道的花生四烯酸含量最高的藻类。采用Trizol法提取总RNA,然后按照Clontech公司的SMART cDNA文库构建的方法,构建了缺刻缘绿藻的cDNA文库,测得的原始文库滴度为6×10^6pfu／mL,随机挑选文库的阳性单克隆进行PCR鉴定,扩增出的片段主要集中在0．5-1．5kb,平均插入片段长度约为1kb,文库的重组率达95．83％,说明本实验所构建的cDNA文库质量合格。     

缺刻缘绿藻cDNA文库的构建

缺刻缘绿藻（Myrmecia incise）富含花生四烯酸（arachidonic acid,AA）,是迄今为止所知道的花生四烯酸含量最高的藻类。采用Trizol法提取总RNA,然后按照Clontech公司的SMART cDNA文库构建的方法,构建了缺刻缘绿藻的cDNA文库,测得的原始文库滴度为6×10^6pfu／mL,随机挑选文库的阳性单克隆进行PCR鉴定,扩增出的片段主要集中在0．5-1．5kb,平均插入片段长度约为1kb,文库的重组率达95．83％,说明本实验所构建的cDNA文库质量合格。     

播娘蒿角果全长cDNA文库的构建与分析

以播娘蒿成熟期角果为材料,采用SMART技术构建了其全长cDNA文库。该文库的原始滴度为1.49×106pfu/ml,重组率为91.42%,扩增后文库滴度为1.15×109pfu/ml,随机挑取10个噬菌斑,PCR扩增插入片段,其长度为800～2000bp,表明所构建的文库达到了目的基因分离和克隆的要求。     

沙门氏菌诱导后家蝇幼虫cDNA文库的构建

采用沙门氏菌以针刺法诱导家蝇三日龄幼虫,提取诱导后培养24 h的家蝇幼虫总RNA,进一步分离、纯化其mRNA,运用SMART技术构建家蝇幼虫cDNA文库.结果表明:原始文库的滴度为1.55 × 106 pfu/mL,原始文库重组宰为99.5%,文库扩增后滴度达1.27 × 10 pfu/mL.从扩增文库随机挑取10个噬菌斑克隆进行PCR扩增鉴定,结果显示所选的lO个噬菌体克隆均合有重组的cDNA,插入片段大小为400～1 500 bp.     

CAP-trapper法构建台湾乳白蚁中后肠全长cDNA文库

通过CAP-trapper法构建台湾乳白蚁的中后肠全长cDNA文库,经过中后肠总RNA的提取、mRNA的纯化与分离、cDNA双链的合成、cDNA大片段的分级分离与回收、载体的连接,体外包装等步骤,获得了滴度为1.6×106pfu/mL,重组率为98.7%,库容量为5.6×107cfu的初级文库,扩增后文库滴度为8.5×109pfu/mL,插入片段平均大小为2.1 kb,插入片段全长率约为44%。这表明利用该方法构建台湾乳白蚁中后肠cDNA文库切实可行。     

蓝点马鲛头肾cDNA文库的构建及鉴定

研究运用SMART技术对蓝点马鲛头肾构建了cDNA文库,该文库原始文库滴度为2.26×106pfu/m L,文库容量为1.36×106pfu,符合文库构建的要求。从文库中随机挑选24个单克隆菌,以载体的通用引物进行菌落检测PCR,结果表明:重组率为95.8%,插入片段大小平均为1 000bp。该文库的构建满足了基因的分离与筛选,为进一步研究其相关基因克隆及分子生物学研究奠定基础。     

津田芜菁直根皮cDNA文库的构建及ESTs测序质量的分析

利用Trizol法从津田芜菁中提取总RNA,分离纯化富含Poly(A)+的mRNA,反转录合成双链cDNA,并以λ-ZAP为载体,构建了津田芜菁cDNA文库。以XL1-Blue为受体菌,测定原始文库的滴度为4. 3×106pfu/mL,重组率为96%,扩增后文库总滴度为6×1010pfu/mL。对随机提取的质粒进行PCR鉴定,表明插入片段大多分布在0. 5~2. 0kb之间。文库质量鉴定结果表明,构建的津田芜菁直根皮cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。对3 020个克隆的序列测定表明,获得可用序列2 718个,测序成功率为90%,首批共获得652个芜菁直根皮ESTs。     

鲤脑组织cDNA文库的构建及鉴定

用Gubler—Hoffman法构建了耐低温鲤Cyprinuscarpio脑组织全长cDNA文库,经测定库容量为5．7×10^5cfu／mL,文库的重组率接近95％,平均插入片段长度为1500bp,符合文库保存和筛选实验的要求。同时,根据鲤与低温相关的消减eDNA文库中低温下特异表达基因的片段序列,设计了PCR引物,并在此eDNA文库中进行PCR检测和序列测定。使用BLAST软件将测序的10个cDNA序列同GenBank等数据库进行比对,结果显示,8个阳性克隆有相关同源性,2个克隆为功能未知的基因,全长率接近75％。     

巴西橡胶树胶乳酵母双杂交cDNA表达文库的构建及分析

提取巴西橡胶树胶乳总RNA,并纯化mRNA.采用特异引物（oligo-dT）反转出第一链DNA,经LDPCR合成第二链DNA.将ds cDNA和经Sma Ⅰ线性化的pGADT7-Rec质粒共转化Y187酵母菌,构建酵母双杂交cDNA表达文库.结果表明,转化单菌落个数为2.8 ×107;文库滴度为4.92×107·mL-1;插入片段大小主要分布于500 ～2 000 bp间;重组率为96％.实验数据表明该文库能满足后续的杂交筛选.     

生物药剂防治两色绿刺蛾的研究

应用浸渍法选用5种不同浓度的白僵菌和苏云金杆菌,分别对两色绿刺蛾2龄初幼虫进行致病力测定,结果表明：白僵菌对2龄初幼虫致病力回归线方程为y=3.2363＋0.2729x,其LC50为2.90×106孢子.ml-1,且5×10^6、5×10^7、5×10^8、5×10^9、5×10^10孢子.ml-1不同浓度的LT50分别为8.62d、7.72d、7.25d、6.07d和5.66d。苏云金杆菌对2龄初幼虫致病力回归线方程为y=3.2889＋0.2919x,其LC50为7.28105伴孢晶体.ml-1,且8×106、8×107、8×108、8×109、8×1010伴孢晶体.ml-1不同浓度的LT50分别为7.62d、5.87d、4.84d、4.33d和4.21d。根据正交试验均值最大值的组合原理,混合生物药剂的最佳组合为c1b2a3,即1%阿维菌素5000倍液＋白僵菌20倍液＋苏云金杆菌3000倍液;而混合生物与化学药剂的最佳组合为A1C2B2,即20%杀灭菊酯8000倍液＋1%阿维菌素10000倍液＋白僵菌20倍液,经林间应用防治效果较好。     

黑龙江省土著根瘤菌制剂最佳施用浓度筛选

为了解黑龙江省土著根瘤菌制剂对大豆生长的影响,筛选出最佳使用浓度,以结瘤能力较强的根瘤菌菌株为试材,通过活化、摇床培养设定4个浓度梯度,混拌接种于大豆,在结荚期测定其植株生物量、根瘤鲜重、根瘤干重和根瘤数,并于成熟期对其产量构成因子进行测定分析。结果表明:大豆接种根瘤菌后,叶片颜色深绿、株高升高,单株根瘤数目增加,并在结荚期达到结瘤高峰。根瘤干鲜比随着根瘤菌液浓度的变化呈现抛物线状,菌细胞0.8×108个·mL-1浓度处理的根瘤干鲜比最高,对照根瘤菌液处理的根瘤干鲜比明显高于试验中各菌液处理的根瘤干鲜比。接入根瘤菌处理的大豆生物量均高于菌液对照处理及清水对照处理,菌细胞0.6×108个·mL-1处理的生物量达到最高。低浓度菌液处理的根冠比小于高浓度菌液处理。株高、单株荚数、单株粒数随着根瘤菌液浓度的变化也呈现出抛物线状,菌细胞均以0.6×108个·mL-1根瘤菌液浓度处理最高。根瘤菌液各浓度处理的百粒重变化不大,略高于菌液对照处理而显著高于清水对照处理。因此,黑龙江省土著根瘤菌制剂推荐使用浓度菌细胞0.6×108个·mL-1。     

一种简便的胡麻枯萎病抗性鉴定方法——胚根接种法

采用胚根接种法鉴定胡麻抗枯萎病,具有操作简便,试验时间短,病害症状明显易调查,结果可靠的特点,接种浓度以5×105～1×106个孢子/mL为宜,接种后16～20 d的枯萎株率可作为评判品种的抗性依据。     

壳聚糖对烟草黑胫病菌抑制作用

以烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var nicotianae,Ppn）为材料,探讨了4种不同分子量的壳聚糖、壳聚糖的浓度和pH对烟草黑胫病菌的影响。结果表明,壳聚糖处理后烟草黑胫病菌菌丝出现畸变,正常的新陈代谢和细胞壁结构受到明显影响和破坏。在低浓度下（0．625mg·L^-1）,壳聚糖抑菌效果随分子量增大而增强;分子量越小受浓度影响越大,浓度≥5mg·L^-1时,分子量为4．7×10^4的壳聚糖抑菌效果最强。除分子量5．0×10^3的壳聚糖外,其它分子量较大的壳聚糖受pH影响明显。壳聚糖分子量不同,其抑菌主要机理可能也不同,浓度、pH和分子量对其抑菌活性具有较强的影响。     

氨氮质量浓度对感染白斑综合症病毒的凡纳滨对虾的影响

研究了氨氮质量浓度渐变和突变对白斑综合症病毒(WSSV)在凡纳滨对虾体内增殖的影响。结果表明:在氨氮质量浓度突变组实验中,氨氮质量浓度从起始浓度0.05 mg·L-1向中浓度1.25 mg·L-1和高浓度3.0 mg·L-1突变过程中对凡纳滨对虾的累积死亡率和对虾体内病毒增殖影响显著(P0.05),先氨氮突变后感染WSSV实验中氨氮起始、中、高浓度胁迫下对虾累积死亡率分别为25.6%,34.4%和48.9%;病毒含量最大值分别为9.59×105,5.75×106,1.62×106copy·g-1。先感染WSSV后氨氮突变实验中氨氮起始、中、高浓度胁迫下对虾累积死亡率最大值分别为30%,38.9%和48.9%;病毒含量最大值分别为9.59×105,9.58×105,4.94×106copy·g-1,氨氮浓度渐变实验中各组至24 h对虾累积死亡率较低(P0.05),48 h后开始出现显著差异(P0.05)。先氨氮渐变后感染WSSV实验中氨氮起始、中、高浓度胁迫下对虾累积死亡率最大值分别为28.9%,30.0%和45.6%,病毒含量最大值分别为9.59×105,4.48×106,1.86×106copy·g-1。先感染WSSV后氨氮渐变实验中氨氮起始、中、高浓度胁迫下对虾累积死亡率分别为25.6%,33.3%和45.6%;病毒含量最大值分别为9.59×105,8.58×105,6.55×106copy·g-1。这表明对于携带WSSV的对虾,氨氮变化越大,WSSV从潜伏感染转为急性感染的可能越大,所以控制水质中氨氮含量在低浓度水平对预防WSS爆发至关重要。     

不同给药方式下恩诺沙星在鲤体内的药动学研究

对两组鲤分别进行腹腔注射、口灌恩诺沙星后,应用高效液相色谱法测定了其组织中的药物浓度,研究了恩诺沙星在鲤（Cyprinus carpio）体内的吸收、分布与消除等药代动力学参数．结果表明：两种给药方式下,鲤血浆、肝脏、肾脏和肌肉组织的药时曲线符合一级消除二室模型．腹腔注射给药血浆动力学参数：AUC为59．1856μg·h·mL^-1、K为75．7627h^-1、t1／2B为96．5456h、T（peak）为0．0730h、C（max）为3．2970μg·mL^-1;灌服给药血浆动力学参数：AUC为600．2961μg·h·mL^-1、Ka为0．1693h～、t1／2β为168．2871h、T（peak）为3．6655h、C（max）为3．2661μg·mL^-1．这说明腹腔注射给药比口灌给药吸收快,血药达峰时间短,达峰浓度高．     

8种植物提取物对番茄灰霉病菌抑菌活性的研究

采用生长速率法测定了8种植物丙酮和甲醇提取物对番茄灰霉病原真菌的生物活性。结果表明：多数提取物对番茄灰霉病原真菌有一定的活性;在50×10^-3g·mL^-1浓度下防风、落叶松和五味子的甲醇提取物的72 h抑制率分别为58.19%、80.41%、77.49%;蝙蝠葛、落叶松枝、落叶松叶、五味子丙酮提取物对病菌的72 h抑制率较高分别为82.26%、76.42%、66.60%。     

应用CASA模型估算浙江省植被净初级生产力

自然植被和生产力的变化是表征区域生态环境质量变化的重要指标,利用CASA (Carnegie-Ames-Stanford Approach)模型对浙江省植被净初级生产力(NPP)进行估算,分析了净初级生产力的时空分布变化及受土地利用变化影响的特点.结果表明:①2006年浙江省净初级生产力平均为625.68 g·m-2·a-1;空间上,呈现出随着海拔的增高而增大的趋势;时间上,各土地利用类型的净初级生产力均表现出一致而明显的季相变化,不同土地利用类型之间的净初级生产力高低差异明显;②全年净初级生产力总量为6 451.24万t·a-1,林地和耕地是净初级生产力总量的主要构成部分,占净初级生产力年总量的70％以上;其中,丽水市净初级生产力年总量最高,为1 336.05万t·a1,舟山市最低,为47.18万t·a-1;生态公益林的净初级生产力均值为815.28 g·m-2·a-1,固碳能力明显优于其他林地;③相比1996年,2006年浙江省净初级生产力年总量因土地利用类型的变化增加了52.96万t·a-1,净初级生产力年总量保持着相对稳定的态势.有效提升浙江省植被净初级生产力途径主要有:在平原地区构建森林网络体系,在山区积极实施阔叶林化改造工程,以及对竹林进行科学集约化经营.