Cu2+胁迫诱导花鲢血细胞凋亡的研究

以花鲢Aristichthys nobilis（Rich）血细胞为研究对象,选用不同浓度的铜离子Cu^2＋进行不同时间的胁迫诱导,通过瑞士姬姆萨染色和AO/EB荧光染色,在光学和荧光显微镜下观察细胞形态变化,并统计凋亡率。结果表明：在Cu^2＋的胁迫作用下,花鲢血细胞呈现细胞变圆、核变圆、核边缘化、形成凋亡小体等凋亡形态特征,且凋亡细胞随着Cu^2＋浓度的增加和作用时间的延长而增加。表明Cu^2＋能诱导花鲢血细胞发生典型的凋亡,而且细胞凋亡率与Cd^2＋的浓度和处理时间成明显的剂量-效应关系。     

HMC毒素诱导玉米同核C、N细胞质细胞凋亡的荧光显微观察

[目的]研究玉米小斑病菌C小种毒素(HMC-toxin)诱导同核异质体玉米的离体根冠细胞发生凋亡的差异性及凋亡规律.[方法]采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染以及Hoechst 33258荧光染色的方法检测.[结果]HMC毒素诱导根冠细胞发生凋亡,出现凋亡小体与染色体边集形态特征.在3种毒素浓度、3种处理时间下,Mo17-C的根冠细胞死亡率均高于Mo17-N.采用AO与EB复染方法,在150μg·mL<'-1>HMC毒素处理7 h时,M017-C细胞凋亡率达最高值,为68.7%,而Mo17-N仅为29%;经Hoechst 33258染色后,在150μg.mL<'-1>HMC毒素处理下,Mo17-C也于7 h时达最大凋亡率,为57.3%,而Mo17-N为27.7%.[结论]在毒素"伤害"细胞致死过程中,C细胞质的细胞死亡率远高于N细胞质;在"诱导"细胞凋亡程序中,C细胞质的细胞凋亡率也远高于N细胞质的.凋亡率随诱导浓度和诱导时间的增加而增加.AO、EB复染与Hoechst 33258染色相比,两者细胞凋亡率接近,准确度均高,图像清晰,且费用相当,但前者可以区分早期和晚期凋亡细胞而后者不能区分.     

绿茶多酚诱导肝癌细胞凋亡时Caspase-3蛋白活性与mRNA的变化

[目的]研究绿茶多酚(EGCG)诱导肝癌细胞Hep-G2凋亡过程中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白活性与mRNA的变化。[方法]100 mg/L的EGCG处理Hep-G2细胞48 h,DAPI染色观察细胞形态学,用MTT检测EGCG对Hep-G2细胞生长的影响,流式细胞技术Annexin V-FITC PI法检测不同浓度EGCG诱导细胞的凋亡率,分光光度法检测Caspase-3的活性,用半定量RT-PCR法检测Caspase-3的mRNA变化。[结果]100 mg/L的EGCG作用Hep-G2细胞48 h后,荧光显微镜观察到细胞出现核碎裂和凋亡小体;MTT法检测到EGCG对肝癌细胞Hep-G2的生长均有显著抑制作用,呈浓度依赖性;Annexin V-FITC PI法检测到不同浓度的EGCG作用与肝癌细胞Hep-G2后,凋亡率较对照组明显升高,并随诱导浓度的增加而增加;不同浓度的EGCG处理组和不同时间EGCG处理组的Caspase-3活性和mRNA表达量均比对照组明显升高。[结论]Caspase-3蛋白活性与mRNA上调是EGCG诱导肝癌细胞凋亡的的重要原因和机制。     

洋葱鳞茎内表皮细胞凋亡诱导及观察

[目的]探讨氯化铝(AlCl3)作为凋亡诱导剂作用在洋葱鳞茎内表皮细胞上的效果.[方法]使用不同浓度的AlCl3作为离子胁迫诱导剂,对洋葱鳞茎内表皮细胞进行不同时间的处理,最后经DAPI荧光染色观察细胞形态变化.[结果]0.1和0.5 mol/L AlCl3处理洋葱鳞茎内表皮细胞2 h就可以诱导出细胞凋亡现象,而且随着处理时间的延长,到10 h时,细胞核凋亡在形态学上的变化和出现凋亡小体的现象更加明显.[结论]为AlCl3离子胁迫剂能使植物细胞线粒体的结构和酶活力改变并且释放的促凋亡因子的研究提供了相应的参考证据.     

重金属Cu2+·Zn2+胁迫对紫花苜蓿种子萌发及生长的影响

[目的]探索Cu^2＋和Zn^2＋胁迫对紫花苜蓿种子萌发、根长及植株生长的影响。[方法]重金属胁迫分别设置9个浓度梯度：Cu^2＋为0、10、25、50、80、100、200、300和400mg／L;Zn^2＋为0、50、100、150、200、300、400、500、600mg／L,利用组织培养方法,研究Cu^2＋和Zn^2＋胁迫对紫花苜蓿种子萌发及生长的影响。[结果]低浓度Cu^2＋≤25mg／L、Zn^2＋≤100mg/L对紫花苜蓿的萌发率、根长和株高生长具有促进作用,并且在Cu^2＋为10mg／L、Zn^2＋为100mg／L时根长和植株生长达到最佳。随着Cu^2＋、Zn^2＋浓度的增加,Cu^2＋浓度≥50mg／L,Zn^2＋≥150mg／L时对紫花苜蓿萌发率、根系和植株生长抑制作用逐渐加大,高浓度时Zn^2＋浓度为600mg／L、Cu^2＋浓度为400mg／L时,抑制作用最明显。[结论]不同Zn^2＋和Cu^2＋浓度对紫花苜蓿种子的萌发率、根长和植株生长有不同影响作用。     

三氧化二砷对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其血管内皮生长因子表达的影响

目的了解三氧化二砷（As2O3）对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法用不同浓度的As2O3作用于HeLa细胞不同时间段后,光镜和电镜观察细胞形态改变,MTT法测定细胞生长抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting方法检测VEGF的表达。结果不同浓度的As2O3处理HeLa细胞不同时间后,能抑制宫颈癌Hela细胞的体外生长,诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性（P〈0.01）。As2O3还下调VEGF的表达。结论 As2O3可抑制体外人宫颈癌HeLa细胞增殖及VEGF的表达。     

原花青素对Aβ25—35诱导PC12细胞氧化应激反应的保护作用

目的探讨原花青素对β-淀粉样肽25－35（Aβ25-35）诱导PCI2细胞凋亡及氧化应激反应的影响。方法3×10^8／LPCI2细胞培养24h,分别加入培养液（对照组）、10μmol／LAβ25-35（诱导组）、30mg/L原花青素＋10μmol／LAβ25－35（保护组）。24h后收集细胞,以Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,比色分析测定MDA、H2O2含量和CAT活性。结果诱导组细胞可见凋亡特异性核固缩、核碎裂;MDA和H2O2含量与对照组比较明显增加（P〈0．01）,CAT活性明显降低（P〈0．05）。保护组与诱导组比较,凋亡特异性核固缩、核碎裂减少;MDA和H2O2含量明显降低（P〈0．01）,而CAT活性显著增强（P〈0．01）。结论原花青素可抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,可能与其抑制Aβ25-35引起的氧化应激反应有关。     

Cu2+诱导刺激对喜树悬浮培养细胞喜树碱生物合成的影响

[目的]探讨Cu^2＋作为诱导子对喜树悬浮培养细胞喜树碱积累的影响。[方法]在喜树悬浮培养细胞中,细胞生长的不同阶段,添加不同终浓度的Cu^2＋,诱导刺激喜树碱的生物合成。[结果]0.5μmol/L终浓度的Cu^2＋在第8天添加对细胞的生长最有利,而40.0μmol/L终浓度的Cu^2＋在第18天添加对喜树碱生物合成最有利。在第8天添加0.5μmol/L终浓度的Cu^2＋后再在第18天添加40.0μmol/L终浓度的Cu^2＋,可以使喜树碱的产量在第24天达到71.9mg/L,是未经处理的7.9倍。[结论]Cu^2＋诱导刺激可以显著提高喜树悬浮培养细胞喜树碱的产量。     

Cu2+胁迫对丽蝇蛹集金小蜂生长发育与繁殖的影响

Cu^2＋对棕尾别麻蝇Boettcherisca（Sarcophaga）peregrina敏感品系（S）和耐性品系（CuR）的胁迫间接影响了其蛹期寄生蜂—丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis的生长发育和繁殖。丽蝇蛹集金小蜂P代的寄生率和产仔量在低浓度处理时增加,而在高浓度时下降,且CuR品系中P代寄生率和产仔量较高。Cu^2＋提高了丽蝇蛹集金小蜂的单位蝇蛹重产仔量,而降低了F2代子蜂的羽化率和成虫寿命,该作用在CuR品系处理中更为明显。此外,Cu^2＋胁迫,尤其是高浓度处理,改变了F1代和F2代羽化子蜂的雌雄性比。     

HMC毒素处理诱导玉米幼苗根冠细胞凋亡的结果观察

以玉米小斑病菌C小种毒素(HMC-toxin)分别诱导2对同核异质体玉米的幼苗根冠细胞(即:基因型为B37的玉米C型不育细胞质CB37和同核保持系NB37,基因型为Mo17的玉米C型不育细胞质CMo17和同核保持系NMo17),采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染的方法,研究细胞发生凋亡的差异性及凋亡规律。结果表明:CB37的幼叶接种PBS再经150mg/L的HMC毒素处理后,其根冠细胞凋亡率达最高值为45.3%,而NB37仅为15.3%;CMo17凋亡率最高达63.7%,NMo17仅为6.39%;C细胞质的细胞死亡率远高于N细胞质,凋亡率随诱导浓度和诱导时间的增加而增加。HMC毒素诱导根冠细胞发生凋亡,活细胞核发出绿色荧光,坏死细胞核则呈现橙红色荧光,且细胞核呈松散的颗粒状或新月状,凋亡细胞则发出黄绿色或绿色荧光,染色体固缩成新月状或颗粒状。     

氟对小鼠MC3T3-E成骨细胞内Ca~(2+),NO浓度的影响

为了探究不同浓度的氟化钠对小鼠MC3T3-E成骨细胞内Ca~(2+),NO浓度以及细胞凋亡的影响,建立细胞梯度染氟模型,获取MTT细胞增殖曲线;通过DAPI和HE染色观察细胞核及细胞形态学变化;运用荧光探针Fluo-3 AM和DAF-FM DA标记染氟成骨细胞,采用流式细胞仪测定成骨细胞内Ca~(2+),NO浓度变化。结果表明,随着氟浓度的增加,细胞形态异常,细胞增殖率降低,成骨细胞内Ca~(2+),NO的浓度增加,高氟长时间作用会使细胞生命活性降低,生理反应减弱或缺失,从而影响Ca~(2+),NO的浓度。试验证明,高氟通过增加细胞内Ca~(2+),NO的浓度抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

生活用品对蚕豆根尖细胞的诱变作用

[目的]研究常见市售生活用品对蚕豆根尖细胞的诱变作用。[方法]选取不同浓度的3种市售生活用品（花露水、洗洁精、牙膏）为诱变剂,分别处理松滋青皮蚕豆根尖细胞,用微核检测法确定蚕豆根尖细胞的微核率。[结果]蚕豆根尖经过不同浓度的花露水、牙膏和洗洁精处理液处理后,根尖细胞形态受到不同程度的损伤,根尖长度明显变短,颜色发黄、变黑。微核诱变试验显示,不同浓度的生活用品处理蚕豆根尖细胞可诱发不同频率的微核率,在一定浓度范围内,其微核率随处理浓度的升高而呈现增加的趋势。当洗洁精处理组浓度达到原液浓度时,微核率却呈现下降趋势,但仍然高于蒸馏水为阴性对照组所得到的微核率。[结论]日常生活用品对蚕豆根尖细胞有一定的诱导作用。     

铜、铅、锌对黄芪生长及其DNA损伤的影响

【目的】探究重金属铜、铅、锌胁迫对药用植物黄芪植物种子萌发、生根、叶片叶绿素含量和DNA损伤的影响,为黄芪无公害栽培和药材基地环境评价提供理论依据。【方法】以内蒙特色药用植物黄芪为材料,设置不同浓度重金属（0-300mg／L）单一和复合污染（Zn200／Cu200、Zn200／Pb200、Pb200／Cu200mg／L）,观察黄芪生长状况及其叶片叶绿素含量的变化,并利用单细胞凝胶电泳技术检测黄芪DNA损伤情况。【结果】在0-100mg／L时,Cu^2＋、pb^2＋、Zn^2＋单一胁迫可促进黄芪种子萌发,大于100mg／L时则抑制种子萌发。随着黄芪培养时间的延长和重金属离子处理浓度的升高,Ph^2＋处理的黄芪根生长受抑制逐渐增强,黄芪根长变短;Cu^2＋、Zn2＋处理的黄芪根长呈先升高后降低的趋势,在不同时期内两者最长根长出现的处理浓度分别为60和100mg／L。3种重金属Cu^2＋、Ph^2＋、Zn^2＋单一处理后,黄芪总叶绿素含量呈先增后降的变化趋势,当Cu2＋@理浓度高于100mg／L、Zn^2＋处理浓度高于200mg／L、pb^2＋处理浓度高于60mg／L时,黄芪叶片叶绿素含量最高,随后不断降低。Cu／Zn、Zn／Pb复合胁迫,会降低彼此的毒害作用;cu与zn复合胁迫,对彼此毒害作用影响不大。随着重金属Zn^2＋、Pb^2＋、Zn^2＋浓度的增加,对黄芪DNA的伤害程度不断加大,Pbz抛理造成的损伤最大,Cun处理次之,Zn^2＋处理最小。【结论】一定含量的Ph^2＋、Cu^2＋、Zn^2＋对药用植物黄芪种子萌发、生根、叶绿素含量具有一定毒害作用,且随重金属浓度的增加,毒害程度加深。3种重金属离子的毒性大小排序为Pb^2＋〉Cu^2＋〉Zn^2＋。     

Cu^＋对中华倒刺鱼巴超氧化物歧化酶活性的影响

Cu^2＋是养殖水体的常见污染物，为了评估Cu^2＋对鱼类超氧化物歧化酶（SOD）的影响，将中华倒刺妃暴露于合0．01～0．32mg／L Cu^2＋的水体中饲养8d，测定肌肉、血浆及肝脏中SOD活性的变化。实验结果显示，低浓度Cu^2＋（0．01mg/L）对肌肉、血浆及肝脏的SOD有诱导作用，随着处理时间的延长而升高。但当浓度较高（0．04mg／L以上）时，SOD活性均呈现先诱导后抑制的趋势。Cu^2＋浓度越高，SOD活性上升越急剧，出现活性抑制的时间就越提前。此外，SOD在3种组织中的分布亦存在明显差异，肝脏的SOD活性最大。这些结果表明，肝脏SOD活性更宜作为Cu^2＋污染的生物标记。     

Cu^2＋胁迫下一氧化氮对小白菜生长状况及叶绿素荧光参数的影响

以四季小白菜为试材,研究了Cu^2＋胁迫下一氧化氮对小白菜生长状况及叶绿素荧光参数的影响。结果表明：Cu^2＋胁迫使小白菜生长受到抑制,Fv／Fm和ФPSⅡ降低;Cu^2＋浓度为100—1000μmol／L时,300μmol／L硝普钠能缓解Cu^2＋胁迫对小白菜造成的伤害。     

硫酸钾和磷酸二氢钾对石灰性土壤和酸性土壤吸附铜离子的影响

[目的]研究不同电解质浓度、pH值对土壤吸附铜的影响。[方法]采用平衡吸附法研究潮褐土、红壤对Cu^2＋的等温吸附及不同pH值和电解质对土壤吸附Cu^2＋及次级吸附Cu^2＋的影响。[结果]结果表明,低浓度的K2SO4对潮褐土Cu^2＋的吸附略有促进,KH2PO4浓度高时促进潮褐土Cu^2＋的吸附,红壤对Cu^2＋的吸附率随着2种电解质浓度的增加基本呈峰形曲线变化;潮褐土Cu^2＋次级吸附率随着K2SP4和KH2PO4浓度的增加分别为略有增加和直线降低,K2SO4浓度低时促进红壤对Cu^2＋的次级吸附,红壤Cu^2＋次级吸附率随KH2PO4浓度增加而增加;K2SO4和KH2PO4对红壤Cu^2＋次级吸附率增幅远比Cu^2＋吸附率增幅高,且KH2PO4对红壤Cu^2＋吸附的促进作用比K2SO4强,K2SO4对潮褐土Cu^2＋吸附率与次级吸附率的影响规律一致。[结论]该研究为铜污染土壤的防治提供科学依据。     

钠离子对洋葱细胞程序性死亡的诱导

对洋葱进行活化培养,探讨钠离子不同诱导浓度与时间对洋葱鳞茎内表皮细胞程序性死亡的影响。结果表明:随着钠离子诱导浓度的升高及诱导时间的延长,细胞形状和结构均会发生不同程度的变化,细胞凋亡数目增加,细胞中丙二醛含量上升,且细胞凋亡率及丙二醛含量在不同处理间均差异显著。说明钠离子在一定诱导浓度与时间下,对洋葱鳞茎内表皮细胞形态、结构、细胞凋亡率、丙二醛含量均有不同程度的影响。     

Cu2+胁迫对家山黧豆幼苗POD活性及其同工酶的影响

[目的]研究Cu^2＋胁迫对家山黧豆幼苗过氧化物酶（POD）活性及其同工酶的影响,为提高家山黧豆的抗逆性和抗病性提供科学依据。[方法]通过不同浓度的Cu^2＋（50、100、150、200、250 mg/L）处理家山黧豆幼苗,考察不同浓度Cu^2＋胁迫对其POD活性及同工酶数量和种类的影响。[结果]在Cu^2＋胁迫下,各处理中家山黧豆幼苗根的POD活性均高于茎和叶,且各处理下的家山黧豆幼苗根、茎、叶中POD活性均高于对照（除250 mg/L）。不同浓度Cu^2＋胁迫下,家山黧豆幼苗根系同工酶的酶带数和活性变化较大,茎和叶片比较稳定。[结论]该研究为提高家山黧豆的抗逆、抗病性提供了科学依据。     

烟酰胺削弱罗格列酮诱导猪前体脂肪细胞凋亡的作用与分子机制

【目的】探讨烟酰胺（nicotinamide, NIC）和罗格列酮（rosiglitazone, RSG）对猪前体脂肪细胞凋亡的作用及分子机制,寻找通过凋亡方式调控脂肪细胞数目进而控制生脂的新途径。【方法】分别用含有 0、0.2、0.4、0.6、0.8 和 1.0 mmol•L-1 RSG的培养基处理猪前体脂肪细胞,在处理后的48 h,对不同处理组细胞进行Hoechst33258和Annexin-V-FITC/PI染色以观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡情况;并收集细胞总蛋白,用Western blotting方法检测细胞凋亡关键基因的蛋白表达水平;基于RSG促凋亡的浓度梯度结果,选用1.0 mmol•L-1 RSG分别与含0、0.1、0.2和0.3 mmol•L-1 NIC的培养基共处理细胞,在处理后的48 h,染色并观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡情况;并收集细胞总蛋白、细胞质蛋白和细胞核蛋白,检测细胞凋亡关键基因的蛋白水平。【结果】 RSG以浓度依赖方式诱导猪前体脂肪细胞凋亡,减少了细胞数目;Bcl-2和cleaved Caspase-3凋亡关键蛋白水平随RSG浓度增加而上升,Bax则下降;0.1（P＜0.05）、0.2（P＜0.01）和0.3 mmol•L-1 （P＜0.01）NIC显著削弱1 mmol•L-1 RSG诱导猪前体脂肪细胞凋亡,Bcl-2和cleaved Caspase-3水平显著被下调（P＜0.05）,Bax则被上调（P＜0.05）;0.3 mmol•L-1 NIC明显有助于1 mmol•L-1 RSG处理的猪前体脂肪细胞中的Sirt1由细胞质向核转移,且抑制核中cleaved Caspase-3水平。【结论】NIC通过促进Sirt1由细胞质到核的转位以及下调核中cleaved Caspase-3水平削弱RSG诱导的猪前体脂肪细胞凋亡。     

白藜芦醇对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

[目的]探讨白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721体外生长的影响和作用机制。[方法]利用MTT法检测不同剂量组的白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,通过Hoechst染色和荧光显微镜观察肝癌细胞SMMC-7721细胞核的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721作用的周期变化与凋亡分析。[结果]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,白藜芦醇阻滞肝癌细胞SMMC-7721于S期。[结论]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721生长具有抑制作用,使其细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡。