彭泽鲫的受精细胞学

对彭泽鲫与兴国红鲤受精细胞学所作研究表明,彭泽鲫属雌核发育种群。异源精子能正常进入彭泽鲫儿子内,瑷 精卵中异源精子呈凝缩状态,不形成雄性原核,没有看到两性原核融合。在刚产出的成熟卵子中没有看到极体,受精后１２ｍｉｎ见到唯一的一个极体排出,雌性原核自行发育。     

彭泽鲫的受精细胞学

对彭泽鲫与兴国红鲤受精细胞学所作研究表明,彭泽鲫属雌核发育种群。异源精子能正常进入彭泽鲫儿子内,瑷 精卵中异源精子呈凝缩状态,不形成雄性原核,没有看到两性原核融合。在刚产出的成熟卵子中没有看到极体,受精后１２ｍｉｎ见到唯一的一个极体排出,雌性原核自行发育。     

精子膜蛋白在异精雌核发育银鲫中的作用

通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份，包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等，在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分，研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现，加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多，并且在子代培育过程中，发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明：精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。     

精子膜蛋白在异精雌核发育银鲫中的作用

通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份，包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等，在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分，研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现，加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多，并且在子代培育过程中，发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明：精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。     

索氏六须鲶受精细胞学研究

采用连续切片显微观察的方法对索氏六须鲶成熟卵的受精细胞进行了研究。结果显示，精子入卵刺激卵细胞形成胚盘，精子头部在胚盘中逐渐核化，形成雄性原核；卵母细胞放出第二极体，完成第二次成熟分裂，形成雌性原核，两性原核结合成合子核；合子核膜消失，产生第一次卵裂，受精全过程历时50min。     

青蛤的受精细胞学观察

采用常规石蜡切片方法,用苏木精-伊红染色,在光学显微镜下观察青蛤Cyclina sinensis卵子受精和第一次卵裂的过程。青蛤的成熟卵处于第一次成熟分裂中期,此时可以接受精子入卵即受精。在水温23.2℃条件下,精卵混合6 min时精子开始入卵;混合15 min时,受精卵开始排出第一极体;混合21 min时,受精卵开始排出第二极体;雄原核在第二极体释放前形成,第二极体释放后很快形成雌原核,雌、雄原核逐渐在中央靠拢;42 min时,雌、雄原核融合成合子;50 min左右时,受精卵完成第一次卵裂,成为两个细胞。     

异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育早期胚胎发育及其倍性分析

采用紫外线遗传灭活的长牡蛎（Crassostrea gigas）精子作激活源,经6-DMAP加倍诱导栉孔扇贝（Chlamys farreri）第二极体抑制型雌核发育二倍体;运用荧光显微技术,对雌核发育二倍体卵子早期胚胎发育过程中的核相变化进行观察。结果显示,紫外线处理过的精子入卵后发生一次轻微膨胀,形成雄性原核,但不形成染色体,而是浓缩为致密的染色质小体（DCB）,DCB或滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质中,不与雌原核融合;雌核发育胚胎的发育速度明显滞缓,经6-DMAP处理后胚胎发育速度加快,发育同步化;在雌核发育二倍体诱导过程中,还观察到杂交体、异源三倍体、雌核发育单倍体、雌核发育四倍体。结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了细胞学证据。     

异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育早期胚胎发育及其倍性分析

采用紫外线遗传灭活的长牡蛎（Crassostrea gigas）精子作激活源,经6-DMAP加倍诱导栉孔扇贝（Chlamys farreri）第二极体抑制型雌核发育二倍体;运用荧光显微技术,对雌核发育二倍体卵子早期胚胎发育过程中的核相变化进行观察。结果显示,紫外线处理过的精子入卵后发生一次轻微膨胀,形成雄性原核,但不形成染色体,而是浓缩为致密的染色质小体（DCB）,DCB或滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质中,不与雌原核融合;雌核发育胚胎的发育速度明显滞缓,经6-DMAP处理后胚胎发育速度加快,发育同步化;在雌核发育二倍体诱导过程中,还观察到杂交体、异源三倍体、雌核发育单倍体、雌核发育四倍体。结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了细胞学证据。     

中间球海胆与紫海胆种间杂交的受精、孵化和幼体发育研究

为探明中间球海胆Strongylocentrotus intermedius(Si)与紫海胆Anthocidaris crassispina(Ac)种间杂交的受精、孵化和幼体发育规律,对中间球海胆和紫海胆进行种间杂交,检测了不同水温和精子种类对海胆受精卵卵径、受精率和孵化率的影响,并对自繁和杂交海胆幼体发育时间和体长进行了测定和比较。结果表明:受精前中间球海胆卵径(86.64μm±4.21μm)极显著小于紫海胆(95.62μm±3.80μm)(P<0.01);在21℃和24℃下,自交组Si♀×Si♂受精卵卵径显著或极显著大于杂交组Si♀×Ac♂(P<0.05或P<0.01),而杂交组Ac♀×Si♂和自交组Ac♀×Ac♂受精卵卵径则不受水温(24℃和26℃)的影响;相同温度下,种间杂交受精率均极显著低于自繁受精率(P<0.01),Si♀×Si♂组(或Si♀×Ac♂组)受精率在21℃和24℃下无显著性差异(P>0.05),而杂交组Ac♀×Si♂在26℃下的受精率极显著高于24℃下(分别为38.91%±8.25%和0.79%±1.11%)(P<0.01);杂交组Si♀×Ac♂在21℃下的孵化率(87.96%±4.18%)极显著低于自交组Si♀×Si♂(99.64%±0.81%)(P<0.01),而在24℃下,这两组海胆均不能孵化,杂交组Ac♀×Si♂在24℃下的孵化率(9.32%±4.33%)极显著低于自交组Ac♀×Ac♂(100%)(P<0.01),而在26℃下则不能孵化;Ac♀×Ac♂组和Ac♀×Si♂组在24℃下经5 d即可发育至八腕幼体,Si♀×Ac♂组在21℃下经9 d发育至八腕幼体,Si♀×Si♂在21℃下经12 d发育至八腕幼体。研究表明,杂交组Si♀×Ac♂适宜在24℃下受精,21℃下孵化,而杂交组Ac♀×Si♂则适宜在26℃下受精,24℃下孵化,杂交组Ac♀×Si♂可能更具备高温耐受能力,可作为耐高温品种培育的重点材料进行进一步研究。     

中间球海胆与紫海胆种间杂交的受精、孵化和幼体发育研究

为探明中间球海胆Strongylocentrotus intermedius(Si)与紫海胆Anthocidaris crassispina(Ac)种间杂交的受精、孵化和幼体发育规律,对中间球海胆和紫海胆进行种间杂交,检测了不同水温和精子种类对海胆受精卵卵径、受精率和孵化率的影响,并对自繁和杂交海胆幼体发育时间和体长进行了测定和比较。结果表明:受精前中间球海胆卵径(86.64μm±4.21μm)极显著小于紫海胆(95.62μm±3.80μm)(P0.01);在21℃和24℃下,自交组Si♀×Si♂受精卵卵径显著或极显著大于杂交组Si♀×Ac♂(P0.05或P0.01),而杂交组Ac♀×Si♂和自交组Ac♀×Ac♂受精卵卵径则不受水温(24℃和26℃)的影响;相同温度下,种间杂交受精率均极显著低于自繁受精率(P0.01),Si♀×Si♂组(或Si♀×Ac♂组)受精率在21℃和24℃下无显著性差异(P0.05),而杂交组Ac♀×Si♂在26℃下的受精率极显著高于24℃下(分别为38.91%±8.25%和0.79%±1.11%)(P0.01);杂交组Si♀×Ac♂在21℃下的孵化率(87.96%±4.18%)极显著低于自交组Si♀×Si♂(99.64%±0.81%)(P0.01),而在24℃下,这两组海胆均不能孵化,杂交组Ac♀×Si♂在24℃下的孵化率(9.32%±4.33%)极显著低于自交组Ac♀×Ac♂(100%)(P0.01),而在26℃下则不能孵化;Ac♀×Ac♂组和Ac♀×Si♂组在24℃下经5 d即可发育至八腕幼体,Si♀×Ac♂组在21℃下经9 d发育至八腕幼体,Si♀×Si♂在21℃下经12 d发育至八腕幼体。研究表明,杂交组Si♀×Ac♂适宜在24℃下受精,21℃下孵化,而杂交组Ac♀×Si♂则适宜在26℃下受精,24℃下孵化,杂交组Ac♀×Si♂可能更具备高温耐受能力,可作为耐高温品种培育的重点材料进行进一步研究。     

不同浓度的NaCl、KCl和葡萄糖对彩鲫精子活力的影响

利用NaCl、KCl、C6H12O6各配制成8个不同浓度的溶液,彩鲫精子在4g／LNaCI溶液、3．5g／L KCl溶液、1．5g／L C6H12O6溶液中的活力最强,寿命最长。在NaCl、KCl溶液中,彩鲫精子快速运动时间和变化规律基本上一致。葡萄糖溶液在低浓度下有效延长精子寿命,表明彩鲫精子具有利用外源性葡萄糖的能力,但在5g／L C6H23O6溶液时,就完全抑制精子的活动。     

鲫鱼冰温离 保活及氨基酸分析

为研究鲫鱼(Carassius auratus)冰温无水保活技术,通过冰点测定确定了鲫鱼的生理冰温,采用僵硬指数作为离水后鲫鱼的活力指数,并通过比较冰温及冷藏(4℃)保鲜鲫鱼的氨基酸变化分析了冰温技术对鲫鱼营养吸收及口感的影响。结果表明,-0.3℃为鲫鱼生理冰点,在水中经过1℃/h由室温18℃降至冰温,离水后僵硬指数上升缓慢,可以在无水冰温状态下存活32h;并且水解及游离氨基酸中部分氨基酸含量得到提高。降温处理可能提高了鱼体的抗冻能力,显示经过冰温储藏后蛋白质易于消化吸收,并提高了风味口感。     

三种复方中药对鲫鱼肝脏抗氧化功能的影响

采用三种复方中药(编号分别为AB、CD和AH)分别饲喂1龄鲫鱼28 d,同时设置空白对照组,以探讨所用方剂对鲫鱼肝脏中抗氧化功能的影响。试验期间水温20℃,每天按照体重的2.0%投喂制备的饲料。采集鲫鱼肝脏,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总抗氧化能力(T-AOC)四个代表性抗氧化指标。结果表明,三种复方中药组SOD活性均显著高于对照组。MDA含量均低于对照组,其中AB、CD组与对照组差异显著(P<0.05)。GSH-PX活性均高于对照组,其中AH、CD组与对照组差异显著(P<0.05)。三种复方中药均能提高T-AOC,其中AB、CD组提高效果显著(P<0.05)。所选的三种复方中药均对鲫鱼肝脏抗氧化能力有促进作用,其中CD组方效果最好。     

天然免疫增强剂绿益康对银鲫鱼生长与血清指标的影响

分别添加黄霉素20mg,／kg和中药添加剂绿益康1‰、2‰、3‰进行银鲫鱼养殖试验,测定银鲫鱼溶菌酶和超氧化歧化酶的含量,以探讨中草药免疫增强剂对银鲫鱼保健和调整代谢的作用机理。结果表明：中草药添加剂绿益康可调节银鲫鱼的新陈代谢和免疫功能,添加量2‰时效果最佳。     

小肽替代鱼粉对异育银鲫生产性能及鱼体组成的影响

[目的]为在水产饲料中应用小肽提供试验性参考依据。[方法]试验选用平均体重(16.19±0.25)g/尾的异育银鲫240尾,随机分4组,对照组、试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ中小肽的添加量分别为0、20.03、0.0和40.0 g/kg饲料。每天投饲3次,分别为6:301、3:30和18:30,投饲率为鱼体重的3%~4%,水温24~28℃,pH值6.8~8.0,DO>5 mg/L,饲养45 d。[结果]试验得出,各试验组和对照组的异育银鲫增重率、饵料系数差异不显著(P>0.05),其中试验组Ⅱ的饵料系数在所有试验组中最低;饲料中添加适量的小肽替代部分鱼粉可以显著提高饲料的干物质消化率(P<0.05),可以提高粗蛋白质表观消化率、磷表观消化率,但差异不显著(P>0.05),但降低了粗脂肪的表观消化率(P>0.05);另外,饲料中添加适量的小肽替代部分鱼粉对异育银鲫鱼体组成没有显著影响(P>0.05),其中试验组Ⅱ的鱼体组成和对照组最接近。[结论]试验结果表明,在饲料中添加适量的小肽替代鱼粉,对异育银鲫生产性能及鱼体组成无显著影响,还可以有效降低饲料成本。     

长尾彩鲫人工繁殖及苗种体色变化观测试验

采用注射催产药物的方法进行长尾彩鲫人工繁殖及其体色变化观察试验,结果表明：人工催产亲鱼50组,雌雄比为1∶1,雌鱼重7.5kg,平均尾重150.0g,产卵21.00万粒,平均每1kg雌鱼产卵2.80万粒,平均每尾雌鱼产卵4 200粒;孵化鱼苗17.00万尾,孵化率为80.95%。此外,鱼苗入池后经过20d培育,平均尾重0.61g,显现彩红色的比例占3.52%。培育154d后规格达10.10g/尾,显现彩红色的比例占85.80%。总之,采用注射催产药物的方法进行长尾彩鲫人工繁殖,比自然产卵繁殖率提高30.23%;在鱼苗孵化后20d是对鱼类进行体色增色转化的最佳时机;彩鲫规格达10.0g/尾前为淘汰低品位鱼类的理想时间。     

甲醛对鲫鱼呼吸运动的影响

甲醛属于醛类化合物,为原生质毒物,即使在重质量分数极低的情况下,也能影响人及动物机体的机能代谢,鱼类对水环境中各种因素的改变非常敏感,在呼吸机能上的直接反映就是呼吸运动频率的改变.鲫鱼在不同质量分数溶液中呼吸运动均有所变化.在甲醛的体积分数为0.00%~0.14%的溶液中,呼吸频率先升高后下降,随着溶液体积分数的增加再次升高,后又下降,以后不再升高,而咳嗽频率则先是骤然升高,后又缓慢下降.可利用鱼的这种特性评价水质污染程度,作为环境监测的生物学指标.     

两种养殖密度下鲫鱼生长和免疫酶活性的比较

2011年4～11月比较了两种养殖密度(低密度和高密度)下鲫鱼的生长率和组织中超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性的差异.结果显示,低密度塘鲫鱼生长和免疫酶活性在4月7日低于高密度塘,而后明显高于高密度塘;两种养殖密度下,7～9月为鲫鱼的最佳生长时期.结果表明,放养密度过低会对鲫鱼早期生长和免疫力造成负面影响,放养密度过高则不利于鲫鱼后期生长和免疫力的提高.     

运用TRAP标记分析5个鲤群体的遗传多样性

运用TRAP标记技术,选取10个多态性较好的引物组合对荷包红鲤、黄河鲤、建鲤、兴国红鲤和黑龙江野鲤等5个鲤群体进行遗传多样性分析,其中固定引物是根据目标候选基因GHR基因的序列设计。结果表明,共扩增出168个位点,其中多态性位点134个,平均多态位点比例为80.41%,平均多态性信息含量为0.29。分子变异方差分析(AMOVA)结果显示群体内的方差贡献率达96.97%,表明各个鲤群体内存在较大的遗传变异。种群再分效应固定指数(FST=0.030 26,P<0.05)表明不同鲤群体间有显著的遗传分化。基于目标候选基因的TRAP标记对5个鲤群体进行聚类分析,结果表明建鲤和兴国红鲤首先聚成一类,然后黄河鲤和黑龙江野鲤聚为一类,再与荷包红鲤聚为一类。     

四川地区养殖锦鲤浮肿病毒检测与系统进化分析

2017年10月,四川省某锦鲤养殖场暴发一种以嗜睡、腹部肿大、鳃肿胀和眼睛凹陷为临床特征的传染病,累计死亡率高达50%。为研究锦鲤发病病因和疾病流行规律,对病鱼解剖,进行病理组织观察、电镜观察、PCR检测和系统进化分析。结果显示,患病锦鲤眼球浑浊,腹部肿大,鳃肿胀严重;组织病理学观察发现病鱼的鳃、肝脏、肾脏和脑组织细胞变性、坏死,出现大量炎性细胞浸润;透射电镜观察,在肾脏组织中发现病毒粒子。巢氏PCR方法检测鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV),出现特异性扩增产物;基于CEV P4a基因进行系统发育分析,此病毒与英国株R083同源性为99%。本研究为鲤浮肿病毒的起源进化、分类、疾病诊断和防控提供重要依据。