生鲜乳中优势嗜冷菌对UHT乳蛋白浓度的影响

【目的】研究UHT乳在接入不同数量级的嗜冷菌时，不同储存温度下UHT乳中蛋白浓度的变化。【方法】(1)采用混培法，将原料乳从原液稀释至10^-5稀释梯度，每个梯度做2个平行，6.5℃培养10 d,分离纯化保留单个菌落；(2)运用嗜冷菌基因组DNA提取与PCR反应鉴定筛选出优势嗜冷菌；(3)选用乳平板可视鉴定法，筛选出产蛋白酶能力最强的菌株。(4)采用BCA蛋白浓度测定法，将UHT乳稀释8倍、12倍、20倍、24倍、28倍在磷酸盐缓冲液中，测定不同稀释倍数的UHT乳在蛋白浓度测定试验中线性关系最好的稀释倍数。(5)UHT乳同时接入10³、10⁴、10⁵ CFU/mL的优势嗜冷菌，3组试验组分别在4、7和21℃环境下储存，培养7 d,每24 h BCA蛋白浓度测定法检测一次蛋白浓度。【结果】(1)在33份生鲜乳样品中，共筛选出212株嗜冷菌。(2)假单胞菌为生鲜乳中优势嗜冷菌，分离率为5.19%。(3)99号菌株假单胞菌产蛋白酶能力最强，透明圈带直径为0.3 mm;(4)UHT乳在28倍稀释浓度下的蛋白定...     

产脂肪酶细菌的筛选及碳、氮源对其产酶活性的影响

[目的]为扩大脂肪酶的生产源提供基础资料。[方法]从贵阳市附近的炼油厂、粮油市场、贵州师范大学食堂采集土壤样品,从中筛选高产脂肪酶的细菌菌株。[结果]经过初筛、复筛、分离和鉴定,从78份土样中共筛选到24株脂肪酶产生菌,这些菌株发酵液的脂肪酶活性为1.0-13.2 U/m l,其中从炼油厂土样中筛选到的A7菌株的产脂肪酶活性最强。分别以不同碳源和不同氮源培养A7菌株,发现各碳源对其产酶活性的促进作用分别为蔗糖〉葡萄糖〉果糖〉可溶性淀粉〉甘露醇,各氮源对其产酶活性的促进作用分别牛肉膏〉蛋白胨〉尿素〉黄豆饼粉、酵母粉〉硝酸钠。[结论]炼油厂土样中细菌的产酶活性较高,细菌发酵产脂肪酶的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为牛肉膏。     

腌菜中乳酸菌的分离及产酸菌筛选研究

[目的]从云南不同地区腌菜样品中分离乳酸菌,并筛选产酸能力较强的菌株,为筛选用于腌菜制作的乳酸菌菌株奠定基础。[方法]将收集到的16个腌菜样品在MRS培养基上分离纯化乳酸菌,对其进行形态学观察;通过筛选培养基上的水解圈筛选产酸菌株,再通过初步乳酸发酵进一步筛选产酸菌株。[结果]从16个腌菜样品共分离得到22个菌株,均为革兰氏阳性菌,其中有15个是杆菌,7个为球菌;以产酸菌株筛选培养基筛选出产水解圈的3个菌株,其中1086b水解圈最大。初步发酵研究表明2,2菌株乳酸发酵都可使发酵液pH下降,其中10株菌pH下降幅度较大。[结论]分离出多样性丰富的乳酸菌菌株,从中筛选出产酸能力较强的菌株,研究可为筛选用于腌菜制作的乳酸菌菌株提供借鉴。     

绍兴市售酸奶中乳酸菌的分离鉴定及耐药性分析简

[目的]从绍兴市售酸奶中分离并鉴定乳酸菌,研究乳酸菌分离株对6种抗生素的耐药性。[方法]利用MRS培养基迎过稀释法分离酸奶样品中的乳酸菌并进行菌落计数,对分离菌株进行革兰染色和生化反应鉴定,同时采用纸片扩散法进行耐药性分析。[结果]从15种绍兴市售酸奶样品中共分离出31株菌,生化反应鉴定为嗜酸乳杆菌（6株）、保加利亚乳杆菌（7株）、嗜热链球菌（11株）和双歧杆菌（7株）;活菌计数结果显示,4份样品（26．7％）中乳酸菌计数低于国家标准,11份样品（73．3％）中活菌计数符合国家标准规定;耐药性试验结果显示,31株乳酸菌对4种抗生素均有一定程度的耐受性,且90．3％的菌株具有多重耐药性,能耐受2～3种抗生素。[结论]绍兴市售酸奶中乳酸菌已具有一定程度的耐药性,对酸奶产品进行耐药性监测和安全评价已势在必行。     

新疆冷水鱼肠道中耐低温乳杆菌的分离筛选及其遗传差异分析

乳杆菌能够维持肠道内正常菌群的平衡,而来源于动物肠道的乳杆菌更容易在肠道内生长繁殖,所以分离冷水鱼肠道内的低温乳杆菌具有重要的应用价值。利用MRS、M17、改良番茄和乳杆菌选择性琼脂培养基4种培养基,从6种不同的冷水鱼肠道以及粘膜中分离筛选出耐低温的乳杆菌20株。通过一些生理生化试验初步确定疑似乳杆菌菌株24株,并测定其最适生长温度,其中有7株为嗜冷菌,17株为耐冷菌。根据16Sr RNA基因序列构建系统发育树可知,20株菌隶属Lactobacillius spp.,其他4株分别隶属Clostridium spp.和Pseudomoncs spp.。     

高产脂肪酶菌株的筛选鉴定

通过变色圈法和透明圈法从泥土中筛选出脂肪酶产生菌,并根据菌株的菌落形态、革兰氏染色和16SrDNA序列分析确定筛选得到菌株的种属。采用罗丹明B(Rhodamine B)平板初筛出51株脂肪酶产生菌,以荧光圈直径或透明圈直径与菌落直径的比值(HC)为指标,选取HC1.60的9株脂肪酶产生菌,采用橄榄油乳化液平板进行复筛,对HC进行测量比较筛选出1株高产脂肪酶的菌株L-17,其HC为2.27。利用透明圈法对菌株L-17的粗酶液的酶活力进行测定,HC为3.07,表明菌株L-17具有较高的酶活力。菌株L-17经初步鉴定为洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia),为一株高产脂肪酶的菌株,具有潜在的研究和开发价值。     

脂肪酶产生菌的筛选·产酶条件及酶特性研究

[目的]筛选脂肪酶高活性菌株作为脂肪酶生产菌株和脂肪酶基因的供体菌。[方法]从油脂厂等地采集26份含菌样品,采用溴甲酚紫平板对样品进行初筛,以产脂肪酶发酵培养基摇瓶复筛,获得1株产脂肪酶活性较高的菌株09-7-1,经鉴定该菌株为黑曲霉（Aspergillus niger）。采用正交试验对影响该菌株产酶的因素进行了研究,并探讨了该菌株所产脂肪酶的性质。[结果]该菌株最佳产酶条件：碳源为0.5%的可溶性淀粉,氮源为0.2%的酵母膏,培养温度为32℃,发酵液pH为5.2,该菌株最初发酵液中酶活力为13.164 U/ml,优化后酶活力达24.112 U/ml,是最初酶活力的1.83倍。该菌株所产脂肪酶最适作用温度为30℃,最适作用pH为7.0;酶液在60℃保温90 min后,活性损失较少,pH为5.5～10.0内稳定。[结论]该研究可为脂肪酶生产和基因研究奠定基础。     

小麦秸秆发酵液中优质乳酸菌的分离·纯化与鉴定

[目的]从小麦秸秆发酵液中筛选并鉴定适合于青贮添加剂的高效乳酸菌。[方法]用MRS＋CaCO3固体培养基筛选,分离出78株乳酸菌;经形态学、革兰氏染色、生理生化试验、产酸效率试验、耐酸能力试验和耐盐试验等挑选出43株产酸率高的乳酸菌。通过16S rDNA法对该乳酸菌进行鉴定。[结果]已获得43株产酸能力强的菌株1,6S rDNA鉴定结果表明,37株为副干酪乳杆菌亚种（Lacto-bacillus paracasei subsp.）1,株为鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）,5株为肠球菌（Enterococcus faecium）。[结论]从小麦秸秆中筛选出43株具有较强产酸能力的乳酸菌,对研发优质青贮饲料添加剂具有一定的指导意义。     

UHT乳中产耐高温脂肪酶嗜冷菌的研究

从牛乳中筛选到1株产耐高温脂肪酶的嗜冷菌株DW-A,通过对其形态学及生理生化特性的研究,鉴定该菌株为脆弱假单胞菌(P.fragis).对其生长特性进行了研究,菌株DW-A在发酵液体培养基中振荡培养时,0h～12h为生长延迟期,12h～36h为对数生长期,36h～84h为稳定期,84h后为衰亡期;最适生长温度为20℃;最适作用pH值为7.0;最适培养液NaCl浓度为0%～1%.     

胡椒果皮脱胶菌的分离及筛选

[目的]建立胡椒果皮脱胶菌分离、筛选的方法。[方法]从胡椒种植园的土样中采集样品30份,通过初筛、复筛及胡椒脱皮试验分离、筛选胡椒果皮脱胶菌。[结果]分离出7株能产生果胶酶的菌株,其中2株菌株产生的果胶酶活性较高;胡椒脱皮试验结果表明,菌株QH-2在4 d内脱胶效果较好,脱皮后胡椒产品感官评价优良。[结论]该研究建立的方法为胡椒果皮高效脱胶菌的筛选奠定了基础。     

花椒籽油青睐型脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的研究

[目的]筛选对花椒籽油具有偏好性的脂肪酶产生菌。[方法]采用甘油法和气相色谱相结合的方法,从实验室分离到的11株具有甲醇耐受性脂肪酶菌株中筛选对花椒籽油具有转酯活性的菌株,并进行了最佳产酶条件的优化。[结果]11株菌株中以D-1-4菌脂肪酶催化花椒籽油的转酯率最高,达到43.05%;其最佳产酶条件为：以2.5%蔗糖为碳源、2.0%黄豆粉＋1.0%玉米粉为复合氮源、1.0%橄榄油为诱导物,在初始pH 6.0、30℃培养48h时脂肪酶活力达到79.30U/ml。[结论]为脂肪酶产生菌及其脂肪酶的应用提供了依据。     

耐甲醇脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

[目的]筛选耐甲醇脂肪酶产生菌,并对其酶学性质进行研究。[方法]采用培养基中添加不同浓度甲醇（0、5%、10%、15%、20%）的方法筛选甲醇耐受性脂肪酶产生菌,形态学和ITS序列分析确定菌株的种属关系,硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose FF纯化脂肪酶,并对纯化的酶进行耐甲醇试验和酶学性质研究。[结果]筛选到183株脂肪酶产生菌,菌株SXL-107对浓度20%甲醇具有较好耐受性,脂肪酶活力达104 U/ml;ITS同源性分析确定该菌为Galactomyces geotrichum;经过纯化的SXL-107脂肪酶在浓度10%甲醇溶液中作用48 h后,剩余酶活为96.15%;该酶最适温度为40℃,pH为7.0,50℃温浴60 min仍有80%的酶活力,在pH 4.0~9.0间稳定,微量的Mg2＋、K＋和Zn2＋对该酶有激活作用,Mn2＋和CO2＋有抑制作用,分子量约为66 kDa。[结论]筛选到一株耐甲醇能力较强的脂肪酶产生菌,为该酶在生物柴油中的应用奠定基础。     

产脂肪酶酵母的筛选及菌种鉴定

[目的]从土样中筛选出有脂肪酶活性的酵母菌,测定酶活并,扩增酶活较高的1株酵母菌18SrDNA,测序后比对,确定所得菌株的种属。[方法]以罗丹明B为指示剂,采用常见的培养基培养,采用滴定法测定菌株的酶活,扩增18SrDNA,测序后BLAST比对。[结果]筛选出3株有脂肪酶活性的酵母菌,酶活为1.7～4.0U/ml。测序结果表明,所得菌株分别与Candida,Rhodotorula,Trichosporon等属亲缘关系接近。[结论]产脂肪酶酵母菌的筛选和鉴定可为研究酵母菌全细胞催化生成生物柴油打下前期基础。     

勋章菊叶片再生技术的探讨

[目的]研究勋章菊叶片再生技术,筛选适合勋章菊叶片再生的最佳培养配方。[方法]以日本引进的勋章菊叶片为材料,置床于添加不同种类和浓度激素的MS培养基中进行愈伤组织和不定芽诱导的正交试验,筛选勋章菊叶片再生的最佳培养基配方。[结果]在MS＋TDZ（0.8-1.0 mg/L）＋NAA（0.05-1.0 mg/L）培养基上可形成紧密型绿色的愈伤组织;叶片接种于MS＋TDZ（0.5-1.0 mg/L）＋NAA（0.05-1.0 mg/L）培养基上可形成许多不定芽,诱导效率达100%;健壮的不定芽长至2.0-3.0 cm长时移至1/2 MS＋NAA（0.1mg/L）培养基中,其发根状况良好,生根率达100%。[结论]为勋章菊的高频快繁提供了新途径,并为勋章菊的遗传转化及培育新品种奠定基础。     

姬松茸深层发酵生产菌丝体和胞外多糖的初步研究

[目的]研究姬松茸的深层发酵技术,筛选了适宜姬松茸液体深层培养的碳源和氮源培养基。[方法]对姬松茸的液体深层培养基进行了研究,筛选出适宜姬松茸发酵的最适碳源和氮源,并研究了不同浓度的最佳碳源和氮源对姬松茸菌丝体和胞外多糖的影响。[结果]姬松茸菌株生长和胞外多糖生产的最佳碳源为葡萄糖,最适浓度为30 g/L;最佳氮源为蛋白胨和酵母膏的组合,最适的组合浓度为7 g/L蛋白胨+7 g/L酵母膏。在此条件下,姬松茸菌体干重和胞外多糖产量均达到最大值,分别为8.7 g/L和281 mg/L。[结论]该研究为姬松茸的进一步规模化培养提供了参考。     

1株高效微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件优化

[目的]筛选出高效微生物絮凝剂产生菌并优化其培养条件。[方法]利用平板培养基和液体培养基筛选出絮凝活性高且稳定的菌株,通过计算絮凝率评价其发酵液的絮凝活性,最后通过单因素试验确定所选出菌株的最佳培养条件。[结果]分离出13株具有絮凝活性的菌株,茵株MC3的发酵液对高岭土悬浊液的絮凝率可达舳．8％。培养72h和84h后菌株发酵液的絮凝率分别为80．8％和81．2％。以玉米粉和葡萄糖为碳源培养60h后菌株发酵液的絮凝率分别为92．2％和87．8％,而葡萄糖的絮凝效果更稳定。pH值6时,培养60h后菌株发酵液的絮凝率为81．O％。菌株MC3的最佳培养条件为：用葡萄糖替代查氏培养基中的蔗糖,培养液初始pH值6,接种量为10％,在该条件下培养60h和72h后菌株MC3发酵液的絮凝率分别为92．9％和92．0％。f结论]该研究为微生物絮凝剂的生产奠定了试验基础。     

江西省名优地方品种螺田大蒜脱毒快繁研究

[目的]研究螺田大蒜脱毒快繁技术。[方法]以江西名优地方品种螺田大蒜为试验材料,通过茎盘分生组织的培养,获得了螺田大蒜试管苗。通过激素配比试验,筛选出大蒜脱毒苗快速繁殖的最佳培养基。[结果]大蒜茎盘的不定芽诱导率随6-BA浓度的增加而增加,随NAA浓度的增加而降低,培养基中高比例的6-BA有利于螺田大蒜茎盘不定芽分化。利用大蒜茎盘诱导出芽的最适培养基为MS＋6-BA3．0mg／L＋NAA0．1mg/L,诱导生根的最适培养基为^俗＋NAA0．5mg/L.生根后形成试管苗,通过对试管苗的病毒检测,选择不带病毒的植株,移栽得到小鳞茎。[结论]螺田大蒜的脱毒快繁技术可有效去除大蒜的病毒,恢复其种性。     

红肉苹果的组织培养快繁技术

[目的]建立红肉苹果的高效植株再生体系。【方法]以红肉苹果的茎尖和带腋芽的茎段为外植体，通过组织培养试验筛选出最佳的灭菌时间、基础培养基、增殖培养基和生根培养基。[结果]随着消毒时间的延长，外植体的污染率明显下降，但外植体受到的伤害显著增加。用0．1％HgCl2灭菌5rain的外植体生长正常，污染率仅为3．3％。在增殖培养基MS＋6一BA0．5mg／L＋NAA0．1mg／L、MS＋6．BA0．5mg／L＋NAA0．2mg／L和MS＋6一BA0．5mg／L＋NAA0．5mg／L中。每个外植体平均增殖不定芽4．1、6．8和3．3个。在生根培养基1／2MS＋0．1mg／LIBA＋0．1mg／LNAA、1／2MS＋0．2mg／LIBA＋0．2mg／LN从和1／2MS＋0．5mg／LIBA＋0．5mg／LNAA上幼苗的生根率分别为56．7％、96．7％和83．3％。[结论]该研究为红肉苹果的快速离体扩繁和工厂化育苗以及园林应用奠定了良好的基础。     

广西姜花花粉离体萌发培养基的筛选

[目的]为广西姜花花粉离体萌发筛选出最适培养基。[方法]以原位萌发测定为对照,在正交预试验的基础上,通过单因素试验筛选出广西姜花花粉离体萌发的最适培养基。[结果]蔗糖浓度为10.000%时,广西姜花花粉的离体萌发率最高,为22.45%。当硼酸浓度为0.010%和0.050%时,广西姜花花粉的离体萌发率分别为35.58%和37.42%。当氯化钙的浓度为0.010%时,广西姜花花粉的离体萌发率为38.49%。在0.010%～0.200%浓度范围内,广西姜花花粉的离体萌发率随着氯化钙浓度的升高而下降。广西姜花花粉离体萌发的最适培养基为:10.000%蔗糖+0.050%硼酸+0.010%氯化钙+2.000%琼脂,pH=7.0,培养温度为20℃。在筛选出的培养基上,通过花粉离体萌发测定的花粉萌发率为46.00%。采用花粉原位萌发测定法测定的花粉萌发率为50.00%。[结论]利用筛选出的培养基能够快速准确测定出广西姜花的花粉活力。     

豆豉纤溶酶产酶菌的筛选及菌种保藏

[目的]从豆豉产品中筛选分离活性较高的豆豉纤溶酶产酶菌,并对菌种进行保藏。[方法]用自制的猪血粉为底物配制筛选培养基进行豆豉纤溶酶产酶菌的筛选,然后根据水解圈的大小筛选活性高的产酶菌株,最后将其保藏于LB培养基中。[结果]成功从湖南、广东、江西等地产的豆豉中筛选到一株溶栓活性相对较高的产酶菌。[结论]该研究为新型溶栓药物的开发奠定了基础。