实时荧光定量RT-PCR检测狮头鹅繁殖周期中PRL mRNA的表达

以就巢性极强的狮头鹅为研究对象,选取不同繁殖阶段的狮头母鹅各6羽,采用荧光定量RT-PCR方法测定下丘脑-垂体-性腺轴中PRL mRNA的表达水平.结果表明:PRL mRNA在狮头鹅下丘脑、垂体和卵巢中均有表达,垂体PRL mRNA的表达量最高(P＜0.01),下丘脑最低;在整个生殖周期内,就巢期PRL mRNA的表达水平高于非就巢期,休产期最低.由此可见,下丘脑-垂体-性腺轴中PRL mRNA的表达水平与狮头鹅的繁殖周期密切相关,PRL是就巢行为维持和发展的关键激素.     

山麻鸭SHH基因克隆和组织表达

本研究旨在克隆鸭SHH基因了解其组织表达情况,以山麻鸭为试验材料,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取RNA逆转录后进行SHH基因克隆,并采用实时荧光定量PCR方法检测其表达水平.本试验克隆获得山麻鸭SHH基因cDNA序列878 bp,包含了5′UTR 113 bp和编码序列765 bp,编码255个氨基酸.氨基酸序列同源性比对发现,山麻鸭SHH基因与其他禽类的同源性较高,在物种间的保守性高.山麻鸭SHH基因在下丘脑表达量显著高于垂体和各级卵泡组织(P0.01);而在大黄卵泡中表达极显著低于大白卵泡和小黄卵泡(P0.01).本研究克隆获得SHH基因部分序列并检测其组织表达规律,为后续功能研究打下基础.     

VIP基因在狮头鹅繁殖周期下丘脑-垂体-性腺轴中的表达变化

为了探索狮头鹅繁殖周期下丘脑-垂体-性腺轴中VIP mRNA的表达规律,选取产蛋期、就巢期、休产期狮头鹅母鹅各6只,采用荧光定量PCR方法分别测定了各时期下丘脑、垂体及卵巢VIP mRNA的表达水平。结果表明,狮头鹅就巢期血清催乳素(PRL)质量浓度为30ng/mL,明显高于产蛋期和休产期(P<0.01),下丘脑就巢期VIP mRNA的表达量较其他繁殖周期高(P<0.05),而垂体产蛋期VIP mRNA的表达量最高(P<0.01)。提示狮头鹅下丘脑-垂体-性腺轴中VIP mRNA的表达水平与PRL分泌密切相关,PRL是狮头鹅就巢行为维持和发展的关键激素。     

鹅PRL基因克隆及在繁殖相关组织中的表达规律

以浙东白鹅为研究对象,采用克隆、测序技术获得浙东白鹅PRL基因789 bp的cDNA序列,包括了690 bp的编码区,编码229个氨基酸。并与其他物种进行同源性比较,发现该基因序列与其他鹅 PRL序列相比发生了A170G、T315C、C316A、C318T、T516C、G617A突变;其中A170G发生了氨基酸H→R的变化,C318T处发生了氨基酸H→N 的变化,G617A发生了氨基酸R→H的变化。与禽类PRL基因核苷酸和氨基酸序列同源性均在92．9％以上,与人和哺乳动物同源性在51．8％～77．2％之间。利用实时荧光定量PCR技术检测鹅产蛋期到就巢期PRL基因在相关组织中的表达变化。在产蛋期和就巢期,垂体中PRL基因表达量显著高于其他3个组织,下丘脑、卵巢、输卵管3个组织之间PRL基因mRNA表达量没有显著性差异。就巢期组织中 PRL基因表达量极显著高于产蛋期同一组织中mRNA 表达量。     

山羊促甲状腺素β亚基基因(TSHB) cDNA克隆 与组织表达研究

促甲状腺素β亚基基因(TSHB)主要表达于动物垂体腺,其表达受到光照周期调控并且与动物季节性繁殖活动密切相关.本实验以济宁青山羊和辽宁绒山羊为研究对象,运用RT-PCR方法克隆获得山羊TSHB基因部分cDNA序列(GenBank No.:JQ937288),并使用RT-PCR与荧光定量PCR技术检测TSHB基因在济宁青山羊与辽宁绒山羊下丘脑-垂体-卵巢繁殖轴及其他组织的表达分布情况.结果表明,山羊TSHB基因编码区417bp,编码含有138个氨基酸的蛋白质;各哺乳动物间TSHB基因高度保守,山羊与绵羊、牛TSHB基因同源性最高,达99％;另外,两品种山羊TSHB基因均在垂体中高表达,在济宁青山羊下丘脑、卵巢及海马等组织低度表达,而在辽宁绒山羊下丘脑低度表达,两品种其他组织均没有表达.非繁殖季节济宁青山羊垂体TSHB基因表达水平是辽宁绒山羊的1.6倍(P=0.061),其对季节性繁殖的调控功能值得进一步研究.本研究首次对山羊TSHB基因cDNA序列进行了克隆和表达分析,研究结果对山羊繁殖调控具有重要意义.     

鹅PRLR基因克隆及在生殖相关组织中的表达规律

本文采用克隆、测序技术获得浙东白鹅PRLR基因c DNA序列,利用实时荧光定量PCR技术检测鹅产蛋期和就巢期PRLR基因在生殖相关组织中的表达规律,为揭示PRLR基因在生殖过程中的功能提供资料。结果表明,在获得的浙东白鹅PRLR基因c DNA序列中,其中编码区2496 bp可编码831个氨基酸,与其他鹅PRLR序列相比发生了T667C、G738A、C757T、G1047A突变,其中T667C引起氨基酸R-C的变化,C757T处引起氨基酸W-R的变化。在产蛋期和就巢期时,垂体中PRLR基因mRNA表达量均显著性高于下丘脑、卵巢和输卵管,其他组织间表达量没有显著性差异。同一组织在产蛋期和就巢期之间存在显著差异,部分组织达极显著差异。本文试验结果为继续开展鹅的就巢性方面的研究提供了一些数据。     

反季节调控对鹅PRL和PRLR基因表达的影响

为研究反季节生产期鹅催乳素(PRL)和催乳素受体(PRLR)基因表达情况,选取经反季节调控处于产蛋期(试验组)和未调控处于正常休产期(对照组)母鹅,采集垂体、下丘脑和卵巢组织,应用实时荧光定量PCR技术研究PRL和PRLR基因mRNA在下丘脑-垂体-性腺轴中的表达水平变化。结果表明:PRL和PRLR基因在垂体、下丘脑和卵巢组织均有表达,在垂体中表达量最高;PRL基因在试验组鹅垂体中表达量极显著高于对照组,而PRLR基因在试验组鹅垂体中表达量极显著低于对照组;PRL基因在试验组鹅下丘脑中表达量显著高于对照组,而PRLR基因在两组鹅下丘脑中表达元显著差异;PRL基因在两组鹅卵巢中表达量无显著差异,而PRLR基因在试验组鹅卵巢组织中表达量极显著高于对照组。反季节调控可增加鹅垂体和下丘脑中PRL基因表达,抑制垂体PRLR基因表达,增加卵巢中PRLR基因表达。     

产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴OAZ1和OAZ2基因表达的研究

【目的】探讨产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴中OAZ1和OAZ2基因表达的差异。【方法】选取健康的产蛋前期和产蛋期四川白鹅母鹅各3只,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取总RNA并反转录合成cDNA,应用实时荧光定量PCR检测产蛋前期和产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体、卵巢组织中OAZ1和OAZ2基因的相对表达量。【结果】在产蛋前期和产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体和卵巢组织中,OAZ1和OAZ2基因均有表达,并且产蛋期OAZ1和OAZ2表达量均极显著高于产蛋前期(P<0.01),产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体和卵巢中OAZ1的表达量分别是产蛋前期的1.79倍(P<0.01)、2.96倍(P<0.01)和3.48倍(P<0.01);产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体和卵巢中OAZ2的表达量分别是产蛋前期的2.66倍(P<0.01)、1.38倍(P<0.01)和2.03倍(P<0.01)。【结论】OAZ1和OAZ2可在HPG轴的各级水平发挥其调控鹅繁殖过程的功能,OAZ1主要参与卵巢功能的调控,而OAZ2主要参与下丘脑功能的调控。     

山麻鸭开产期和产蛋高峰期卵巢组织转录组分析

【目的】探明山麻鸭开产期和产蛋高峰期卵巢组织的转录组差异,丰富蛋鸭转录组数据信息。【方法】选取6份山麻鸭卵巢组织样品（开产期和产蛋高峰期各3份）,利用Illumina HiSeq^TM 2000进行高通量测序,构建山麻鸭开产期和产蛋高峰期卵巢组织转录组文库,并用测序评估、基因功能注释等生物信息学方法进行分析。【结果】经过测序获得质量不低于20的碱基比例（Q20）均高于93%;开产期获得了43 489 798条reads,4 380 847 061 bp数据量;高峰期获得了42 782 676条reads,4 307 499 083 bp数据量;分别有70.92%和72.70%的reads能比对到鸭参考基因组序列上。对开产期与产蛋高峰期转录组进行比较,发现开产期有26 808个表达基因,产蛋高峰期有27 013个表达基因,与开产期为参考,在高峰期卵巢组织中共获得1 929个差异表达基因,其中上调基因989个,下调基因940个;进一步将这些差异基因在Nr数据库进行注释,发现获得注释的基因有1 423个,其中上调基因695个,下调基因728个;COG功能注释分析发现这些差异表达基因共获得663个功能注释,涉及25个功能分类;GO 功能注释分析表明,有1 122个基因获得GO 功能注释,可以分为61个功能分类,这些分类主要涉及到分子绑定、催化活性、细胞过程、生物调节等诸多生理生化过程,其中涉及到发育繁殖生物学过程的相关注释基因有406个;KEGG分析发现共有425个基因注释到160个代谢通路中,其中GnRH信号通路、GPI-anchor生物合成、TGF-β信号通路、核糖体生物合成等通路显著富集。GnRH信号通路和TGF-β信号通路在卵巢的生理生殖活动发挥了重要作用,而GPI-anchor生物合成和核糖体生物合成,这两类代谢通路在卵巢生理生殖活动的作用尚不明确。【结论】利用高通量测序技术对山麻鸭开产期和产蛋高峰期卵巢组织的转录组进行测序和分析,揭示了山麻鸭不同生理状态下卵巢组织差异表达基因的数量,获得了差异表达基因的功能、分类和代谢通路。为丰富蛋鸭卵巢组织转录组信息,为开展蛋鸭产蛋性状相关基因的研究及分子调控机制研究奠定基础。     

鹅催乳素受体基因克隆与表达

应用RACE-PCR技术,克隆了全长3 159 bp鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA.序列分析表明, cDNA含443 bp 5′-UTR、2 496 bp编码区(含终止密码子TAA)和220 bp 3′-UTR.比对鸡催乳素受体基因并将前330 bp看作第1外显子,则gPRLR基因可划分为14个外显子.推导的蛋白序列含831个氨基酸,与鸡、鸽及火鸡PRLR的同源性分别为87.7%、85.2%和84.8%,其N末端含24个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含807个氨基酸.gPRLR mRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富.