氯霉素多克隆抗体的制备及免疫活性研究

建立氯霉素的免疫分析方法,由氯霉素原药与丁二酸酐反应合成了氯霉素两种半抗原(CAP-HS1、CAP-HS2),分别纯化后经质谱法(MS)分析鉴定结构.纯化的半抗原与牛血清蛋白(BSA)以碳二亚胺法偶联得到人工抗原.将免疫抗原分别免疫兔子获得了相应抗体.当包被抗原的浓度为10μg·mL-1时,抗CAP-HS1和CAP-HS2的冻干粉效价分别为8.39×106和6.55×104(OD490nm=1.0).研究了抗原抗体反应的亲和力和竞争抑制能力,其中抗CAP-HS1抗体适合免疫分析,检测线性范围为0.2～100 ng·mL-1,最低检测限IC20为0.239 ng·mL-1,抗CAP-HS1抗体对各类似物如甲砜霉素、氟甲砜霉素的交叉反应率分别为0.025%和0.166%,对其他类抗生素的交叉反应率＜2×10-5.     

丙烯酰胺单克隆抗体的制备

丙烯酰胺分子量小,结构简单,因此制备其特异性抗体比较困难.试验将丙烯酰胺与间巯基苯甲酸反应合成丙烯酰胺半抗原,半抗原偶联KLH载体蛋白合成抗原,通过免疫制备单克隆抗体,并对其进行了抗血清的效价、半抑制率、交叉反应测定.结果表明:免疫原为AM-KLH,包被原为AM-OVA测定的抗血清效价最高为1:32000倍,其半抑制率(IC50)为120.323 ng·mL-1,该抗体与丙烯酰胺近似物的交叉反应率均<1.48.探索了丙烯酰胺单克隆抗体的制备方法,为丙烯酰胺快速检测方法的建立提供了新的思路.     

基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立

[目的]制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持.[方法]以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工抗原,免疫7周龄Balb/c雌性小鼠,取抗血清效价最高、特异性最优小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分别评价融合细胞株的阳性和特异性,通过有限稀释法筛选稳定分泌对硫磷抗体的单克隆细胞株.再通过棋盘格试验筛选出抗原抗体最佳工作浓度组合建立对硫磷ic-ELISA标准曲线,并基于对硫磷单克隆抗体与各结构类似物的交叉反应率,评估ic-ELISA的特异性.采购西红柿样品进行对硫磷的添加回收试验,运用气相色谱法(GC)验证ic-ELISA的准确性.[结果]成功合成对硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,经5次免疫后融合小鼠的血清效价为8×103;通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、特异性最强的对硫磷单克隆细胞株4F11A10.以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25μg/mL细胞株4F11A10分泌抗体为最佳抗原抗体工作浓度组合,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC50)为50 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.34~300 ng/mL;所建立的对硫磷ic-ELISA与5种有机磷农药(丙溴磷、杀扑磷、倍硫磷、水胺硫磷和甲拌磷)均无交叉反应.对比ic-ELISA和GC测定西红柿样品中对硫磷的添加回收试验结果,发现ic-ELISA的添加回收率为84.86%~100.27%,GC的添加回收率为97.60%~106.40%,两种方法的检测结果一致性较好.[结论]建立的ic-ELISA可用于快速检测蔬菜、水果等农产品中的对硫磷残留.     

对硫磷抗体制备及其性质分析

人工降解对硫磷,得到了具有氨基活性的半抗原化合物——对氨基对硫磷,再通过戊二醛法和重氮法使之与载体蛋白连接,分别获得了抗原Ⅰ和抗原Ⅱ,在其基础上制备了抗体Ⅰ和抗体Ⅱ。ELISA试验结果表明,抗体Ⅰ对对硫磷的识别能力较弱,但能识别对氨基对硫磷并具有很好的特异性,抑制中浓度(IC50)为5．1ng／ml,最低检测限为2．4ng／ml;抗体Ⅱ对对氨基对硫磷的识别能力较弱,但对对硫磷具有很好的特异性,抑制中浓度(IC50)为5．2ng／ml,最低检测限为0．1ng／ml。     

己烯雌酚多克隆抗体的制备研究

合成了具有己烯雌酚基本分子结构特性并带有一个羧基活性基团的半抗原CP-DES,用混合酸酐法将其与BSA偶联后免疫6只BALB/c雌性小鼠,获得了特异性的己烯雌酚多克隆抗体。以所得抗体建立间接竞争性酶联免疫吸附分析法(cELISA)用于己烯雌酚的检测,最低检测限为0.04 ng.mL-1。交叉反应表明,己烯雌酚的特异性抗体与其结构类似物无明显交叉反应。     

免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗

试验选取自身蛋白制备克盐酸伦特罗克伦特罗载体抗原,免疫动物后产生高效价的特异性抗体,纯化抗体与胶体金结合成免疫金,制备成简易的检测试纸条。通过检测试纸条敏感性、保存期、金标抗体工作浓度选择、操作方法对比、实验检测及与单抗金标试纸条平行检测等试验,证明建立的免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗具有实用性、可靠性和稳定性。自身全血清作载体可使抗盐酸克伦特罗的ELISA效价高达4万以上。免疫金试纸法对盐酸克伦特罗的最小检测量为40ng·mL-1,试纸条在室温保存150d不影响检测结果。实验检测86份ELISA试剂盒阴性样品和42份阳性样品,其符合率分别为100%和95.2%。市售单抗金标试纸条检测结果与ELISA法的阳性符合率为95%(19/20)。     

己烯雌酚多克隆抗体的制备研究

合成了具有己烯雌酚基本分子结构特性并带有一个羧基活性基团的半抗原CP-DES,用混合酸酐法将其与BSA偶联后免疫6只BALB/c雌性小鼠,获得了特异性的己烯雌酚多克隆抗体。以所得抗体建立间接竞争性酶联免疫吸附分析法(cELISA)用于己烯雌酚的检测,最低检测限为0.04 ng.mL-1。交叉反应表明,己烯雌酚的特异性抗体与其结构类似物无明显交叉反应。     

急性冷应激对金定鸭开产前内分泌活动的影响

选42羽产前的金定蛋鸭进行笼养,研究其在舍温从正常的15℃急速降到-15℃,0.5h后再恢复正常温度的12h内某些内分泌活动的规律。试验结果如下,血清中三碘甲腺原氨酸(T3)呈现抛物线变化,在应激后0.5￣1h内出现峰值(1.28±0.03ng·mL-1),然后开始下降,在应激后12h达到(1.22±0.03)ng·mL-1的最低值,其差异显著(P<0.05);甲状腺素(T4)的含量均在应激后1h出现高峰值(5.24±5.07ng·mL-1),然后迅速下降,在应激后12h达到(1.81±1.98)ng·mL-1的最低值,其差异极显著(P<0.01);皮质醇(Cort)的含量前期上升迅速,后期变化规律不明显,并在试验期间内出现了2次峰值,分别是应激后立刻出现的(1.42±0.19ng·mL-1)和在应激后12h出现的(1.38±0.21ng·mL-1),同时在应激后2h有一个小的波峰(1.37±0.07ng·mL-1),其差异不显著(P>0.05);胰岛素(Ins)的含量先下降后上升,在应激开始时是(1.15±0.01)μIU·mL-1,在应激12h后为(1.15±0.02)μIU·mL-1,其差异不显著(P>0.05);血清中的总抗氧化能力(T-AOC)在应激后1h达到高峰(32.56±3.65)IU·mL-1,然后开始下降,到应激后12h为(24.04±4.40)IU·mL-1;其差异极显著(P<0.01);丙二醛(MDA)的含量变化较大,应激后立刻降到(1.43±0.33)nmoL·mL-1,应激后12h为(1.26±0.35)nmoL·mL-1,中间不断呈现波动变化,在应激后2h达到了峰值(2.18±0.36)nmoL·mL-1,其差异显著(P<0.05)。综合本试验结果得出,在急性应激条件下,血清中的个别激素、总抗氧化能力和丙二醛可以作为应激的敏感指标。     

间接竞争时间分辨荧光免疫分析法检测稻米中Cry1C毒素

利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明:获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074 ng·mL-1,中抑制浓度(IC50)为60.16 ng·mL-1,线性检测范围(IC20~IC80)为0.96~1 633.60 ng·mL-1;对Cry1B、Cry1Ab和Cry1Ac均有一定的交叉反应;添加回收试验的批内、批间回收率为84.53%~107.12%,变异系数为6.05%~11.24%。结论:该检测方法稳定性和重复性较好,可以满足Cry1C毒素的检测要求。     

间接竞争时间分辨荧光免疫分析法检测稻米中Cry1C毒素

利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明:获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074 ng·mL-1,中抑制浓度(IC50)为60.16 ng·mL-1,线性检测范围(IC20~IC80)为0.96~1 633.60 ng·mL-1;对Cry1B、Cry1Ab和Cry1Ac均有一定的交叉反应;添加回收试验的批内、批间回收率为84.53%~107.12%,变异系数为6.05%~11.24%。结论:该检测方法稳定性和重复性较好,可以满足Cry1C毒素的检测要求。     

农药残留免疫分析方法及其研究进展

发展经济简便的农药残留检测方法将有助于控制农药污染带来的危害。基于抗原－抗体特异性结合的免疫分析方法，克服了传统色谱法费时费力操作流程的缺点，既适合于实验室检测，又可用于现场筛选，具有分析速度快，经济、简便，又能同时分析大样本的特点。本文综合介绍了这类分析方法的基本类型，抗原、抗体的制备、标记方法及其在有机磷类、有机氯类、氨基甲酸酯类、三嗪类、拟除虫菊酯类农药检测中的应用。     

免疫分析中五参数Logistic模型的应用

在计算机中用五参数 Logistic 回归方程对玉米赤霉烯酮不同免疫分析方法的数据进行处理,方便、快速、准确地建立标准曲线及测定样品中未知抗原浓度,克服了手工绘制曲线、查算抗原浓度的随意性及繁琐性,使免疫分析方法的数据处理更科学更简便,同时与常用的 Logit-log 模型的处理结果进行了比较,表明五参数 Logistic 回归模型更合理更准确。模型中的五个参数具有特定的物理及生物意义,与免疫分析方法的基本参数有一定的联系。     

免疫分析方法在拟除虫菊酯类农药残留检测中的应用进展

综述拟除虫菊酯类农药免疫分析方法的建立及近年来免疫分析方法在拟除虫菊酯类农药残留检测中的应用,并对今后拟除虫菊酯类农药免疫分析研究的方向进行了展望。     

农产品中氰戊菊酯农药残留免疫检测技术探究

本文重点研究的是基于乡村振兴战略背景下，岭南乡村地区如何抓住政策机遇实现创新性 旅游开发，在整合现有乡村旅游开发的基础上，进一步推进岭南荔枝文化的旅游开发，通过文化娱乐 与旅游开发、文化整合与规划发展、文化风俗与创意发展路径，旨在为岭南荔枝文化的旅游开发寻找 一条新型的特色发展之路。     

免疫分析法在除草剂残留分析中的应用

文章介绍了农药残留免疫分析技术的原理、关键技术环节,综述了国内外除草剂残留免疫测定的研究动态。     

正常孕妇红细胞铁蛋白含量的测定

采用放射免疫法测定了１２６例正常孕妇的红细胞铁蛋白含量。孕妇红细胞铁蛋白（６．９±６．４ａｇ／细胞）低于非孕妇女（９．７±７．３ａｇ／细胞），差异显著。红细胞铁蛋白含量不受妊娠期血容量增加等因素的影响，故能准确地反映孕妇体内的铁储备状况，对孕妇缺铁有较高诊断价值。     

胶体金免疫层析试纸条法快速检测动物性食品中的氨苯砜

本研究以硝酸纤维素膜为固相载体,包被氨苯砜-OVA偶联物为检测带(T带),酶标羊抗兔二抗为质控带(C带)。依据免疫竞争法原理,建立了胶体金渗滤式试纸条快速检测动物性食品中氨苯砜的方法,最低检出限为20μg/L。样品前处理方法简单,在10min内即可目测判断结果。经高效液相色谱法验证,该方法可用。该方法操作简便、快速,适用于大批量临场动物性食品中氨苯砜残留的快速定性检测。     

农兽药多残留免疫分析检测方法研究进展

综述了免疫分析法在拟除虫菊酯、氨基甲酸酯、有机磷、氟喹诺酮、磺胺5种农兽药多残留检测上的应用情况,着重讨论了抗原设计、抗体制备和方法建立等核心技术的研究进展,并对检测方法的发展进行了展望。     

3种血清肿瘤标志物在诊断大肠癌中的价值

目的：探讨癌胚抗原（CEA）、糖链抗原（CA199．casbohydrate antigen19-9）和CA242（casbohydrate antigen 242）在大肠癌的临床价值。方法：采用微粒酶免疫法（MEIA）检测30例大肠良性疾病及45倒大肠癌患者血清CEA,CA199和CA242的水平。结果：大肠癌患者与大肠良性疾病患者的CEA,CA199和CA242水平比较差异有显著性（P〈0．01～0．05）。血清CEA,CA199和CA242的水平随大肠癌病程的进展而逐渐升高;3种肿瘤标志物中以CA242敏感性和特异性最高．分别为60．3％和73．3％．3种肿瘤标志物对诊断的敏感性与大肠癌的分期有关;联合检测可使诊断的敏感性提高至83．6％。结论：血清CEA,CA199和CA242水平测定可应用于大肠癌的诊断和疗效的观察,并可用于监测肿瘤的复发和转移。肿瘤标志物的联合检测有助于大肠癌的早期诊断,并增加诊断的敏感性和特异性。