豫杂一号泡桐体细胞同源四倍体诱导及其体外植株再生

在含不同质量浓度秋水仙素固液双层培养基上,以叶片为外植体进行了豫杂一号泡桐同源四倍体的诱导,同时建立了其体外植株再生系统。结果表明,秋水仙素质量浓度和处理时间对豫杂一号泡桐同源四倍体诱导率影响显著,外植体预培养时间影响不显著。在含20 mg.L-1秋水仙素MS培养基上处理48 h,未经预培养叶片四倍体诱导率最高达21.2%。同源四倍体幼苗叶片及其单气孔器较二倍体变大,气孔密度变小,叶绿素含量和SOD活性升高,MDA含量和POD活性降低。此外,叶片是同源四倍体豫杂一号泡桐体外植株再生的最佳外植体,MS+0.5 mg.L-1NAA+16 mg.L-1BA和1/2MS+0.1 mg.L-1NAA分别是其芽诱导和根诱导的最适培养基。     

火鹤四倍体的诱导与鉴定

以火鹤二倍体品种‘Smaragd’和‘Artus’的愈伤组织为诱导材料,利用秋水仙素处理的方法进行火鹤四倍体的离体诱导。结果发现,火鹤四倍体诱导率因基因型、秋水仙素处理浓度及处理时间不同而异。不同品种的四倍体诱导率不同,低浓度的秋水仙素的诱导率要高于高浓度的诱导率;相同浓度处理下,长时间处理的诱导率比短时间处理的诱导率要高。两个品种分别在含0.2 g/L秋水仙素浓度的液体培养基中振荡培养14 d的四倍体诱导率最高,分别为52.50%和61.90%。随着秋水仙素浓度的增加,愈伤组织的绝对生长速度和平均芽分化数逐渐降低。改良压片法是鉴定火鹤四倍体的可靠方法。     

南方泡桐同源四倍体的诱导及其体外植株再生

【目的】用秋水仙素诱导出南方泡桐同源四倍体,建立其体外植株高效再生系统,为泡桐新品种的培育奠定基础。【方法】以二倍体南方泡桐幼苗叶片为外植体,预培养泡桐不同时间(0,8,16 d)后,置于含不同质量浓度(5,10,20 mg/L)秋水仙素的固液双层培养基上处理泡桐不同时间(24,48,72 h),以诱导其同源四倍体植株,并通过根尖细胞染色体计数和叶片单细胞DNA相对含量的测定,进行变异植株的倍性分析;同时,以其四倍体叶片、茎段和叶柄为外植体,利用不同植物激素不同质量浓度的组合培养基,筛选建立体外植株再生系统的最适培养基。【结果】秋水仙素质量浓度和处理时间对南方泡桐同源四倍体诱导率影响显著,外植体预培养时间影响不显著;在含10 mg/L秋水仙素的MS培养基上处理72 h,未经预培养叶片的四倍体诱导率高达18.8%;同源四倍体幼苗叶片较二倍体大而且厚,叶片单气孔器变大,孔密度变小,叶绿素含量和SOD活性升高,MDA含量和POD活性降低。MS+0.1mg/L NAA+8 mg/L BA、MS+0.3 mg/L NAA+12 mg/L BA和1/2 MS分别是其愈伤组织诱导、芽诱导和根诱导的适宜培养基。【结论】诱导获得了南方泡桐同源四倍体,建立了同源四倍体南方泡桐的体外植株再生系统;叶片是同源四倍体南方泡桐体外植株再生的最佳外植体。     

秋水仙素离体诱导红掌四倍体试验

以红掌阿拉巴马(Albama)愈伤组织为诱导材料,采用秋水仙素进行四倍体离体诱导。结果表明,液体培养处理效果较好,能有效地诱导四倍体。秋水仙素浓度0.20 g·L-1时的四倍体诱导率较高,浓度过高或过低均会导致诱导率下降。在同一秋水仙素浓度下,处理时间越长,四倍体诱导率越高。0.20 g·L-1秋水仙素液体培养15 d的四倍体诱导率最高,为17.5%。四倍体植株相对粗壮,叶片大而厚实且皱,叶下表皮气孔长,且密度小,形态筛选和气孔鉴定可作为四倍体的辅助筛选。     

秋水仙素浸泡法对黑果腺肋花楸多倍体的诱导及初步鉴定

以黑果腺肋花楸组培苗茎尖、叶片和继代愈伤组织为材料,探索秋水仙素不同浓度和不同处理时间对不同外植体诱导的愈伤组织的存活率、再生芽数、增殖系数和多倍体发生的影响;并对秋水仙素处理后不同外植体诱导产生的再生植株,经3次继代培养后生长30d的植株的染色体倍性进行镜检。结果表明:不同外植体的存活率和出芽率随秋水仙素浓度的增高和处理时间延长而降低;其中,黑果腺肋花楸愈伤组织的存活率高于茎尖和叶片。经秋水仙素处理后,3种外植体均能诱导多倍体发生;处理浓度和时间的增加有利于提高染色体加倍率,但外植体的死亡率随之增加。当愈伤组织在秋水仙素浓度为2 000mg/L,处理24h时,叶片愈伤组织增殖系数为2.4,存活率为52%。以植株矮化和茎秆粗壮为依据筛选的再生植株中鉴定出47株假定多倍体,但大多为混倍体(嵌合体)。叶片诱导的愈伤组织,经1 500mg/L秋水仙素浸泡处理24h后,诱导再生的生根植株中获得1株整株均一加倍的四倍体植株。     

未名玫瑰葡萄秋水仙素诱导与鉴定

[目的]研究未名玫瑰葡萄秋水仙素处理的最适浓度和时间,及适宜的倍性鉴定方法。[方法]以秋水仙素为诱变剂,利用不同浓度的秋水仙素浸泡种子不同时间,对二倍体葡萄未名玫瑰品种进行加倍诱导,并采用流式分析仪对诱变植株的细胞DNA含量进行鉴定。[结果]从诱导成活率和四倍体诱变率综合考虑,诱变四倍体未名玫瑰种子的适宜条件:当种子胚根长1.0 cm时,用0.5%秋水仙素处理96 h,其成活率和四倍体率分别为11.33%和5.12%。[结论]用倍性分析仪测定细胞倍性是一条简便快捷的鉴定方法。处理时间是影响成活率、四倍体率和变异率的主要因素。     

秋水仙素离体双层诱导同源四倍体青花菜的研究

研究秋水仙素离体双层培养诱导对3种青花菜染色体加倍的诱导效应,建立青花菜四倍体的离体双层培养诱导体系,为植物倍性育种提供新途径。以子叶期保留下胚轴0.4~0.6 cm的子叶为外植体,接入含不同浓度的秋水仙素离体双层培养基(上层为含秋水仙素的液体培养基,下层为不含秋水仙素的固体培养基)中诱导24、48和96 h。结果表明:以300mg·L-1秋水仙素处理48 h诱导获得四倍体的效果最佳,LQ-2、S139-2和LQ-23三个材料外植体存活率达100.00%,增殖系数分别为2.00、2.33和2.67,四倍体诱导率分别为66.67%、71.42%和62.50%。与二倍体相比,四倍体植株在株高、叶片、花球等性状上增大,气孔大小和密度呈现显著差异,LQ-2、S139-2和LQ-23三个材料的花粉粒增大,增幅分别为18.85%×63.71%、25.00%×34.68%和3.36%×61.86%。四倍体根尖染色体为2n=4x=36。流式细胞仪鉴定发现二倍体DNA相对含量为300,四倍体为600。结论:通过大量试验,找到了秋水仙素双层诱导青花菜的最佳秋水仙素浓度和诱导时间,提高了诱导率,获得了3个同源四倍体青花菜新材料。     

不同诱导方法对毛泡桐和白花泡桐四倍体诱导的影响

将预培养不同时间的毛泡桐和白花泡桐茎段、叶片和叶柄分别在含有不同浓度秋水仙素的液体、固体和双层培养基上进行四倍体植株诱导,并采用根尖染色体计数和成熟叶片单细胞DNA含量测定进行诱变植株的倍性分析.结果表明,叶片是毛泡桐和白花泡桐四倍体诱导的最适材料,双层培养基处理叶片后四倍体诱导率最高,不经预培养的毛泡桐叶片在质量浓度为2 000 mg·L-1的秋水仙素双层培养基上处理72 h和预培养12 d的白花泡桐叶片在质量浓度为1 000 mg·L-1的秋水仙素双层培养基上处理24 h分别是毛泡桐和白花泡桐四倍体诱导的最佳组合.     

柑橘四倍体田间化学诱导技术研究

采用不同的诱导药剂及其不同的浓度对大田柑橘腋芽进行四倍体诱导,用流式细胞仪检测植株的倍性。多年研究结果表明:对柑橘四倍体田间诱导效果最佳的药剂为秋水仙素,其适宜的处理浓度为0.10%;秋水仙素对不同柑橘品种的发芽率和四倍体诱导率的影响存在较大的差异,以新余蜜橘的发芽率最高,以南丰蜜橘的四倍体诱导率最高。     

秋水仙素诱导贵州野生淡黄花百合的多倍体

以贵州野生淡黄花百合为材料,通过不同浓度及时间的秋水仙素浸泡处理芽诱导多倍体,进行无菌培养。结果表明:以0.15%秋水仙素处理48h的诱导效果最佳,四倍体诱导率达16.67%,四倍体植株叶面皱缩,部分扭曲,根系粗壮,根尖染色体加倍。     

柑橘四倍体田间化学诱导技术研究

采用不同的诱导药剂及其不同的浓度对大田柑橘腋芽进行四倍体诱导,用流式细胞仪检测植株的倍性。多年研究结果表明:对柑橘四倍体田间诱导效果最佳的药剂为秋水仙素,其适宜的处理浓度为0.10%;秋水仙素对不同柑橘品种的发芽率和四倍体诱导率的影响存在较大的差异,以新余蜜橘的发芽率最高,以南丰蜜橘的四倍体诱导率最高。     

秋水仙素对大蒜茎尖试管苗四倍体的诱导

【目的】大蒜为无性繁殖作物,难以采用常规育种方法选育新品种,而化学诱变作为种质创制的重要方法之一,在一些作物上获得了较好的效果。探讨秋水仙素对大蒜茎尖组培试管苗多倍体的诱变效应,旨在为创新大蒜种质提供理论依据和技术方法。【方法】选用山东‘苍山蒲棵’、四川‘正月早’和‘新疆紫皮’3个生态区域的大蒜品种,鳞茎经自然晾干通过休眠后,取鳞芽茎尖为外植体接种到不同处理的培养基上,采用二次饱和-D最优设计方法,研究秋水仙素不同浓度及处理时间对大蒜茎尖试管苗成苗率及染色体加倍率的影响,并建立相关回归模型;通过对回归模型进行解析,确定诱变大蒜四倍体的优化方案;采用流式细胞仪检测幼叶和根尖压片染色体计数相结合的方法进行染色体倍性鉴定。【结果】利用流式细胞仪检测的四倍体大蒜植株叶片DNA相对含量是二倍体对照大蒜‘苍山蒲棵’的2倍;通过染色体计数法鉴定二倍体植株根尖染色体为2n=2x=16,而四倍体植株染色体为2n=4x=32。在秋水仙素处理大蒜茎尖诱变四倍体过程中,随秋水仙素处理浓度的升高及时间的延长,3个大蒜品种试管苗成苗率均逐渐降低,且处理浓度的影响大于处理时间;品种间成苗率存在显著差异,以‘正月早’较高,‘新疆紫皮’次之,‘苍山蒲棵’较低,其处理间平均成苗率分别为48.69%、46.73%和41.83%。秋水仙素对大蒜四倍体的诱变效应以处理浓度大于处理时间,不同大蒜品种对秋水仙素的反应存在显著差异,虽然‘苍山蒲棵’、‘正月早’与‘新疆紫皮’的最高四倍体诱导率分别达15.69%、15.69%和23.53%,但大蒜四倍体平均诱导率则以‘正月早’最高,‘苍山蒲棵’次之,‘新疆紫皮’最低,分别为9.15%、7.84%和6.53%。经计算机模拟寻优,求得的3个大蒜品种试管苗成苗率均超过50%的处理方案为秋水仙素浓度为0.268%-0.694%、处理时间为61.1-113.8 h;3个大蒜品种四倍体诱导率均超过5%的秋水仙素处理浓度和时间分别为0.531%-0.580%和79.8 -112.2 h。【结论】不同大蒜品种对秋水仙素处理浓度和处理时间的反应不同,秋水仙素对大蒜四倍体的诱变效应亦存在显著差异,但均以处理浓度的影响大于处理时间,且处理浓度与处理时间存在互作效应。3个大蒜品种成苗率超过50%且四倍体率超过5%的秋水仙素处理浓度为0.531%-0.580%、处理时间为79.8-112.2 h。     

秋水仙素对金达苜蓿染色体加倍效果的影响

【目的】获得金达苜蓿四倍体的纯合体,为不同倍性苜蓿遗传特性研究及不同倍性间实现基因的流动奠定基础。【方法】以金达苜蓿(Medicago sativa L.cv.Jinda)种子(2n=16)为材料,利用秋水仙素结合组织培养,研究了秋水仙素不同质量浓度(0.02,0.07,0.12mg/mL)、不同处理时间(1,3,7d)对金达苜蓿愈伤组织诱导效果及染色体加倍效果的影响,并从形态学和根尖染色体观察对变异株进行倍性鉴定。【结果】秋水仙素质量浓度和处理时间2个因素对金达苜蓿诱变效果均有一定程度的影响,随着秋水仙素质量浓度的升高、处理时间的延长,愈伤组织的诱导率和分化率均下降,成苗率则规律不明显,其中0.07mg/mL秋水仙素处理3d的诱导效果最好,愈伤组织的诱导率达到60.5%,愈伤组织分化率为33.63%,诱变幼苗成苗率为24.1%。倍性鉴定结果表明,获得的变异植株为四倍体与二倍体的混倍体。【结论】0.07mg/mL秋水仙素处理3d是获得多倍体变异幼苗的最佳条件,获得了四倍体和二倍体的混倍体。     

除草剂胺磺灵(Oryzalin)诱导椪柑四倍体的研究

以椪柑枝条为外植体,建立其无菌离体快繁体系,利用除草剂Oryza1in为诱变剂进行椪柑四倍体诱变处理,研究胺磺灵Oryzalin不同浓度和不同处理时间对椪柑四倍体诱导效果的影响,结果表明:椪柑四倍体诱导的最佳处理条件为40 mg/L浓度的Oryzalin浸泡茎段2d,诱导率最高为13.3％.     

水稻体细胞同源四倍体的人工诱导及遗传特性研究

以４种基因型水稻灿粳杂种二倍体为材料，在幼穗离体培养过程和种子发芽期，分别用不同浓度秋水仙素处理愈伤组织和发芽种子，诱变获得水稻同源四倍体。结果表明，秋水仙素３００ｍｇ／ｌ和５００ｍｇ／ｌ的浓度处理愈伤组织，四倍体最高诱导率分别达到４５．５％和５６．３％，平均诱导率比种子发芽期的四倍体诱导率提高１０倍左右。种子发芽期为２５０－５００ｍｇ／ｌ较低浓度的秋水仙素诱导效果较好，四倍体诱导率为２．９－５．     

小果型西瓜离体诱导四倍体的初步研究

[目的]为小果型西瓜三倍体的育种奠定基础。[方法]以二倍体小果型西瓜优良自交系MH-39-1的子叶为外植体进行离体诱导四倍体的研究。[结果]100 mg/L秋水仙素处理子叶的不定芽分化率达66.7%,平均分化不定芽6.7个。400 mg/L秋水仙素处理的四倍体诱导率为20.0%。秋水仙素处理12 h的不定芽分化率为83.3%,处理48 h的不定芽分化率为16.7%。秋水仙素处理24~36 h的四倍体诱导率为16.7%。4.0 mg/L 6-BA处理的不定芽分化率为83.3%,1.0 mg/L 6-BA处理的不定芽分化率为58.3%。再生芽在4种生根培养基上的生根率均在90%以上,在不添加植物生长调节剂的培养基上再生苗的平均生根数仅为6.5条,添加NAA的培养基上再生苗的平均生根数在10条以上,但根短而粗。[结论]初步确定秋水仙素离体诱导小果型西瓜四倍体的适宜浓度和处理时间为400mg/L和24 h。     

利用秋水仙素诱导地菍多倍体的研究

[目的]探索利用秋水仙素诱导地蒸多倍体的可行性.[方法]以秋水仙素作为诱变剂,对地菍无菌试管苗丛芽进行多倍体诱导,研究秋水仙素浓度、处理方法和处理时间对地菍组培苗丛芽诱导效果的影响.经纯化和鉴定后,分析地菍多倍体的外部形态和叶片气孔特征.[结果]采用混培法用0.1%秋水仙素对地菍处理14 d的诱导率达28%,明显优于浸泡法.秋水仙素浓度对地菍染色体的加倍率影响显著.采用不定芽技术切取变异株顶芽继代5次后,可得到纯合四倍体地菍植株,染色体数目为2n=56.与正常二倍体相比,四倍体地菍植株表现出多倍体巨大型特征.[结论]采用混培法用0.1%秋水仙素处理地菍试管苗丛芽21 d,可获得最好的诱导效果.     

白魔芋多倍体诱导研究初报

采用种子浸泡法和根状茎顶芽滴液法进行白魔芋多倍体诱导,比较了不同秋水仙素浓度和不同处理时间对出苗率和变异率的影响。结果表明,滴液法对材料的毒害性更小,经同一浓度秋水仙素溶液处理后出苗率和植株形态变异率均高于种子浸泡法,但诱变加倍的效果不如浸泡法。实验中获得一株纯合四倍体植株,由0.20%秋水仙素溶液处理种子48h诱变得到。     

用秋水仙素处理不同家系白桦种子诱导四倍体的研究

采用0.1%和0.2%秋水仙素分别处理4 个家系白桦种子1、2、3 和4 d,调查其对白桦种子相对发芽率、相对 发芽势的影响和四倍体诱导率,在此基础上研究了2 种桦树共7 个家系在0.2%秋水仙素处理3 d 的条件下四倍体 的发生率。结果表明:1)秋水仙素对种子发芽率、发芽势有显著影响,随着浓度的增加发芽率和发芽势降低;同一 浓度下随着诱导时间的增加种子发芽率和发芽势呈现先降低后增加的变化趋势,在诱导3 d 时为最低。2)用 0.2%的秋水仙素处理种子3 d,发现白桦种间和家系间的四倍体诱导率明显不同,欧洲白桦4 个家系的平均诱导率 为3.76%,而3 个白桦杂种家系的平均诱导率仅为0.09%,7 个家系中YB3 的诱导率高达8.86%。      

春兰根状茎多倍体诱导试验

秋水仙素处理对根状茎生长和分化起抑制作用,在相同浸泡时间处理下,秋水仙素浓度越高,其分化率越低;而采用相同浓度处理时,原球茎基本上随着浸泡时间的增加,其分化率逐步下降。秋水仙素处理后的再生植株中,0.10%浸泡3 d处理的变异诱导率最高为19%,四倍体加倍率最高的为3 d处理。