烟草赤星病抗病性鉴定方法研究进展

现阶段有代表性的烟草赤星病抗病性鉴定方法主要有大田人工病圃鉴定法、离体叶片鉴定法和赤星病菌毒素抗性鉴定法等，本文对这几种鉴定方法的优缺点进行了分析，并在此基础上结合其它作物品种的抗病性鉴定方法提出了一些新的设想。     

玉米大斑病发生及防治若干问题的研究

研究了12种化学农药对玉米大斑病菌孢子萌发和菌丝扩展的抑制作用、花粉粒对大斑病菌孢子萌发的影响、离体叶片上病斑的产孢规律等问题。结果表明：代森锰锌及其复配药荆、福美双对大斑病菌孢子萌发、菌丝扩展均有较强的抑制作用；花粉粒对大斑病菌孢子萌发有明显的促进作用；离体叶片上的幼龄病斑仍可旺盛产孢约4d，持续产孢时间可达10d，且在叶片背面病斑产孢量明显高于叶片正面。     

烟草赤星病菌致病力测定方法的研究

用烟草赤星病菌(Alternaria alternata)和其它植物来源的分离物(Alternaria sp.)共39个菌株分别接种烟草品种G80和G140的幼苗,并用其中24个菌株接种此二品种的离体叶片。结果表明,不同菌株对离体叶片的穿透生长能力与致病力以及对幼苗的致病力(病叶率与病情指数),明显地表现为从低到高的组群关系。其中,烟草赤星病菌5个菌株,TBA6、TBA8、TBA12、TBA19和TBA28,为表现一致的高致病力,而TBA20和TBA27表现一致的低致病力。比较发现,病菌对离体叶片的致病力(等级)与其对幼苗的致病力,在烟草赤星病菌的24个菌株间以及在两个烟草品种间的趋势相一致,而病菌对离体叶的穿透生长能力与其对幼苗的致病力之间无一致趋势。讨论认为,离体叶片法用于测定病菌的致病力不失为一种准确快速而又易于控制的方法。     

细菌性果斑病菌Acidovorax avenae subsp.citrulli对黄瓜侵染及离体叶片接种方法的研究

由Acidovorax avenae subsp. citrulli引起的细菌性果斑病对西瓜、甜瓜等葫芦科作物是一种毁灭性病害.对分离自发病甜瓜的细菌性果斑病菌供试菌株FC440的抗生素抗性特点、对黄瓜(Cucumis sativus L.)的致病性以及黄瓜离体叶片接种发病条件等病原生物学特性作了研究.结果表明:FC440对氨苄青霉素,氯霉素,壮观霉素,利福平和潮霉素具有抗性,对卡那霉素和四环素敏感,可侵染重要的经济作物黄瓜.离体叶片接种实验显示,不同缓冲液制备的菌悬液在供试黄瓜叶片上形成病斑存在差异,磷酸盐缓冲液(5和10 mmoL/L PBS)悬浮菌液发病较水悬浮菌液快,104 cfu PBS悬浮菌的接种量和107 cfu水悬浮菌的接种量分别可致黄瓜离体叶片在接种8 d内形成典型症状;病斑在划伤条件下以及在老龄叶片上形成快;以5 mmoL/L PBS(pH 7.4) 悬浮,106 cfu的接菌量划伤接种第一、二真叶期叶片,是离体黄瓜叶片上形成病斑的较好的接种方法.这些研究结果为利用该菌的抗生素抗性特点开展其遗传转化工作、离体接种以便规模筛选致病突变体以及研究其与寄主植物互作机制等方面的工作奠定了基础.     

大蒜叶枯病抗性鉴定方法的筛选

为了建立大蒜叶枯病抗性鉴定的方法,根据田间调查结果选取对大蒜叶枯病不同抗性的3个品种G087、G064、G039作为鉴别品种,对病菌离体接种鉴定中不同孢子悬浮液浓度、病菌接种部位、接种后不同培养温度、不同株龄接种,以及活体接种方法进行了比较和筛选。结果表明:采用4～5叶期大蒜的离体叶片,叶面或叶背接种,接种病菌孢子悬浮液浓度106个/mL,接种后置于21℃温度条件下培养7 d,统计病情指数和品种抗性类型,鉴定结果与品种的抗病水平一致;离体接种鉴定比活体接种法更简便、快速;离体和活体鉴定结果均与品种田间抗病性一致,可作为大蒜品种资源叶枯病抗性鉴定技术。     

非洲菊菌核病的抗性鉴定方法比较

菌核病是非洲菊生产上的重要病害。为了建立快速有效的菌核病抗性鉴定方法,本研究采用离体叶片接种法、带菌牙签接种法、菌块接种法和菌核接种法对不同抗性的非洲菊品种进行抗性鉴定与评价。在离体叶片接种时发现菌核病菌对叶肉的侵染力较叶柄更强,嫩叶和老叶更有利于病害的发生和病斑的扩展;带菌牙签接种后,植株发病快且病情指数明显高于菌块接种法,而菌块接种法与连作地自然发病体现的抗性水平更接近。因此,菌块接种法更适合作为非洲菊品种对菌核病抗性鉴定的接种法。     

不同寄主来源腐烂病菌对苹果树致病性研究

[目的]研究不同寄主来源腐烂病菌对苹果树的致病性,确定苹果树腐烂病菌侵染来源,为制定病害防治策略及降低发病率提供理论依据.[方法]将来源于梨树、苹果、杨树、沙枣、胡杨、枣树、柳树及核桃腐烂病菌,接种于30;苹果树皮培养基、苹果果实、叶片、离体枝条及田间枝条上观察产孢情况,并计算发病率、病斑扩展速率.[结果]来源于梨树和胡杨树腐烂病菌在果实上侵染速度最快且能形成产孢体.来源于梨树、胡杨、枣树的腐烂病菌能在离体枝条上吐出分生孢子角.来源于胡杨和柳树的腐烂病菌未能侵染苹果叶片.来源于苹果、胡杨、枣树的腐烂病菌能成功侵染田间枝条且在20 d内吐出黄色分生孢子角.[结论]不同寄主来源的腐烂病病菌均能在30;苹果树皮培养基上形成产孢体,能成功侵染果实、叶片及离体枝条,但在病斑扩展速率和产孢能力等方面存在明显差异.来源于梨树、苹果、胡杨、红枣的病原菌均能在苹果田间枝条上侵染成功.     

重庆烟草赤星病菌致病力分化及培养性状研究

利用离体叶片悬滴法，将从重庆烟区采集分离的烟草赤星病菌13个代表株进行了致病力测定．在PDA平板上对其培养性状进行研究。结果表明，不同菌株之间致病力有明显的差异。其中，3株表现较强的致病力．病指为68．6、63．2和61．8；2株表现中等致病力，病指为57．0和55．6；1株表现较弱致病力，病指为22．9；5株表现弱致病力．病指为4．9、5．6、9．7、14．6和4．8；不致病的有2株，病指为0，未发现有强致病力菌株。通过不同菌株对离体叶片的穿透生长能力与致病力以及病菌来源说明，病菌对离体叶片的穿透生长能力与致病力有一定的一致趋势；在不同的烟区中存在着致病力不同的菌株，同一烟区中也存在着致病力不同的菌株。在培养性状上．13个代表菌株同以往报道的相一致．菌株致病力的强弱与其生长量和产孢量有一定的关系。     

对烟草青枯病苗期抗性鉴定接种方法的探讨

观察了烟草青枯病菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）接种烟草叶片后的发病情况,结果是同一烟草品种的叶片接种不同浓度的青枯菌株,随着浓度增高而症状加重。烟草苗龄对发病存在影响,苗龄越大发病越轻。不同品种之间的症状反应表现出明显差异。温度是发病的关键因素,高温发病重,低温发病轻或不发病。在相同条件下,离体叶片接种比非离体叶片接种症状表现重、其中小龄叶又比大龄叶发病重。离体叶片注射接种     

可可种质抗黑果病离体鉴定方法研究

利用可可离体叶片和离体果实鉴定可可种质对黑果病抗性的方法。结果表明:接种方法、接种物浓度、叶龄或果龄等因素影响离体叶片、果实黑果病发生程度;离体叶片接种鉴定方法最适条件是采用针刺法接种、接种物浓度3×107个/m L、叶龄50~60 d;离体果实接种鉴定方法最适条件为采用滴接法、接种物浓度为3×105个/m L、果龄2~3个月。采用离体叶片接种和离体果实接种方法均能鉴定出可可种质对黑果病抗性的差异,鉴定结果与田间成株期的抗病性表现基本一致。     

云南烟草赤星病菌致病力分化研究

利用离体叶片悬滴法,将从云南烟区采集,分离的烟草赤星病菌３９种分别接种到感病品种ＲＧ１７上,在保湿培养箱中测定其致病力。结果表明,病菌不同菌株致病力有明显的差异。其中,致病力强的菌株有６株,病指为６０￣９５,最高的两个菌株为９７Ａａ０．０３和９８Ａａ６１２,病指分别为９５．０和９４．４％,致病力中等的菌株有８株,病指为１５￣４７．５;致病力弱的菌株有１５株,病指在１０以下,还有１０个菌株不致病。病     

基于柑橘叶斑驳病毒的表达载体构建及应用

【目的】 构建基于柑橘叶斑驳病毒（citrus leaf blotch virus,CLBV）的表达载体,通过系统表达抗菌肽提高植物抗病性,为柑橘溃疡病、柑橘黄龙病等病害的防控提供新型技术手段。【方法】 基于前期构建的侵染性克隆pCY-CLBV201,在外壳蛋白基因终止子后插入亚基因组启动子序列及多克隆位点,构建病毒表达载体pCLBV202。在多克隆位点插入绿色荧光蛋白（green fluorescent protein）基因（gfp）,通过农杆菌介导接种、荧光观察验证pCLBV202-GFP表达GFP的情况。克隆天蚕的抗菌肽（cecropin B,CB）基因并构建重组载体pCLBV202-CB,通过农杆菌介导分别注射接种本氏烟和真空浸润接种柑橘实生苗,筛选阳性植株并分别注射接种和根灌接种烟草青枯病菌及针刺离体叶片接种柑橘溃疡病菌,同时设空载体接种植株为对照,通过症状观察、发病率及病情指数评价接种植株的烟草青枯病抗性;通过柑橘叶片的病斑数量、发病率及菌落浓度评价其溃疡病抗性。【结果】 pCLBV202-GFP接种烟草和尤力克柠檬后,均可以在系统新叶上观察到绿色荧光,在烟草上表现更为明亮,说明基于CLBV的表达载体构建成功。接种青枯病菌后,处理组（pCLBV202-CB）较对照组（pCLBV202）发病时间延迟4 d。在接种后第24天（24 dpi）,处理组发病率为14.3%,对照组发病率为100%,差异显著。处理组相对于对照组的抗性指数为-2.66,抗性评价为高抗,表明利用pCLBV202-CB系统表达CB增强了对烟草青枯病的抗性。尤力克柠檬叶片针刺接种柑橘溃疡病菌,7 dpi时,处理组病斑数为47个,发病率为43.5%,对照组病斑个数为73个,发病率为67.6%。菌群数变化检测发现,处理组菌群数小于对照组菌群数,表明利用pCLBV202-CB系统表达CB增强了尤力克柠檬的溃疡病抗性。【结论】 构建了基于CLBV的病毒表达载体pCLBV202。利用pCLBV202在本氏烟和柑橘中系统表达CB可以提高植株对细菌性病害的抗性,这为柑橘细菌性病害的防控提供了新技术。     

36%速杀菌防治烟草赤星病和番茄灰霉病初探

离体活性测定结果，36％速杀菌对烟草赤星病菌、番茄灰霉病菌的抑制中浓度EC50分别为0．838μg/ml、0.505μg/ml。小区药效试验结果表明，其1500g/hm^2在药后7d、14d对烟草赤星病的防效分别在79％、74％以上，高于生产上普遍使用的同样稀释倍数菌核净的防效；1200g/hm^2对番茄灰霉病的病果、病叶防治效果分别达79％、75％以上，极显著高于多菌灵、国产速克灵的防效。     

烟草赤星病菌拮抗微生物的筛选及其对病原的抑制作用

从烟草赤星病斑上分离得到14株拮抗赤星病菌的微生物，对峙培养发现其中6株对赤星病主要病原Alternaria alternata具不同致病力的6个菌株均具拮抗作用。室内离体叶片悬滴法测定发现其中的AM1、AM2、AM6三株拮抗微生物100倍带菌培养液对赤星病的防效均达100％。平皿测定发现AM6 100倍带菌培养液对强致病力病菌的抑制作用为100％，其灭菌滤液的抑制效果为81.8%。其抑菌机理主要是产生拮抗物质，显微镜观察表明AM6能使病菌孢子和菌丝畸变，细胞壁破裂，原生质泄露。     

4种梨砧木对梨火疫病的抗病性评价

通过离体和活体接种的方式分析梨资源对于梨火疫病的抗病水平，为进行优异梨砧木资源选育及梨火疫病的合理防治奠定理论基础。选取秋子梨、豆梨、杜梨、川梨4种梨砧木类型，采用室内离体叶片、室内离体枝条和室外活体嫩梢人工接种的方式，初步评价不同梨砧木种质接种梨火疫病菌(Erwinia amylovora菌株)后的发病率、发病程度，病斑蔓延的程度及病原菌在侵染过程的差异，并对3种人工接种的鉴定方法结果进行相关性分析。结果表明，接种梨火疫病菌后4种梨砧木类型均有发病现象；结合离体叶片、离体枝条和活体嫩梢的抗病分级结果得出，不同梨砧木类型对梨火疫病抗性强弱依次为秋子梨>豆梨>川梨>杜梨。     

烟草黑胫病菌对甲霜灵具有较大的抗药性风险

烟草黑胫病是烟草生产上的一种主要病害,目前仍然以甲霜灵作为最主要的防治药剂.由于甲霜灵对病原菌的作用位点单一,病菌容易对其产生抗药性.为了评估烟草黑胫病菌对甲霜灵的抗药性风险,云南省烟草科学研究所和云南大学工业微生物发酵工程重点实验室的科研人员近期以对甲霜灵敏感和高抗的烟草黑胫病菌240和191为出发菌株,进行了抗性突变频率测定、抗性诱变、抗性水平测定、遗传稳定性、生长速率、致病性测定和适合度等研究.     

水稻离体叶抗稻瘟病鉴定方法研究

[目的]筛选一套较为完善的适宜于水稻稻瘟病抗性叶片离体鉴定的方法。[方法]从保绿剂对离体叶保绿效果的影响、保绿剂对孢子在离体叶上萌发率的影响、不同孢子接种方法对叶片发病的影响和孢子悬浮液浓度、温度对稻瘟病病原菌染叶片效果的影响几方面对水稻稻瘟病抗性叶片离体鉴定方法的影响因素进行了研究。[结果]以6-BA作为保绿剂,浓度在50-75mg／ml范围内保绿效果较好,叶片几乎全部保绿。接种方法以喷雾法与液滴法较好,孢子萌发率较高,分别达到了84．7％、86．5％,浸泡法不适合叶片离体鉴定。温度为28℃时,接种用孢子悬浮液的浓度1×10^5～2×10^5个／ml较为合适。叶片发病期间温度低于28℃,潜育期有所延长。[结论]得到了行之有效的水稻抗瘟性叶片离体鉴定方法。     

烟草赤星病菌拮抗菌发酵液的防病作用

以拮抗烟草赤星病菌的两株放线菌SZF2和SZF7为材料,对其发酵液防赤星病菌的效果及机理进行了初步研究.结果表明,SZF2和SZF7的无菌发酵液能抑制烟草赤星病原菌孢子萌发,同时还能激发烟草产生过量过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO),从而提高烟草对赤星病菌的抗性.离体和盆栽试验结果表明,SZF2和SZF7的发酵液可明显降低烟草赤星病的病情指数,其盆栽试验相对防效分别为48.94%和50.13%.     

木霉菌发酵液蛋白对玉米弯孢菌叶斑病的诱导抗性作用

[目的]研究木霉菌发酵液蛋白对玉米弯孢菌叶斑病的诱导抗性作用。[方法]对玉米叶片离体病斑大小进行比较和经活体诱导后检测抗病性相关基因在mRNA水平上的表达差异。[结果]与对照相比,经发酵液蛋白处理后的离体叶片接种后病斑较小,且防御反应基因的转录水平都有不同程度的提高。[结论]木霉菌发酵液蛋白对玉米弯孢菌叶斑病有较好的诱导抗性作用。     

水稻主栽品种对纹枯病的抗性鉴定及评价

广泛收集全国各稻区主栽水稻品种98份,于2018年在辽宁省沈阳市沈阳农业大学水稻所试验基地,通过分蘖期田间接种带菌高粱粒和室内菌饼离体接种的方法,对供试水稻品种进行抗纹枯病种质资源的筛选。田间调查采用病株率以及病情指数;离体接种鉴定采用相对病斑面积进行病害分级。鉴定结果表明,离体叶片在接种纹枯菌后24～36 h内,病斑开始出现差异,田间鉴定结果,水稻品种间对纹枯病的抗性有显著差异,综合田间接种和离体接种的结果,筛选出9份具有抗性水平的品种。