液体发酵法发酵豆粕产蛋白酶条件的优化

为了提高B-15菌株发酵豆粕产蛋白酶能力,采用单因素法对B-15菌株发酵培养基所需的碳源、氮源、无机盐进行筛选,采用正交试验对B-15菌株的发酵培养基组成及发酵培养条件进行优化,最终确定最适发酵培养基组成为葡萄糖为2%、豆粕浓度为12%、KCl为0.01%、MgSO4为0.05%。通过发酵工艺条件参数的正交优化试验得出发酵培养基的最佳工艺参数为:发酵时间为48 h,装瓶量为50 mL,种龄为14 h,pH值为6.5。在此条件下B-15菌株发酵产蛋白酶活力为125.05 U/mL,与基础发酵培养基相比,提高了11.9%。     

烟草黑胫病拮抗菌HZ15的发酵条件优化

采用平板对峙法研究了烟草黑胫病菌的拮抗菌铜绿假单胞菌HZ15菌株对烟草疫霉的抑菌活性;以HZ15菌株发酵液的细菌浓度即在波长600 nm处的OD值为指标,采用单因素试验和正交试验对HZ15菌株的基础发酵培养基和发酵条件进行了优化.结果表明:HZ15菌株的发酵培养以YSP培养基(其组分为蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、蔗糖20 g/L、蒸馏水1 L)为最适的基础培养基,以蔗糖为最佳碳源,以蛋白胨为最佳氮源;最佳发酵条件为pH 7、温度36℃、光照时间12 h/d、发酵时间48 h、装液量40 mL/250 mL、转速220 r/min、接菌量2.5％.优化后的培养基和发酵条件提高了HZ15菌株的培养效率,节约了发酵成本.     

烟草黑胫病拮抗菌HZ15的发酵条件优化

采用平板对峙法研究了烟草黑胫病菌的拮抗菌铜绿假单胞菌HZ15菌株对烟草疫霉的抑菌活性;以HZ15菌株发酵液的细菌浓度即在波长600 nm处的OD值为指标,采用单因素试验和正交试验对HZ15菌株的基础发酵培养基和发酵条件进行了优化。结果表明:HZ15菌株的发酵培养以YSP培养基(其组分为蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、蔗糖20 g/L、蒸馏水1 L)为最适的基础培养基,以蔗糖为最佳碳源,以蛋白胨为最佳氮源;最佳发酵条件为pH 7、温度36℃、光照时间12 h/d、发酵时间48 h、装液量40 mL/250 mL、转速220 r/min、接菌量2.5%。优化后的培养基和发酵条件提高了HZ15菌株的培养效率,节约了发酵成本。     

豆粕的微生物发酵降解

【研究目的】以脱脂豆粕粉为原料,具产蛋白酶能力的菌株CHD21为生产菌种进行发酵。菌株所产蛋白酶作用于豆粕粉中的大豆蛋白将其水解为大豆多肽。【方法】以水解度作为指标,对菌株CHD21发酵降解豆粕的条件进行了优化。通过液体发酵探讨菌株CHD21适宜的培养基组成、接种时间、接种量与发酵时间。【结论】结果表明：在豆粕含量8％,麸皮含量2％的液体发酵培养基中接种4％的菌龄为19h的液体种子,于温度40℃,转速120r／min条件下发酵48h,豆粕蛋白的水解度可达42％,比条件优化前的水解度提高了40％。     

枯草芽孢杆菌OKB105菌株不同培养基发酵上清液的杀线活性

采用室内离体测定方法,测试枯草芽孢杆菌OKB105菌株在不同培养基(Landy、LB、λ肉汤、TY、超级肉汤、胰化蛋白胨肉汤、TYGPN、A、M63、M9)的发酵滤液中对植物寄生线虫[南方根结线虫(Meloidogyne incognita)2龄幼虫、程氏伞滑刃线虫(Bursaphelenchus chengi)、豆伞滑刃线虫(B.doui)、拟松材线虫(B.mucronatus)]的生物活性,以期获得具有较高防效的发酵培养基。结果表明:OKB105菌株的培养滤液分别处理植物寄生线虫6 h后,对南方根结线虫2龄幼虫防效较佳的发酵培养基是TYGPN、LB、LANDY、TY、胰化蛋白胨肉汤、超级肉汤等6个培养基;对豆伞滑刃线虫防效较佳的是TYGPN和TY等2个培养基;对豆伞滑刃线虫、拟松材线虫防效最佳的是TYGPN培养基;OKB105菌株TYGPN培养基发酵上清液对4种标靶线虫都具有较强的拮抗性。     

放线菌菌株1331发酵工艺优化及对南方根结线虫的作用效果

【目的】研究放线菌菌株1331的最佳发酵工艺条件,并探究其发酵液对南方根结线虫2龄幼虫的抑杀作用。【方法】在摇瓶试验中采用单因素筛选和正交试验对其发酵条件进行优化。【结果】该菌株的最佳摇瓶发酵培养基为发酵培养基Ⅱ;最佳发酵条件为装液量80 mL (500 mL摇瓶),种子液接种量为5%(体积分数),初始pH值7.0,培养温度25℃,150 r/min培养7 d。该条件下菌株1331产孢量为1.68×109 CFU/mL,其5%发酵稀释液处理南方根结线虫卵9 d,卵孵化率与对照相比降低了70.59%;10%和20%发酵稀释液对南方根结线虫2龄幼虫48 h的校正死亡率分别达88.97%和100%。【结论】放线菌菌株1331发酵液可有效抑杀南方根结线虫,具有潜在生防价值。     

马铃薯叶片内生细菌的分离鉴定及其对马铃薯块茎蛾的毒力研究

【目的】研究马铃薯叶片内生细菌对马铃薯块茎蛾幼虫的杀虫活性,为马铃薯块茎蛾生物防治提供理论依据。【方法】以云南省2种马铃薯主栽品种丽薯6号和会-2叶片为材料,采用LB固体培养基分离培养马铃薯叶片内生细菌,根据内生细菌的形态特征和16S rDNA序列进行种类鉴定;通过浸叶饲喂法测定内生细菌的发酵液、发酵上清液和菌悬液对马铃薯块茎蛾3龄幼虫的毒力。【结果】分别从丽薯6号和会-2叶片中分离获得对马铃薯块茎蛾3龄幼虫具有杀虫活性的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)QL1和带化红球菌(Rhodococcus fascians)YH2。分别用浓度为1.5×109CFU/mL的菌株QL1和YH2发酵液饲喂马铃薯块茎蛾3龄幼虫后第7 d时,其幼虫累积死亡率分别为81.67%和65.00%,LT₅₀分别为3.03和5.58 d;菌株QL1发酵液处理后第3、5和7 d马铃薯块茎蛾3龄幼虫的LC₅₀分别为7.99×108、3.21×106和2.73×103CFU/mL;菌株YH2菌体无明显致死效应。在1.5×109CFU/mL浓度下,菌株QL1和YH2发酵液对马铃薯块茎蛾3龄幼虫的杀虫活性高于发酵上清液和菌悬液。菌株QL1和YH2的发酵液、发酵上清液、菌悬液处理后马铃薯块茎蛾3龄幼虫的累积死亡率均随着处理时间变长而逐渐升高。【结论】马铃薯叶片内生细菌苏云金芽孢杆菌菌株QL1和带化红球菌菌株YH2的发酵液、发酵上清液、菌悬液对马铃薯块茎蛾3龄幼虫均具有杀虫活性,可作为马铃薯块茎蛾生防制剂开发的潜力菌株。     

生防菌菌株A的摇瓶培养条件及发酵工艺

[目的]优化生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺。[方法]采用均匀试验设计方法、回归分析方法和分批补料发酵工艺,研究生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺的优化。[结果]结果表明,适合菌株A摇瓶培养的最佳条件为：培养温度35℃,摇瓶装量12％,接种量3．0％,初始pH值7．2。20L发酵罐分批补料发酵参数为：种子培养基为YDC培养基,培养时间24h,接种量3．0％;发酵培养基：葡萄糖1．0％,酵母膏1．0％,CaCO3 1．0％,pH值7．2;流加培养基：葡萄糖1．5％,酵母膏0．5％,制成混合液一起流加,发酵8h开始流加;发酵周期（34±2）h,在以上发酵条件下,发酵液芽孢浓度达（3．410±0．151）×10^9cfu／ml。[结论]该试验条件下所获得发酵液芽孢数浓度较高,可用于进一步制备生防菌剂。     

柑橘内生放线菌CR20发酵培养基的优化

从柑橘根部分离得到1株对多种植物病原菌具有拮抗活性的放线菌菌株CR20,经鉴定属于链霉菌(Streptomyces sp.)。为提高该菌株产生抗生素的能力,通过单次单因子试验和正交试验,对其发酵培养基进行优化筛选,获得最佳培养基配方:葡萄糖1.5%、淀粉1%、花生饼粉3%、(NH4)2SO41%、Na Cl 0.4%、CaCO30.2%、Fe SO4·7H2O 0.1%、KH2PO40.1%,优化后的发酵培养基对柑橘炭疽病菌的抑制率达到84.66%,比初始发酵培养基提高130.18%。为进一步明确菌株CR20的最佳发酵时间,采用优化后的培养基配方,利用5 L全自动发酵罐对其进行培养,获得最佳发酵时间为96 h。     

1株角蛋白酶产生菌的筛选、鉴定与产酶特性研究

采用平板透明圈筛选法,从长期堆积羽毛废弃物的土壤及沼渣中筛选出22株产角蛋白酶的菌株,其中B1-2菌株的酶活较高,经16S rRNA鉴定为红灰链霉菌(Streptomyces rubrogriseus).对B1-2菌株的发酵工艺进行了优化,试验结果表明,B1-2菌株产角蛋白酶的最佳条件为:发酵时间96 h,发酵温度35℃,接种量8％;最佳发酵培养基为:5％羽毛粉角蛋白,0.1％磷酸氢二钾,0.01％ MgCl2,0.5％蛋白胨,1.5％玉米粉;最佳试验条件下酶活性达到132.4±2.48 U/mL.     

产氨短杆菌的诱变以及TMTD抗性突变株发酵培养基条件的优化

通过对产氨短杆菌进行微波诱变,筛选TMTD(N,N-四甲基二硫双硫羰胺)抗性突变株以期获得辅酶A的高产菌株,并对其中菌株A3进行了培养基的初步优化.获得的优化培养基配方为:葡萄糖1.5％,蛋白胨1.0％,酵母膏0.5％,硫酸镁1％,磷酸氢二钾1％,磷酸二氢钾1％:接种量为15％.在此优化条件下.菌株的OD600可达512.     

粉红粘帚霉G-019浅盘发酵工艺的研究

对粉红粘帚霉G-019浅盘发酵工艺进行了研究，为提高生产孢子产量，进行了固态发酵基质、营养液成分的筛选和含量的单因素实验。结果表明最佳发酵工艺为：固态发酵基质为麸皮75%，玉米粉15%，啤酒糟10%，营养液为糖蜜2%，磷酸氢二钾0.15%,硫酸镁0.5%，料液比1：1，在此条件下发酵10d孢子数可达1.07*10^10CFU/g。     

L-乳酸生产菌干酪乳杆菌6028液体发酵条件的研究

[目的]寻求干酪乳杆菌6028发酵产酸的最佳条件。[方法]以干酪乳杆菌6028为试验菌种,经斜面培养基、筛选培养基、种子培养基、发酵培养基培养后进行液体发酵,研究碳源、氮源、硫酸镁、磷酸氢二钾、乙酸钠、发酵温度和发酵时间对干酪乳杆菌6028 L-乳酸产量的影响。[结果]当培养基中葡萄糖、氮源、无水乙酸钠、MgSO4.7H2O含量分别为14%、3.75%、0.5%、0.02%,发酵温度为34℃、发酵时间为96 h时,L-乳酸产量最高。在此条件下,L-乳酸的产量达到97.03 g/L。[结论]干酪乳杆菌6028的最佳培养基组成为:葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、无水乙酸钠、MgSO4.7H2O、MnSO4.7H2O、碳酸钙分别为140、15、15、7.5、5、0.2、0.05、100 g/L、吐温-80 1 ml、pH值6.8。最佳发酵时间和温度分别为96 h、34℃。     

假蜜环菌液体发酵培养基优化研究

通过单N素试验确定了假蜜环菌液体发酵培养基的较好碳源为淀粉和玉米粉、氮源为豆粕和麸皮，正交设计试验确定了获得胞内多糖的最佳培养基配方为：土豆汁20％，淀粉150％，玉米粉150％，盖粕10％，麸皮6％，-H-4C10 25％，MgS-4 0.01％，KH2P-4 0.09％。获得胞外多糖的最佳培养基配方为土豆汁15％，淀粉150％，玉米粉200％，豆粕10％，麸皮6％，-H-4C10 20％，MgS-4 0.015，KH2P-4 0.06％。     

具抑菌活性的诺丽内生真菌发酵条件的优化

为了研究发酵条件对诺丽内生真菌M2抑菌性的影响，笔者采用传统方法和ITS rDNA测序方法相结合，将本实验室筛选出的抑菌效果突出的诺丽内生真菌M2初步鉴定为棘孢曲霉（Aspergillus aculeatus）,在NCBI数据库中登录号为MK560191。通过单因素试验和正交设计对内生真菌M2进行发酵优化，筛选出最优发酵条件:（1）内生真菌M2优化后的培养基方案为200 g土豆煮沸30 min浸出液、葡萄糖20 g、硝酸钠5 g、磷酸二氢钾0.2 g、七水合硫酸镁0.2 g、1 000 mL双蒸水；（2）发酵条件为150 mL锥形瓶装液50 mL、温度25 ℃、培养基初始pH8、转速170 r·min?1。     

高大毛霉液体深层培养研究

利用豆腐生产工艺中的副产物黄泔水为溶剂,通过单因素实验和正交实验,在28℃、200 r/min摇瓶培养条件下,确定高大毛霉MHC-7最佳培养基为黄豆粉3%、可溶性淀粉0.4%、硫酸镁0.2%、磷酸二氢钾0.2%、蔗糖0.3%和黄泔水。培养基中碳氮比为1.5、最适接种量为6%、最适起始pH值为6.0,通过生物量测定,MHC-7液体培养在36 h达到最大值(1.363 g/100 mL)。     

堆肥中产纤维素酶真菌的筛选及其产酶条件

采集牛粪及其堆肥样品,通过纤维素—刚果红平板培养基初筛和摇瓶发酵复筛得到1株分解纤维素能力较强的真菌菌株F12,经形态学初步鉴定为青霉属(Penillium)。对该株真菌进行了产纤维素酶的适宜碳源、氮源、初始pH、接种量、培养时间和温度等培养特性的研究,结果显示：F12菌株的适宜碳源为麸皮和微晶纤维素复合碳源,氮源为硫酸铵,最佳培养条件为：pH值在5～6之间,接种量为5%左右,培养时间120 h,培养温度30～35℃。在此条件下,该菌株的CMCase活性达到47.5 IU/mL,FPA活性达11.1 IU/mL。     

菌株XXJ15的分离及其活性评估

采用平板分离技术从烟草根际土壤中分离到一个菌株,编号为XXJ15。对该菌株的几种活性功能进行了评估,结果表明：XXJ15在魔芋粉液体鉴别培养基经过48 h发酵后,发酵液中的β-甘露聚糖酶活性达到4.6 U/mL；在解磷液体鉴别培养基中培养72 h后,培养基上清液中游离态磷含量达到102 μg/mL；XXJ15不具备解钾活性。菌株XXJ15可作为后期诱变育种、烟草专用菌肥和土壤保育剂开发等研究的备用菌株。     

白色链霉菌产ε-聚赖氨酸发酵条件优化研究

通过各单因素试验并结合正交试验分析,结果确定白色链霉菌最佳产ε-聚赖氨酸条件为葡萄糖5%、硫酸铵1.5%、酵母膏0.7%、初始pH6.8、接种量10%、发酵温度30℃和发酵时间72h,在该条件下所得的发酵液中ε-聚赖氨酸含量达0.60g/L。     

广西共生型野生松乳菇的驯化研究

为了合理开发和利用野生食用菌资源,寻找适合松乳菇生长的人工培养基。从山地松林上采集野生松乳菇,设计5个母种培养基和7个原种、栽培种培养基进行组织培养以及室内、室外和半人工模拟栽培试验,观察菌丝的生长情况。5个母种培养基均适宜松乳菇菌丝体的生长,最佳母种培养基为:马铃薯200.00 g、葡萄糖20.00 g、琼脂20.00 g、蛋白胨2.00 g、硫酸镁1.90 g、磷酸二氢钾3.75 g、VB112.5 mg、水1 000 ml。7个原种、栽培种培养基对菌丝生长速度和长势均有显著影响,最佳原种、栽培种培养基为:棉籽壳88%、松木屑10%、糖2%。人工栽培和半人工模拟栽培均可观察到菌丝体的生成。该研究为松乳菇的人工栽培奠定了基础。