小枣黑疔病拮抗放线菌的筛选与发酵优化

【目的】筛选蒙自小枣黑疔病链格孢拮抗放线菌,并优化发酵条件。【方法】以小枣黑疔病链格孢为指示菌,以肾茶26株、臭灵丹17株内生放线菌和大庆油田12株土壤放线菌作为供试菌,采用滤纸片法筛选高拮抗放线菌,进而通过单因子试验优化发酵条件。【结果】筛选到一株分离自肾茶根部、抑菌带宽达13.6 mm的拮抗菌株BEG-46,其最佳培养基组成和最佳培养条件为1 000 mL培养基中含葡萄糖2 g、酵母粉20 g,蛋白胨2 g,NaCl 4 g,CaCO_34 g,初始pH值为自然,发酵温度28℃,发酵周期为7 d;优化后BEG-46发酵液抑菌活性提高了118.3%。【结论】拮抗放线菌BEG-46的发酵液抑菌活性在优化条件下显著提升。     

钩丝孢属真菌高产蛋白酶菌株的筛选及其发酵条件优化

【目的】筛选钩丝孢属真菌高产蛋白酶菌株,并优化其产酶培养基和发酵条件,为寄生线虫病的生物防治提供优良菌种。【方法】以15株钩丝孢属真菌为材料,在28℃、180 r/min振荡培养10 d后,采用福林酚法测定其蛋白酶活性,筛选高产蛋白酶菌株,测定其产酶周期,并利用全齿复活线虫测定该菌株发酵液的杀线虫率。通过单因素试验和正交试验对高产蛋白酶菌株的产酶培养基及发酵条件进行优化,并对优化条件进行验证。【结果】从15株钩丝孢属真菌中筛选出1株高产蛋白酶菌株H6,其蛋白酶活性在发酵5 d最高。最佳产酶培养基成分为葡萄糖8 g/L、明胶8 g/L、蛋白胨8 g/L、酵母提取物4 g/L。最佳发酵条件为pH 7.0、20℃、260 r/min、接种2块直径5 mm的菌块。在此优化条件下,菌株H6蛋白酶活性为216.42 U/mL,比优化前(67.84 U/mL)提高了2.19倍。【结论】筛选出1株钩丝孢属高产蛋白酶菌株H6,获得了其优化产酶培养基和发酵条件。     

一株产多糖真菌的筛选、鉴定与发酵条件优化

以马铃薯汁（PDA）培养基为筛选培养基，从自然界枯枝腐木中筛选产多糖真菌，经平板初筛、摇瓶复筛获得最优菌株TL-8，胞外多糖产量达1.1 g/L。经形态观察和分子生物学鉴定，TL-8菌株鉴定为白囊耙齿菌（Irpex lacteus）。在发酵基本培养基初始条件下，分别以培养条件（如温度、摇床转速、pH值、发酵时间等）和培养基成分（如氮源、碳源）作单因素优化，并根据单因素优化结果筛选影响较大的因素进行正交试验优化，以确定白囊耙齿菌TL-8产胞外多糖的最优发酵条件。结果表明：在发酵基本培养基的基础上，采用乳糖（12 g/L）和葡萄糖（28 g/L）作复合碳源，采用酵母膏（6.0 g/L）和豆渣粉（9.0 g/L）作复合氮源，pH值6.0，摇床转速160 r/min，装液量为100 mL/250 mL，培养温度30℃的条件下培养8 d，白囊耙齿菌TL-8的生物量达15.78 g/L，胞外多糖产量达5.49 g/L。     

草地早熟禾褐斑病拮抗细菌发酵条件的研究

采用发酵液抑菌法,探明草地早熟禾褐斑病拮抗细菌G10菌株的发酵条件。结果显示:最佳培养基配方为:山梨醇10g、牛肉膏5 g、KH2PO4 0.2 g、MgSO4.7H2O 0.2 g、NaCl 0.2 g、CaSO4.2H2O 0.2 g、CaCO3 5 g、蒸馏水1 000 mL;最适发酵条件为:起始pH 6.0、温度35℃、转速150 r/min、接种量2%、发酵时间48 h。     

青钱柳内生真菌多样性及其代谢产物的特性

为揭示青钱柳内生真菌的分布、多样性及其代谢产物的抑菌活性,并筛选产黄酮的内生真菌,挖掘植物内生真菌新资源,采用组织分离的方法对青钱柳的枝、皮、叶、根部位的内生真菌进行分离,用马丁氏培养基、察氏培养基、PDA培养基对内生真菌进行培养,通过观察内生真菌的形态特征进行初步分类,同时提取其发酵产物,并以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌为供试病原菌对分离的内生真菌进行抑菌活性试验,通过显色试验和薄层层析试验筛选出产黄酮的内生真菌.试验共分离得到67株内生真菌,通过菌落形态和显微形态对分离得到的青钱柳内生真菌进行分类,其分别隶属于3纲4目6科10属;青钱柳不同组织中内生真菌的分离结果不同,其中根部分布的内生真菌从数量和种属上都占优势;马丁氏培养基培养的菌株种类少、数量多,而察氏培养基和PDA培养基培养的菌株种类较多、菌株较少;抑菌试验共得到13株具有抑菌作用的内生真菌,其中有2株内生真菌的发酵产物对供试菌株均表现出较强的抑菌活性,分别属于青霉属和链格孢属;并且筛选出7株菌株(PP03、PY01、PG11、PZ06、PY12、PP12和PP06)具有稳定的产生黄酮类化合物的能力.     

拮抗香蕉枯萎病菌的海洋细菌TC-1发酵条件优化

通过对6种培养基进行筛选得到海洋拮抗细菌TC-1在BPDB培养基发酵的无菌发酵液对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)的抑菌活性最好。在BPDB培养基基础上,通过正交试验优化培养基成分及用量,得到最佳配方为马铃薯200 g,牛肉膏20 g,葡萄糖20 g,玉米粉7 g、蛋白胨7 g,蒸馏水1 000 mL,pH自然;通过正交试验对发酵条件的装瓶量、培养温度、初始pH、发酵时间和转速5个因素进行了优化,得到最优发酵条件为:装瓶量20%,培养温度27℃,初始pH自然,发酵时间72 h,摇床转速200 r/min;在最佳培养基和最佳发酵条件下,TC-1的无菌发酵液抑菌圈直径为24.3 mm,与优化前抑菌圈直径20.7 mm相比,抑菌活性提高了17.4%。     

辣椒疫病拮抗真菌ASD菌株发酵优化研究

利用从土壤中分离筛选出的1株高效拮抗辣椒疫病的真菌ASD菌株,采用含毒介质菌碟法进行抑菌试验,优化不同培养基配方(包括碳源、氮源、无机盐离子)及发酵条件(包括发酵时间、温度、pH、转数、装液量),并利用单因子试验结果进行正交试验,以得到最佳抑菌效果的优组合。单因子试验结果表明,最佳营养成分为葡萄糖、甘氨酸、0.1 g/L KCl及MgSO4.7H2O、0.05 g/L FeSO4,最佳培养条件为pH 6、25℃、220 r/min、30 mL/100mL;正交试验结果表明,pH影响最大、氮源影响最小,根据K值得出发酵最优组合为葡萄糖、甘氨酸、0.03 g/L FeSO4、pH 6、于30℃180 r/min摇床培养5 d。     

烟草赤星病高效生防内生细菌的分离筛选及发酵培养条件优化

为提高烟叶安全，探索曲靖烟区烟草赤星病生物防控技术，研究烟草内生菌株对烟草赤星病的防控作用。以曲靖烟区分离得到的烟草赤星病病原菌为靶标，采用平板对峙培养法从健康烟株体内分离筛选出生防内生细菌，并应用Design-Expert软件，采用响应面法对其进行发酵培养基的优化。结果表明，从曲靖烟区健康烟株体内分离筛选出15株对烟草赤星病病原真菌链格孢菌具有拮抗作用的菌株，其中编号为YWF-19-0004、YWF-19-0065、YWF-19-0068、YWF-19-0070、YWF-19-0071的5株内生细菌抑菌带宽≥10 mm、抑菌率≥50%;采用响应面法获得YWF-19-0068菌株的优化培养基配方：大豆粉浓度14 g/L,蛋白胨浓度2 g/L,鱼粉浓度2 g/L,蔗糖浓度11 g/L,玉米粉浓度为7 g/L,碳酸钙浓度5 g/L,氯化钠浓度0.3 g/L,磷酸二氢钾浓度0.3 g/L,磷酸氢二钾浓度0.3 g/L,硫酸锰浓度0.2 g/L,硫酸镁浓度0.3 g/L,硫酸铵浓度0.5 g/L,利用优化培养基进行发酵，YWF-19-0068菌株的菌量是基础培养基发酵所得菌量的4.47倍，说明...     

藜麦内生细菌LS3发酵条件优化及其抑菌机制初探

藜麦黑茎病是危害藜麦的主要病害之一，可引起藜麦倒伏、籽粒空瘪和不育，严重影响藜麦籽粒的产量和品质。前期从藜麦穗中分离获得1株对藜麦黑茎病菌（Ascochyta caulina）具有良好抑菌活性的内生细菌，命名为LS3，为进一步开发应用该菌株，采用单因素试验法对LS3菌株的最佳培养基、碳源、氮源、温度进行筛选，对其发酵条件进行优化，采用鉴定培养基法对LS3菌株的抑菌活性物质进行检测，对其抑菌机制进行初探。结果表明，LS3菌株发酵所需最佳培养基为YSP培养基，最佳碳源为蔗糖，最佳氮源为牛肉膏+酵母粉，发酵最佳温度为28℃。对转速、装液量、接种量、pH以及发酵时间5个因素进行正交发酵优化，结合方差分析，并考虑成本因素，最终确定LS3菌株最佳发酵条件为：转速130 r/min，装液量150 mL/300 mL，接种量1%,pH值7.0，发酵时间96 h。对LS3菌株细胞壁降解酶活性检测发现，LS3菌株可分泌β-1,4-葡聚糖酶和胞外蛋白酶，但不能产生几丁质酶和β-l,3-葡聚糖酶。     

响应面分析法优化苦参内生真菌BS003菌株液体发酵条件

对苦参内生真菌BS003的液体发酵条件进行优化,以获得最大的发酵产物。在Plackett-Burman试验设计基础上,采用响应曲面法,以生物量为考察指标,优化发酵条件。结果表明,液体发酵最佳条件组成为:250mL锥形瓶中的培养基装液量为75mL、接种量104 cfu/mL、硝酸铵1.22g/L、马铃薯200g/L、蔗糖10g/L、乙酸钠1.66g/L、温度27℃、pH=7、转速150r/min、时间4d。回归分析表明,整个模型显著,此方法合理可行,相比优化前产量提高38%。     

侧孢芽孢杆菌C5发酵条件及培养基的优化

为了更加有效地利用侧孢芽孢杆菌C5,研究了该菌株的生长特性,并对其发酵条件及培养基进行了优化。结果表明,侧孢芽孢杆菌C5的生长规律为:0~4h延滞期,4~16h指数期,16h后进入稳定期;最佳发酵条件为:初始pH值7.0、培养温度30℃、接种量3%~5%、转速180r/min;最适培养基为:葡萄糖20.0g/L、酵母膏10.0g/L、MnSO_4 0.2g/L、CaCl_2 0.3g/L、KH_2PO_4 0.1g/L、MgSO_4 0.05g/L。在上述条件下,侧孢芽孢杆菌C5的发酵芽孢数可达1.08×109CFU/mL。     

一株北高丛蓝莓内生真菌的液体发酵条件优化及生长动力学分析

[目的]优化北高丛蓝莓内生真菌的液体发酵条件.[方法]以一株分离自北高丛蓝莓的内生真菌菌丝提取物为研究对象,对液体培养条件进行优化.选择一种适合工业化生产的培养基：玉米粉90 g/L,豆粕5 g/L,KH2PO41 g/L,MgSO4 0.6 g/L,维生素B1 10mg/L,以菌丝体得率为指标,通过正交试验考察培养温度、培养基pH、摇床转速、接种量,以确定最适培养条件.[结果]在培养温度25℃,摇床转速160 r/min,pH值7.0,接种量5％时,菌丝体生长量达到最大.[结论]初步得到该菌的生长动力学参数,为工业化生产提供一定依据.     

褐环粘盖牛肝菌多糖发酵工艺研究

为提高褐环粘盖牛肝菌发酵产多糖的能力,通过单因素试验和正交试验对褐环粘盖牛肝菌的培养基组成和发酵条件进行了优化.结果表明,最佳发酵培养基为:10.0％马铃薯、3.0％葡萄糖、0.5％牛肉膏、0.3％ KH2PO4、0.2％ CaCO3、0.1％ ZnSO4· 7H2O;最适发酵条件为:初始pH值5.6,250 mL三角瓶装100 mL培养液,温度25～28℃,摇瓶培养9d.在该工艺下,褐环粘盖牛肝菌多糖的产量达62.10 mg/g.     

雪白弯颈霉产环孢菌素发酵条件的优化

[目的]探讨雪白弯颈霉(Tolypocladium inflatum)产环孢菌素的最适发酵条件。[方法]采用正交试验,研究不同培养时间、培养基种类、装瓶量、菌种接种量(以菌片计)对雪白弯颈霉产环孢菌素的影响。[结果]在培养时间为4 d,发酵培养基为马铃薯200.00 g、甘露醇40.00 g、蛋白胨6.00 g,装瓶量为100 m L,菌片投放为9片时雪白弯颈霉产环孢菌素的发酵条件为最优。[结论]试验结果为提高雪白弯颈霉产环孢菌的产量提供了理论依据。     

铁皮石斛内生真菌的分离鉴定及其促宿主生长作用

利用微生物学传统分离培养方法从野生铁皮石斛根部分离内生真菌,依据形态学和真菌18SrDNA ITS序列分析对菌株进行分类,并采用正交设计法优化菌丝体液体培养基,考察发酵液对铁皮石斛组培苗生长的影响,以期为人工种植铁皮石斛提供优良菌肥。结果显示,共分离到4株内生真菌,其中TPSH1、TPSH2、TPSH3为镰刀菌属(Fusarium),TPSH4为柱霉属(Scytalidi-um)。优化后确定培养液的组分为:麦麸25g/L,土豆20g/L,蔗糖10g/L,1/2MS。菌株发酵液分别喷施铁皮石斛组培苗8周后,与对照(1/2MS)相比,以TPSH4菌株液体发酵8d,对铁皮石斛生长促进作用明显,成活率提高30.43%,植株高度增加了31.21%,鲜质量增加40.61%。TPSH4为具有促宿主生长作用的新菌株,其发酵液可作为菌肥,用以促进人工栽培铁皮石斛的生长。     

产壳聚糖酶土壤微生物的筛选鉴定及发酵条件优化

对浙江舟山虾蟹养殖场附近的土壤进行针对性地采样,通过壳聚糖平板初筛、摇瓶复筛获得一株具有产壳聚糖酶活性的菌株,编号为ZJOU-AC1。通过形态观察、ITS全序列分析及系统发育进化树的构建,确定ZJOU-AC1为鹿皮色曲霉(Aspergillus cervinus)。对其产酶条件进行初步优化,经优化后的培养基成分为胶体壳聚糖1.5%,(NH_4)_2SO_4 0.4%,KH_2PO_4 0.2%,MgSO_4·7H_2O 0.05%。最适发酵周期为96 h。ZJOU-AC1产酶活力由2.05 U/m L提高到4.85 U/m L,与优化前相比提高了2.36倍。     

枯草芽孢杆菌B_2种子液发酵条件的研究

采用单因子、双因子及正交试验,对枯草芽孢杆菌B2的培养液组成(碳源、氮源、酵母膏、pH值)及培养条件(装液量与转速)进行了研究,结果表明:以葡萄糖1%,牛肉胨0.8%,酵母膏0.5%及pH 8制成的培养液,装液量100 mL/250 mL锥形瓶,转速140 r/min,培养B236 h为最佳培养条件,在此条件下,活菌数可达2.97×1010cfu/mL,分别是D培养液和NB培养液的2.05倍和52.36倍.     

黑曲霉固体发酵产酸性蛋白酶条件优化

对经诱变后黑曲霉固体发酵生产酸性蛋白酶的培养基组成及发酵条件进行优化。结果表明,该菌发酵产酶的最适培养基和条件为米糠20 g,碳源玉米粉60 g/kg,氮源硝酸铵5 g/kg,MnCl2 4 g/kg,料液比1.0∶1.5,调初始pH值7,以6mL/100g的接种量接种,在40℃、180 r/min下发酵72 h,摇瓶产酶达到1 120.0 U/mL,比基础培养基提高了近2.9倍。     

金针菇工厂化生产的液体菌种开发与应用

[目的]开发金针菇工厂化生产所需的液体菌种。[方法]从工厂化生产的菌株与二级液体菌种培养基的筛选,液体菌种培养条件的优化及金针菇液体菌种在工厂化生产的应用试验等方面进行研究。[结果]在4个金针菇工厂化生产菌株中,金针菇工厂化生产的液体菌种开发宜以F白"18"为出发菌株;二级液体菌种的培养基宜为马铃薯15%、麸皮7%、蔗糖2%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%;培养条件为接种量10%,转速150 r/min,温度23℃,pH自然,发酵罐培养时间结束点和适宜的菌龄均为144 h;在工厂化生产应用中,液体菌种较固体菌种发菌速度快,生产周期缩短9 d,生物转化率提高了6.38百分点。[结论]该研究可为金针菇工厂化生产所需液体菌种的开发提供技术方法。     

烟草青枯病拮抗真菌烟曲霉发酵条件的优化

烟曲霉(Aspergillus fumigatus)对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)有稳定的拮抗作用,在验证其发酵液对烟苗生长无害的前提下,利用四因素(发酵温度、发酵时间、接种量、装液量)三水平三重复正交试验,测定该真菌的最佳发酵条件.结果表明,烟曲霉的最佳发酵条件为:发酵温度28℃、发醇...