二倍体苍白茎藜组织培养研究

[目的]建立藜麦二倍体苍白茎藜的组织培养体系。[方法]以二倍体苍白茎藜种子为外植体,先获得无菌幼苗,在此基础上进行不同脱毒外植体不同激素浓度配比对愈伤组织的诱导、不定芽分化的诱导、生根的诱导及移栽驯化的相关研究。[结果]二倍体苍白茎藜的种子最佳消毒时间为2%次氯酸钠消毒6 min;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.0 g/L水解酪蛋白+35 mg/L肌醇+690 mg/L脯氨酸+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D,诱导率达到86.63%;不定芽分化诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L 2-IP+1.0 mg/L KT,诱导率为11.67%;MS+2.0 mg/L IBA或MS+0.5 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA为最佳生根培养基,生根率均达100%,试管苗经炼苗和移栽驯化后成活。[结论]该研究通过苍白茎藜种子诱导获得再生植株,经炼苗移栽驯化后成活,为二倍体藜麦的遗传转化体系的建立提供基础。     

小麦×玉米产生小麦单倍体的染色体加倍研究

 小麦与玉米杂交产生的单倍体植株无染色体自然加倍发生 ,为获得加倍单倍体 ,进行了两种秋水仙素加倍处理。结果表明 ,在培养基中直接加入秋水仙素处理已培养 7d的幼胚 ,无秋水仙素对照的幼胚萌发率为 6 7.4 % ,存活的植株均未结实 ;而经过浓度为 5 0mg/L、10 0mg/L和 2 0 0mg/L秋水仙素处理的幼胚萌发率分别是 32 .1%、2 6 .4 %和 16 .3% ,加倍率分别是 85 .7%、10 0 %和 5 0 %。秋水仙素处理时间在 2 4～ 72h范围内 ,随着处理时间的延长 ,幼胚萌发率随之降低 ,死亡率随之增加 ,以 2 4h效果较好。用浓度为 5 0 0mg/L、75 0mg/L、10 0 0mg/L的秋水仙素溶液浸根加倍处理 ,平均加倍率分别是 89.6 %、76 .0 %和 73.3% ,而用浓度为 5 0 0mg/L秋水仙素处理壮苗获得了98.2 %的加倍率和 93.2 %的加倍处理效率     

羽衣甘蓝小孢子再生植株的倍性鉴定及加倍

为了提高羽衣甘蓝小孢子植株中二倍体比例,以波浪叶红心、皱叶红心、红欧、白欧为供试材料,利用流式细胞仪对其小孢子再生植株的倍性进行分析,采用秋水仙素溶液对单倍体植株和游离小孢子进行诱导加倍。结果表明:含75 mg/L秋水仙素的培养基处理单倍体试管苗,波浪叶红心与皱叶红心的双单倍体比例分别为20.0%、5.0%,效果较差;1 000 mg/L秋水仙素溶液浸根处理的波浪叶红心与皱叶红心的双单倍体比例分别为53.3%和25.0%,效果较好;50 mg/L秋水仙素溶液处理小孢子36 h,4份材料的加倍效果均最好,其中红欧双单倍体比例高达55.6%。     

甘蓝小孢子单倍体植株加倍技术探讨

【目的】比较甘蓝单倍体植株(H植株)茎生叶及其愈伤组织的秋碱处理时间及愈伤组织大小对再生植株加倍效果的影响,筛选加倍效果最佳的秋碱处理时间与合适的外植体,为扩大甘蓝小孢子双单倍体植株(DH株)群体及提高甘蓝小孢子培养效率奠定基础。【方法】以3个甘蓝H植株(H10-23,H10-3和H10-5)的茎生叶为试材,用2.0mg/L秋碱溶液浸泡处理H植株叶片外植体及其愈伤组织以获得再生DH植株,设置15,30和60h3个处理时间,比较分析秋碱处理叶片外植体和愈伤组织的时间对加倍效果的影响;同时用2.0mg/L秋碱溶液处理大(直径≥1cm)、中(1cm直径≥0.5cm)、小(直径0.5cm)3种类型的愈伤组织30h,比较愈伤组织大小对加倍效果的影响。【结果】2.0mg/L秋碱处理甘蓝单倍体植株叶片外植体30h,可获得44.80%的平均再生DH株加倍率;2.0mg/L秋碱处理愈伤组织30h,可获得58.13%的平均再生DH株加倍率;2.0mg/L秋碱处理中等大小的愈伤组织30h,可获得51.11%的再生DH株加倍率。【结论】用2.0mg/L秋碱处理甘蓝H植株茎生叶及其愈伤组织30h,可获得较高比例的DH株。     

喷淋秋水仙素加倍玉米单倍体籽粒最适条件及应用效果研究

为了提高玉米单倍体籽粒加倍效率,探索更简便、有效、安全的加倍方法,为单倍体籽粒加倍应用提供参考。试验研究喷淋秋水仙素不同处理对玉米单倍体加倍率的影响及在最适条件下应用于不同种质材料的效果。浓度分别为0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg/mL,喷淋时长分别为6、8、10、12、14 h。秋水仙素浓度为0.6 mg/mL、喷淋时长10 h时,玉米单倍体幼苗的加倍效果最佳,加倍率最高达17.5%;秋水仙素浓度为0.8 mg/mL、喷淋时长10 h时,单倍体幼苗加倍率排第2位(16.4%)。在不同种质基础单倍体籽粒为试验材料中,研究秋水仙素浓度为0.625 mg/mL、喷淋时长10 h和直接播种的加倍效果。研究显示,喷淋秋水仙素加倍法效果明显,与对照相比达到极显著水平,是对照的1.54～9.47倍,平均为对照的3.78倍。2018年冬海南佛罗的自然加倍率仅为0.55%～7.69%,平均自然加倍率为2.46%,秋水仙素喷淋法的平均加倍率为9.29%。自然加倍率均值:SS-NSS种质(4.49)﹥NSS种质(2.38)﹥SS种质(1.48);喷淋秋水仙素加倍率均值:NSS种质(16.67)﹥SS-NSS种质(10.98)﹥SS种质(5.98)。秋水仙素喷淋法加倍效果明显,适用性广,有一定的推广应用价值。     

厚皮甜瓜高效再生体系的建立

以优质厚皮甜瓜品种鲁厚甜2号和鲁厚甜4号为材料,系统研究了以子叶为外植体的厚皮甜瓜组培高效再生体系。结果表明:两个甜瓜品种在不定芽和愈伤组织诱导上存在着较大的差异,在MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L的分化培养基上,鲁厚甜2号不定芽诱导率最高达92.6%;而鲁厚甜4号在MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L中达94.3%;诱导出的不定芽丛的伸长以MS+KT 0.2 mg/L为最佳;两个甜瓜品种在1/2MS+IBA 0.4 mg/L中均获得良好的生根效果。另外,保持高温、高湿是甜瓜再生苗移栽成活的重要条件。     

玉米自交系幼胚再生体系建立的研究

[目的]探索出玉米高频诱导具有胚性的愈伤组织和植株再生的条件。[方法]以玉米自交系幼胚为外植体,研究了不同2,4-D浓度对愈伤组织诱导、6-BA浓度对试管苗分化以及IBA浓度对试管苗生根的影响。[结果]2,4-D对玉米胚性率诱导有明显影响,其最佳诱导培养基为N6＋2,4-D 2 mg/L＋水解酪蛋白（CH）500 mg/L＋脯氨酸（pro）500 mg/L＋AgNO310 mg/L;试管苗分化适宜的培养基是N6＋6-BA 0.5 mg/L＋水解酪蛋白500 mg/L;试管苗生根的最佳培养基为1/2 MS＋IBA 0.5 mg/L。[结论]该研究可为玉米抗病基因的遗传转化和优良抗病玉米品种的培育奠定基础。     

不同基础材料和秋水仙素浓度对玉米单倍体加倍率的影响

试验研究了不同种质基础材料和秋水仙素不同处理浓度对玉米单倍体加倍率的影响。结果表明:秋水仙素质量浓度为0.7 mg/m L浸芽8 h处理玉米单倍体的加倍效果最好,加倍率高达14.2%;秋水仙素质量浓度为0.8 mg/m L浸芽8 h处理的单倍体加倍率次之(11.9%)。PH4CV×D12(26.0%)、PHB1M×D12(25.6%)、PHGJ4×D18(23.1%)和PH6WC×D18(21.1%)的单倍体加倍率显著高于PHB1M×PH4CV(13.3%)和PH6WC×PHGJ4(8.2%),用DH系组配基础材料选系,可显著提高玉米杂交组合单倍体加倍率。     

萝卜小孢子培养再生植株及其性状表现

以‘银玉’白萝卜小孢子胚状体为试材,研究激素对胚状体再生的影响。结果表明:在B5培养基中添加0.2mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)能够促进胚状体分化成再生植株,萘乙酸(NAA)和吲哚丁酸(IBA)可促进再生植株生根,IBA效果好于NAA,IBA适宜的质量浓度为0.5mg/L。利用流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)对163株小孢子再生苗的倍性进行测定,表明萝卜小孢子再生株的自然加倍率为82.21%,17.79%为单倍体,44.17%为双单倍体,38.04%为多倍体。其中多倍体包括三倍体、四倍体、八倍体和嵌合体。观察和测定不同倍性再生植株苗期和花期的植物学性状,并与供体植株进行对比。结果显示单倍体植株弱小,没有花粉;四倍体和八倍体长势强,花粉发育正常;三倍体苗期长势与双单倍体相当,但花器官弱小,药室内无花粉或有微量花粉;双单倍体与供体植株长势相同。     

金鱼草嫩茎组织培养及无性系建立的研究

以金鱼草变异植株的嫩茎为外植体,采用不同培养基对其愈伤组织的诱导与分化、不定芽生根、试管苗移栽和扦插等进行研究,以建立金鱼草变异植株的无性系.试验结果表明;MS 6-BA 0.8mg/L IBA 0.1mg/L 2,4-D 0.5mg/L 蔗糖30g/L 是诱导金鱼草嫩茎愈伤组织的理想培养基,MS AgNO3 0.6mg/L 6-BA 0.2mg/L NAA 0.1mg /L 蔗糖30 g/L是诱导愈伤组织和不定芽分化的理想培养基,1/3MS IAA 0.6mg/L 蔗糖10g/L 是金鱼草试管苗生根培养和生根继代培养的理想培养基;炉灰渣是试管苗移栽扦插的最适合基质,移栽成活率为96%,扦插成活率为93%.移植于花坛的试管苗具有保持有利变异的特     

欧美杨热杨1号离体叶片快繁体系的研究

[目的]研究欧美杨热杨1号离体叶片快繁技术。[方法]以欧美杨热杨1号为材料,研究了不同植物生长调节剂组合诱导愈伤组织、芽及根的效果。[结果]在附加25种不同植物生长调节剂组合的培养基中,添加6-BA 0.5 mg/L和NAA 0.05 mg/L的MS培养基愈伤组织的诱导率最高,达到100%。36种诱导芽再生培养基中,最佳的诱导芽培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.1mg/L,出芽率达到100%,且芽质量较高。6-BA和NAA及IBA过高过低都不利出芽。培养基中IBA和NAA两者混合使用时有利于根的形成,诱导生根的最佳培养基是1/2MS+NAA 0.5 mg/L+IBA 0.15 mg/L,生根的小苗被移植在温室条件下生长良好。[结论]以欧美杨热杨1号叶片为外植体,建立了高效植株再生体系。     

正交试验优化红颜草莓离体再生体系

[目的]优化红颜草莓离体再生体系。[方法]采用正交试验,研究不同培养基、植物生长调节剂的种类及浓度对红颜草莓叶片不定芽再生的影响。[结果]IBA是影响叶片不定芽增殖的重要因素;最适诱导培养基为MS+TDZ 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L,诱导率为90.00%;最佳分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L,分化率为8.1%;最适增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2mg/L,平均每个不定芽的增殖倍数为7.67;最适继代培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,每个处理的平均苗高5.98 cm;最适生根培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,每个处理的平均根数为4.5根。[结论]为进一步研究草莓的遗传转化奠定了基础。     

甜瓜离体再生体系优化研究

[目的]对甜瓜离体再生体系进行优化研究。[方法]以优良甜瓜品种南湘91023为试验材料,以其子叶、下胚轴为外植体,在不同组织培养阶段添加不同种类和不同浓度的生长调节剂,以筛选出简单有效的甜瓜再生培养基配方。[结果]愈伤组织的诱导及增殖以MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA为最佳培养基;不定芽的诱导分化以MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D为最佳培养基;幼苗的诱导生根以MS+1.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA为最佳培养基,在此培养基下培养,幼苗的生根率高且根粗壮。[结论]为进一步开展甜瓜的遗传转化改良品种研究提供了保障。     

牛大力茎段组织培养技术研究

[目的]为牛大力的规模化生产提供依据,保护牛大力野生资源。[方法]以牛大力的幼嫩茎段作为外植体,研究其组织培养和离体快繁技术。[结果]用0.1%升汞处理外植体20 min,可获得无菌材料。以MS+6-BA1.0 mg/L+IBA0.1 mg/L为启动培养基,诱导率可达100%,接种后20 d,腋芽开始萌发,且生长正常。以MS+6-BA2.0 mg/L+IBA0.1 mg/L为增殖培养基,培养30 d后,增殖系数达7.0,有少量的愈伤组织产生,但不定芽生长发育正常。用1/2MS+IBA0.5 mg/L+IAA0.5 mg/L培养基进行生根培养,生根效果最好,生根率达80%,根生长状态良好。将生根的小苗移栽到椰糠∶砂为3∶1的基质中,覆盖地膜保湿15 d,成活率达85%以上。[结论]牛大力茎段组织培养的最佳生根培养基为:1/2 MS+IBA0.5 mg/L+IAA0.5 mg/L。     

香水百合再生体系的建立

[目的]探讨不同外源激素水平对香水百合小鳞茎分化、增值及不定根形成的影响,为其再生体系的建立奠定技术基础。[方法]取香水百合鳞叶为外植体,探讨不同植物生长调节剂组合对其离体培养中愈伤形成、不定芽分化、增值、不定根形成的影响,并对试管苗移栽技术进行研究。[结果]香水百合小鳞茎分化与增值培养以MS+0.5～1.0 mg/L 6-BA+0.1～0.3 mg/L IAA效果好,分化率达78.5%以上,增值率可达5.6以上;生根以1/2 MS+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA或1/2 MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1～0.3 mg/L NAA或1/2 MS+0.1 mg/L 6-BA+0.8 mg/L IBA效果好,生根率可达96.0%;在泥炭∶珍珠岩=1∶1的基质中驯苗,成活率可达96.3%。[结论]香水百合离体培养技术的研究对其规模化快速育苗及进一步利用基因工程技术实现香水百合遗传转化具有重要意义。     

甜瓜再生体系的建立

[目的]建立甜瓜再生体系。[方法]以加格达甜瓜为材料,以MS培养基为基本培养基,根据植物生长调节剂对植物愈伤组织的诱导分化的决定性作用,通过设计不同生长素和细胞分裂素的组合与不同浓度配比,研究建立和优化高效的加格达甜瓜再生体系。[结果]愈伤组织诱导培养基:MS+2,4-D 1.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L,出愈率93%;芽诱导培养基:MS+6-BA 2.0 mg/L,出愈率76%,出芽率100%;芽的分化培养基:MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA0.2 mg/L,分化率为95%;芽的伸长培养基为:MS+6-BAI 0.05 mg/L;根的诱导培养基为:MS+IAA0.2 mg/L。[结论]建立了1套甜瓜的离体再生体系,为利用转基因技术培育出具有抗病虫害、抗逆性等优良性状的甜瓜奠定基础,在理论和实践上均具有重要的意义。     

原种黑麦草组培再生体系建立初探

[目的]探索原种黑麦草愈伤组织诱导和植株再生方法,为多年生黑麦草原种的转基因研究奠定基础。[方法]以多年生黑麦草原种成熟种子为外植体,在组织培养条件下,施以不同浓度的激素进行培养,研究不同激素组合对愈伤组织诱导以及植株再生的影响。[结果]MS基本培养基中添加5.0 mg/L 2,4-D时愈伤组织诱导率最高,达64.85%;愈伤组织在MS附加1 mg/L 6-BA和0.5 mg/L IBA的分化培养基中分化率最高,为37%;不定芽在添加0.1 mg/L IBA的生根培养基中生根率为96%。[结论]黑麦草原种愈伤组织再生体系成功建立。     

大花蕙兰腋芽增殖体系的建立

[目的]建立大花蕙兰腋芽增殖体系。[方法]以大花蕙兰的嫩芽为试材,研究大花蕙兰腋芽增殖的最佳条件。[结果]结果表明,腋芽增值的最佳培养基为B5+6-BA 3.0~4.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AD 2.0 mg/L+YE 100.0 mg/L;生根阶段培养基为1/2MS+2.0 g/L AC+0.3 mg/L NAA生根效果好,生根率为90%,根数3~4条,6-BA添加与否影响不大。[结论]该试验通过腋芽增殖模式,遗传稳定性较高。     

灯盏花组培快繁与植株再生

[目的]建立较为系统的灯盏花组培体系,培育、壮大和发展灯盏花这一独具特色和优势的产业。[方法]以灯盏花（Erigeron breviscapus）的叶片为外植体,用不同浓度的激素6-BA、2,4-D、KT和NAA对其进行愈伤组织的诱导和再生植株的研究。[结果]诱导愈伤组织最佳的培养基是MS＋KT0．5mg／L＋2,4-D10mg／L和MS＋2,4-D0．5mg／L＋6-BA0．5mg／L,诱导率为100％;二者相比,前者长出的愈伤组织较为紧密,而后者松散性好;MS＋6-BA0．5mg／L＋10％香蕉汁是诱导芽最佳的培养基,达87％;加入0．3mg／L NAA的1／2MS培养基对生根最有利,生根率达83％。[结论]生长素与细胞分裂素的合理配比有利于快速构建灯盏花培养体系。     

野生木薯组织培养快繁技术研究

[目的]对野生木薯进行种质资源保存和大规模种苗繁殖。[方法]采用组织培养的方法进行快速繁殖。[结果]适宜野生木薯愈伤与不定芽分化的培养基为MS＋6-BA 0.10～0.50 mg/L＋NAA 0.1～0.5 mg/L;继代增殖适宜培养基为MS（Fe含量加倍）＋6-BA 0.50～0.65 mg/L＋IBA 0.1 mg/L＋PVP 200 mg/L;适宜生根的培养基为MS（Fe含量加倍）＋0.1%AC,生根率达90%以上;在粗河沙∶细河沙=2∶1基质中驯苗,成活率可达85%以上。[结论]建立了野生木薯的快速繁殖方法。