寄生松墨天牛的球孢白僵菌不同菌株DNA多态性的RAPD 分析

采用RAPD 技术对21 个不同来源的寄生松墨天牛Monochamus alternatus 的球孢白僵菌Beauveria bassiana 菌株的DNA 指纹图谱进行了测定。从RAPD 结果可知寄生松墨天牛的白僵菌菌株间具有丰富的遗传多态性。聚类分析把21 个寄生松墨天牛的白僵菌菌株分为两大类群:①B1 , B14 , B4 , B5 , B6 , B7 , B8 , B12 , B13 , B10 , F-263 , Bxs , B2 , B11 , Bf , Bz , B9 ;②B3 , B15 , By2 , By7 。结果表明菌株DNA 多态性与采集地之间有一定的相关性, 与对松墨天牛幼虫的毒力未表现出相关性。图2 表2 参11     

松墨天牛寄生白僵菌的优良菌株筛选

对21个球孢白僵菌(Beauveriabassiana)菌株的生长、产孢能力、抗逆性等生物学性状以及对松墨天牛(M.alternatus)4龄幼虫的毒力进行了全面的比较研究。综合各菌株的生物学特性和对天牛幼虫的毒力指标,最终得出防治松墨天牛幼虫最优良菌株是来自浙江象山的Bxs和来自江苏的B5菌株,其中Bxs在生长指标上略占优势,B在抗性指标上略占优势。     

绿僵菌不同菌株DNA多态性的RAPD分析

采用RAPD－PCR技术分析了4个绿僵菌株的DNA遗传多态性。从160条引物中筛选出27条引物，对各菌株进行PCR扩增，结果4个绿僵菌菌株共扩增出334个位点，其中多态性位点299个，占89．5％，表明各菌株间具有较丰富的遗传多态性。菌株DNA多态性与原寄主和孢子形态表现出明显的相关性，但与对松墨天牛幼虫的毒力间未表现出相关性。图2表4参7     

继代移殖对球孢白僵菌蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶活性的影响及与毒力的相关性

为探讨继代移殖对球孢白僵菌蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶活性的影响及与毒力的相关性,以筛选得到的高毒力菌株B5、 BXS与低毒力菌株B11、BZ为出发菌株,通过连续接种松墨天牛幼虫获得H1、H2、H3、H4继代移殖菌株,而连续在PPDA培养基上转接,获得R1、R2、R3和R4继代移殖菌株。分别对各原始菌株与继代移殖菌株进行蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶活性与毒力测定,并将每种酶活性与相应菌株对松墨天牛的半致死时间（LT50）作相关性分析。结果表明:高毒力菌株B5、BXS与低毒力菌株B11、BZ在PPDA培养基上继代移殖,随着各菌株对松墨天牛的毒力逐代下降,其蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶活性也逐代降低;来源于松墨天牛的B5、BXS、B11菌株通过松墨天牛幼虫继代移殖后随着毒力逐代提高,3种酶活性也逐代上升,但来源于松毛虫的BZ菌株逐代之间3种酶活性差异不显著;相关性分析表明4个原始菌株与继代移殖菌株彼此间的LT50与3种酶活性间均呈极显著的直线负相关。      

不同松树上松墨天牛和花绒坚甲种群及白僵菌自然寄生率动态

对两年纯林和混交林中诱木进行解剖研究.结果表明,不管是纯林还是混交林,松墨天牛种群数量为黑松＞马尾松＞湿地松;林分对松墨天牛种群影响不显著.松墨天牛天敌花绒坚甲数量,纯林中马尾松＞黑松＞湿地松;混交林中黑松＞马尾松＞湿地松.不管是纯林还是混交林,松墨天牛的白僵菌自然寄生率都极低,为0%～4.35%,且不同林分不同树种松墨天牛的白僵菌自然寄生率之间差异不显著.     

绿僵菌不同菌株DNA 多态性的RAPD 分析

采用RAPD-PCR 技术分析了4 个绿僵菌菌株的DNA 遗传多态性。从160 条引物中筛选出27 条引物, 对各菌株进行PCR 扩增, 结果4 个绿僵菌菌株共扩增出334 个位点, 其中多态性位点299 个, 占89.5%, 表明各菌株间具有较丰富的遗传多态性。菌株DNA 多态性与原寄主和孢子形态表现出明显的相关性, 但与对松墨天牛幼虫的毒力间未表现出相关性。图2 表4 参7     

基于RAPD对贵州省小麦白粉菌的遗传多样性评价

对2005～2006年采自贵州省的24个代表性小麦白粉菌单胞培养物进行RAPD分析.30个随机引物对代表菌株分别能扩增出3～7条带.并主要集中在300～2 500bp,选用条带比较明显的5个引物进行统计.多态性位点频率占71.8%,表明RAPD标记在贵州省小麦白粉菌中存在较高的多态性.对RAPD分析结果进行聚类分析表明.小麦白粉菌毒性多态性与DNA多态性不形成一一对应的关系,同一地域内的菌株在聚类图中近缘性更为紧密.     

花绒寄甲防治松墨天牛林间试验初报

[目的]防治松墨天牛,预防松材线虫病的发生及传播。[方法]将花绒寄甲成虫释放到林班,观察花绒寄甲对松墨天牛的寄生效果。[结果]花绒寄甲主要寄生松墨天牛老龄幼虫,松墨天牛在新干县的寄生死亡率为64.6%。[结论]随着花绒寄甲在自然界的种群量不断增加,用其防治松墨天牛的效果显著。     

广东省烟草青枯茵的菌系和遗传多样性

从广东省韶关和梅州2个烟草产区采集了来自8个县市的共38个烟草青枯菌菌株，对病菌的生物型、致病型和遗传多样性进行了测定，结果表明广东烟草青枯菌全部为生物型Ⅲ。通过在红花大金元，K326，岩烟97和系3等4个烟草鉴别品种上的致病性反应，将广东烟草青枯菌分为强致病力、中等致病力和弱致病力3种致病型，其中以中等致病力菌株为主，占78．9％；强致病力菌株占13．2％；弱致病力菌株占7．9％。从116个RAPD通用引物中筛选出10条引物，用于对38个烟草青枯菌株DNA的RAPD分析，扩增条带表现出明显的多态性，条带主要聚集在0．3～4．0kb之间。聚类分析这38个菌株可分为2个组群，即组群A和组群B。组群A中又可以分为7个亚组（A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7）；组群B也含有4个亚组（B1、B2、B3、B4）。研究结果还表明，广东烟草青枯菌菌株RAPD组群的划分与菌株的寄主来源有一定的相关性，但与地理区域、生物型和致病型没有明显的相关性；生物型不能反映烟草青枯菌菌系的差异。 04—0463—06     

广东省烟草青枯菌的菌系和遗传多样性

从广东省韶关和梅州2个烟草产区采集了来自8个县市的共38个烟草青枯菌菌株,对病菌的生物型、致病型和遗传多样性进行了测定,结果表明广东烟草青枯菌全部为生物型Ⅲ。通过在红花大金元,K326,岩烟97和系3等4个烟草鉴别品种上的致病性反应,将广东烟草青枯菌分为强致病力、中等致病力和弱致病力3种致病型,其中以中等致病力菌株为主,占78.9%;强致病力菌株占13.2%;弱致病力菌株占7.9%。从116个RAPD通用引物中筛选出10条引物,用于对38个烟草青枯菌株DNA的RAPD分析,扩增条带表现出明显的多态性,条带主要聚集在0.3～4.0 kb之间。聚类分析这38个菌株可分为2个组群,即组群A和组群B。组群A中又可以分为7个亚组(A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7);组群B也含有4个亚组(B1、B2、B3、B4)。研究结果还表明,广东烟草青枯菌菌株RAPD组群的划分与菌株的寄主来源有一定的相关性,但与地理区域、生物型和致病型没有明显的相关性;生物型不能反映烟草青枯菌菌系的差异。     

球孢白僵菌无纺布菌剂与引诱剂联合防治松褐天牛初报

在宣城地区利用引诱剂(M99-1)诱捕松褐天牛成虫, 结果表明,7月12-8月1是松褐天牛的危害高峰期.使用不同诱集方法与球孢白僵菌无纺布菌条联合应用,通过多指标分析显示,白僵菌对松褐天牛具有显著的抑制效果,其中以诱芯与白僵菌无纺布菌条联合使用的效果最佳:感染率52.1%,刻槽抑制率39.13%,寿命抑制率40.1%,侵入孔数下降7.75%,幼虫数下降12.43%.     

三株丝孢虫生真菌对松墨天牛幼虫的感染效应

 生物测定了球孢白僵菌（Beauveria bassiana）Bb050715,Bb060721菌株和粉拟青霉（Paecilomyces farinasus）Pf0607菌株对松墨天牛（Monochamus alternatus Hope）的感染效应。结果表明,球孢白僵菌及粉拟青霉对松墨天牛幼虫的毒力有一定的差异,3株丝孢真菌侵染三龄幼虫后,均造成虫体血淋巴中蛋白质含量降低,且球孢白僵菌侵染后血淋巴中总蛋白含量明显低于经粉拟青霉接种处理感染后的虫体。供试3菌株中,球孢白僵菌菌株处理后天牛累积死亡率明显高于粉拟青霉菌株,对天牛幼虫感染的剂量效应参数分别为0.45,0.45和0.39,对松墨天牛三龄幼虫的毒力回归方程分别为Y=13.537X-4.603²(R²=0.97),Y=15.361X+0.444 4(R²=0.97)和Y=9.138X-3.100 1(R²=0.99)。在1.36×10⁴～1.36×10⁹孢子/mL下处理后第4d才出现死亡,Bb050715,Bb060721和粉拟青霉3菌株接种处理后第4～8d的累积死亡率分别为13.3%～80.0%,13.3%～86.7%,6.7%～53.3%,LT₅₀依次为5.1,5.1和7.7d,第5 d的LC₅₀分别为7.23×10⁸孢子/mL,1.53×10⁸孢子/mL,7.27×10⁹孢子/mL。     

松墨天牛幼虫真菌病侵染途径研究

为了探讨生物防治方法控制松材线虫病的发生和发展,开展了松材线虫病死木昆虫区系调查及虫种鉴定,进行了白僵菌孢子萌发试验和人工侵染试验。结果表明,在松材线虫病死木中,松纵坑切小蠹、马尾松梢小蠹、松瘤小蠹、额毛小蠹、松墨天牛为优势种。所用白僵菌株的孢子萌发率和萌发时间之间存在显著相关,相关系数均达0.9以上。中山陵地区的几种主要小蠹均能被白僵菌所感染,即均具有携带白僵菌孢子的能力。由此推测,松墨天牛幼虫感染白僵菌的途径很可能是:某种小蠹虫先感染白僵菌,然后该小蠹虫经过二次侵染,将白僵菌孢子转移给松墨天牛幼虫,从而导致松墨天牛幼虫感病。     

白僵菌和绿僵菌蛋白对松墨天牛致病性的研究

从4株白僵菌和1株绿僵菌中提取了10种全蛋白提取液,以林业害虫松墨天牛幼虫为试虫,筛选出菌株Bb36的全蛋白提取液Bb36W-Z和Bb36N-Z,再从中分离出12种单一蛋白提取液,生测发现虫生真菌蛋白Bb36W-D对松墨天牛幼虫具有较强的注射毒性,经其处理后的试虫酯酶谱发生明显变化,致使松墨天牛幼虫内部组织发生病变.     

利用白僵菌防治松褐天牛的试验研究

通过生物测定筛选出对松褐天牛毒力较高的菌株Bb202,用该菌株生产白僵菌无纺布菌条和高孢粉用于野外防治松褐天牛,结果表明,防治后松褐天牛的虫株率下降了0.9%,下降幅度达31.1%;无纺布菌条处理区解剖木中的幼虫死亡率为61.8%,高孢粉处理区为52.5%,对照区为45.6%.挂笼试验中,无纺布菌条处理区解剖木的幼虫死亡率为41.9%,高孢粉处理区为62.0%,对照区为32.3%,说明用白僵菌防治松褐天牛有一定的效果.     

松墨天牛优良球孢白僵菌菌株生物学及毒力研究

 对松墨天牛Monochamus alternatus优良球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株B_xs的营养生长、产孢条件以及对松墨天牛毒力进行研究。试验表明：B_xs菌株营养生长温度范围为20～30 ℃,最适宜营养生长和产孢温度均为25 ℃,35 ℃下营养生长停止;适合菌株B_xs的营养生长和产孢的培养基为DPSA。毒力测定表明：不同松墨天牛虫龄和虫态间感病性差异较大（P＜0.05）,虫龄越小越容易感病。B_xs菌株对3龄幼虫的剂量—死亡率方程为y = －1.388 4+0.996 7x,致死中浓度C_L50为3.936 × 10⁶个孢子·L^－1。充分考虑了时间—剂量—死亡率之间的三维关系制作出了菌株对松墨天牛3龄幼虫的互补重对数（CLL）模型。图3表7参11     

白僵菌和绿僵菌不同菌株对橙斑白条天牛幼虫的致病力

橙斑白条天牛是福建省杨树的一种新害虫,应用不同球孢白僵菌(Beauveria bassiana)和金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)菌株对橙斑白条天牛幼虫进行致病力测定,旨在筛选出感染该虫的高致病力菌株,为生物防治提供新的资源。结果表明,接种后,该天牛幼虫的累积死亡率随时间的延长而逐渐增高,接种绿僵菌Ma1291-2和Ma1775菌株14 d后,幼虫的校正死亡率分别为91.69%和86.50%;接种白僵菌BbDp-06菌株14 d后,幼虫校正死亡率达71.05%。绿僵菌Ma1291-2和Ma1775菌株对该幼虫的LT50分别为5.73和5.39 d,白僵菌BbDp-06菌株的LT50为8.02 d。Ma1291-2菌株对该幼虫的LC50为3.82×104孢子.mL-1,白僵菌BbDp-06菌株的LC50为3.88×104孢子.mL-1。说明绿僵菌对该幼虫的致病力较强,尤其是Ma1291-2和Ma1775菌株,在橙斑白条天牛的生物防治中将有较好的应用价值。