大麻染色体制片技术

[目的]探究大麻染色体的制片技术。[方法]对大麻染色体制片技术的预处理液、解离时间、染色时间等进行试验研究,并对其进行染色体数目观察。[结果]研究表明:用大麻根尖在常温下用0.003%的8-羟基喹啉溶液预处理2 h或用饱和对二氯苯处理1.5 h,经卡诺固定液固定30 min后,在1∶1的1 mol/L HCl和45%醋酸60℃下恒温水浴中解离30 s,地衣红染液染色8 h压片镜检,能取得良好的制片效果。大麻染色体数目观察表明,大麻染色体数目2n=2x=20。[结论]该研究为大麻细胞学方面的深入研究提供了资料。     

金铁锁染色体制片技术研究

以金铁锁组培苗根尖为材料,对其染色体制片过程中预处理、固定、解离、染色等环节的最佳处理条件进行探讨。结果表明,金铁锁根尖在室温下用0.003 mol/L 8-羟基喹啉溶液预处理5.0 h后,放入预冷的卡诺固定液[V(无水乙醇)∶V(冰乙酸)=3∶1]中于冰水中处理30 min,然后用解离液[V(浓HCl)∶V(无水乙醇)=1∶1]处理120 s,再用卡宝品红染色液对根尖染色25 min(先染色20 min后复染5 min),能得到良好的镜检效果。金铁锁根尖体细胞的染色体数目为2n=2x=28,为二倍体。     

用于菊花品种核型分析的根尖压片技术研究

根尖压片技术是研究植物中期染色体数目和形态的一种重要方法。以2个大菊品种的根尖为材料,以典型中期分裂相的数目、中期染色体的分散程度、聚缩程度和中期染色体的清晰性为衡量制片效果优劣的标准,通过对比不同预处理药剂、取材时间、预处理温度、预处理时间长短以及解离时间条件下的制片效果,得出如下结论：当根长至1 cm时,在9：00~10：00取根,用饱和对二氯苯溶液在4℃条件下预处理4 h,然后用卡诺固定液固定22~24 h,用1 mol/L的HCl60℃下解离10 min,能够得到数量较多、染色体分散良好、染色体形态清晰以及染色体长度适中的中期分裂相。     

文心兰染色体的制片技术

以文心兰根尖为材料,采用常规制片法,对染色体制片的取样时间、预处理液、固定液、解离时间、染色液及染色时间进行了研究。结果表明：文心兰组织培养苗培养温度为25℃;适宜的取样时间为5～6月的上午10：00;材料放入1g·L^–1的秋水仙素＋0.002mol·L^–1的8-羟基喹啉混合液中室温预处理4h的效果最好,用卡诺氏液固定12～24h,可获得较多的细胞分裂相,1mol·L^–1的盐酸60℃水浴锅中恒温解离8min的效果较好,用改良的苯酚品红染色制片效果最好。     

木薯根尖染色体的观察技术

[目的]探索制作木薯二倍体根尖压片技术,为多倍体的鉴定提供参考。[方法]以木薯品种华南124的根尖为试材,在恒温水浴中用1 mol/L HCl溶液处理,进行细胞解离,并进行11~15 min的时间梯度试验以寻找最佳解离时间。通过木薯根尖染色体的解离观察试验,探讨了木薯根尖染色体(二倍体)的观察方法。[结果]木薯根尖的最佳取材时间在雨后或头天浇水第2天上午9∶00~10∶00。解离时间梯度试验表明,解离13 min可达到木薯的最佳解离效果。通过比较4种染色试剂(I-IK染液、改良苯酚品红、番红染液和醋酸洋红)的染色效果选出的最佳试剂为改良苯酚品红。[结论]该研究为木薯多倍体的直接鉴定提供了新方法。     

桉树染色体压片技术优化研究

为了探索和优化桉树染色体压片技术,获得收缩度好、分散充分的桉树染色体显微镜观察图,对比不同取材时间、不同预处理剂和不同解离方法处理下的染色体压片效果,得出最优的处理方法为:上午09:00进行取材,以8-羟基喹啉进行预处理4 h,用卡诺氏固定液于4℃固定24 h,酶解35 min,卡宝品红染色10 min,最后在显微镜下观察,可以得到清晰、可计数的染色体。该技术可用于桉树染色体核型分析和倍性鉴定等细胞生物学层面的研究。     

新疆紫草不同材料染色体制片技术研究

[目的]研究新疆紫草不同材料的染色体制片方法,为今后倍性鉴定奠定技术基础.[方法]以新疆紫草根尖及毛状根根尖为试验材料,采用常规制片法,分别考察培养方式及培养时间、取材时间、预处理方法、酸解方法、酸解时间、染色时间对染色体制片效果的影响.[结果]B5固体培养基培养4d的毛状根中期分裂相指数较大,且染色体清晰,制片效果较好;早上08:00取材的毛状根根尖的中期分裂相指数(124.2‰)最高,原植物根尖(115.4‰)在早上10:00取材较为适宜;毛状根根尖采用0.1;秋水仙素、温度15℃、预处理时间4h时的中期分裂指数为97.6‰～124.2‰,室温酸解法、10;盐酸、酸解时间为12 min、染色时间为20 min有利于毛状根根尖的制片.原植物根尖采用0.1;～0.2;秋水仙素、温度4 ～15℃、预处理时间3h、室温酸解法、10;盐酸、酸解时间为15 min时的中期分裂指数为128.6‰～128.9‰.[结论]材料不同则取材时间及秋水仙素预处理时间就有所不同.秋水仙素预处理时间、温度及酸解时间是影响新疆紫草染色体制片效果的关键因素.     

根尖压片法制备树莓染色体标本的研究

以红泡刺藤(R.niveus)、栽秧泡(R.ellipticusvar.obcordatus)和插田泡(R.coreanus)绿枝或硬枝扦插生根的根尖为材料,通过取材时季与扦插环境气温,8-羟基喹啉、秋水仙素和对二氯苯3种药剂在不同的温度下预处理不同时间,混合酶液和盐酸在不同温度下解离,醋酸洋红、卡宝品红、席夫试剂和铁矾-苏木精各染色剂染色压片等的对比研究,并以细胞中有丝分裂中期分裂相的数目、染色体的清晰性、分散程度和聚缩程度以及染色体的形态为衡量指标,探索出适于树莓属植物核型分析的根尖压片方法是:当根尖长至1~2 cm、扦插环境气温17~23℃时取材,卡诺氏固定液I低温固定24 h,用0.002 mol/L 8-羟基喹啉在0~4℃下预处理24 h,再用1 mol/L HCl(60±1)℃恒温解离4~7 min,最后用卡宝品红染色压片能获得效果好树莓染色体标本,该染色体标本完全适用于核型分析。     

马蓝染色体制片技术优化

以莆田地区马蓝分生组织为材料,采用压片技术,探讨马蓝不同取材部位、不同取材时间、不同预处理试剂处理、不同解离时间等对马蓝染色体制片的影响,并进行核型分析。结果表明:以根尖分生组织为材料,在上午8:00、8:30取材,用0.1%秋水仙素溶液室温预处理0.5h,用卡诺液固定4h,然后用1mol·L-1盐酸在60℃水浴8min,卡宝品红染色8min,可获得分散良好,形态清晰的染色体。核型分析表明,马蓝染色体为32条,马蓝的核型公式是2x=2n=32=4sm+28m,核型类型为1B,不对称系数为59.54%。说明莆田地区马蓝在相对稳定的自然环境中进化速度缓慢。     

中国沙棘染色体的染色和制片技术

以中国沙棘的茎尖为材料,进行不同的取样时间、预处理、固定、解离时间处理后,压片观察染色体。结果表明:早上09:00～10:00取生长旺盛的茎尖组织,用8-羟基喹啉预处理材料1.5～2.5h,卡诺固定液固定2～3h置于60℃恒温水浴酸化15～20min,用改良的卡宝品红染色15min,制出的玻片染色体清楚,效果极佳。     

刺五加导管特征及其与刺五加苷B·E含量相关性的分析

[目的]分析不同产地刺五加导管特征及其与刺五加苷B、E含量的相关性。[方法]以不同产地刺五加的1年生根、茎为试材,石蜡切片法制片,测定导管周长、面积,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]刺五加根中导管平均面积、周长分别为986.89μm2、141.08μm,茎中导管平均面积、周长分别为362.48μm2、88.46μm,不同产地刺五加根、茎中导管的周长、面积差异显著。刺五加茎中刺五加苷E含量与茎中导管面积呈显著相关。[结论]导管面积、周长可以作为鉴定刺五加产地来源的指标,茎中导管面积可作为茎中刺五加苷E含量的早期鉴定指标。     

刺五加不同药用部位中槲皮素鼠李糖苷的含量比较

[目的]测定刺五加不同药用部位中槲皮素鼠李糖苷含量,并对结果进行比较,为刺五加合理利用及质量评价提供科学依据。[方法]采用高效液相色谱法测定刺五加的根、茎、叶、花和果中槲皮素鼠李糖苷含量。色谱条件为:大连江申Nucleosil C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为无水甲醇-水(40∶60,V/V),流速为1.1 ml/min,检测波长为370 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。[结果]刺五加各药用部位中槲皮素鼠李糖苷的含量大小顺序为花蕾叶果茎根。其中,花蕾中槲皮素鼠李糖苷含量最高,为4.43%;其次为叶(0.61%);根中的最低,为0.01%。[结论]该方法操作简便、快速、准确,可用于刺五加不同部位中的槲皮素鼠李糖苷的含量比较。     

刺五加内生真菌对刺五加苷B和E含量的影响

[目的]分析内生真菌对刺五加中刺五加苷B,E含量的影响。[方法]以分离自不同产地的刺五加内生真菌为试材．以伤口法回接,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]结果表明,25株内生真菌中有16株为致病菌,9株为非致病菌。其中来自产地吉林省梅河口市刺五加的菌株P116-1a、P109—4、P116-1b和P312—1均不同程度地提高了刺五加茎、根茎中刺五加苷B、E的含量。[结论]刺五加内生真菌可通过产生的代谢物调节刺五加苷B、E的含量。     

刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析

[目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1 099 bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋(alpha helix),占46.72%;53个延伸链(extended strand),占14.48%;27个β折叠(beta turn),占7.38%;115个无规则蜷曲(random coil),占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。     

刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析

[目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1099bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋（alpha helix）,占46.72%;53个延伸链（extended strand）,占14.48%;27个β折叠（beta turn）,占7.38%;115个无规则蜷曲（random coil）,占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。     

温度对刺五加黑斑病菌的影响

[目的]探讨温度对刺五加黑斑病菌的影响。[方法]在不同温度条件处理下,对刺五加黑斑病菌的生长速率和病原菌孢子的萌发状况进行系统的研究和分析。[结果]刺五加黑斑病病原菌对温度条件的适应性比较强,在5—35℃温度范围内均可以生长,超过40℃不能生长．而且在60℃以下的温度条件下均可以存活,最适宜的生长温度范围为25—30℃。其孢子萌发率在25℃时随着时间的延长而升高。刺五加黑斑病病原菌的生长速率和病原菌孢子的萌发率都是在25℃温度条件处理下为最高,表明25℃是刺五加黑斑病菌生长发育和侵染的最佳温度。[结论]该研究证明温度对刺五加黑斑病菌的生长速率和孢子萌发率均具有较大影响,该研究为刺五加黑斑病的进一步研究奠定了理论基础。     

刺五加多糖提取纯化工艺的优化

[目的]优化刺五加多糖的提取纯化工艺。[方法]以药用植物刺五加为材料,采用单因素试验和正交试验法对多糖提取、纯化的工艺进行优化。[结果]结果表明,热水浸提的最佳温度为90℃,浸提时间为150min,水料比为18：1,提取次数2次;醇沉温度为-20℃,时间36h,乙醇与浸提液比例为4：1,pH值为7时多糖产率最高。采用树脂动态吸附法筛选不同树脂去除多糖色素和蛋白的效果,结果显示,D941树脂最好。经树脂处理的多糖采用DEAE-Sepharose阴离子交换柱和Sepharose-G200层析柱进一步纯化,得到了纯度较高的As-1和As-2 2个多糖组分。[结论]该研究结果为进一步确定刺五加多糖的生化特性、生理功能奠定基础。     

角瓜籽蛋白饮料的研制

[目的]对角瓜籽蛋白饮料的配方和工艺进行研究。[方法]以脱壳角瓜籽为原料,打浆后添加适量的风味成分和稳定剂,采用正交试验确定饮料的配方。[结果]影响角瓜籽蛋白饮料风味的因素大小为白砂糖〉乳酸〉乙基麦芽酚。将黄原胶、羧甲基纤维素钠与海藻酸钠混合使用作增稠剂,其用量为0．20％较为适宜;乳化剂使用分子蒸馏单甘酯和蔗糖脂肪酸酯,其用量为0．20％较为适宜。添加7．O％白砂糖、0．16％乳酸、0．003％乙基麦芽酚,83℃、23MPa下均质2次,121℃下杀菌15min即可制成角瓜籽蛋白饮料。且所研制的角瓜籽蛋白饮料质量稳定、营养丰富、口感柔和、风味独特、组织状态良好,具有较高的市场开发价值。[结论]该研究为角瓜籽蛋白饮料的工业化生产提供了一定的理论依据。