6种病毒抑制剂对烟草花叶病毒的抑制作用及其机制初探

采用半叶枯斑法测定6种病毒抑制剂对烟草花叶病毒(TMV)的活体治疗、保护和钝化作用,并用半定量RT-PCR检测药剂诱导烟叶中病程相关蛋白基因PR-5的表达情况。结果表明:有效成分为宁南霉素的金珠蔬美对TMV有较高的活体治疗和保护效果,在250 mg/L时枯斑抑制率分别达到了67.24%、54.55%;关于药剂对TMV的活体钝化作用,金毒冠氨基寡糖素的抑制率最高,5 mg/L时平均抑制率为60.31%。6种药剂处理烟草K326后,PR-5基因表达呈现不同程度地上调,表明它们均能诱导烟草产生对TMV的抗性。     

壳寡糖的诱导抗性及对TMV的体外钝化研究

以摩擦接种法和半叶枯斑记数法调查了壳寡糖诱导枯斑寄主对TMV侵染的抑制率.试验结果表明,被壳寡糖诱导后的烟苗病斑率减少42.8%,被诱导植株的病斑小;壳寡糖在活体外对TMV粒子有钝化作用;壳寡糖钝化病毒液处理植株在1～5个小时内处理的病斑数比对照的减少80%左右,但其钝化作用在一定时间内有效,体外钝化处理超过15 d后钝化效果消失.壳寡糖液浓度为0.5×10～5 μg/ml以内,对病毒有明显的钝化作用,病斑率降低94.9%～77.6%,当浓度低于0.9×10～6μg/ml时,对病毒的体外钝化作用消失.     

TMV与CMV不同组合侵染番茄后TMV致病性与浓度关系的数学模型与统计分析

由烟草花叶病毒(TMV)与黄瓜花叶病毒(CMV)三种不同组合接种番茄幼株(北京早红)后,再由接种侵染的番茄株体中分别捉取的 TMV 以不同的浓度对心叶烟侵染所得半叶平均枯斑数据,应用植物病毒侵染与浓度关系的理论模型 y=B_1ln(1+B_2V),采用 Gauss-Newton 法与 Marguardt 洪两种方法,分别实现了模型的参数计算,得到了三种组合侵染番茄株体后提取的 TMV 的致病性与浓度关系的数学模型与最优曲线拟合,并对两种计算方法的效果进行了比较。本文还对由不同组合侵染番茄株体后提取的 TMV 的不同浓度对心叶烟侵染所得半叶平均枯斑数据进行了统计分析,证明 TMV 与 CMV 的不同处理组合间的 TMV 侵染的半叶平均枯斑数差异是极显著的,TMV 各接种浓度间侵染的差异性也是极显著的,而这两者的交互作用侵染的差异性则不如前两种情形显著,这些结论与实验结果完全一致。     

食用菌提取物对烟草花叶病毒的抑制作用

 从钝化(提取物与病毒混合后接种)、预防(施用提取物24 h后接种病毒)、治疗(接种病毒24 h后施用提取物)3个不同时期,在心叶烟上测试了8种食用菌乙醇提取物水溶液对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)的抑制作用。试验结果表明：8种食用菌提取物在体外都具有钝化病毒(TMV)及抑制病毒(TMV)侵染的作用；除鸡油菌(Cantharellus minor Peck)外，其它7种食用菌提取物对TMV有不同程度的治疗作用。     

漂盘培养液中TMV含量对烟草花叶病发病情况的影响

[目的]为提高烟叶产量和品质提供参考。[方法]以普通烟K326和心叶烟为材料,用12．7、1．27、0．127、0．0127μg/ml烟草花叶病毒（TMV）液对K326进行漂盘培养,培养5、10、15、20、25d后随机取各处理K326叶片得叶片提取液,用各处理提取液接种8叶期心叶烟叶片,调查K326的发病情况及心叶烟的枯斑数。[结果]12．7ug／mlTMV处理K326表现出发病症状,其他处理未表现明显发病症状;随着培养液中TMV浓度的升高,各处理烟叶提取液接种心叶烟产生的枯斑数逐渐增多,且枯斑数随病毒接种时间的延长迅速增加;12．7、1．27μg/mlTMV处理K326叶片提取液接种20d后心叶烟枯斑数最多,0．127、0．0127μg／mlTMV处理K326叶片提取液接种25d后心叶烟枯斑数最多。[结论]烟草花叶病的发病率和病情指数与培养液中TMV的浓度有关。     

壳寡糖诱导烟草抑制TMV增殖的研究

采用ELISA-DSM法和半叶枯斑法,研究了壳寡糖诱导对普通烟(Nicotiana tabacum)体内TMV 增殖的影响。结果表明,普通烟经50μg/mL壳寡糖溶液诱导处理后,其对TMV的侵染表达了高水平的系统抗病性,显症推迟4～7 d,平均严重度降低了82．9％。ELISA-DSM法检测结果表明,壳寡糖诱导处理的普通烟植株体内病毒浓度明显降低;在接种后10 d,接种叶片OD值仅为0．400,相当于同期不诱导对照的23．0%;新生叶片OD 值为0．190,相当于同期不诱导对照的38．7％。以发病普通烟叶片为接种体,利用半叶法接种心叶烟(Nicotiana glutinosa),结果表明,壳寡糖诱导处理大大减少了枯斑数目;以接种后10 d的壳寡糖处理叶片为接种体,平均半叶枯斑数为9．25,仅为不诱导对照的19．5%;以同期新生叶为接种体,平均半叶枯斑数为0．630,为不诱导对照的 25．0%。以上两种方法的检测结果均证明,壳寡糖诱导处理可以有效抑制普通烟体内的TMV增殖。通过对壳寡糖 (低分子质量)处理与壳聚糖(高分子质量)处理的比较发现,分子质量的差异不影响其对病毒增殖的抑制效果。     

放线菌ZX01菌株发酵产物抗TMV活性的初步研究

【目的】探明新发现的一种放线菌ZX01菌株发酵产物对烟草花叶病毒（TMV）的抑制活性,为该菌株在植物病毒病害防治中的开发应用提供依据。【方法】以心叶烟和普通烟K326为材料,采用半叶枯斑法、叶圆片法和室内盆栽试验,测定放线菌ZX01菌株发酵产物抗TMV活性。【结果】放线菌ZX01菌株发酵产物对TMV具有明显钝化作用,其中发酵液在对TMV钝化10,30和60 min后,抑制率分别为62.29%,75.46%和84.78%;接种TMV 6 h后,在普通烟K326上,ZX01菌株发酵液对TMV复制增殖的抑制率可达53.27%;并且ZX01菌株发酵液对烟草花叶病毒病寄主保护和治疗作用显著,其保护和治疗作用的防治效果分别为54.48%和44.85%,明显高于对照药剂病毒A。【结论】放线菌ZX01菌株代谢产物对TMV有较高的抑制活性,值得在菌种鉴定、发酵条件优化、活性物质的分离与鉴定等方面进行深入研究。     

烟草花叶病毒侵染对光合组织中蛋白质的影响及其防治研究

为了提高烟草对烟草花叶病毒(TMV)侵染的耐受性,筛选有效防治TMV的制剂,采用i TRAQ技术探寻TMV侵染烟草后不同时间段蛋白质组的变化。结果显示:光合系统、卟啉代谢和叶绿素代谢途径中PSⅡ32 ku protein、PSⅠP700 apoprotein A1、Cytochrome b/f complex subunitⅣ、Oxygen-evolving enhancer protein 1、Geranylgeranyl diphosphate reductase及Short-chain dehydrogenase TIC 32的表达量在TMV侵染后发生显著变化。在此基础上,筛选了对植物叶片组织具有保护作用的复配制剂A和B。采用qRT-PCR检测结果显示,制剂B提高了烟株光合途径和卟啉代谢与叶绿素代谢途径中关键基因(Oxygen-evolving enhancer protein 1、Short-chain dehydrogenase TIC32)的表达水平,降低了TMV对光合系统的破坏。进一步检测抗性基因N和PR1-a的表达量,并结合半叶枯斑试验,均表明制剂B对烟草花叶病具有显著的防治效果。     

植物源病毒抑制剂WCT-II控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT- 直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体,经枯斑半叶法接种和电镜检测发现,处理后的病毒致病力明显下降,病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象,WCT- 对TMV的枯斑抑制率为86.6%;WCT- 处理烟草后,其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现,处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明,WCT- 不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用,而且能诱导植物产生病程相关蛋白,提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

植物源病毒抑制剂WCT-Ⅱ控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT-Ⅱ直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体，经枯斑半叶法接种和电镜检测发现，处理后的病毒致病力明显下降，病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象，WCT-Ⅱ对TMV的枯斑抑制率为86．6％；WCT-Ⅱ处理烟草后，其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现，处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明，WCT-Ⅱ不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用，而且能诱导植物产生病程相关蛋白，提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

烟草漂浮苗花叶病毒病重要初侵染源的探讨

烟草花叶病毒病是烟草漂浮苗的一个重要病害.为了解该病的初侵染源,对苗盘和剪叶机进行了调查采样和检测接种.结果表明.病毒污染的苗盘和剪叶机上烟苗残留物样品当季可检测到TMV抗原阳性.温室内存放1年后,苗盘残留物仍然可检测到TMV抗原阳性,且接种枯斑寄主出现枯斑,用带毒苗盘育苗可使烟苗感染TMV.苗盘和剪叶机上残留物TMV抗原阳性与烟草团棵期部分田块花叶病发病率高于20%有关.这些结果表明,病毒污染的苗盘和剪叶机上烟苗残留物是漂浮苗烟草花叶病毒病的重要初侵染源.生产上要重视旧苗盘和剪叶机的清洗与消毒.     

白花蛇舌草抗烟草花叶病毒作用机理的研究

[目的]研究白花蛇舌草提取液对烟草花叶病毒（TMV）的抑制作用及其防治效果,为植物源抗病毒类生物农药的研制提供依据。[方法]以心叶烟和K326为试验材料,采用常规摩擦接种,分别于接种病毒前24h和接种后24h分别喷施白花蛇舌草10倍液;接种处理3～5d后,调查枯斑数量,计算枯斑抑制率;普通烟接种处理后调查病情指数、计算防效;采用间接ELISA法[4]测定各处理的病毒浓度;将提纯的TMV与白花蛇舌草10倍液等体积混合不同时间后,采用负染法在电镜下观察病毒粒子的形态变化。[结果]对心叶烟的抑制率为84.6%,对系统寄主K326的防效为76.6%;在接种病毒前24h喷施药剂,枯斑抑制率和对系统寄主的防效分别为62.2%和61.5%;接种病毒后24h喷药试验结果表明,药剂能抑制植株体内病毒的增殖;电镜观察结果表明,病毒粒子有断裂现象,混合时间越长,破坏作用越强。[结论]白花蛇舌草对TMV还具有较强的体外抑制作用,作用时间越长,抑制率越高。     

几种病毒抑制剂对烟草花叶病毒的抑制试验

通过室内生物测定试验,研究了5种常用药剂对烟草花叶病毒(TMV)的治疗、保护和钝化作用,旨在为创制新的烟草病毒病抑制剂提供科学依据.结果表明,金珠蔬美对病毒的活体治疗和保护效果最好,在250 μg/mL时抑制率分别达到66.24％和54.55％,高于其他抑制剂的防效.药剂对IMV活体钝化的效果中,金毒冠氨基寡糖素的抑制...     

抑制烟草花叶病毒侵染的植物提取物的筛选

用半叶枯斑法,在心叶烟上测试了33种植物乙醇提取物水溶液对烟草花叶病毒(Tobacco mosaicvirus,TMV)侵染的抑制效果。结果表明,雪松、桉树提取物能较好地抑制病毒(TMV)侵染,抑制率达到89.7%,78.3%;此外,菟丝子、红花蔷薇、桑、红千层、杜鹃、桂花、香石竹、滇厚朴、荠菜、芦荟等植物提取物也具有抑制烟草花叶病毒(TMV)侵染的效果,抑制率均在50%以上。     

烟草内源提取物抗TMV活性筛选

【目的】探讨3种烟草提取物的抗TMV活性,为开发烟草内源性抗烟草花叶病物质提供依据。【方法】利用半叶枯斑法对心叶烟、云烟203和K326三种烟草的根、茎、叶、杈甲醇提取物进行抗烟草普通花叶病毒活性筛选,并用叶盘法对部分筛选结果进行验证。【结果】3种烟草根和茎的提取物对TMV具有较明显的抑制活性,其中根对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制率范围分别为65.00%~79.75%、64.0 8%~74.31%、26.9%~42.40%,活性最强;茎的活性次之,对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制率范围分别为33.33%~44.25%、42.82%~66.06%、10.96%~47.76%。3种烟草叶和杈的提取物对TMV虽有一定的抑制活性,但较全株提取物对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制活性均降低,抑制活性不明显。【结论】3种烟草的根部粗提物具有较好的抗TMV活性,值得进一步研究。     

VFB抗烟草花叶病毒活性及对烟草叶片超微结构的影响

【目的】评价植物源病毒抑制剂VFB的抗烟草花叶病毒(TMV)活性,并初步探讨其作用机理。【方法】以心叶烟(Nicotiana glutinosaL.)和普通烟(Nicotiana TabacumL.)为寄主材料,采用半叶枯斑法测定了VFB对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖的抑制作用,并用透射电镜技术研究了VFB对感染TMV烟草叶片超微结构的影响。【结果】VFB对TMV具有明显的体外钝化作用,在对TMV钝化0.5,1和2 h后,其抑制率分别为44.41%,55.62%和64.43%;VFB对TMV侵染心叶烟具有较好的预防作用,其50倍稀释液在24和48 h的抑制率分别达到54.33%和55.60%,均优于对照药剂病毒A;VFB对TMV有一定的治疗作用,其50倍稀释液的抑制率为36.15%,略低于对照药剂病毒A。烟草叶片病理结构的超微观察表明,普通烟感染TMV后,叶片中大部分细胞结构会受到不同程度的破坏,经VFB处理的烟草,花叶症状减轻,叶片中的TMV粒子显著减少,叶绿体和线粒体的解体症状减轻,并产生大量嗜锇颗粒和膜体。【结论】VFB对TMV具有较好的抑制作用。     

一株对TMV和PVY具有拮抗活性生防菌的筛选与鉴定

【目的】筛选对烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）和马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY)具有显著拮抗活性的菌株。【方法】从山东诸城等植烟区采集烟草病毒病高发区健康烟株中烟100（Nicotiana tabacum var. Zhongyan 100）的根际土壤,分离抗TMV的活性菌株,通过生理生化测定和分子鉴定确定菌株。采用Real-time PCR技术定量检测该菌株对TMV和PVY的抑制作用进一步验证该菌株的抗病毒活性。田间试验进行3个处理,菌液与病毒混合,2 h后接种（I）,喷菌液2 h后接种病毒汁液（II）,接种病毒汁液2 h后喷施菌液（III）,以8%宁南霉素和肥皂水分别与等体积病毒汁液混合为阳性对照,以LB培养基与病毒汁液混合为空白对照。利用菌株发酵液对剪刀上病毒的钝化作用进行验证试验。【结果】筛选到的菌株通过枯斑寄主半叶法显示其对TMV的抑制效果达98%以上,命名为4A1,分子鉴定结果显示该菌株16S rDNA序列与Pseudomonas monteilii的16s rDNA序列同源率达到99%;菌株4A1为革兰氏阴性,氧化酶、淀粉水解VP、吲哚等反应为阴性,明胶液化、葡萄糖反应为阳性,能运动,确定该菌株为蒙氏假单胞菌（P. monteilii）。Real-time PCR检测结果显示其发酵液对TMV、PVY具有显著的抑制活性。田间试验结果显示,处理I可有效降低大部分病毒侵染,TMV和PVY发病率分别为5.3%和7.7%,病情指数分别为0.8和2.9;处理II可显著减少TMV和PVY的侵染几率,发病率分别为33.3%和36.7%,病情指数分别为4.2和6.0;处理III烟株发病率为95.0%和92.0%,病情指数为24.5和20.1;CK组TMV、PVY发病率分别为99.3%和95.4%,病情指数为别为38.6和45.1。菌株对剪叶工具的处理,钝化病毒效果可达95%以上,防效显著高于其它处理。【结论】在烟叶生产上,该菌株可以作为生产工具的生物消毒剂和抗病毒剂。     

烟草花叶病毒系统诱发抗性的研究

用烟草花叶病毒诱发接种4种枯斑寄主:心叶烟、三生NN烟、珊西NC烟和蔓陀罗,可使接种植物对烟草花叶病毒、烟草蚀纹病毒及马铃薯X病毒的侵染表现很强的诱发抗性.这种抗性主要表现为处理的枯斑直径及枯斑数目比对照减少50%～75%.诱发抗性具有非特异性和广谱性.抗性在诱发接种后2～4天开始出现,7～8天达到最高抗性水平,且至少保持25天以上.     

VA系统诱导烟草对TMV抗性与细胞内防御酶系统的关系

枯斑三生烟(Nicotiana tabacum L.“Samsum”NN)经植物源抗病毒剂VA诱导处理后第7天(清水处理作对照)，在其长出的新叶上接种烟草花叶病毒(TMV)。结果表明，VA可以诱导枯斑三生烟对TMV产生系统抗性，其枯斑抑制率可达57．25％，枯斑出现时间推迟10h。超氧物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POX)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)3种酶的活性均比对照明显提高，其中48h时增加幅度最大；VA处理使枯斑三生烟叶片内的丙二醛(MDA)含量降低，其中接种48h时降低幅度最大。此外，在接种TMV后的12h内，清水对照的枯斑三生烟新叶中POX和SOD活性呈下降趋势，PAL活性几乎无变化，随后呈上升趋势，而经VA处理的枯斑三生烟新叶中的POX、SOD和PAL，活性自接种后，一直呈上升趋势，且上升幅度也高于对照；MDA含量的变化与3种酶活性的变化呈相反趋势。     

寡聚酸碘抑制TMV活性测定及对番茄生长影响初探

为研究新型壳寡糖衍生物类农用制剂寡聚酸碘(寡聚N-乙酰基-D-氨基葡萄糖醛酸碘)对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用及对番茄生长、生理特性的影响,以番茄品种:L402、贝鲁特、粉多利作为供试材料,以氨基寡糖素及50%腐霉利L可湿粉剂作为对比,通过室内生测试验试验,测定寡聚酸碘对番茄病毒病中常见病原菌TMV的抑制效果、对番茄生长及及番茄幼苗茎尖中吲哚乙酸、赤霉素及叶绿素含量的影响。寡聚酸碘对TMV的抑制效果表现出良好的速效性和持效性,接种后17d,抑制效果从45.08%迅速提升到74.48%,接种21~35d,对TMV的抑制效果维持在80%以上。寡聚酸碘对TMV的EC50值为15.62mg/L,对TMV的抑制活性高于3%氨基寡糖素水剂寡聚酸碘处理,有效成分300.0mg/L的寡聚酸碘可作为抑制TMV活性的最优供试剂量;寡聚酸碘在300~1 200mg/L处理剂量下,对供试的3个番茄品种(L402、贝鲁特、粉多利)安全,未见任何药害症状,与CK、3%氨基寡糖素及50%腐霉利L可湿粉剂相比,可以明显提升番茄幼苗株高、茎尖内IAA、GA含量及叶片中总叶绿素含量。寡聚酸碘处理的番茄茎秆粗壮,叶色浓绿,生长性状良好。因此,寡聚酸碘具有抑制TMV活性及促进番茄生长的双重功效,开发利用前景良好。