河北省辣椒(Capsicum frutescens)主要出口基地辣椒病毒病毒源种类鉴定——1.Ⅰ—17、Ⅱ—44、Ⅲ—59和Ⅳ—34分离物的鉴定

从辣椒上分离到的Ⅰ—17、Ⅱ—44、Ⅲ—59、和Ⅳ—34四个病毒分离物,根据其病毒形态、大小、血清反应、蚜虫传毒特性、体外稳定性、寄主范围和症状特点,Ⅰ—17、Ⅱ—44和Ⅲ—59分离物鉴定为黄瓜花叶病毒(CMV)的三个不同分离物,Ⅳ—34鉴定为烟草花叶病毒(CMV)。CMVⅠ—17、Ⅱ—44和Ⅲ—59三个分离物的病毒形态为球状,直径约28nm,免疫琼脂双向扩散试验结果:它们与 CMV 有密切的亲缘关系,三个分离物均由棉蚜、桃蚜以非持久性方式传播;钝化温度:Ⅰ—17为55—60℃,Ⅱ—44为66—70℃,Ⅲ—59为60—65℃,三个分离物的稀释限点均为10~(-4)—10~(-5),体外保毒期均为5天;在辣椒、黄瓜、心叶烟和普通烟等寄主上引起系统花叶,在奎宁藜、豇豆、蚕豆等植物上引起局部枯斑,不侵染十字花科植物。Ⅰ—17、Ⅱ—44和Ⅲ—59三个分离物在心叶烟、黄花烟、普通烟、蚕豆、蕃茄、曼陀罗等寄主上的侵染性及症状反应不同,在不同辣椒(甜椒)品种上的症状反应也存在差异。TMVⅣ—34分离物病毒粒子形态为直杆状,大小约为300×18nm,免疫琼脂双向扩散试验表明它与烟草花叶病毒(TMV)存在亲缘关系;不能由蚜虫传毒,致死温度为95°—100℃,稀释限点为10~(-10)—10~(-11),体外保毒期2个月以上;在普通烟、毛叶烟、三生烟、辣椒、蕃茄等寄主上表现系统花叶,在心叶烟、曼陀罗、奎宁藜、黄色藜、枯斑三生烟等寄主上引起枯斑症状,不侵染黄瓜和蚕豆等植物。     

长沙郊区辣椒病毒病毒源类型的初步鉴定

1981—1982年从长沙郊区辣椒上采回具有花叶、绉缩、丛枝以及可疑病株的标样70株,在鉴别寄主心叶烟(Nicotiana glutinosa)和普通烟(N.tabacum)上测得病毒的有34株,共鉴定出三种病毒。黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)和芜菁花叶病毒(TpMV),以黄瓜花叶病毒最多。烟草花叶病毒包括普通株和蕃茄株。通过三次单斑分离,纯化出烟草花叶病毒蕃茄株,寄主范围测定结果可为害4科14种种植物,致死温度96℃,稀释限度10~(-9),电子显微镜下观察病毒粒子形态为长杆状,大小为270纤米。     

长沙郊区辣椒病毒病毒源类型的初步鉴定

1981—1982年从长沙郊区辣椒上采回具有花叶、绉缩、丛枝以及可疑病株的标样70株,在鉴别寄主心叶烟(Nicotiana glutinosa)和普通烟(N.tabacum)上测得病毒的有34株,共鉴定出三种病毒。黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)和芜菁花叶病毒(TpMV),以黄瓜花叶病毒最多。烟草花叶病毒包括普通株和蕃茄株。通过三次单斑分离,纯化出烟草花叶病毒蕃茄株,寄主范围测定结果可为害4科14种种植物,致死温度96℃,稀释限度10~(-9) ,电子显微镜下观察病毒粒子形态为长杆状,大小为270纤米。     

北疆地区辣椒上两个TMV分离物的鉴定

依据在鉴别寄主上的反应,从北疆辣椒上分离得到的90—15和90—24两个TMV类型病毒,经测定,前者致死温度为85℃,侵染普通烟表现系统坏死,苋色藜表现系统花叶,与TMV普通株系抗血清部分融合,外壳蛋白分子量为17 782Dalton,由161个氨基酸组成,没有组氨酸,但有一个蛋氨酸,后者致死温度为90℃,侵染普通烟表现系统花叶,苋色藜表现局部枯斑,与TMV普通株系抗血清完全融合,外壳蛋白分子量为16 982Dalton,由157个氨基酸组成(不包括色氨酸),含组氨酸和蛋氨酸各一个。两者在苋色藜上有交互保护作用。     

辽宁省辣椒花叶病毒分离鉴定

在辽宁省主要蔬菜区获得辣椒花叶病毒两个分离物,一为烟草叶病毒辣椒分离株(TMV—P),其表现黄斑驳花叶症,病毒粒子呈长杆状,稀释限点10~(-6);致死温度97℃;体外存活期为10天以上,另一为黄瓜花叶病毒辣椒分熟株(CMV—P),病毒粒子球状,稀释限点1:3000,致死温度60～65℃。体外存活期3～4天。     

引起辣椒黄白花叶、内卷的一个病毒分离物的鉴定

从新疆石河子地区辣椒病毒病株上分离到一株病毒 PV分离物。测定表明能侵染 6科 34种植物 ,引起辣椒局部褪绿斑和圆环 ,系统白色至黄色花叶 ,内卷和矮化。桃蚜不能传毒 ;钝化温度 65～ 70℃ ,稀释限点 10 -4～ 10 -5 ,体外保毒期 3个月以上 ;病毒颗粒杆状 ,大小 2 5 8nm×16 nm;外壳蛋白分子量 18.0 KD;琼脂双扩散和交互保护反应测定 PV与烟草花叶病毒(TMV)相关密切 ;电镜下观察到辣椒病组织中含有病毒粒子的集结体、假晶体、叶绿体内的网膜状结构和分散病毒粒子。初步认为该分离物是 TMV,但寄主反应、粒体大小、致死温度和异常内含体与文献报道的 TMV各分离物有所不同 ,可能是 TMV普通株系的变异体。     

广州市郊及其邻近地区辣椒CMV和TMV的鉴定

根据对广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的田间调查、寄主范围和症状特点、血清学反应以及RT-PCR的试验结果，证实了黄瓜花叶病毒(CMV)是广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的主要毒原之一；通过生物学和血清学方法，鉴定了烟草花叶病毒(TMV)是另一主要毒原。在采集的病样中，根据鉴别在寄主上的症状特点，主要存在两种类型的分离物，分别称为分离物Ⅰ和分离物Ⅱ。分离物Ⅰ在辣椒、西葫芦、三生烟、普通烟、心叶烟、曼陀罗等寄主植物上引起花叶等症状，在苋色藜、昆诺阿藜上产生局部枯斑，不侵染千日红，由此可初步鉴定为CMV；从间接ELISA和RT—PCR的检测结果也可判断分离物Ⅰ是CMV，其检出率为36．67％。分离物Ⅱ在辣椒、普通烟上产生花叶症状，在心叶烟、曼陀罗、千日红、三生烟、苋色藜和昆诺阿藜等寄主植物上产生局部枯斑，而不侵染西葫芦，由此可初步鉴定其为TMV；间接ELISA检测结果表明，分离物Ⅱ是TMV，其检出率为43．33％。另外，TMV在田间发生率明显高于CMV。     

珊瑚豆花叶病病原病毒鉴定

从珊瑚豆(Solanum pseudocapsicum L.var diflorum(Vell)Bitter)花叶病株上分离到一病毒(SPV—I),汁液摩擦接种和桃蚜(Myzus persicea)、棉蚜(Aphis gossypii)均能传毒。两次试验证明该病毒不经种传,人工摩擦接种可侵染7科中的21种植物。在黄瓜、心叶烟等植物上能引起系统花叶,能引起苋色藜、昆诺阿藜接种叶片局部枯斑。该病毒钝化温度为65～70℃10分钟;稀释限点为10~(13)～10~(-4);体外存活期为1～2天(22℃)。琼脂免疫双扩散表明,此病毒与黄瓜花叶病毒有明显的血清学关系。浸蘸法制备样品,2%醋酸铀负梁,透射电镜观察,该病毒粒子为正二十面体,其直径为28～30nm。根据此病毒的生物学、血清学特性和病毒粒子的形态特征,初步认为该分离物是黄瓜花叶病毒的一个株系。     

丹东地区番茄花叶病毒原鉴定及药剂防治研究初报

丹东地区番茄花叶病的病害样本,经分离鉴定得知毒原种类为黄瓜花叶病毒(CMV),但也有一些混合侵染者。病汁液摩擦接种于心叶烟及普通烟上,均表现花叶症,侵染蚕豆生局部枯斑,侵染苋色藜表现针尖大小的枯斑。经试验该病毒致死温度为65℃,稀释限点为1:3000,体外存活期1～4天。电镜观察病毒粒子为球状。药剂防治试验采用 NS—83增抗剂100倍液及“九二○”10ppm 液喷雾防治,均有不同程度效果。     

广西西瓜花叶病病原病毒鉴定

从广西各西瓜主产区采集到表现花叶症状的样品124份,经ELISA测定,所采样品均与西瓜花叶病毒二号(WMV-2)抗血清呈阳性反应,与黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)抗血清呈阴性反应.取典型样本摩擦接种西瓜、西葫芦、南瓜、黄瓜、毛节瓜、瓠瓜、罗汉果等葫芦科植物表现花叶症状;接种苋色藜产生局部坏死斑;接种番木瓜、普通烟、心叶烟、番茄、辣椒、豇豆等无任何症状反应.该病毒还可通过棉蚜和嫁接传染.病毒初提纯液经电子显微镜观察,发现许多大小为12nm×(600～800)nm的线状病毒.ELISA测定结果显示,该病毒与莴苣花叶病毒(LMV)、大豆花叶病毒(SMV)抗血清呈阳性反应,它们之间有密切的血清学关系.据此,广西西瓜花叶病的病原病毒应为西瓜花叶病毒二号(WMV-2).     

毕节市烟草3种主要病毒检测及株系分析

利用RT-PCR检测体系对贵州毕节烟区的烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus, CMV)和马铃薯Y病毒(potato virus Y, PVY) 3种病毒进行病害检测和株系鉴定,样品检测结果显示, TMV发生最严重,检出率为64.13%,其次是PVY,检出率为40.22%, CMV发生较轻,检出率为31.52%.通过同源性比较和构建系统进化树,结果表明,毕节烟区CMV均属于ⅠB亚组, TMV均属于种群Ⅰ, PVY均属于PVY~(N∶O)株系,各株系间没有明显的地域差异,烟田周边马铃薯上分离物MQG1和MQG2,与烤烟上CMV,TMV和PVY 3种病毒的分离物亲缘关系较近,由此可以推测,烟田周边的马铃薯可能是烟田这3种病毒的主要毒源.     

陕西省咸阳市、商州市烟草病毒病毒原鉴定初报

2001年在咸阳市，商州市采集了101个毒株，经过生物学测定，血清学反应（琼脂双扩散法和酶联免疫吸附法），电镜观察鉴定出5种为害烟草的病毒，它们是烟草普通花叶病毒（TMV），黄瓜花叶病毒（CMV），烟草蚀纹病毒（TEV），马铃薯Y病毒（PVY），烟草环斑病毒（TRSV），其中烟草普通花叶病毒病，黄瓜花叶病毒病和烟草蚀纹病毒病是当前生产上发病率较高，造成损失较大的3种病毒；同时，烟草普通花叶病毒（TMV）和黄瓜花叶病毒（CMV），烟草普通花叶病毒（TMV）和马铃薯Y病毒（PVY）的复合侵染也是当前生产上亟待解决的主要问题。     

辣椒花叶病防治研究初报

辣椒(Capsicum annuum L.)花叶病,是近年影响产量和质量的重要问题。经近年来的研究(1980～1985年),初步鉴定,主要毒原为烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)及很少的烟草蚀纹病毒(TEV)和马铃薯Y病毒(PVY)等。因毒原种群不同症状表现有些差异。由TMV侵染的辣椒多表现黄色斑驳花叶型和普通花叶型;由CMV侵染的辣椒叶片,多表现黄化型和畸形、蕨叶等型。田间蚜虫传播CMV,品种间对病毒的抗性略有不同,若采取一系列栽培措施,有显著减轻本病的作用。兹将防治研究初步结果简报如下。     

烟草花叶与黄瓜花叶病毒复合或重复侵染番茄后在体内TMV浓度及致病性的比较

1980至1982年的试验结果表明,北京郊区番茄抹上主要病毒类型是烟草花叶病毒(TMV),其次为黄瓜花叶病毒(CMV),以及部分由它们的复合侵染所造成的花叶、厥叶和茎坏死条斑等症状,其中以 TMV 起主导作用,它占总病毒数的50%以上。用测定 TMV 浓度的增量来估计不同组合接种的作用可以看出,单独侵染 TMV 的呈现系统花叶症、疱斑和部分叶片畸形;混合侵染的则表现一般:重复侵染的比前两种处理的症状表见更轻些,而单独侵染 CMV 的症状则表现最轻。不同方式组合的TMV 枯斑数量测定结果也同上述症状表现一致。症状的轻重与枯斑数量的多少成正比。单独侵染 TMV 的不同稀释度(5 mg/ml)的枯斑数量,比两种复合侵染的多。用数学方法所得 TMV 的致病性稀释曲线图同上述结果一致。由于复合侵染中CMV 对 TMV 浓度的增量产生一定的抑制作用,因此,在症状的表现上和枯斑数量也相应减轻和减少。     

抗TMV、CMV转基因烟草的初步选育

将烟草花叶病毒复制酶54 KD蛋白基因构建到质粒pSSZ32.54K,导入根癌农杆菌EHA105株系,用农杆菌介导的叶盘法转化含CMV CP基因的纯合系烟草,获得了含CMV CP基因和TMV RepE基因的转基因烟草,以及只含TMV RepE基因的转基因烟草.以繁殖于新鲜普通烟叶片上的TMV为毒源,机械摩擦接种含双基因的烟草和只含CMV CP基因的烟草.接种15 d后,观察植株发病情况,发现转双基因的烟草无花叶症状出现,而对照植株(只含CMV CP基因)出现花叶症状.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病毒含量,发现转基因植株体内无病毒积累,而对照植株体内有病毒积累.因此,含RepE基因的烟草对TMV有一定抗性.     

广东番茄花叶病毒的鉴定

在1979～1981年间进行了本项调查研究工作,根据病毒粒子形态、血清学反应、物理性质、鉴别寄主植物和寄主范围等特性,广东番茄花叶病的病原病毒经鉴定有CMV和TMV—普通株系和TMV—番茄株系,在全省16个地点采集的223个标样中,它们分别分布于16,8和4个地点;它们所占比例分别约为74.4％,12.6％和13.9％。     

VFB抗烟草花叶病毒活性及对烟草叶片超微结构的影响

【目的】评价植物源病毒抑制剂VFB的抗烟草花叶病毒(TMV)活性,并初步探讨其作用机理。【方法】以心叶烟(Nicotiana glutinosaL.)和普通烟(Nicotiana TabacumL.)为寄主材料,采用半叶枯斑法测定了VFB对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖的抑制作用,并用透射电镜技术研究了VFB对感染TMV烟草叶片超微结构的影响。【结果】VFB对TMV具有明显的体外钝化作用,在对TMV钝化0.5,1和2 h后,其抑制率分别为44.41%,55.62%和64.43%;VFB对TMV侵染心叶烟具有较好的预防作用,其50倍稀释液在24和48 h的抑制率分别达到54.33%和55.60%,均优于对照药剂病毒A;VFB对TMV有一定的治疗作用,其50倍稀释液的抑制率为36.15%,略低于对照药剂病毒A。烟草叶片病理结构的超微观察表明,普通烟感染TMV后,叶片中大部分细胞结构会受到不同程度的破坏,经VFB处理的烟草,花叶症状减轻,叶片中的TMV粒子显著减少,叶绿体和线粒体的解体症状减轻,并产生大量嗜锇颗粒和膜体。【结论】VFB对TMV具有较好的抑制作用。     

白花蛇舌草抗烟草花叶病毒作用机理的研究

[目的]研究白花蛇舌草提取液对烟草花叶病毒（TMV）的抑制作用及其防治效果,为植物源抗病毒类生物农药的研制提供依据。[方法]以心叶烟和K326为试验材料,采用常规摩擦接种,分别于接种病毒前24h和接种后24h分别喷施白花蛇舌草10倍液;接种处理3～5d后,调查枯斑数量,计算枯斑抑制率;普通烟接种处理后调查病情指数、计算防效;采用间接ELISA法[4]测定各处理的病毒浓度;将提纯的TMV与白花蛇舌草10倍液等体积混合不同时间后,采用负染法在电镜下观察病毒粒子的形态变化。[结果]对心叶烟的抑制率为84.6%,对系统寄主K326的防效为76.6%;在接种病毒前24h喷施药剂,枯斑抑制率和对系统寄主的防效分别为62.2%和61.5%;接种病毒后24h喷药试验结果表明,药剂能抑制植株体内病毒的增殖;电镜观察结果表明,病毒粒子有断裂现象,混合时间越长,破坏作用越强。[结论]白花蛇舌草对TMV还具有较强的体外抑制作用,作用时间越长,抑制率越高。     

陕西省烟草主要病毒病种类及植物带毒的检测

【目的】明确陕西省烟区烟草主要病毒病种类及烟田周围携带病毒植物的种类及带毒情况。【方法】采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),对从安康、宝鸡、商洛、延安、咸阳、汉中和铜川烟区采集感染病毒病的167个烟草样品以及烟田周边7科23种植物的279个植物样品进行了检测。【结果】从感染病毒烟草样品中检测到烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV)5种病毒。其中CMV的侵染最普遍,总检出率达74.34%;PVY、TMV、TEV、TVBMV的总检出率分别为58.16%,47.29%,21.59%和18.87%。在156个烟草阳性样品中,有28个样品受CMV、TMV、PVY或TVBMV单独侵染,其检出率分别为4.78%,10.09%,1.66%和1.18%,未检测出TEV单独侵染;其余样品均受2种以上病毒复合侵染,总检出率为82.05%。烟田周边279个植物样品中,176个植物样品被检测出携带有包括TMV、CMV和PVY等在内的烟草病毒,病毒检出率占63.08%。毒源植物样品中病毒检出率最高的植物为刺儿菜,其病毒检出率高达92.86%,其次为番茄、茄子、辣椒、蚕豆,其病毒检出率分别为90.91%,87.50%,86.67和78.57%。【结论】CMV取代TMV和TEV已成为当前陕西烟区的优势毒种,PVY检出率在部分烟区有明显上升的趋势。田间烟草病毒复合侵染现象严重,值得高度重视。烟田周围植物是烟草病毒病防治的重要考虑因素。     

侵染大豆的黄瓜花叶病毒(CMV)

在本校育种田的大豆上得到一个病毒分离物——A-1。A-1分离物接种了7个科28个种和品种,而侵染6个科19种植物。A-1分离物很易侵染大豆、菜豆,引起深浅绿色花叶;在豇豆接种叶上产生扩散的褪绿斑,并发展成系统花叶;亦易侵染心叶烟、普通烟、克氏烟、矮牵牛和辣椒等茄科作物,表现系统花叶症状;在苋色藜和番杏上引起局部褪绿斑。但A-1分、离物与番茄上分离的CMV在豆科寄主反应上有差异。A-1分离物可以侵染几种豆科作物,而CMV不侵染大豆和菜豆,仅在蚕豆和豇豆上引起小型的红褐色斑。A-1分离物的体外抗性:失毒温度50℃,稀释限点10~(-2)—10~(-3),体外存活期1—2天。桃蚜以非持久性方式传病。A-1分离物与CMV标准抗血清作琼脂双扩散测定呈阳性反应。根据以上性状,分离物A-1应属于黄瓜花叶病毒组的黄瓜花叶病毒(CMV)。江苏省南京、徐州和山东省薛城、莱西等地采集的140个大豆病毒样本中,CMV占36％。