高产蛋白酶和纤维素酶放线菌的筛选、鉴定及酶活测定

从含废弃物土壤中分离筛选出一株同时产蛋白酶和纤维素酶的放线菌,并对其产酶活力进行测定,采用形态学和分子生物学对筛选菌株进行菌种鉴定.结果表明,筛选出的高产蛋白酶和纤维素酶的菌株GT-B-S001为嗜热一氧化碳链霉菌,该菌株产蛋白酶活力为161.3U/毫升、产纤维素酶活力为135.5U/亳升.GT-B-S001有较强的产...     

产碱性蛋白酶海洋菌的诱变及其酶学性质的初步研究

[目的]筛选出高产碱性蛋白酶的菌株,为其在生产中的应用提供依据。[方法]从青岛沿海海域采集的海水及海泥中分离得到产碱性蛋白酶的菌株,经紫外诱变和微波诱变处理,获得目标菌株并测定菌株的酶活力,同时对诱变菌株的酶学性质进行初步的研究。[结果]筛选出的菌株酶活力为145 U/ml,经过复合诱变后,菌株ZR-58-3-1-3发酵液的酶活力达775 U/ml,比出发菌株高4.3倍。菌株所产碱性蛋白酶的最适反应温度为45℃,属中温蛋白酶;最适作用pH为8.5,具有较高的热稳定性。[结论]菌株ZR-58-3-1-3产碱性蛋白酶的性能稳定,可作为产碱性蛋白酶的突变菌株。     

蚕蛹蛋白高效分解菌的分离筛选及部分酶学性质的研究(英文)

[目的]获得蚕蛹蛋白高效分解菌,探索其有关酶学性质。[方法]从腐败蚕蛹中采用稀释平板分离蛋白高效分解菌。先进行菌株的初筛:取采集的样品2g,分别加入装有LB培养基的摇瓶中,置摇床上180r/min,37℃培养4～5d。将发酵液稀释一定倍数,涂布法进行分离,根据酪素培养基中单菌落透明圈和菌落直径比值(H/C)大小,选取H/C比值较大的菌株进行复筛。将初筛得到的待测菌株接种于发酵培养基中,32℃摇床培养60h。发酵液离心(4000r/min,5min)后取上清,测定酶活力,并比较不同菌株发酵液蛋白酶pH、温度作用范围。对筛选出的菌株所产中性蛋白酶再进行pH值条件下酶活力稳定性测验,酶活力热稳定性试验,及不同金属离子对中性蛋白酶活力的影响试验。蚕蛹粉采用筛选出的菌株固体发酵后,于60℃烘箱烘干,测定其中小分子蛋白含量。[结果]经筛选得到1株产中性蛋白酶的KB细菌,在摇瓶发酵条件下其酶活达到589.08U/ml,发酵蚕蛹粉后中小分子蛋白含量达到15.09%,比未发酵的对照和实验室现用菌株发酵分别提高了95.72%和15.67%,这表明KB菌株在蚕蛹粉发酵中优于实验室现用菌株。KB菌株所产中性蛋白酶在pH值6.5～9.0条件较稳定,pH值8.0为其最适pH值,在pH值8.0、温度55℃条件下处理0～30min时的酶活较稳定,残余酶活力在90.0%以上。[结论]初步获得蚕蛹蛋白高效分解菌。     

金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选及鉴定

采用透明圈法从舟山普陀白山土壤中筛选出3株能分泌胞外蛋白酶的菌株,并对蛋白酶活力最高的菌株进行分子鉴定及最适宜生长条件分析。选择福林酚试剂法测定其蛋白酶活力,对蛋白酶活力最高的菌株进行16S r RNA基因测序,用MEGA软件构建系统发育树,并考察其接种量、温度、时间对该菌株产酶活力的影响。结果表明,zjoub-1菌为高产蛋白酶菌属,并确定为枯草芽孢杆菌。该菌株用于金枪鱼暗色肉发酵时的最适宜条件为接种量2%、pH 7.4、温度37℃、时间48 h。在此生长条件下,菌株产蛋白酶活力最高,为49.21 U/m L,能够有效地降解金枪鱼暗色肉。     

蛋白酶高产菌株的紫外诱变选育

［目的］提高地衣芽孢杆菌B7的产蛋白酶能力。［方法］采用福林酚法测定酶活力,通过诱变育种试验和遗传稳定性试验选育出遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株。［结果］紫外线照射时间为2 min,菌落的总致死率为62.47%。371株菌株的HC值变化小于5%,53株菌株的HC值正变大于5%,76株菌株的HC值负变大于5%。正变大于10%的12株菌株的HC值是出发菌株的1.18-1.34倍。所有变异株的蛋白酶活力均显著高于出发菌株,其中菌株B720和B749的蛋白酶活力达50 U/ml,比出发菌株提高了40%以上。经过复筛得到菌株B7 49,诱变前后其最高酶活分别为33.97和50.29 U/ml。遗传稳定性试验中菌株B749的蛋白酶活力变化小于10%。［结论］该试验成功选育出的遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株B749可用于发酵法制备大豆肽。     

固态发酵法生产大豆多肽的初步研究

以豆粕粉为原料,以大豆多肽转化率为指标对固态发酵生产条件进行了优化,并对获得的13株蛋白酶产生菌株进一步筛选。结果表明:最佳发酵条件为基质含水量40%,接种量1%,初始pH值6.5,发酵时间120 h,发酵温度28℃;各菌株对蛋白含量无明显影响,但蛋白水解度存在较大差异,其中米曲霉(Aspergillus oryzea)1001和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵后大豆多肽含量可高达26.44%和25.46%。     

米曲霉高产蛋白酶菌株的选育及在酱油酿造中的应用研究

[目的]筛选蛋白酶活力高的菌株酿造酱油.[方法]通过对沪酿3042米曲霉进行紫外线和LiCl复合诱变, 筛选高产蛋白酶突变株,并对其遗传稳定性和产生的蛋白酶性质进行研究,同时将该突变株应用于酱油酿造试验.[结果]通过诱变得到高产蛋白酶突变株米曲霉UF366, 其蛋白酶活力达1 440 U/g,比对照提高了33.3;.UF366菌株的遗传稳定性好,在pH 7.2,40℃时其中性蛋白酶活力最高;在90℃处理30 min,蛋白酶活力完全丧失.[结论]采用UF366米曲霉发酵的酱油氨基酸态氮和全氮分别为0.637和1.14 g/100 mL,与出发菌株沪酿3042米曲霉相比分别提高了36.7;和39.0;.     

大豆降压肽的生产工艺研究

应用4种蛋白酶酶解大豆分离蛋白,研究其水解效果和降压活性。实验选定碱性蛋白酶为生产大豆降压肽的最适酶,并对其酶解条件进行了优化,确定生产大豆降压肽的最佳条件为：温度60℃,pH8.0,底物浓度4%,碱性蛋白酶浓度4%,水解度14.4%,优化后的ACE抑制率可达到84.1%。     

大豆肽液体发酵工艺的响应面优化

[目的]利用Minitab软件优化大豆肽发酵条件,为液体发酵法生产大豆肽提供参考。[方法]采用Plackett-Burman试验设计法,对影响芽孢杆菌y-6发酵豆粕产大豆肽的主要影响因子进行了筛选;采用Box-Behnken试验设计法对发酵条件进行优化,得到大豆肽转化率的数学模型,通过对该模型求解,得最佳发酵条件。[结果]Plackett-Burman试验表明,影响大豆肽转化率的主要因子为接种量、发酵温度、摇床转速;Box-Behnken试验得最佳发酵条件:接种量为6.3%,发酵温度为39.89℃,摇床转速为187 r/min。优化发酵参数后,大豆肽的转化率由最初的63.70%提高到了78.15%。[结论]响应面分析法有效地提高了大豆肽的制取率。     

制备大豆抗氧化肽用酶的筛选

文章研究了由碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等蛋白酶水解制备的大豆抗氧化肽的水解度和AOV值。结果表明,大豆抗氧化肽的AOV值大小和水解度的大小与酶的种类有关,以AOV值为指标,筛选出碱性蛋白酶为最佳用酶。     

酱油曲菌GA-M_(31)的性能及试用效果

ＧＡ－Ｍ３１是一株诱变的酱油曲菌，其生长快、产孢子多、孢子发芽率高；该菌株具有较强的淀粉糖化酶活力，而且蛋白酶活力比一般菌种高１０％。经８个厂家试用证实，该菌株酶活力和出品率均比原生产菌种提高１０％以上，生产工艺性能优良     

耐草甘膦大豆种质资源筛选的研究

通过田间试验结合室内生物测定的方法,对不同大豆品种(系)进行了耐草甘膦特性的筛选,以期获得耐草甘膦大豆育种的新种质资源。结果表明,在草甘膦常规剂量下,不同大豆品种(系)对草甘膦耐性程度有着较大差异。褐皮豆和绥无腥豆1号耐性程度较强;DS系列大豆对草甘膦的耐性明显高于其他品系。通过室内生物测定对耐性程度较高的品种(系)进行进一步研究发现,DS品系等4个品系的耐性程度较高,其耐性倍数分别为4.23、3.82、2.93、2.59和2.48。室内考种数据表明,草甘膦虽然对耐性品系的株高有不同程度的抑制;但耐性品系可以正常的成熟结实,在单株荚数、百粒重等重要指标上具有可利用价值。     

大豆根瘤菌的分离与分子鉴定

为进一步发掘新的根瘤菌资源,丰富和充实根瘤菌资源库,本研究采用平板分离的方法从大豆根瘤中分离纯化根瘤菌,获得的菌株进行盆栽回接试验,结果表明分离获得的5株根瘤菌代表菌株均可在大豆上结瘤,具有结瘤能力。根据已公布大豆根瘤菌共同结瘤基因nodA保守区域设计引物对其进行了分子鉴定均获得了nodA PCR扩增产物,从而在分子水平上实现了对根瘤菌的快速鉴定。     

大豆肽对小鼠免疫功能的影响

研究了大豆肽对小鼠免疫器官和免疫功能的影响。将120只小鼠随机分成4组,对照组饲喂基础日粮,3个试验组分别在基础日粮中添加1%、2%、4%的自制大豆肽,饲喂小鼠21 d后,以免疫器官指数、血清溶菌酶、巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素为指标进行免疫功能的测定。结果表明,日粮中添加大豆肽可显著提高小鼠免疫器官指数,增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性,激发小鼠抗鸡红细胞抗体的产生,而血清溶菌酶酶活则无明显差异,说明芽孢杆菌y-6发酵制备的大豆肽具有一定的免疫调节作用。     

四川紫色土壤中土著大豆根瘤菌的资源分布

调查四川紫色土壤中土著大豆根瘤菌分布状况的结果表明。土著根瘤菌数在种植大豆的紫色土中为３３～１５００个／ｇ干土;未种植大豆的土中为２．５个／ｇ、３．８个／ｇ干土;水稻土壤没有测出。这些土著大豆根瘤菌与大豆品种的共生有效性不同,自贡５号、川农早熟１号的浸染力和固氮性比泉水３号强,但不及基因工程菌株ＨＮ３２。     

华南大豆种质对大豆疫霉根腐病的抗性分析

【目的】大豆疫霉根腐病是由大豆疫霉菌引起的严重影响大豆生产的世界性病害之一,选用抗病品种是控制该病最经济有效的措施。筛选抗大豆疫霉菌PGD1的优异抗源和多抗疫霉根腐病种质资源,推导大豆种质抗疫霉根腐病基因,为热带、亚热带地区大豆抗病育种提供有效抗源。【方法】采用下胚轴创伤接种法,利用在广东发现并分离的大豆疫霉菌PGD1菌株,接种鉴定主要来自广东、广西、福建、海南、湖南、江西和四川等华南省份631份大豆种质资源的抗病性,筛选抗大豆疫霉菌PGD1种质资源;再用其他6个不同毒力的大豆疫霉菌株接种鉴定抗大豆疫霉菌PGD1的种质,筛选多抗资源,通过基因推导方法分析抗病种质的抗病基因类型。【结果】631份大豆种质中有101份种质抗大豆疫霉菌PGD1,占鉴定种质的16.0%;73份为中间反应类型,占11.6%;457份表现感病,占72.4%。其中83份抗大豆疫霉菌PGD1的种质对其他6个不同毒力菌株Pm14、Pm28、PNJ1、PNJ3、PNJ4、P6497的侵染率分别为28.9%、34.9%、9.6%、66.3%、57.8%和10.8%。4份种质同时抗7个不同毒力的大豆疫霉菌株,分别为ZDD21538、ZDD21604、ZDD14286和明夏豆1号,占鉴定种质的4.8%。毒力频率为0的种质有15份,占鉴定种质的18.1%。83份大豆种质对7个不同毒力的大豆疫霉菌株共产生20种反应型,1种反应型与单个抗病基因的鉴别寄主Williams79反应型一致,可能含有抗病基因Rps1c;45份种质产生的9种反应型符合一些2个或2个以上已知抗病基因组合的反应型,这些种质可能含有已知抗病基因组合;38份种质共产生11种反应型既不同于任何含有单个已知抗病基因品种的反应型也不同于2个或2个以上已知抗病基因组合的反应型,它们可能含有新的抗病基因或基因组合。【结论】华南地区大豆种质中蕴藏着丰富的抗大豆疫霉菌PGD1和多抗大豆疫霉菌抗源,这些抗病种质可作为热带、亚热带地区大豆抗病育种的重要亲本和抗病基因定位的重要研究材料。     

大豆活性肽对14日龄早期断奶仔猪生长性能和甲状腺素分泌的影响

研究大豆活性肽对14日龄早期断奶仔猪生长性能和甲状腺素分泌的影响。选取14日龄的早期断奶杜×长×大三元杂交商品仔猪18头,随机分为3组,每组6头,正式试验30d。试验组分为对照组(添加8%血浆蛋白粉)、4.9%大豆活性肽组(添加4.9%血浆蛋白粉和4.9%大豆活性肽)和12.62%大豆活性肽组(添加12.62%大豆活性肽),按血浆蛋白粉和大豆活性肽的粗蛋白含量设计。结果表明,4.9%大豆活性肽组有提高平均日增重的趋势,比对照组提高13.94%。但各处理间差异不显著(P>0.05)。对照组平均日采食量最大,12.62%大豆活性肽组饲料转化率最佳为1.208,比对照组改善15.76%。4.9%大豆活性肽组有提高T3和降低T4的趋势,分别为0.36ng·mL-1和49.23ng·mL-1。但各处理均差异不显著(P>0.05)。大豆活性肽可作为血液性产品—血浆蛋白粉的替代品应用在14日龄早期断奶仔猪饲料中,最佳添加量仍需进一步试验。     

大豆多糖提取工艺优化

大豆多糖是大豆中的有效活性成分之一,具有抗氧化性、提高食品稳定性等作用.以豆渣为材料,采用不同的超声波处理时间、料液比、水提取温度和水提取时间进行单因素试验,然后在此基础上采用四因素三水平L_9(3~4)的正交试验对水溶性大豆多糖的提取条件进行优化.结果表明:超声波处理时间对水溶性大豆多糖提取率的影响最大,其次是水提取时间,再次是水提取温度,最后是料液比.水溶性大豆多糖提取的最优工艺参数是:超声波处理时间为20 min、水提取时间为4 h、水提取温度为80℃、料液比为1:40,在此条件下大豆多糖提取率为3.54%.经苯酚-硫酸法测定,所提取的大豆多糖纯度为96.58%.     

利用阳离子交换树脂对黄豆酱多肽脱盐作用的研究

为了进行黄豆酱中低聚肽的分离,去除黄豆酱中的盐分。以脱盐率、肽吸附率为指标,对黄豆酱脱盐的吸附树脂种类、动态吸附及解吸条件进行了研究。筛选出了强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001x7为吸附剂,动态吸附的最佳脱盐条件为进样浓度4mg·mL^-l,pH为8的50％乙醇溶液为洗脱剂,流速30r·min^-l,在此条件下,脱盐率为91．28％,肽回收率为88．54％。研究表明,采用001x7阳离子交换树脂对黄豆酱脱盐是一种有效的方法。本试验为黄豆酱多肽的进一步分离、生物活性评价及其一级结构鉴定奠定了研究基础。