PCR技术在食品检测中的应用和发展

食源性致病微生物的检测是食品卫生安全检测中一个重要的部分。目前,食源性致病微生物主要采用分离培养、生化鉴定的方法,操作繁琐,检测时间较长,通常需要3~5d才能完成,且每次只能检出一种致病菌,灵敏度和准确度较低。近年来,PCR技术在食品检测中的应用发展十分迅速,它的快速、准确、灵敏度高等优点受到众多研究人员的青睐。并且随着研究的深入和发展,PCR技术在食品检测中的应用领域也越来越广泛,如,多重PCR技术、实时荧光定量PCR技术、PCR-DGGE、食品有效成分检测、转基因食品鉴定等方面。     

PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展

对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法,     

多重PCR技术在植物生物学研究中的应用进展

多重PCR是近年来兴起的一项分子生物学技术,它是在一个反应体系中同时扩增多个核酸片段的PCR技术,具有高效快捷、成本低廉、适合大量样本分析与鉴定等优点.就多重PCR技术原理及其在植物种质、转基因植株、植物病害、抗病基因和植物育种检测中的应用现状进行了综述,并对其应用前景作了展望.     

数字PCR在食品快速检测中的应用进展

食品安全日益成为一个重要的公共卫生问题,食源性疾病、转基因食品和食品原料造假在发达国家和发展中国家都呈现出普遍和日益增长的趋势。传统检测方法费时费力,难以满足对食品快速检测的需求,应用新型数字PCR技术针对食源性病原体、转基因食品和原料造假的方法,开发出可以满足当下食品快速和精确监测的需要,并控制和预防人类食源性感染的最有效方法之一。为此,综述了近年来数字PCR技术在食品快速检测中的应用。     

食品中4种肉类成分多重PCR的快速鉴别方法

【目的】建立快速可靠的用于食品中4种肉类（猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉）成分快速鉴别的通用引物多重PCR（universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR）方法。【方法】使用DNeasy试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K法分别提取肉类中总DNA,通过比较提取效率和纯度,确定提取肉类中总DNA的方法;基于动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点,设计两组各5条长度不同的多重PCR引物,建立并优化多重PCR反应体系,通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4种肉类的快速鉴别;应用优化的多重PCR方法对80份市售食品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性。【结果】SDS-蛋白酶K法与DNeasy试剂盒提取法的DNA效率显著优于CTAB-蛋白酶K法;在优化的反应条件下,选择特异性高、序列较长的多重PCR引物可有效地进行食品中猪、牛、羊和鸡源性成分的快速鉴定,检测灵敏度达到皮克级DNA;对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结论】多重PCR方法精确稳定,可用于食品中多种动物源性成分的快速鉴别。     

数字PCR在食品快速检测中的应用进展

食品安全日益成为一个重要的公共卫生问题,食源性疾病、转基因食品和食品原料造假在发达国家和发展中国家都呈现出普遍和日益增长的趋势。传统检测方法费时费力,难以满足对食品快速检测的需求,应用新型数字PCR技术针对食源性病原体、转基因食品和原料造假的方法,开发出可以满足当下食品快速和精确监测的需要,并控制和预防人类食源性感染的最有效方法之一。为此,综述了近年来数字PCR技术在食品快速检测中的应用。     

食品中4种致病微生物的多重PCR快速检测技术研究

传统微生物检测方法耗时长、灵敏性差,难以满足食品安全快速检测要求,建立和完善食品中致病微生物快速检测技术具有重要的现实意义。本研究针对沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌,根据其特异基因设计出4对引物,通过对食品样品进行梯度离心处理、改良异硫氰酸胍法提取基因组DNA和多重PCR（multiplex　PCR）条件的优化,建立了这4种食源性致病微生物的多重PCR检测方法。通过人工污染检测和市场样品检测,同时进行传统方法验证,结果表明：该检测方法简单、快速、准确、灵敏度高,只需经过增茵4～8h其最低检出限可达1cfu／mL,具有较强的实际应用价值,可广泛应用于食品卫生检测和临床检验等领域。     

1分子生物学技术在食品微生物检测中的应用

食品安全检测要求及时、准确地检测出食品中的病原微生物。近年来,随着各种病原微生物检测方法的出现和发展,分子生物学检测技术因其特异性和灵敏性而受到广泛的关注。主要介绍了PCR技术、基因探针检测方法和基因芯片技术的原理。在食品微生物检测中的应用和发展方向及前景。     

聚合酶链式反应技术在食品源性分析中的应用

[目的]比较不同聚合酶链式反应(PCR)技术在食品源性分析中的应用,分析引物、荧光染料和探针的特点及其发展前景。[方法]介绍PCR、荧光定量PCR技术,比较该技术及荧光标记基团的特性,及其在食品源性成分鉴定方面的实际应用。[结果]通过完善DNA提取方法、优化反应体系、设计特异性引物或探针均能有效提高PCR检测的灵敏度及准确性。[结论]采用PCR、荧光定量PCR技术能有效地实现食品中源性成分鉴定,且方法具有高灵敏度、高特异性、高效率等优势,能满足实验室对食品中源性成分的检测分析。     

食品中4种致病微生物的多重PCR快速检测技术研究

传统微生物检测方法耗时长、灵敏性差,难以满足食品安全快速检测要求,建立和完善食品中致病微生物快速检测技术具有重要的现实意义.本研究针对沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌,根据其特异基因设计出4对引物,通过对食品样品进行梯度离心处理、改良异硫氰酸胍法提取基因组DNA和多重PCR(multiplex PCR)条件的优化,建立了这4种食源性致病微生物的多重PCR检测方法.通过人工污染检测和市场样品检测,同时进行传统方法验证,结果表明:该检测方法简单、快速、准确、灵敏度高,只需经过增菌4～8 h其最低检出限可达1 cfu/mL,具有较强的实际应用价值,可广泛应用于食品卫生检测和临床检验等领域.     

多重PCR技术在畜禽病原学检测中的应用

多重PCR技术是能同时扩增同一病原核酸的不同基因片段或多个病原不同核酸片段的技术,具有高效快捷、特异性高、敏感、成本低等优点,对于多种病原的鉴别诊断比单一的PCR更为快速。就多重PCR技术在细菌性病原混和感染、病毒性病原混和感染及其他病原混和感染检测中的应用进行了综述。     

PCR在食品微生物检测中的应用

PCR即聚合酶链式反应,现在已广泛应用于环境、化工、医药、食品等各个领域,本文主要叙述了PCR技术在食品微生物检测方面的应用,并详细阐述了PCR技术的基本原理。也提出了目前PCR技术在食品微生物检测中存在的问题。     

多重PCR技术在动物病原检测中的应用

多重PCR技术是近几年兴起的一项新技术,具有高效快捷、高度特异敏感、实验成本低等优点,能够同时扩增出多个核酸片段,具有普通PCR方法不可比拟的优越性。文章主要论述了多重PCR技术的影响因素、条件优化以及多重PCR技术在动物病毒病原体、细菌病原体、动物产品及寄生虫和微生物耐药性等方面的检测应用,指出当前应用PCR技术对动物疫病病原诊断中存在的问题,并提出了解决问题的方法。     

PCR技术在植物检疫性病害鉴定中的应用

简述了传统PCR、实时定量PCR以及多重PCR技术的基本原理及在植物检疫中的应用,分析了目前PCR技术存在的问题和应用前景。     

产毒真菌的分子生物学鉴定方法研究进展

真菌毒素污染日益受到关注,其中受污染的包括食品、谷物、饲料等。真菌毒素是丝状真菌产生的次级代谢产物,如黄曲霉毒素、单端孢霉烯族毒素、伏马菌素、棒曲霉素等。人或动物摄取后,会对身体造成严重的损害。对近年来应用在真菌种类检测和鉴定方面的常规PCR、多重PCR(Multiplex PCR)技术、PCR-DGGE技术、实时定量PCR(Real-time Quantitative PCR,RQ-PCR)技术、DNA微阵列(DNA microarray)技术、分子标记技术等分子生物学新技术和新方法进行了综述。     

多重PCR分析方法应用于转基因农作物的检测

以转基因大豆、水稻等样品为材料,采用多重PCR技术对转基因作物中常见的启动子、终止子、筛选标记基因和转入的目的基因等多个外源转基因元件进行检测,以期建立一套快速、准确、高效的转基因农作物筛查鉴定技术。通过多重扩增实验,建立了关于转基因大豆检测的大豆内源Lectin基因,花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因NOS终止子的三重PCR分析体系,及关于转基因水稻检测的CaMV35S、NPTII和HPT基因的三重PCR分析的技术体系。并以大豆、水稻等农作物样品为检测材料,采用单一PCR和多重PCR技术同时进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、高效、简便、准确等特点,在转基因成分的检测上具有非常重要的实际应用价值和潜力。     

多重PCR快速检测槟榔黄化植原体和槟榔隐症病毒1体系的建立

由槟榔黄化植原体(arecapalmyellowleafphytoplasma,AYLP)引起的黄化病和槟榔隐症病毒1(Areca palm velarivirus 1, APV1)引起的黄叶病毒病是危害槟榔树最严重的两种病害,对海南槟榔产业造成了巨大的经济损失,建立快速的检测技术对于两种病害的预警防控具有重要意义。利用多重PCR(Multiplex PCR)技术同时检测AYLP和APV1,即AYLP巢式PCR第一轮结束后,再使用一次多重PCR对两种病原同时进行扩增,最后进行电泳观察结果。结果显示,通过对多重PCR浓度体系和退火温度进行优化,在一个体系中成功扩增出AYLP和APV1,得到525和311 bp两条特异性大小条带。多重PCR检测与单一PCR检测结果完全一致,并且与单一PCR检测方法比较,多重PCR方法精简了操作步骤,提高了检测效率,显著降低了检测成本,为槟榔黄化病和黄叶病毒病的常规诊断提供了新方法。因此,该技术在AYLP和APV1常规检测中具有重要的应用价值。     

PCR及其改进技术在食品微生物检测中的应用

简述了PCR及其几种改进技术,并对其在食品微生物检测中的应用进行综述。     

多重PCR同时检测鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG方法的建立和临床应用

通过建立针对鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG的多重PCR鉴别诊断技术,并进行了特异性、敏感性试验和临床应用。结果表明：设计的5对引物对同一样品中的RNA（AIV、NDV、IBV）和DNA（ILTV、MG）进行多重PCR扩增,均同时得到5条片段大小与设计相符的特异性片段,即268bp（AIV）、321bp（NDV）、457bp（IBV）、662bp（ILTV）和732bp（MG）。说明该多重PCR技术具有较强特异性和较高敏感性,能检测出1pgAIV、1pgNDV、10pg IBV的RNA和1pg ILTV、10pgMG的DNA。对自然感染鸡临床样品检测的结果则证明,该技术在临床诊断方面具有广阔的应用前景。     

农作物种子转基因成分实时荧光PCR盲检技术要点与应用

本文综述了TaqMan探针技术运用于转基因检测方面的原理,并阐述了实时荧光PCR方法定性检测农作物转基因成分的技术流程和操作要点,介绍了多重荧光PCR技术需要考虑的因素及其在转基因成分检测方面的应用。