东方蜜蜂大肚病致病菌的分离鉴定及乳酸菌对其抑菌效果

蜜蜂大肚病会引起蜂群的大面积死亡,造成巨大损失,通过无菌操作采集患大肚病的东方蜜蜂成年工蜂肠道,LB培养基分离培养致病菌,采用形态分析、生理生化检测、16S rDNA基因序列分析和人工攻毒试验对致病菌进行鉴定;应用滤纸片扩散法检测致病菌耐药性;采用琼脂孔扩散法研究从健康东方蜜蜂成年工蜂肠道中自主分离的瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌对致病菌的抑制作用。结果显示,从患大肚病的东方蜜蜂成年工蜂肠道中共分离得到12株菌株,均为革兰氏阴性杆菌,根据形态、生理生化和16S rDNA序列分析结果鉴定12株菌株均为黄杆菌;12株黄杆菌对氨苄青霉素、链霉素、万古霉素、卡那霉素、庆大霉素、新生霉素耐药,对阿莫西林敏感;饲喂黄杆菌KMD1和LPD2的东方蜜蜂成年工蜂腹部有明显膨胀,在饲喂6 d后对照组蜜蜂死亡率为25%,饲喂黄杆菌KMD1组蜜蜂死亡率为81%,饲喂黄杆菌LPD2组蜜蜂死亡率为73%;瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌均能显著抑制黄杆菌KMD1和LPD2增殖。鉴定出东方蜜蜂大肚病的致病菌为黄杆菌,东方蜜蜂肠道源乳酸菌对黄杆菌具有显著抑菌效果,试验结果对采用微生物制剂防治东方蜜蜂大肚病奠定了理论基础。     

鹅鸭疫里默氏杆菌RC株的分离鉴定及药敏试验

［目的］为防治鸭疫里默氏杆菌所致鹅群传染病提供理论依据。［方法］对染病鹅群进行流行病学调查,从病鹅中分离鉴定致病菌并通过药敏试验研究其防治方法。［结果］待检菌的纯培养物涂片经革兰氏染色为阴性小杆状,瑞氏染色后呈两端浓染的细小球杆菌。该菌在半固体培养基上沿穿刺线生长,因而被鉴定为鸭疫里默氏杆菌。动物回归试验表明：用病鹅分离菌接种雏鹅、雏鸭后,发病雏鹅和雏鸭的临床、解剖症状与自然病例一致,且能回收到鸭疫里默氏杆菌。该菌对庆大霉素、卡那霉素和壮观霉素敏感,对林可霉素、环丙沙星等中敏,对链霉素、青霉素、磺胺嘧啶和四环素不敏感。［结论］该致病菌为鸭疫里默氏杆菌,其所致鹅群疫病可用庆大霉素、卡那霉素和壮观霉素进行防治。     

牛蛙米尔伊丽莎白菌的分离、鉴定与特性分析

从广州番禺某养殖场患“歪头病”的牛蛙(Lithobates catesbeiana)体内脑组织中分离到1株致病菌MEYL-1. 对分离菌株采用细胞形态学、生化特性分析结合16S rDNA 和gyrB基因分子分析,判定所分离菌为米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingia miricola）. 采用菌株MEYL-1人工回归感染,显示健康牛蛙注射1×10^8 CFU·mL-1的分离菌株可复制自然发病相似的“歪头”、“白内障”等症状,并且患病蛙中再分离到的致病菌与感染菌株相同. 综合理化特性分析、基因分子鉴定、回归感染实验可基本判定所患歪头病牛蛙病原为MEYL-1（米尔伊丽莎白菌）. 对19种常用药物敏感分析发现分离株MEYL-1对其中4种药物敏感,7种药物中度敏感,对另外8种药物耐受. 本研究通过对“歪头病”的牛蛙菌株的分离鉴定和药物敏感试验,明确了米尔伊丽莎白菌是引起其患病的病原,研究结果将为米尔伊丽莎白菌病的致病机制研究及牛蛙歪头病的防治提供参考依据.     

大鲵赤皮病病原分离鉴定及防治试验

对人工养殖大鲵发生的“赤皮病”病原菌进行了分离培养、人工感染试验,鉴定出该病的致病菌为Ⅰ－型荧光假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）。发病大鲵表现症状为全身肿胀,呈充血发炎的红斑块和化脓性溃疡。菌株对链霉素、氯霉素、氟哌酸、庆大霉素、“鱼病康－Ｉ”均高度敏感。伤口涂抹氯霉素软膏和肌肉注射硫酸庆大霉素治疗发病大鲵,每天剂量为１５ｍｇ·ｋｇ－１,７ｄ后完全治愈,治愈率为９３．４％．养殖中饵料加入“鱼病康－Ｉ”,可防治该病的发生。     

常温高效纤维素分解菌的筛选

从长期堆放稻草的土壤中分离出12株常温纤维素分解菌。采用Hutchison液体培养基,对12株纤维素分解菌进行发酵产酶试验。结果表明,通过纤维素酶活力测定,最终筛选出对纤维素分解能力较强的霉菌菌株NM5,其C1酶活力、羧甲基纤维素酶活力、滤纸酶活力分别为0.0170、0.7174、1.3435IU·mL-1。根据菌落特征和形态特征,将NM5鉴定为木霉菌属(Trichoderma)。     

利用废弃毛发生产生物农药苏云金杆菌的研究

采用鸡毛水解液和头发水解液代替常规黄豆粉培养基中的氮源进行发酵培养苏云金杆菌,在发酵过程中测定总菌数.芽孢数和pH值等指标,并与常规黄豆粉培养基进行了比较.结果表明,用鸡毛水解液和头发水解液培养的B.t 546在48 h总菌数达到5.0×108个·mL-1左右,芽孢数达到1.0×108～2.0×108个·mL-1左右,效果略低于常规黄豆粉培养基(48 h总菌数4.8×109个·mL-1,芽孢数2.6×109个·mL-1),但可以达到工业生产水平(芽孢108个·mL-1);而且镜检结果表明.毛发水解液培养的B.t 546在18 h左右就出现芽孢和伴孢晶体,比常规黄豆粉培养基出现时间要早6 h左右.以棉铃虫为供试虫进行了室内毒力测定,利用毛发水解液生产的苏云金芽孢杆菌比常规黄豆粉培养基生产的苏云金芽孢杆菌杀虫效果略高.因此,利用毛发等废弃物生产生物农药以降低其生产成本是一个值得推广的废物资源化方法.     

降解秸秆纤维素丝状真菌的分离鉴定

经过初筛和复筛从腐烂的秸秆中分离出的8株产纤维素酶的真菌中获得1株高效降解秸秆纤维素的丝状真菌g76,经菌株形态分析和18S rRNA基因序列分析,确定该菌株为Gibberella fujikuroi,以天然水稻秸秆为惟一碳源,37℃摇瓶培养120 h.所得粗酶液作用于CMC-Na、水稻秸秆、滤纸、木聚糖等不同底物,其酶活可分别达1.722 67 IU·mL-1(Cx酶)、0.368 13 IU·mL-1(Cx酶)、0.344 24 IU·mL-1(FPase)、0.531 78 IU·mL-1(半纤维素酶).     

人参锈腐病拮抗细菌HNO1发酵条件优化

通过单因素试验和正交试验,对人参锈腐病拮抗细菌HN01进行摇床发酵条件和培养基配方研究.结果表明:该菌最适发酵条件为温度30℃,初始pH值7.0,250mL三角瓶装液50mL,接菌量10％,摇床转速150r· min-1,发酵时间36h.最佳产菌培养基组分为葡萄糖15.0g·L-1,牛肉膏8g·L-1,NaCl 5g·L-1,(NH4)2SO41 mg· L-1,K2HPO4 4g·L-1.抑菌培养基组分为葡萄糖10g·L-1,牛肉膏8g· L-1,NaCl3g· L-1,(NH4)2SO4 2mg· L-1,K2HPO4 4g· L-1     

广西黑山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定

从广西某养殖户发病黑山羊的脓肿脓汁中分离获得1株无荚膜、不形成芽孢的革兰氏阳性球杆菌,该菌在含血液或血清的琼脂培养基上,可生长成直径1 mm左右、干燥、中央凸起、不透明呈灰白色、边缘不整齐、伴有β溶血环的菌落,而在普通培养基上生长不良,在麦康凯琼脂培养基上不能生长。经生化试验、PCR鉴定及测序分析,证实该菌为伪结核棒状杆菌,动物试验证实该菌为致病菌。最后根据药敏试验结果选择敏感抗生素对发病黑山羊进行治疗,并提出综合防控措施。     

樱桃根腐病病原鉴定及其生物学特性研究

为了有效的防治樱桃树根腐病,采用组织分离法、单孢分离法、形态学特征和柯赫氏法则对樱桃根腐病的病原进行了分离纯化和鉴定;并采用菌落直径生长速率法和悬滴法测定了致病菌的培养条件及其对6种杀菌剂的敏感性。研究结果表明引起樱桃根腐病的病原为腹状镰孢菌(Fusarium ventricosa AppelWollenweber);病原菌在PSA培养基上生长最好,25℃和偏酸性条件有益于孢子的萌发,而光照对孢子的萌发没有影响。供试的6种杀菌剂中,樱桃根腐病菌对多菌灵最敏感,EC50为0.431 4μg·mL-1,其次是苯醚甲环唑和扑海因,EC50分别为34.999 3μg·mL-1和85.092 9μg·mL-1。研究结果对指导樱桃根腐病的防治具有一定的意义。     

蜜蜂患白垩病虫体内一株球囊菌拮抗细菌的分离与鉴定

【目的】寻找抑制蜜蜂球囊菌的拮抗菌,用于白垩病的生物防治。【方法】利用细菌纯化技术从患白垩病的蜜蜂幼虫体内分离纯化了一株对蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)有抑制作用的细菌,并结合形态学、革兰氏染色以及16S rDNA序列分析技术进行鉴定,同时通过蜜蜂体内、体外接种试验研究其对蜜蜂球囊菌的抑制作用。【结果】该细菌被初步鉴定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),它在培养基中能够完全抑制蜜蜂球囊菌的生长,但其发酵液对蜜蜂球囊菌的生长没有影响。将含菌饲料喂蜜蜂幼虫,蜜蜂幼虫的死亡率和生长发育没有受到影响,说明该细菌对蜜蜂幼虫没有致病性。蜜蜂幼虫体内同时接种细菌和球囊菌孢子,发现细菌对球囊菌在蜜蜂体内的萌发和初期菌丝的生长没有影响,蜜蜂依然能够患病,但生长后期该细菌能够降解球囊菌菌丝,对球囊菌子代孢子的产生表现出一定的抑制作用。【结论】 该研究结果为蜜蜂白垩病的生物防治提供了理论依据。     

棉花枯萎病致病菌定量检测的研究

选择镰刀菌用驹田或植选1号培养基,在米饭培养基上划分镰刀菌种群,用试管法或盆栽作致病性测定,以检测土壤中棉花枯萎病致病菌。试验结果表明,该致病菌主要在奶油色、淡青莲及深紫色菌群中,分别占21.2%,11.5%,4.5%。陕西杨陵(1985)棉枯萎病病圃(发病株率85%以上),播种前10公分土层内每克干土含菌量为2236～2576个菌落。使用这一定量检测程序比单独使用选择性培养基提高了精确度,方法简便易行。     

九种动物性食品致病菌通用前增菌方法的研究

为探索快速多重检测食源性致病菌的方法,对污染动物性食品的大肠埃希氏菌O157:H7(EnterohemorrhagicEscherichiacoli O157:H7),副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus),创伤弧菌(Vibrio vulnificus),伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi),金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica),单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes),宋氏志贺氏菌(Shigella sonnei),荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)等九种致病菌进行了通用前增菌方法的研究。研究了培养基、培养温度和培养时间对九种菌前增菌效果的影响,结果表明:LB肉汤培养基,36℃培养18h,九种致病菌的增菌效果最好且数量级均衡一致,均达到108cfu·mL-1。     

大鲵赤皮病病原分离鉴定及防治试验

对人工养殖大鲵发生的“赤皮病”病原菌进行了分离培养，人工感染试验，鉴定出该病的致病菌为１－型荧光假单胞菌，发病大鲵表现症状为全身肿胀，呈充血发炎的红斑块和化脓性溃疡。菌株对链霉霉，氯霉素，氟哌酸，庆大霉素，“鱼病康－Ｉ”均高度敏感。治愈率为９３．４％，养殖中铒料加入“鱼病康－Ｉ”，可防治该病的发生。     

MLF植物乳杆菌R23培养基优化

根据乳酸菌的营养需求,采用均匀设计优选具有苹果酸乳酸发酵能力植物乳杆菌R23生长的培养基组分,并对培养基进行正交优化,筛选出无Mn2+及含Mn2+培养基LH16、LH18组合.采用LH16、LH18培养基培养植物乳杆菌R23,在25℃恒温培养24 h,菌量分别达到3.40×109 cfu·mL-1和6.67×109 cfu·mL-1.     

鸡疑似克雷伯氏杆菌病的诊断与药敏试验

[目的]诊断疑似患有克雷伯氏杆菌病的发病鸡群。[方法]通过采取病鸡肝脏和脑组织,接种于胰蛋白胨琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基、兔血琼脂培养基,培养出疑似克雷伯氏杆菌菌落,革兰氏染色发现该菌属于革兰氏阴性菌,将菌落进行溶血试验和生化试验。[结果]初步判断该菌为克雷伯氏杆菌。药敏试验中发现该菌对庆大霉素、妥布霉素、恩诺沙星、阿米卡星表现较敏感;对阿莫西林、卡那霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、多黏菌素、四环素有极强的耐药性;对于红霉素、新霉素的敏感性介于两者之间。[结论]药敏试验为治疗该菌提供了大致方向,同时提醒抗生素类药物切不可滥用,以免产生耐药性。     

大蒜素对蜜蜂球囊菌的抑菌和杀菌活性研究

本研究旨在探明大蒜素对蜜蜂白垩病的病原菌蜜蜂球囊菌在体外的抑菌和杀菌活性。试验以蜜蜂球囊菌为受试菌,采用琼脂倍比稀释法测定最小抑菌浓度(MIC),采用琼脂培养基法测定最小杀菌浓度(MBC),测试大蒜素对蜜蜂球囊菌的体外抑菌和杀菌活性。结果表明,大蒜素对蜜蜂球囊菌的MIC为12.0mg/mL,MBC为24.0mg/mL。证实大蒜素在体外对蜜蜂球囊菌具有较好的抑菌和杀菌作用。     

地衣芽孢杆菌L3发酵培养基的响应面法优化

地衣芽孢杆菌L3对镰刀菌、核盘茵等显示出强的抑茵活性,对其发酵培养基进行了优化研究.在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman设计确定了碳源、豆饼粉和K2PO4等显著影响芽孢形成和茵体数量的因素.通过最陡爬坡路径试验、综合中心组合设计和响应面分析法得出最优培养基组成为豆饼粉8.0 g·L-1、K2HPO4 2.00 g·L-1,碳源32.2 g·L-1,MgSO4 0.5 g·L-1,酵母膏2.5 g·L-1,地衣芽孢杆菌L3的活菌体数目可以达到100.20×108CFU·mL-1,比初始培养基提高近1倍.     

茶卷叶蛾寄生真菌的分离、鉴定及毒力测定

从茶园中自然羅病而死的茶卷叶蛾(Homona coffearia)幼虫僵虫上分离纯化出1株病原真菌,经核糖体DNA(rDNA)转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)鉴定为球孢白僵菌(Beauveria bassiana),并命名为JYBb201菌株。对该菌株在PDA、PPDA和SDAY3种培养基上的生长速度和产孢能力进行测定,发现其在PDA上平均生长速度最快,菌丝的日均增长量达4.30 mm。但在SDAY培养基上培养16 d的产孢量比其他两种培养基大,达4.30×107孢子.mL-1。对茶卷叶蛾幼虫的毒力测定结果显示,该菌具有较高的杀虫活性,以2.16×108孢子.mL-1和4.32×107孢子.mL-1的菌液处理,9 d后其校正死亡率均达到94.74%,表明JYBb201菌株是1株对茶卷叶蛾幼虫具有潜在防治作用的病原真菌菌株。     

慢性蜜蜂麻痹病的防治

慢性蜜蜂麻痹病又叫瘫痪病、黑蜂病,是危害成年蜂的主要传染病,在我国春季和秋季大量死亡的成年蜂中,有较大部分是由慢性蜜蜂麻痹病引起的。1.主要症状一种为“大肚型”,病蜂腹部膨大,蜜囊内充满液体,不能飞翔,在地面缓慢爬行或集中在巢脾框梁、边缘和蜂箱底部,病蜂反应迟钝,行动缓慢。另一种为“黑蜂型”,病蜂身体瘦小,头部和腹部末端油光发亮。由于病蜂常常受到健康蜂的驱逐和