自然发酵东北酸菜中乳杆菌的分离与鉴定

文章从15份自然发酵的东北酸菜样品中分离乳杆菌,并对其种属进行鉴定。通过形态学观察及H2O2酶、糖发酵等生理生化试验对所分离菌株进行初步鉴定,再利用16S rDNA序列同源性分析的方法对所分离菌株进行16S rDNA基因扩增与测序,并将测序结果与GenBank中该属内菌株的16S rDNA基因序列进行同源性比较分析。结果表明,从15份自然发酵的东北酸菜中分离获得21株菌,其中6株为植物乳杆菌,8株为短乳杆菌,6株为罗伊氏乳杆菌,1株为米酒乳杆菌。本研究为从多角度开发利用东北酸菜中的微生物资源提供依据。     

乳杆菌的分离及鉴定

从健康学龄儿童的新鲜粪便样品中分离得到6株乳杆菌,并对其进行属和种的鉴定。首先通过形态学观察及H2O2酶、糖发酵等生理生化试验对所分得菌株进行初步鉴定,然后利用16S rDNA序列同源性分析方法,对所分得菌株进行16S rDNA基因扩增与测序,测序结果与GenBank中该属内菌株的16S rDNA基因序列进行同源性分析,从而准确鉴定所分得菌株,并申请各菌株的GenBank登录号。经鉴定,其中1株为卷曲乳杆菌,2株为植物乳杆菌,1株为发酵乳杆菌,1株为黏液乳杆菌,1株为唾液乳杆菌。     

致蜜蜂大肚病黄杆菌的分离与鉴定

为更好地预防和控制蜜蜂大肚病的发生和蔓延,从患“大肚病”的蜜蜂中分离出致病菌,通过细菌镜检和培养,结果表明:此致病菌为G-球杆菌,不溶血,在普通肉汤培养基上呈乳白色圆形菌落,在SS培养基上不生长;该菌接触酶试验为阳性,不产生H2S,不能还原硝酸盐;经血清鉴定该菌为黄杆菌属.进一步药敏纸片试验分析表明,庆大霉素、硫酸阿米卡星对该菌的半数抑菌量(IC50)分别为8.73和36.92IU·mL-1,该菌对菌必治、环丙沙星高度敏感.用20~30IU·mL-1剂量的庆大霉素可有效地预防“大肚病”的发生和蔓延.     

传统肉制品中一株植物乳杆菌的分离筛选及鉴定

从传统发酵酸肉中分离出一株乳酸杆菌(XC10001),利用API鉴定系统、16S rDNA同源性分析以及recA基因多重PCR特异性扩增3个方法对该菌株进行鉴定,API鉴定结果和16S rDNA同源性分析结果都表明该菌株同植物乳杆菌的同源性最高;多重PCR扩增后发现一条约300 bp的recA基因特异扩增片段,对该片段测序后发现同植物乳杆菌ATCC14917序列完全相同,因此将该菌确定为植物乳杆菌.菌株XC10001的16S rDNA序列的国际基因序列注册号为HM446157.     

3株乳杆菌表面疏水性及凝聚性研究

[目的]探讨干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌和植物乳杆菌的表面疏水性以及凝聚性。[方法]采用MATH法测定3株乳杆菌的表面疏水率,自凝聚试验测定菌株的自凝聚率,共凝聚试验测定3株乳杆菌与致病菌的共凝聚率。[结果]3个菌株的涡旋时间与表面疏水性呈负相关,静置时间与自凝聚作用呈正相关,且凝聚作用与致病菌的粘附和菌体自身特性有关。[结论]3株乳杆菌在肠道中均表现出良好的凝聚能力。     

荣昌猪肠道乳酸菌筛选及鉴定

通过稀释涂布法,在含有碳酸钙的MRS平板上选取有明显透明圈、革兰氏染色为阳性、接触酶实验为阴性的菌株,反复划线纯化培养并保存,然后经16SrRNA序列同源性分析鉴定菌株.结果从猪大肠中分离出5株乳酸菌,经鉴定D8为干酪乳杆菌、D12为鸟肠球菌同属菌株、D14为约翰逊氏乳杆菌、D15为唾液乳杆菌、D21为植物乳杆菌;从小肠中分离出4株乳酸菌,经鉴定XF为嗜酸乳酸菌、XH为乳酸乳球菌、XI为约翰逊氏乳杆菌、XQ为能动乳杆菌.表明荣昌猪肠道内含有丰富的乳酸菌群,乳杆菌是荣昌猪肠道内乳酸菌中的优势菌.     

驴源罗伊氏乳杆菌的安全性评价

对驴肠道内分离鉴定的罗伊氏乳杆菌L2-2株安全性进行评价,以确定其能否作为益生菌菌株并用于后续的产品研发。通过小鼠大剂量L2-2株经口毒性试验,记录小鼠增重和采食量,检测脏器指数、血液学指标、细菌易位情况。所有试验小鼠无异常表现,体重、采食量均正常,灌胃罗伊氏乳杆菌可增加小鼠胸腺指数和血清球蛋白含量,降低血脂含量,无细菌易位现象。本研究初步证明罗伊氏乳杆菌L2-2对小鼠安全、无毒副作用,且能增强免疫功能。     

高效降胆固醇植物乳杆菌的筛选及其益生潜能初探

为筛选出高效降胆固醇乳杆菌,挖掘其潜在益生功能,从民间自制泡菜样品中分离乳杆菌,采用邻苯二甲醛法筛选高效降胆固醇菌株,利用16S rDNA进行分子生物学鉴定,并通过耐酸、耐胆盐及抑菌性实验,测定菌株的益生潜能。结果表明:1)从分离出的11株乳杆菌中筛选出PL2、PL5、PL16和PL194等4株高效降解胆固醇菌株,其体外胆固醇降解率分别为48.22%、51.67%、48.43%和48.56%;2)结合菌落特征、部分生理生化试验及16S rDNA基因序列比对鉴定4株乳酸菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);3)该4株乳酸菌均可在pH2.0的环境下生存3h,菌株PL2和PL5可以在0.3%的胆盐浓度下存活3h;4)菌株PL5对致病性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和福氏志贺氏菌均有显著的抑制作用。总之,植物乳杆菌PL5是具有开发前景的高效降胆固醇益生菌。     

散养茶花鸡源乳酸菌分离鉴定及益生特性研究

【目的】从国家级畜禽资源保护品种茶花鸡中分离乳酸菌,研究其益生特性,以期为禽用益生菌制剂研发奠定基础。【方法】采集散养茶花鸡新鲜粪便,使用MRS培养基分离乳酸菌,采用生理生化试验和16S r DNA基因序列分析法鉴定,并研究其胃肠道耐受性、抑菌活性、抗生素敏感性和肠上皮细胞黏附能力等益生特性。【结果】分离得到CHF4-1、CHF6-2、CHF7-2和CHF10-2共4株菌株。生理生化鉴定和16S rDNA序列分析结果表明:CHF4-1、CHF6-2、CHF7-2和CHF10-2分别为唾液乳杆菌、加氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和约氏乳杆菌;与参考菌株鼠李糖乳杆菌GG相比,CHF6-2和CHF10-2具有较强的胃肠道耐受性和抗菌活性;加氏乳杆菌CHF6-2除对头孢噻肟中度敏感之外,对其余9种抗生素均敏感,且其细胞黏附水平为(13.07±0.22)个/细胞,黏附能力最强。【结论】从散养茶花鸡粪便中分离得到唾液乳杆菌、加氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和约氏乳杆菌4株乳酸菌,其中加氏乳杆菌CHF6-2具有显著胃肠道耐受性、抑菌活性、抗生素敏感性和肠上皮细胞黏附能力等益生特性,可作为微生态制剂候选菌株进一步开展深层次研究。     

牛蛙腐皮病病原菌分离鉴定及药敏试验

[目的]明确浙江嘉善某养殖场引起牛蛙腐皮病的致病菌,并探究益生菌与牛蛙腐皮病病原菌间的相互作用,为今后利用益生菌防控牛蛙腐皮病的发生提供技术支持.[方法]通过常规的细菌分离纯化、人工回归感染试验、生理生化特性鉴定及16S rDNA序列扩增,确定引起牛蛙腐皮病的致病菌;根据药敏试验筛选抗菌药物,并从生物防控的角度探究枯草芽孢杆菌等益生菌与致病菌间的相互作用.[结果]从患病牛蛙的内脏及体表溃烂处共分离获得9株疑似致病菌株,经人工回归感染试验确定菌株NWt-2为引起牛蛙腐皮病的致病菌;综合其形态学特征、生理生化特性及分子生物学鉴定结果,可确定菌株NWt-2为布韦不动杆菌(Acinetobacter bouvetii).菌株NWt-2对丁胺卡那、庆大霉素、哌拉西林、头孢氨苄和硫酸阿米卡星等5种抗菌药物高度敏感,对青霉素、复方新诺明、诺氟沙星、氟苯尼考、复方磺胺嘧啶、盐酸林可霉素和盐酸大观林可霉素等7种抗菌药物不敏感(耐药).浓度为105 CFU/mL的枯草芽孢杆菌和紫色杆菌对菌株NWt-2有一定的抑制作用,抑菌圈直径分别为1.45±0.46和0.97±0.38 mm.[结论]布韦不动杆菌是引起浙江嘉善养殖牛蛙发生腐皮病的致病菌,可选用丁胺卡那、庆大霉素、哌拉西林、头孢氨苄和硫酸阿米卡星等抗菌药物进行防治.鉴于枯草芽孢杆菌对布韦不动杆菌具有一定的抑制效果,在当前病原菌对抗菌药物普遍存在耐药性的情况下,选择枯草芽孢杆菌等益生菌进行生物防控具有可行性.     

阿鲁科尔沁牧区牛乳中乳酸菌生物学特性的研究——第一报:乳杆菌属的鉴定

本项研究从科尔沁草原的阿鲁科尔沁牧区南北 4个苏木 16个牧户中采集 43个乳样。从 43个乳样中分离到 6 4株乳酸菌 ,对其中的 47株进行了鉴定 ,结果分离到 2 9株乳杆菌属的细菌。对其中 10株进行了种的鉴定 ,结果 4株为犊牛乳杆菌 (L actobacillus vitulinus)、 2株德氏乳杆菌 (L .delbrueckii )、 2株植物乳杆菌 (L .plantarum )、1株瘤胃乳杆菌 (L .ruminis)、1株清酒乳杆菌 (L .sake )共为 5个种。本项研究发现 ,该牧区自然发酵酸乳中主要菌株是乳杆菌属细菌和肠球菌属细菌的乳酸菌菌株 ,这些菌均属于中温发酵性菌株 ,经对其生物学特性的鉴定基本符合乳杆菌属、种的鉴定标准。     

盐泽地分离的耐盐性芽孢杆菌菌株的分子鉴定

采用生理生化检测、Rep-PCR指纹图谱分析、16S rDNA及gyrB基因序列分析技术,对在青海尕海盐泽地植物根际土壤中分离得到的几株菌落形态较为特殊的芽孢杆菌菌株进行鉴定。生理生化分析结果表明:分离的芽孢杆菌菌株革兰氏染色为阳性。Rep-PCR指纹图谱表明,不同分离菌株间的指纹图谱完全相同,为同种芽孢杆菌。16S rDNA及gyrB基因序列鉴定结果显示,菌株与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的亲缘关系最近。综合几种鉴定结果,最终将分离自盐泽地的芽孢杆菌菌株鉴定为B.licheniformis。     

阿鲁科尔沁牧区牛乳中乳酸菌生物学特性的研究

本项研究从科尔沁草原的阿鲁科尔沁牧区南北4个苏木16个牧户中采集43个乳样。从43个乳样中分离到64株乳酸菌，对其中的47株进行了鉴定，结果分离到29株乳杆菌属的细菌。对其中10株进行了种的鉴定，结果4株为犊牛乳杆菌(Lactobacillusvitulinus)、2株德氏乳杆菌(L.delbrueckii)、2株植物乳杆菌(L.plantarum)、1株瘤胃乳杆菌(L.ruminis)、1株清酒乳杆菌(L.sake)共为5个种。 本项研究发现，该牧区自然发酵酸乳中主要菌株是乳杆菌属细菌和肠球菌属细菌的乳酸菌菌株，这些菌均属于中温发酵性菌株，经对其生物学特性的鉴定基本符合乳杆菌属、种的鉴定标准。     

一株芽孢杆菌的分离、鉴定及其抗菌效果研究

从健康牙鲆肠道内分离到一株芽孢杆菌(H-1)和鳗弧菌W-1株进行拮抗实验,表明该菌对鳗弧菌具有较强的拮抗作用(抑菌直径33.05 mm)。应用形态学、生理生化及16S rDNA序列分析方法对该菌进行了综合鉴定,结果显示,菌株H-1与枯草芽孢杆菌标准菌株同源性高达98%,故将其确定为Bacillus subtilis。     

棉花黄萎病拮抗菌株DS45-2的分离鉴定

从土样中筛选对棉花黄萎病致病菌大丽轮枝菌(Verticillium dahliaeKleb)具有拮抗作用的芽孢杆菌菌株,初筛得到具有拮抗作用的菌株68株,复筛选出1株拮抗活性较高的菌株DS45-2,通过形态特征观察,生理生化试验及16S rDNA序列分析对此菌株进行鉴定,初步鉴定此菌株属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),与相应标准菌株NBRC 15535的16S rDNA序列相似度达99.50%。     

新疆冷水鱼肠道中耐低温乳杆菌的分离筛选及其遗传差异分析

乳杆菌能够维持肠道内正常菌群的平衡,而来源于动物肠道的乳杆菌更容易在肠道内生长繁殖,所以分离冷水鱼肠道内的低温乳杆菌具有重要的应用价值。利用MRS、M17、改良番茄和乳杆菌选择性琼脂培养基4种培养基,从6种不同的冷水鱼肠道以及粘膜中分离筛选出耐低温的乳杆菌20株。通过一些生理生化试验初步确定疑似乳杆菌菌株24株,并测定其最适生长温度,其中有7株为嗜冷菌,17株为耐冷菌。根据16Sr RNA基因序列构建系统发育树可知,20株菌隶属Lactobacillius spp.,其他4株分别隶属Clostridium spp.和Pseudomoncs spp.。     

一株猪源芽孢杆菌益生菌的筛选与鉴定

以大肠杆菌(Escherichia coli)为病源指示菌,从养猪场健康成年猪粪便中分离、筛选出8株对其有抑菌活性的芽孢杆菌。经培养特征、形态观察、生理生化试验以及16S rDNA序列分析,通过对照《常见细菌鉴定手册》确定L-7菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),16S rDNA序列相似度为99.58%,是一株比较理想的潜在益生菌。     

抗猪传染性胃肠炎病毒益生菌的分离、筛选及鉴定

试验从健康仔猪肠道内容物内分离筛选具有抗猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis coronavirus,TGEV)活性的益生菌。从健康仔猪肠道内容物内分离获得69株乳酸菌,通过致细胞病变(CPE)作用初步筛选出18株具有影响TGEV致细胞病变的乳酸菌,在体外试管平台上,将获得的18株乳杆菌分别与定量的TGEV感作后取上清,将病毒上清感染ST细胞,运用MTT比色法测定候选菌株对TGEV感染ST细胞的抑制作用。结果表明,18株中的2株益生菌对TGEV感染ST细胞有显著的抑制作用,其他16株对TGEV感染ST细胞的抑制作用不显著。对2株具有显著作用的益生菌进行生化鉴定及16SrRNA鉴定,最终确定为罗伊氏乳杆菌和发酵乳杆菌。     

传统酸面团中优势乳酸菌的分离及性能研究

以自然发酵的传统酸面团为研究对象,对其中的优势乳酸菌进行分离及鉴定,并评价其产酸性能。结果表明:共筛选到7株乳酸菌,经形态学及16S rDNA序列分析鉴定为面包乳杆菌1株、短乳杆菌1株、植物乳杆菌3株、白面粉乳杆菌2株;供试乳酸菌的产酸能力具有菌种及菌株特异性,其中植物乳杆菌L2-2产酸能力最强,37℃发酵24 h发酵液pH值可达3.81。     

开菲尔粒中醋酸菌的分离鉴定

从开菲尔粒中分离出2株醋酸菌FJAT-13764和FJAT-13780.利用形态学观察、生理生化和16S rDNA方法对菌株进行分类鉴定.菌株FJAT-13764和FJAT-13780的菌体形态均为圆端直杆菌,单个或成对,无芽孢,其生理生化特征与醋杆菌属Acetobacter基本一致.经16S rDNA基因序列同源性比较和系统发育分析,鉴定菌株FJAT-13764为Acetobacter orientalis(东方醋酸菌),菌株FJAT-13780为Acetobacter syzygii.