利用转录组分析鹅等级前卵泡中脑源性神经生长因子及其受体基因的差异表达

为研究脑源性神经生长因子(brain‐derived neurotrophic factor,BDNF)及其高亲合力受体—酪氨酸蛋白激酶受体基因B(tropomyosin receptor kinase B,Trk B)在鹅等级前卵泡中的表达情况,采用高通量测序技术对鹅等级前卵泡进行转录组测序分析,并采用荧光定量PCR进行结果验证。通过FPKM值计算分析,BDNF及其受体基因在鹅等级前卵泡中均有表达。且随着卵泡的发育,BDNF及其受体基因的表达呈现先增加后降低的趋势,在小白卵泡中的表达量达到最高值,在中白卵泡中的表达量最低。荧光定量PCR结果与转录组测序结果基本相同。证实了在鹅等级前卵泡中BDNF及其受体Trk B对卵泡的发育有促进作用。探明BDNF及其受体Trk B在鹅等级前卵泡中对卵泡的发育调控提供参考数据。     

利用转录组分析鹅等级前卵泡中脑源性神经生长因子及其受体基因的差异表达

为研究脑源性神经生长因子(brain‐derived neurotrophic factor,BDNF)及其高亲合力受体—酪氨酸蛋白激酶受体基因B(tropomyosin receptor kinase B,Trk B)在鹅等级前卵泡中的表达情况,采用高通量测序技术对鹅等级前卵泡进行转录组测序分析,并采用荧光定量PCR进行结果验证。通过FPKM值计算分析,BDNF及其受体基因在鹅等级前卵泡中均有表达。且随着卵泡的发育,BDNF及其受体基因的表达呈现先增加后降低的趋势,在小白卵泡中的表达量达到最高值,在中白卵泡中的表达量最低。荧光定量PCR结果与转录组测序结果基本相同。证实了在鹅等级前卵泡中BDNF及其受体Trk B对卵泡的发育有促进作用。探明BDNF及其受体Trk B在鹅等级前卵泡中对卵泡的发育调控提供参考数据。     

利用转录组分析鹅等级前卵泡中脑源性神经营养因子及其受体基因的差异表达

为研究脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其高亲合力受体酪氨酸蛋白激酶受体基因B(Tropomyosin receptor kinase B,Trk B)在鹅等级前卵泡中的表达情况,采用高通量测序技术对鹅等级前卵泡进行转录组测序分析,并采用荧光定量PCR进行结果验证。通过FPKM值计算分析,BDNF及其受体基因在鹅等级前卵泡中均有表达,且随着卵泡的发育,BDNF及其受体基因的表达呈先增加后降低的趋势,在小白卵泡中的表达量达到最高值,在中白卵泡中的表达量最低。荧光定量PCR结果与转录组测序结果基本相同。证实了在鹅等级前卵泡中BDNF及其受体Trk B对卵泡的发育有促进作用。     

PDGF及其受体mRNA在鹅不同等级前卵泡中的表达差异

为探讨血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)及其受体(PDGFR)mRNA在鹅等级前卵泡中的表达差异及生物学意义。选取健康的产蛋前期和产蛋期籽鹅各3只为试验材料,利用实时荧光定量PCR方法检测PDGF和PDGFR mRNA在产蛋前期和产蛋期鹅等级前卵泡(分为SYF、LWF、MWF、SWF、PE 5个等级)中的表达差异。结果表明:产蛋期PDGF及其受体mRNA在5个等级前卵泡中的表达量均高于产蛋前期(P0.05),说明PDGF及其受体mRNA对卵泡发育有促进作用;产蛋前期和产蛋期PDGF及其受体mRNA表达量均在初级卵泡(PE)中最高,说明初级卵泡是主要表达部位,其中颗粒细胞形态由扁平变成立方形后开始大量增殖,通过促进颗粒细胞的增殖进而促进卵泡发育;在初级卵泡向小白卵泡(SWF)发育过程中,PDGF及其受体mRNA表达量有明显下降(P0.05),推测这可能与PDGF抑制类固醇的合成进而抑制卵泡发育有关,使优势卵泡更有序的进行筛选。     

神经生长因子mRNA在鹅等级前卵泡中的表达

采用相对荧光定量PCR(RT-PCR)相对标准曲线方法,对籽鹅和卡洛斯鹅不同产蛋时期初级卵泡、小白卵泡、中白卵泡和大白卵泡中神经生长因子(NGF)mRNA的表达量进行研究,同时检测血液中促卵泡素(FSH)的含量,并与NGFmRNA表达量进行相关性分析。结果表明:产蛋高峰期,籽鹅初级卵泡中NGF mRNA表达量极显著高于其他卵泡(P0.01),卡洛斯鹅初级卵泡中NGF mRNA表达量显著高于中白卵泡(P0.05),其余卵泡间差异不显著。产蛋末期,籽鹅初级卵泡中NGF mRNA表达量极显著高于中白卵泡和小白卵泡(P0.01),大白卵泡NGF mRNA表达量极显著高于中白卵泡(P0.01),卡洛斯鹅初级卵泡NGF mRNA表达量极显著高于中白卵泡和小白卵泡(P0.01),大白卵泡极显著高于其他卵泡(P0.01)。2种鹅产蛋高峰期血液中FSH表达水平高于产蛋末期(P0.05);籽鹅和卡洛斯鹅的小白卵泡NGF mRNA表达量与血液中FSH的表达水平呈显著正相关(P0.05),在大白卵泡中两者呈负相关,其他卵泡呈正相关。     

不同品种哺乳仔猪精氨酸代谢特性比较研究

我国地方品种猪与外来猪生长速度差异明显。鉴于精氨酸对仔猪生长发育的重要性,本研究选用14日龄哺乳的宁乡猪、湘西黑猪、蓝塘猪、巴马香猪、环江香猪和长白猪各12头,公、母各半,前腔静脉采血,离心分离血清,测定其中游离精氨酸和一氧化氮(NO)的浓度;采集肠道、肌肉、肝脏和肾脏等组织,测定其中的游离精氨酸浓度和NO合成酶(NOS)活性以及N-乙酰谷氨酸合成酶(NAGS,内源性精氨酸合成限速酶)mRNA的绝对表达量。结果表明,长白猪的血清精氨酸浓度显著高于(P<0.05)其他地方品种猪,血清NO浓度高于(P＞0.05)其他地方品种猪;各品种猪空肠前段和肝脏中的NOS活性最高,肾脏中的NOS活性最低;长白猪的空肠前段NOS活性仅低于宁乡猪,肝脏NOS活性仅高于环江香猪;在各个组织均检测到NAGS mRNA不同程度的表达,其中肠道和肝脏中的表达水平最高。综上所述,本研究揭示了不同品种哺乳仔猪血清精氨酸和NO浓度、3种主要组织游离精氨酸含量和NOS活性以及12种组织中NAGS基因的表达谱差异,为解释不同品种猪的生长表型差异提供了营养生化基础。     

鸡PAPPA2基因在卵泡中的时空表达特性分析

为探讨PAPPA2基因在鸡卵泡生长发育中的调控作用,以150日龄海兰褐蛋鸡为供试材料,采用相对定量RT-PCR方法对PAPPA2基因在鸡卵巢组织不同发育时期卵泡中的mRNA转录水平进行检测分析,并用免疫组织化学方法对PAPPA2蛋白质分子在鸡前等级卵泡中的时空表达模式进行了蛋白定位分析。结果表明:鸡PAPPA2基因mRNA在卵巢间质、各前等级卵泡和不同等级化的卵泡中均有表达,但也表现出其在不同卵泡组织中转录水平的差异性,其中,PAPPA2基因在间质组织、5~6 mm、6~7 mm、F2卵泡中的mRNA转录水平最高(P0.05),而在4~5 mm前等级卵泡和F3卵泡中的mRNA表达量最低(P0.05)。由此表明,鸡PAPPA2基因对处于不同阶段的卵泡生长发育发挥着不可或缺的调控功能,且表现出卵泡的不同生长发育程度可能与PAPPA2基因的转录水平之间有着剂量依赖关系。通过免疫组化检测结果可见,鸡PAPPA2蛋白质分子在卵巢间质组织、卵母细胞和颗粒细胞中均有表达,但在膜层细胞中未检测到其表达信号。初步推断,鸡PAPPA2分子可能以旁分泌或自分泌的方式在卵泡的生长发育过程中发挥着重要调节作用。     

四川白鹅RPS27a和SDC2基因差异表达

为阐明鹅不同组织和卵泡中RPS27a和SDC2基因的表达规律,明确其在卵泡发育过程中的作用,应用实时荧光定量PCR检测四川白鹅17种组织及卵泡中RPS27a和SDC2基因的相对表达量。结果表明:四川白鹅卵巢组织中RPS27a的表达量最高(P0.05),而小脑中的表达量最低;肝脏中SDC2的表达量最高(P0.05),SDC2在腿肌和胸肌中的表达量最低。在等级卵泡中,小黄卵泡RPS27a和SDC2表达量均显著低于小白卵泡;F2卵泡中RPS27a的表达量显著高于F5和F3;F2卵泡中SDC2的表达量是小白卵泡的2.05倍,且显著高于F5、F4和F3卵泡,但与F1卵泡差异不显著;在排卵后卵泡中,RPS27a和SDC2的表达量呈显著下降趋势。RPS27a和SDC2在所检测的组织中均有表达,但具有组织特异性的特点;RPS27a和SDC2可能对维持鹅卵巢功能具有重要调控作用,且RPS27a和SDC2在排卵后卵泡中显著降低可能对排卵后卵泡的退化消失具有促进作用。     

鹅AKR1D1基因编码区克隆、序列分析及在卵泡中的表达特性研究

【目的】克隆鹅AKR1D1基因编码区序列,预测其蛋白结构、功能,并研究其在鹅各等级卵泡中的表达特性。【方法】以天府肉鹅母系为材料,采用RT-PCR技术克隆鹅AKR1D1基因编码区序列,利用多种生物信息学分析软件预测其结构与功能,并应用荧光定量PCR技术检测其在各等级卵泡中的表达特性。【结果】结果表明:鹅AKR1D1基因编码区全长981 bp,编码326个氨基酸,氨基酸水平上与鸡相似性高达95.71%;氨基酸序列分析表明鹅AKR1D1蛋白相对分子量为37 263.7 Da,主要定位在细胞质和线粒体内,属于水溶性蛋白;预测鹅AKR1D1氨基酸含有磷酸化位点18个、糖基化位点3个;其二级结构以无规则卷曲为主,三级结构呈弯曲螺旋结构;荧光定量PCR结果显示,AKR1D1在鹅2~4 mm卵泡颗粒层和膜层表达最高,在膜层F5和颗粒层F1中表达最低。【结论】AKR1D1可能通过调控类固醇激素的动态平衡从而对卵泡募集、筛选、闭锁以及排卵起到重要作用。     

雏鹅冷应激反应中HPT轴HSP70mRNA的动态表达规律

【目的】研究急性冷应激处理时,HSP70基因mRNA在下丘脑、垂体和甲状腺(HPT轴)中的表达规律。【方法】以7日龄皖西白鹅为研究对象,利用实时荧光定量逆转录PCR技术,分析(12±1)℃室温条件下雏鹅HSP70 mRNA在HPT轴中的动态表达规律。【结果】下丘脑HSP70 mRNA转录量在冷应激1.5、6和9h显著升高,其它时间点均恢复到正常水平;在应激结束后6h内HSP70 mRNA转录水平均显著升高,应激结束后6h转录水平最高,随后又迅速下降到室温下的转录水平。垂体HSP70 mRNA转录量在冷应激0.5、1.5、6和12h时显著降低,其它应激时间均升高到应激前的水平,应激结束后0.5、3和6h转录水平也显著低于应激前的水平,随后逐渐升高到应激前的正常水平。甲状腺HSP70 mRNA转录量在冷应激0.5h时显著升高,随后迅速下降到应激前的水平,应激3、6和12h时显著降低。应激结束后0.5h和3h转录量显著升高,其它时间点逐渐恢复到正常水平。【结论】雏鹅冷应激反应中,HSP70基因在下丘脑、垂体、甲状腺(HPT轴)中的表达规律是不同的,在不同的组织中有不同的调控规律。下丘脑HSP70 mRNA转录水平最高,表达量总体呈现明显上升趋势,是冷应激反应时的正调控基因;而它在垂体和甲状腺中的表达总体是被抑制的,是垂体和甲状腺冷应激反应时的负调控基因。     

鹅皮肤BMP4基因mRNA表达研究

采用荧光定量PCR方法研究BMP4基因mRNA在吉林白鹅胚胎期和生后期皮肤中表达变化规律,并采集21~29胚龄胎毛及40~130日龄鹅背部羽毛,观察羽毛生长发育规律及羽毛分支。结果表明:BMP4基因mRNA在鹅皮肤毛囊发育的整个过程中都有表达,胚胎期21~29胚龄表达量相对较低,40~70日龄时,鹅背部皮肤中BMP4mRNA表达量呈线性快速增加,在70日龄时BMP4mRNA相对表达量为2.575,是40日龄时相对表达量0.931的2.77倍,70~90日龄BMP4mRNA表达量有所下降,90~130日龄表达量呈线性快速增加,BMP4相对表达量在130日龄时达到了4.943,是40日龄时的5.31倍,是90日龄时相对表达量1.814的2.73倍。羽毛的长和直径以及羽小枝长和直径增长速度在90日龄后减慢,呈平稳增长状态。可见,BMP4基因在鹅羽毛快速发育时期低表达,在羽毛发育速度较慢的时期高表达,且在片羽分支阶段高表达,可能与羽毛分支有一定关系。     

济宁青山羊发情周期不同阶段LHR在输卵管的分布及其mRNA表达

 【目的】探究济宁青山羊发情周期不同阶段黄体生成素受体（LHR）在输卵管不同部位的分布及其mRNA的表达差异。【方法】运用实时荧光定量RT-PCR技术，对LHR mRNA目的片段回收、克隆及序列分析，检测其表达量的差异，同时做LHR免疫组化染色。【结果】LHR阳性物质存在于发情周期各个阶段的输卵管各段，且主要分布在输卵管的黏膜上皮细胞、固有层细胞以及血管内皮细胞中。LHR mRNA在整个发情周期的输卵管中均有表达，但以输卵管漏斗部在发情期的相对表达量最高，且与其它3个阶段差异极显著（P＜0.01）。输卵管壶腹部在发情后期的相对表达量最低，与其它3个时期的差异显著（P＜0.05）。输卵管峡部在发情前期相对表达量最高，与其它3个时期的差异极显著（P＜0.01）。【结论】LHR及其mRNA在山羊输卵管分布及表达反映LH对输卵管功能具有一定调节作用。     

性成熟前籽鹅PRL及PRLR mRNA表达量的动态变化

选取1日龄、1、2、3、4和5月龄籽鹅各6只,取其垂体和卵巢,利用real-time PCR技术对垂体组织中PRL和卵巢中的PRLR进行实时定量,来探讨PRL及其受体mRNA表达量的变化规律,进而了解卵巢对PRL的反应能力。结果表明籽鹅垂体组织在出雏当日就具有表达PRL的能力,并且表达量较高,从1～3月龄PRL的表达量持续下降,4月龄时开始上调,1～5月龄相对表达量均显著低于1日龄(P0.05),1、5月龄与2～4月龄差异显著(P0.05)。卵巢中PRLR表达量与垂体中PRL表达趋势相近,卵巢PRLR的表达量在1月龄时最高,与其它各月龄之间差异显著(P0.05)。由此可以看出在性成熟之前,PRL及其受体基因的表达均处于较低水平,卵巢对PRL的反应能力较弱,PRL在卵巢发育过程中所起的作用是不明显的。     

胆碱对鹅体内脂质代谢及肝脏FAS基因mRNA表达的影响

【目的】探讨胆碱对青农灰鹅体内脂质转运、代谢的作用及脂肪酸合成酶FAS（fatty acid synthase）基因表达的影响,确定鹅日粮中胆碱的最适添加量。【方法】将180只1日龄青农灰鹅随机分为6个处理组,每处理组3个重复,每个重复10只。试验在玉米-豆粕型饲粮的基础上各组的胆碱添加量分别为0、600、1 200、1 800、2 400和3 000 mg•kg-1,试验期15周。屠宰后测定肝脏和血清总胆固醇、甘油三酯,血清低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、葡萄糖、胰岛素、胰高血糖素水平,肝脏脂蛋白酯酶、肝脂酶及血清胆碱酯酶活性和肝脏脂肪酸合成酶（FAS）基因表达量。【结果】①4周龄时,饲粮中添加胆碱显著降低肝脏和血清总胆固醇、甘油三酯、血清低密度脂蛋白胆固醇、胰岛素水平和血清胆碱酯酶活性（P＜0.05或P＜0.01）;显著提高肝脏脂蛋白酯酶、肝脂酶活性和血清胰高血糖素水平（P＜0.05）;但对血清高密度脂蛋白胆固醇、葡萄糖含量影响不显著（P＞0.05）。15周龄时,饲粮中添加胆碱显著降低肝脏和血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量与胰岛素水平及血清胆碱酯酶活性（P＜0.05或P＜0.01）;显著提高肝脏脂蛋白酯酶、肝脂酶活性和血清高密度脂蛋白胆固醇、胰高血糖素水平（P＜0.05）;但对血清葡萄糖含量影响不显著（P＞0.05）。②饲粮中添加胆碱显著提高肝脏FAS基因的表达量（P＜0.01）,且肝脏脂肪酸合成酶基因表达量随胆碱添加水平呈先下降后上升趋势。【结论】综合考虑胆碱对鹅肝脏脂质代谢的影响,1—4和5—15周龄鹅饲粮中胆碱适宜添加量分别为1 200—1 800和1 200 mg•kg-1。     

鹅褪黑素受体Mel1c基因的组织表达特征

采用qRT-PCR等技术探究了Mel1c在鹅不同器官组织(心脏、肝脏、肾脏、肺脏、胰脏、脾脏、卵巢、大脑、胸肌及F1、F2、F3、F4、F5卵泡)中的表达分布。结果表明,Mel1c mRNA在鹅的心脏、肝脏、肾脏、肺脏、胰脏、脾脏、卵巢、大脑、胸肌及各级卵泡中均有表达;其表达量在各组织中存在差异,且以胰脏、脾脏、肾脏、卵巢中表达量较高,肺脏次之,心脏、胸肌、大脑水平相当,肝脏中最少。而在卵泡组织中,F4级卵泡中最高,其次为F5级卵泡,F1级卵泡中表达量最少。Mel1c在鹅各组织中普遍表达分布,进一步说明了褪黑素在机体中有着广泛的生物学作用,特别是对卵泡发育的影响。     

绵羊肌肉生长激素受体基因表达的发育性变化研究

1材料与方法 1．1试验动物选取新疆维吾尔族自治区石河子市紫泥泉种羊场的2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只（120日龄的只有新疆细毛羊）,共计54只,测体重后屠宰,采取背最长肌,立即置于液氮中速冻,-70℃保存。     

miR-222-3p在鹅肥肝形成中的作用及靶基因验证

为了检测miR-222-3p在填饲鹅不同组织中的表达情况，并对其靶基因进行预测和验证，探讨miR-222-3p在鹅肥肝形成中的功能。运用实时荧光定量 PCR技术检测miR-222-3p 在填饲鹅肝脏、胸肌和腹脂中的表达量；采用生物信息学方法对鹅miR-222-3p的靶基因进行预测，荧光定量PCR技术检测预测靶基因在肝脏中的表达量，并利用双荧光素酶基因报告系统验证其靶向关系。结果显示：相比对照组，miR-222-3p 在填饲鹅肝脏和腹脂中的表达量均显著升高；生物信息学预测结果显示MARF1和B4GALNT3基因在3’UTR区域存在miR-222-3p的潜在结合位点，且这两个基因在鹅肥肝中均显著下调，而双荧光素酶基因报告系统显示只有MARF1基因与鹅 miR-222-3p存在靶向关系。结果表明，miR-222-3p在鹅肥肝中表达量显著上调，且可能通过其靶基因MARF1对鹅肥肝的形成发挥调控作用。     

葡萄风信子黄酮醇合酶基因克隆和表达分析

以葡萄风信子‘亚美尼亚’的根、茎、叶、花为材料,采用RT-PCR技术克隆得到一条FLS基因,命名为MaFLS2。生物信息学分析表明,该基因cDNA全长为1 152 bp,含有完整的开放读码框1 056 bp,编码353个氨基酸,MaFLS2蛋白是一种亲水性蛋白,氨基酸序列含有典型的DIOX_N结构域(2-酮戊二酸-双加氧酶活性的N端区域)和2OG-FeII_Oxy超家族结构域,属于2-酮戊二酸-双加氧酶(2-ODDs)蛋白家族。实时定量PCR结果显示,MaFLS2基因在蓝白葡萄风信子中的表达存在组织特异性,蓝色品种‘亚美尼亚’中在花蕾未着色时表达量最高,而白色品种‘白丽人’在根中表达量最高, 在花发育的不同阶段,MaFLS2基因在‘亚美尼亚’中的表达峰值出现在花蕾未着色时期,基因表达总体呈现出先降低后升高再降低的趋势,而在‘白丽人’中的表达峰值出现在转色中期,总体呈现出先升后降的趋势。研究结果为开展单子叶植物花色育种提供了理论依据。