褪黑素对大鼠纤维化TGF-β1/Smads信号通路干预研究

褪黑素是一种主要由松果体分泌的多效性神经激素,具有多种生物学功能,包括抗氧化应激、抗炎、抗凋亡和抗肿瘤特性,以及调节昼夜节律。为探寻临床治疗肾间质纤维化的新途径,本试验观察褪黑素对单侧输尿管梗阻(UUO)构建大鼠肾纤维化模型TGF-β_1/Smads信号通路影响,探讨其干预对肾纤维化机制,SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、UUO模型(UUO)组、UUO+5mg·kg~(-1)褪黑素组、UUO+10mg·kg~(-1)褪黑素组、UUO+15mg·kg~(-1)褪黑素组,每组6只。均于手术当天晚上灌胃给药,每24h1次。14d处死大鼠,取血清检测血肌酐、尿素氮,肾组织进行Masson染色,观察病理结果,实时定量PCR检测肾组织TGF-β_1、Smad3、Smad7和Collagen Type I mRNA表达。结果表明:褪黑素减轻肾组织纤维化病理损伤,使肾组织TGF-β_1、Smad3、Collagen Type I mRNA表达降低,Smad7mRNA表达升高(P0.05,部分P0.01),以15mg·kg~(-1)改善效果最佳。褪黑素可呈剂量相关性下调TGF-β_1、Smad3、Collagen Type I及上调Smad7来抑制TGF-β_1/Smads信号通路,从而发挥肾间质纤维化作用。     

姜黄素对力竭运动大鼠心肌抗氧化、糖代谢及细胞凋亡的影响

为探究姜黄素对力竭运动大鼠心肌抗氧化、糖代谢和细胞凋亡的影响以及对力竭运动大鼠心肌保护的机制,将50只SD大鼠随机分为安静对照组(CK组)、力竭运动对照组(EE组)、低剂量姜黄素组(LC组)和高剂量姜黄素组(HC组)4个组,LC和HC组在力竭性运动大鼠模型基础上给予不同剂量姜黄素刺激,随后通过ELISA方法检测心肌组织丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。Western blotting方法检测葡萄糖代谢关键蛋白、Bcl-2家族促存活蛋白和凋亡活化相关蛋白的表达。结果表明:与EE组相比,LC和HC组大鼠心肌SOD、CAT和GSH-Px活性显著升高,MDA含量显著降低,Nrf2核表达增强,Glut1和HK2蛋白表达上调。与CK组相比,EE组Bcl-2和Mcl-1蛋白表达下调,caspase3/7和PARP剪切体的表达增多。但LC和HC组Bcl-2和Mcl-1蛋白较EE组显著升高,caspase3/7和PARP剪切体的表达减少。该研究说明姜黄素能增强大鼠心肌细胞抗氧化能力、促进葡萄糖代谢并抑制凋亡的发生,大大推进姜黄素对心肌细胞损伤保护机制的研究。     

姜黄素通过Nrf2信号通路对H2O2诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化应激的缓解

【目的】验证姜黄素是否能够通过转录因子E2相关因子2（Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）信号通路减轻H₂O₂诱导的奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激,为防治围产期奶牛代谢紊乱导致的氧化损伤提供理论依据。【方法】培养奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T）,用500 μmol·L^-1H₂O₂处理MAC-T细胞24 h后加入不同浓度的姜黄素（0、5、15或30 μmol·L^-1）处理3 h;MAC-T细胞转染Nrf2 siRNA 48 h后,用500 μmol·L ^-1 H₂O₂处理奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞24 h后加入不同浓度的姜黄素（0、5、15或30 μmol·L^-1）处理3 h。采用实时定量PCR（Quantitative real-time PCR,qPCR）、蛋白免疫印迹（Western blot,WB）和试剂盒等方法,检测Nrf2的蛋白表达量及下游靶基因NAD（P）H醌氧化还原酶1（NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1）和血红素加氧酶1（Heme oxygenase 1,HO-1）的mRNA及蛋白表达量和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）和丙二醛（Malondialdehyde,MDA）等氧化应激相关指标的活性及含量。【结果】（1）H₂O₂处理组MAC-T细胞中MDA含量显著高于对照组（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著低于对照组（P<0.01）。15 μmol·L^-1姜黄素+H₂O₂共同处理组和30 μmol·L^-1姜黄素+H₂O₂共同处理组MAC-T细胞中MDA的含量显著低于H₂O₂处理组（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著高于H₂O₂处理组（P<0.05,P<0.01）。（2）H₂O₂处理组总Nrf2蛋白水平显著低于对照组（P<0.01）,H₂O₂处理组Nrf2下游基因HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著低于对照组（P<0.01）。姜黄素处理组总Nrf2蛋白表达水平显著高于对照组（P<0.01）,姜黄素处理组HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著高于对照组（P<0.01）。姜黄素+H₂O₂处理组总Nrf2蛋白表达水平显著高于H₂O₂处理组（P<0.01）,姜黄素+H₂O₂处理组HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著高于H₂O₂处理组（P<0.01）。（3）si-Nrf2组与对照组相比,Nrf2的mRNA表达水平显著降低（P<0.01）。si-Control+H₂O₂+姜黄素组与si-Control+H₂O₂组相比,MDA的含量显著降低（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著升高（P<0.01）。si-Nrf2+H₂O₂+姜黄素处理组与si-Control+H₂O₂+姜黄素组相比,MDA的含量显著升高（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px活性显著降低（P<0.01）。【结论】姜黄素可以通过增加Nrf2的表达,诱导下游抗氧化分子的转录从而缓解H₂O₂诱导奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激。本研究为防治围产期奶牛代谢紊乱导致的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤提供理论依据。     

姜黄素和白藜芦醇联用对断奶仔猪消化酶活性和胰腺抗氧化功能的影响

[目的]本试验旨在研究白藜芦醇和姜黄素对断奶仔猪内源消化酶活性和胰腺抗氧化功能的影响。[方法]180头日龄为(28±2)d的断奶杜×长×大仔猪(公母各半,体质量均为7.8 kg),随机分成6组(每个组3个重复,每个重复10只):分别饲喂基础日粮(CON组)或含有添加剂的日粮:300 mg·kg~(-1)抗生素(ANT组);白藜芦醇和姜黄素各300 mg·kg~(-1)(HRC组);白藜芦醇和姜黄素各100 mg·kg~(-1)(LRC组);300 mg·kg~(-1)白藜芦醇(RES组);300 mg·kg~(-1)姜黄素(CUR组)的试验饲粮,试验期为28 d。[结果]与CON组相比,各添加剂组胰腺中淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶活性均无显著变化(P0.05),仅RES组胰腺糜蛋白酶活性表现为差异显著(P0.05),HRC、LRC、RES、CUR组空肠中淀粉酶、糜蛋白酶的活性均显著上升(P0.05),回肠中HRC、LRC、RES组糜蛋白酶活性显著上升(P0.05);HRC、LRC、RES、CUR组胰腺丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶1(SOD1)活性显著下降(P0.05),还原性谷胱甘肽(GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著上升(P0.05);HRC和LRC组胰腺过氧化氢酶(CAT)、GSH-Px mRNA表达水平显著升高(P0.05),HRC组胰腺血红素氧合酶1(HO-1)、SOD1 mRNA表达水平显著提高(P0.05)。[结论]饲粮中组合添加白藜芦醇和姜黄素可以提高断奶仔猪小肠消化酶活性及胰腺的抗氧化能力,缓解由断奶应激带来的损伤。     

豆腐果苷对脂多糖诱导的猪小肠上皮细胞损伤分析

【目的】研究脂多糖(LPS)诱导猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)来建立氧化及炎症模型,分析豆腐果苷(HEL)抗炎及抗氧化的作用机理。【方法】试验分为5组:对照组,LPS组,HEL(25、50和100 μM)+LPS组。【结果】HEL会显著降低炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA水平的表达;LPS会显著提高氧化相关蛋白(Nrf2和HO-1)的表达和抗氧化酶(SOD和CAT)的活性,显著减少氧化产物(MDA)的含量,HEL表现出相反的结果,显著降低了Nrf2和HO-1的表达量和SOD和CAT的活性,显著增加了MDA的含量。【结论】HEL会缓解LPS所引起的IPEC-J2细胞的氧化及炎性损伤,一定程度上保护细胞免受伤害。     

Nrf2介导姜黄素对四氯化碳诱导鲫鱼肝损伤的保护作用

为了评价姜黄素对四氯化碳(CCl_4)诱导鲫鱼肝损伤的保护作用以及核因子NF-E2相关因子(Nrf2)的调控作用,采用精密肝切片技术(Precision-cut liver slices,PCLS)分离肝组织并进行体外培养,以四氯化碳诱导建立急性肝损伤模型,同时用不同浓度(1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml)的姜黄素处理肝组织切片,收集上清液及肝组织。检测谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)活性,以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量和总抗氧化能力(T-AOC)等生化指标,同时检测Nrf2和Keap1基因表达。结果表明:姜黄素可以改善CCl_4诱导的肝损伤,其浓度为1μg/ml和5μg/ml时能有效抑制GPT、GOT、LDH和AKP活性的升高,提高SOD、GSH-Px活性及T-AOC和GSH含量,降低MDA的生成,上调Nrf2基因表达。可见,姜黄素对CCl_4诱导的鲫鱼肝损伤有保护的作用,其作用机制可能是姜黄素能激活Nrf2基因在肝细胞中的表达,调节氧化应激,从而减轻CCl_4对肝损伤。     

白刺黄酮对运动力竭大鼠体内抗氧化效应的影响

为探讨白刺黄酮对力竭大鼠抗氧化能力的影响,将60只SD雄性大鼠随机分为安静对照组、运动对照组、阳性对照组和运动给药[给药剂量分别为100、200、300mg·(kg·d)-1]组,每组10只。运动给药组大鼠分别灌胃上述不同剂量的白刺黄酮。运动对照组和运动给药组在为期7周训练后,进行一次性力竭运动,测定大鼠体重、力竭时间及运动后大鼠血清、心脏、肝脏中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总氧化能力(T-AOC)指标。结果表明:经过高强度耐力训练后,大鼠血清中CAT、GSH-Px、GSH、SOD、T-AOC降低,GR、MDA升高(P0.05);心脏中CAT、GR、MDA、T-AOC升高,GSH-Px、GSH、SOD、T-AOC降低(P0.05);大鼠肝脏中GR、MDA升高,CAT、GSH-Px、GSH、SOD降低(P0.05);运动对照组与安静对照组比较,力竭时间延长,体重降低(P0.05)。补充白刺黄酮后运动疲劳指标得到改善,血清中CAT、GSH-Px、GSH、SOD、T-AOC升高,GR、MDA降低(P0.05);心脏中CAT、GR、MDA、T-AOC降低,GSH-Px、GSH、SOD升高(P0.05);肝脏中GR、MDA升高,CAT、GSH-Px、GSH、SOD、T-AOC降低(P0.05);运动给药各组随着剂量的增加力竭时间延长,体重减轻(P0.05)。白刺黄酮可通过调节机体内基本抗氧化酶活性、力竭时间延长、体重减轻,从而达到改善机体抗氧化能力、提高运动能力的目的,对促进机体抗氧化能力、抑制脂质过氧化及能量补充剂的开发具有重要意义。     

阴地厥提取物对运动训练大鼠不同组织抗氧化水平的影响

【目的】探讨阴地厥提取物(Scepteridium ternatumextract,STE)对运动训练大鼠心、肝、肾、脑、股四头肌等组织抗氧化水平的影响。【方法】将24只SD雄性大鼠随机分为安静对照组、运动对照组及运动+STE组,后2组大鼠进行7周的大强度跑台耐力训练,安静对照组自由活动不进行跑台训练,运动+STE组大鼠每天灌胃STE100mg/kg,其他2组灌服相同体积的生理盐水,每周最后1天测各组大鼠的体质量。第8周第1天取运动对照组和运动+STE组大鼠心、肝、肾、脑、股四头肌等组织样品,匀浆后分别测试各组大鼠不同组织总抗氧化能力(T-AOC)及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量。【结果】运动+STE组和运动对照组大鼠体质量与安静对照组比较均呈下降的趋势,其中运动+STE组大鼠体质量变化无显著性差异(P0.05),而运动对照组大鼠体质量变化有显著性差异(P0.05)。运动+STE组大鼠各组织T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px活性和GSH含量显著或极显著高于运动对照组。运动+STE组大鼠各组织(除脑组织外)MDA含量显著低于运动对照组(P0.05),而高于安静对照组。【结论】阴地厥提取物可以改善长时间大强度耐力运动大鼠心、肝、肾、脑、股四头肌等组织的抗氧化水平,维持各组织抗氧酶活性和GSH含量,降低脂质过氧化反应,减少MDA的生成。     

地鳖肽提取物对小鼠体内抗氧化酶活性和mRNA表达的影响

[目的]探明地鳖肽对小鼠体内抗氧化能力及其作用机制的影响.[方法]小鼠灌服地鳖肽提取物(0、40、80、160mg/kg)连续20 d,采用分光光度法检测小鼠肝肾组织及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)含量,荧光实时定量PCR分析抗氧化酶mRNA表达.[结果]与对照组相比,地鳖肽组小鼠肝脏、肾脏及血清中抗氧化酶活力明显升高;地鳖肽组小鼠组织中MDA含量显著降低;肝脏中SOD1、SOD2及CAT的mRNA表达量均显著高于对照组,肾脏中SOD1、SOD2、CAT及GSH-Px的mRNA表达量与对照组相比显著提高.[结论]地鳖肽提取物抑制小鼠体内组织中脂质过氧化物生成,提高抗氧化酶活力和上调抗氧化酶基因表达,可能是通过调节抗氧化酶基因的表达从而发挥抗氧化作用.     

麦麸阿魏酰低聚糖对大鼠肝脏抗氧化功能的影响

为探讨麦麸阿魏酰低聚糖(Feruloyl oligosaccharides,FOs)对大鼠肝脏组织抗氧化功能的影响,选取40只健康断奶大鼠,随机分为5组,包括空白对照组(生理盐水)、阳性对照组(w(Vc)=100 mg/kg)、低剂量组(w(FOs)=20mg/kg)、中剂量组(w(FOs)=40mg/kg)和高剂量组(w(FOs)=80mg/kg)。试验期为21d,每日定时灌胃。试验结束后,收集肝脏组织,通过酶联免疫吸附试验法测定其抗氧化相关指标,利用RT-PCR和Western Blot技术分别分析抗氧化相关基因的mRNA和蛋白表达量。结果表明:1)随着FOs剂量增加,谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性,谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(Glutamate cysteine ligase catalytie subunit, GCLC)、醌氧化还原酶1 (NAD (P)Hquinoneoxidoreductasel,NQO1)、CAT、SOD、GSH-Px和核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2p45-related factor 2,Nrf2)的mRNA表达水平二次方增加,Nrf2蛋白表达水平线性增加(P0.05),而8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy deoxyguanosine,8-OHdG)含量线性和二次方极显著下降(P0.01)。2)与Vc组相比,低剂量组中的GSH-Px活性和8-OHdG含量极显著降低(P0.01),而CAT的mRNA表达水平显著增加(P0.05);中剂量组中的总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性和8-OHdG含量显著降低(P0.05),而GCLC、NQO1、CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2的mRNA表达水平显著增加(P0.05);高剂量组中的SOD和GSH-Px活性和8-OHdG含量显著降低(P0.05)。综上,FOs可增强肝脏抗氧化酶活性,减少DNA氧化损伤,且可提高Nrf2及其下游抗氧化基因的mRNA表达水平,且以中剂量40mg/kg BW的使用剂量效果最佳。     

尿毒清颗粒抑制大鼠肾脏间质纤维化作用靶点研究

目的 研究尿毒清抑制大鼠肾脏间质纤维化的作用。方法 采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化大鼠模型,将10周龄SPF级雄性大鼠60只,随机分3组：假手术（Sham,n=20）、模型组（UUO,n=20）和尿毒清治疗组（UNQ,n=20）;UNQ组于于术前1天给予尿毒清2 g/（kg·d）灌胃,假手术组及模型组每天灌胃等量生理盐水,各组分别于术后第3、7、14天处死5只大鼠,取梗阻侧肾脏进行组织学检查,对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化情况进行半定量评分;采用免疫组化、ELISA和Western Blot分别分析肾组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、纤粘连蛋白（FN）表达。结果 与Sham相比,UUO大鼠各时间点的病理损害进行性加重,肾小管间质中TGF-β1、FN表达均增高（P<0.05）。与UUO相比,尿毒清治疗后3 d,可观察到大鼠的肾间质炎性细胞浸润、肾小管萎缩及肾间质纤维化（P<0.05）明显减轻,同时肾组织中TGF-β1表达减少（P<0.05）;治疗后7 d,上述治疗作用持续存在,同时进一步使UUO大鼠肾间质的FN表达下降（P<0.05）;治疗14 d后,肾间质细胞浸润情况评分（CIS）和慢性病变（包括肾小管萎缩和间质纤维化）评分（AFS）较UUO组分别下降22.2%和19.1%（P<0.05）,TGF-β1、FN的表达则较UUO组分别减轻30.8%和30%（P<0.05）。结论 尿毒清的保护作用表现在肾损伤的开始就通过减少TGF-β1表达从而使肾间质炎症细胞浸润受到抑制,同时还能减少病变肾组织细胞外基质的积聚,从而减轻肾间质纤维化。     

柴胡皂苷d联合黄芩苷对脑缺血再灌注损伤大鼠抗氧化酶的影响

目的探讨柴胡皂苷d联合黄芩苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠抗氧化酶的作用。方法雄性SD大鼠60只,采用线栓法制备脑缺血再灌注模型,按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组、柴胡皂苷d组(70 mg·kg~(-1))、黄芩苷组(30 mg·kg~(-1))、柴胡皂苷d(70 mg·kg~(-1))+黄芩苷组(30 mg·kg~(-1)),缺血/再灌注后,每天腹腔注射一次,连续给药7d后,检测大鼠神经功能损伤评分,检测脑组织、血清中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX))的活性。结果与假手术组比,模型组大鼠神经功能损伤评分显著升高,差异有统计学意义(P0.01);药物组神经功能损伤评分显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。与假手术组相比,模型组脑组织、血清中MDA含量增加,差异有统计学意义(P0.01),CAT、SOD、GSH-PX活性降低,差异有统计学意义(P0.01);药物组脑组织、血清中MDA含量降低,差异有统计学意义(P0.05),CAT、SOD、GSH-PX活性增强,差异有统计学意义(P0.05)。柴胡皂苷d(70 mg·kg~(-1))+黄芩苷组(30 mg·kg~(-1))抗氧化酶作用显著。结论柴胡皂苷d联合黄芩苷对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用可能通过抗氧化作用实现。     

食淀粉乳杆菌干预PRV GDNF和GSNO的ZO-1调控

为探究食淀粉乳杆菌在猪轮状病毒(PRV)感染乳鼠空肠组织中GSNO及GDNF对紧密连接蛋白ZO-1的影响,选择2日龄清洁级中国昆明鼠乳鼠作为试验动物,分为5组,正常对照组、轮状病毒组(RV组)、食淀粉乳杆菌组(L.a组)、预防性干预组(BI组)、治疗性干预组(AI组).空肠组织作为靶器官,分别应用实时荧光定量PCR检测GDNF和ZO-1 mRNA相对表达量,采用比色法检测抗氧化指标(NO、GSH、SOD、MDA、GSH-Px、CAT),通过ELISA定量检测GSNO和5-HT含量,Western blot检测ZO-1、GDNF、GFAP蛋白含量变化,免疫组化检测ZO-1蛋白分布表达变化.结果表明,食淀粉乳杆菌可显著上调ZO-1和GDNF mRNA相对表达量(P<0.05),RV组、BI组和AI组ZO-1和GDNF的mRNA相对表达量变化趋势相似,先升后降.攻毒后各时间点,L.a组5-HT含量均显著高于其他组(P<0.05),RV组5-HT含量高于对照组,低于BI组和AI组;L.a组GSNO含量均显著高于其他组(P<0.05),RV组、BI组和AI组GSNO含量整体变化趋势相似,均是先升后降;对于ZO-1、GFAP、GDNF蛋白表达,整体趋势相似,在攻毒后第2、3天表达量较显著,L.a组ZO-1和GFAP蛋白表达量比其他4组高,AI组GDNF蛋白表达量比其他4组高.免疫组化结果表明,L.a组ZO-1蛋白分布比对照组更连续均匀,BI组ZO-1蛋白分布较RV组更连续,AI组与RV组无明显差异.RV组NO含量和MDA含量显著高于其他组(P<0.05),L.a组NO和MDA含量保持不变,BI组和AI组NO和MDA含量高于L.a组,低于RV组;L.a组CAT、SOD、GSH、GSH-Px含量均高于其他组,BI组和AI组CAT、SOD、GSH、GSH-Px含量整体变化趋势一致,先降后升,且高于RV组.可知,食淀粉乳杆菌通过上调GDNF和GSNO表达和增强乳鼠空肠抗氧化能力,共同促进ZO-1表达,使其在乳鼠空肠上更均匀连续,显著提高乳鼠空肠细胞屏障强度,干预轮状病毒感染.     

Keap1、Nrf2和HO-1在大鼠应激性胃溃疡中的表达

探讨Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein 1,Keap1)/核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路在应激性胃溃疡发生及发展中的作用。建立大鼠水浸束缚应激性(water immersion and restraint stress,WRS)胃溃疡模型,按Guth标准计算溃疡指数(ulcer index,UI),应用免疫组织化学检测Keap1、Nrf2、HO-1在胃黏膜组织中的定位和表达情况。结果表明,WRS处理7 h后,大鼠胃黏膜出现明显的点线状出血;WRS处理前后,Keap1、Nrf2、HO-1蛋白均主要定位于大鼠胃底腺细胞胞质中,其中Nrf2在溃疡周围胃底腺细胞胞核中也有表达;WRS处理7 h后,Keap1表达量显著降低(P0.05),于7 d后恢复至正常水平,而HO-1表达量显著升高(P0.05),于3 d后恢复至正常水平;Nrf2恢复3 d后表达量显著升高(P0.05),随后出现下降。WRS处理后,Keap1、Nrf2、HO-1在大鼠胃黏膜中的定位和表达量均出现变化,提示Keap1/Nrf2/HO-1信号通路可能在应激性胃溃疡的发生及发展过程中发挥了一定抗应激作用。     

日粮铜水平对大鼠肠道和肝脏组织形态、铜离子代谢及氧化还原平衡的影响

[目的]本试验旨在研究日粮铜水平对大鼠血清生化指标、肠道和肝脏组织形态及氧化还原平衡、肝脏铜离子代谢的影响,为探讨仔猪日粮适宜铜水平提供参考。[方法]采用单因素试验设计,选择21日龄雄性斯泼累格·多雷(SD)大鼠60只,随机分为3组:对照组(C,6 mg·kg~(-1)Cu);处理组1(T1,120 mg·kg~(-1)Cu);处理组2(T2,240 mg·kg~(-1)Cu),每组5个重复,每个重复4只大鼠,预试期1周,正式饲喂8周后,每个处理组选择10只大鼠(每个重复2只),采集血清、肝脏、小肠(十二指肠、空肠、回肠)组织及食糜(回肠和结肠)样品,观察肝脏及小肠组织形态,测定氧化还原反应、血清生化指标、肝脏铜转运相关蛋白基因表达。[结果]与C组相比,T2组大鼠血清中胰岛素(insulin)、胃饥饿素(ghrelin)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和肝脏中锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性显著升高(P0.05),T1和T2组大鼠空肠和回肠组织中一氧化氮(NO)水平及回肠SOD活性显著降低(P0.05),大鼠肝脏SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性显著升高(P0.05)。与C组和T2组相比,T1组大鼠肝脏铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)活性显著升高,大鼠肝脏组织中铜锌超氧化物歧化酶基因(Sod1)、金属硫蛋白基因(Mt1a)和铜蓝蛋白基因(Cp)mRNA表达水平显著上调(P0.05)。与C组和T1组相比,T2组大鼠回肠绒毛高度和隐窝深度显著降低,大鼠肝脏铜转运蛋白基因(Ctr1)mRNA表达水平显著下调(P0.05)。血清TNF-α水平与大鼠回肠食糜铜含量(r=0.54)及结肠食糜铜含量(r=0.63)显著正相关(P0.05),回肠食糜铜含量与回肠组织NO水平(r=-0.57)和SOD活性(r=-0.62)显著负相关;大鼠肝脏中铜含量与肝脏SOD(r=0.59)和CuZn-SOD活性(r=0.70)及其伴侣蛋白基因(Ccs)mRNA表达水平(r=0.65)显著正相关。[结论]大鼠长期摄入120 mg·kg~(-1)铜日粮时,肝脏抗氧化酶活性及铜转运相关基因表达水平升高,有利于大鼠保持肝脏铜的稳态;大鼠采食240 mg·kg~(-1)铜日粮,肝脏中Ctr1表达显著下调,铜离子摄取减少,肝脏铜稳态得以维持。日粮中铜(120和240 mg·kg~(-1))吸收率低,主要滞留于肠道,大鼠回肠食糜铜积累引起回肠组织的损伤,改变回肠组织氧化还原平衡,引起大鼠机体炎症反应,不利于大鼠的健康。     

牛磺酸对不同年龄大鼠睾丸组织抗氧化能力的影响

通过在饮水中添加牛磺酸和β-丙氨酸(牛磺酸转运抑制剂),探讨牛磺酸对不同年龄大鼠睾丸组织抗氧化能力的影响.结果表明:牛磺酸对青年大鼠睾丸组织CAT、T-AOC、MDA、NOS、NO、GSH-Px和GSH活性或含量没有明显影响,但可显著提高SOD活性;牛磺酸对老年大鼠睾丸组织CAT、T-AOC、MDA没有明显影响,但可显著提高SOD、NOS、NO、GSH-Px和GSH活性或含量.说明牛磺酸可提高大鼠尤其是老龄大鼠睾丸组织的抗氧化能力,减轻自由基对睾丸组织的损伤.     

加味桃核承气汤对STZ糖尿病大鼠肝、肾和心组织的抗氧化保护作用

[目的]研究加味桃核承气汤对糖尿病大鼠的肝、肾和心脏组织抗氧化保护作用。[方法]尾静脉小剂量(45 mg/kg)注射链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病模型,设立对照组、糖尿病组和给药组(加味桃核承气汤10 ml/mg·d),测定第56天各组的左肾指数、右肾指数和肝指数,测定肝、肾和心组织匀浆中的过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。[结果]给药组大鼠的体重较糖尿病组极显著升高(P0.01),左肾指数和右肾指数较糖尿病组无显著变化,肝指数较糖尿病组极显著降低(P0.01);给药组的肝脏中的SOD和CAT均显著高于糖尿病组(P0.05);心脏中的GSH-Px显著高于糖尿病组(P0.05);给药组肝、肾和心脏中MDA含量均显著低于糖尿病组(P0.05)。[结论]加味桃核承气汤可通过清除氧自由基及抗脂质过氧化作用,提高糖尿病大鼠的肝、肾和心组织的抗氧化能力,缓解氧化损伤。     

红景天苷对运动疲劳大鼠骨骼肌线粒体自由基代谢及呼吸链功能的影响

为研究红景天苷对运动疲劳大鼠骨骼肌线粒体自由基代谢及呼吸链功能的影响,将健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组(A组)、运动模型组(B组)、红景天苷低剂量运动组[50 mg·(kg·d)-1,C组]、中剂量运动组[100 mg· (kg· d)-1,D组]、高剂量运动组[200mg· (kg· d)-1,E组].除A组外,其余各组大鼠进行递增负荷跑台运动建立运动疲劳模型,记录大鼠体重及末次跑台力竭时间,检测骨骼肌线粒体锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平及呼吸链酶复合体Ⅰ-Ⅳ(CⅠ-CⅣ)活性,采用蛋白免疫印迹法检测骨骼肌Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核呼吸因子2(Nrf2)及血氧红素加氧酶(HO-1)表达水平.结果 表明:①与A组相比,B组大鼠跑台力竭运动时间,Mn-SOD、GSH-Px、C Ⅰ-CⅣ活性及Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达均显著降低,MDA含量显著升高(P＜0.01).②与B组相比,D、E组大鼠跑台力竭时间、Mn-SOD活性显著增加(P＜0.01),E组大鼠MDA含量显著降低(P＜0.01);C、D、E组GSH-Px、CⅢ、CⅣ活性及Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量显著增加(P＜0.01或0.05),D、E组CⅠ活性显著增加(P＜0.01或0.05),E组CⅡ活性显著增加(P＜0.05).红景天苷可通过提升机体抗氧化防御能力及线粒体呼吸链中相关酶活性,缓解运动性疲劳的产生,其机制可能是通过激活Keap1-Nrf2-ARE通路来实现的.     

槲皮素－AAPH氧化产物结构鉴定及其对 HepG2细胞氧化还原状态的影响

[目的]探究AAPH诱导的槲皮素氧化产物对Hep G2细胞氧化还原状态的影响。[方法]用紫外-可见波长扫描、HPLC-MS方法分析AAPH和槲皮素在37℃下反应12 h生成的产物结构;以槲皮素-AAPH反应产物处理Hep G2细胞24 h,测定其对细胞存活率、ROS水平及细胞总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、GSH/GSSG比值及丙二醛(MDA)含量的影响,并测定Nrf2、Keap1、NQO1、Prdx1相关抗氧化基因的mRNA表达。[结果]AAPH与槲皮素体系在反应12 h后于294 nm波长处有特征吸收,LC-MS解析结果表明该体系反应生成了含4种主要氧化产物的混合物。与空白组相比,槲皮素与AAPH氧化产物孵育显著降低了细胞存活率,同时细胞内ROS水平和MDA含量升高,细胞内T-AOC水平、GSH-Px及SOD活性显著降低,并显著下调Nrf2、NQO1、Prdx1 mRNA表达,上调Keap1 mRNA表达。[结论]槲皮素氧化产物可造成Hep G2细胞出现氧化应激。     

牛磺酸对乳房链球菌感染引起的氧化应激影响及其机制

[目的]本文旨在探究牛磺酸对乳房链球菌(Streptococcus uberis)感染引起的氧化应激反应的影响及机制。[方法]用70 mmol·L~(-1)牛磺酸(taurine)处理牛乳腺上皮细胞(MAC-T)4 h,加入S.uberis[感染复数(MOI)=10]继续培养3 h,收集细胞;用靶向siRNA干扰牛磺酸的2个转运载体(TauT、PAT1)的表达,再用70 mmol·L~(-1)牛磺酸处理4 h,收集样品。通过Western blot、流式细胞术、试剂盒(ABTS法、TBA法、WST-1法、钼酸铵法等)、免疫荧光等方法,检测Keap1和Nrf2蛋白的表达,活性氧(ROS)和细胞内总抗氧化能力(T-AOC)水平,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及Nrf2蛋白在细胞中的定位。[结果]S.uberis感染能够显著降低T-AOC水平及提高MDA和ROS含量,使SOD和CAT活性显著提高(P0.05)。与S.uberis感染组相比,牛磺酸预处理后感染细菌显著提高胞内T-AOC水平及SOD和CAT活性,降低MDA和ROS含量,并抑制Keap1的表达,促进Nrf2的表达及入核(P0.05);抑制牛磺酸转运载体TauT、PAT1的表达后,Keap1的降低及Nrf2的升高被显著抑制(P0.05)。[结论]牛磺酸可能通过转运载体TauT、PAT1进入乳腺上皮细胞,并通过激活Keap1-Nrf2信号通路缓解S.uberis感染引起的氧化应激反应。