仿火箭电泳应用于单细胞凝胶电泳技术的优势

[目的]研究仿火箭电泳应用于单细胞凝胶电泳技术,为单细胞凝胶电泳技术寻求另一种可行的电泳方法提供参考。[方法]将仿火箭电泳方法应用于单细胞凝胶电泳技术,检验单细胞水平上的DNA损伤,并与传统的电泳方法比较,分析其优劣势。[结果]在细胞DNA未受损状态下,2种电泳方法所得的结果一致;而在细胞DNA受到损伤时,传统的电泳方法下一些细胞的慧尾发散出现漂移,仿火箭电泳方法得到的慧尾图像集中且未发生偏移。[结论]仿火箭电泳方法较传统的电泳方法存在一定优势。     

仿火箭电泳应用于单细胞凝胶电泳技术的优势（摘要）

[目的]研究仿火箭电泳应用于单细胞凝胶电泳技术,为单细胞凝胶电泳技术寻求另一种可行的电泳方法提供参考。[方法]将仿火箭电泳方法应用于单细胞凝胶电泳技术,检验单细胞水平上的DNA损伤,并与传统的电泳方法比较,分析其优劣势。[结果]在细胞DNA未受损状态下,2种电泳方法所得的结果一致;而在细胞DNA受到损伤时,传统的电泳方法下一些细胞的慧尾发散出现漂移,仿火箭电泳方法得到的慧尾图像集中且未发生偏移。[结论]仿火箭电泳方法较传统的电泳方法存在一定优势。     

单细胞凝胶电泳检测Pb~(2+)对小鼠淋巴细胞DNA的损伤

[目的]检测Pb2+对小鼠淋巴细胞DNA的损伤作用。[方法]应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),研究在不同Pb2+暴露浓度(0.05、0.50、5.00 mg/L)下12 h后对小鼠外周血淋巴细胞核DNA的损伤作用。采用DNA拖尾率、DNA损伤专用单位、DNA损伤级别等指标,探讨细胞DNA损伤与Pb2+处理浓度的相关性。[结果]随着Pb2+浓度的增高,拖尾率、DNA损伤专用单位都呈上升趋势。[结论]重金属Pb2+对小鼠淋巴细胞DNA损伤呈正相关剂量效应关系,应用单细胞凝胶电泳技术可对重金属导致的遗传毒性进行检测。     

单细胞凝胶电泳技术评价毛鸡骨草的遗传毒性

[目的]应用单细胞凝胶电泳技术评价毛鸡骨草的遗传毒性。[方法]试验分为5组:阳性对照组(环磷酰胺组)、阴性对照组(生理盐水组)、毛鸡骨草高(30 g/kg)、中(20 g/kg)、低(10 g/kg)剂量组,利用单细胞凝胶电泳技术分析小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞的尾部DNA率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment),以观察毛鸡骨草对小鼠DNA的影响。[结果]毛鸡骨草各剂量组对小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞的Tail DNA%和Tail Moment影响明显低于阳性对照组,差异极显著(P0.01);毛鸡骨草高剂量组肝细胞Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组相比明显降低,差异极显著(P0.01);其他各剂量组小鼠细胞Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组比,无明显差异(P0.05)。[结论]毛鸡骨草在试验剂量范围内对小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞DNA无损伤。     

重金属Cd2+对四膜虫核DNA的损伤作用

采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),研究不同浓度重金属Cd2+对四膜虫核DNA的损伤作用。以拖尾率、细胞损伤率和专用单位为指标,探讨DNA损伤级别与Cd2+处理浓度间的相关性。结果表明,随着Cd2+浓度的升高,拖尾率、细胞损伤率和专用单位均呈上升趋势,说明重金属Cd2+对四膜虫核DNA损伤具有明显的浓度效应。     

三元复合驱采油污水对水丝蚓DNA损伤的影响

[目的]研究三元复合驱采油污水对水生动物基因的毒性效应。[方法]以霍甫水丝蚓(Limnodrilu hoffmeisteri)为受试生物,以浓度分别为12%、36%、24%和44%的采油污水稀释液为供试污染物,采用碱性单细胞凝胶电泳实验,以尾长(TL)、头部DNA含量(HeadDNA)和尾部DNA含量(Tail DNA)为指标检测不同浓度采油污水对水丝蚓DNA的损伤程度。[结果]三元复合驱采油污水会引起水丝蚓体细胞DNA损失,暴露组中受试生物的头部DNA含量与对照组相比均显著减少(P<0.05),尾长和尾部DNA含量均显著升高(P<0.05),随着采油污水浓度的增加,DNA损伤表现出明显的"剂量-效应"关系。[结论]该研究表明三元复合驱采油污水对水丝蚓具有基因毒性效应,可能对油田生态环境产生严重影响。     

断裂剂加入顺序对DNA交联检测的影响

[目的]探讨单细胞凝胶电泳技术在检测DNA交联时断裂剂加入顺序及剂量对检测结果的影响。[方法]采用抗肿瘤药物卡莫司汀(BCNU)作为DNA交联剂,对DNA断裂剂过氧化叔丁醇(tBHP)的加入顺序和最佳使用剂量进行分析。将DNA拖尾长度作为检测指标,并采用t检验分析。[结果]BCNU染毒前加入tBHP组与BCNU染毒后加入tBHP组相比,统计学上均无显著差异。此外,随着tB-HP浓度的增加,DNA断裂程度随之增加,且在400μmol/L时断裂效果非常显著。[结论]断裂剂tBHP的加入顺序不会对DNA交联检测的试验结果产生影响;tBHP在浓度为400μmol/L时断裂效果非常显著。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法改良

[目的]改进聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法。[方法]以2009年在宁夏固原地区采集的马铃薯晚疫病样为试验材料,提取其DNA,PCR扩增,并将其产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]采用12%聚丙烯凝胶电泳检测引物D13、G11,8%聚丙烯凝胶电泳检测引物PI4B、PI63、SSR4,最后采用0.1%硝酸银染色,取得了比较理想的电泳及染色效果。[结论]该研究建立的适用于致病疫霉菌SSR标记的电泳和染色技术方法具有检测灵敏度高、操作简单、获得的条带清晰等特点,是一种行之有效、简便快捷的检测方法。     

盘花垂头菊中两种新型倍半萜类化合物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

[目的]为开发新型肿瘤治疗药物提供依据。[方法]通过单细胞电泳和流式细胞分析法等技术,研究2种从盘花垂头菊中分离的高含氧甜没药烯型倍半萜化合物(HOBS)对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用。[结果]2种HOBS处理48 h后,SMMC-7721细胞体积变小,且出现膜泡化和凋亡小体。单细胞电泳试验表明SMMC-7721细胞经不同浓度HOBS处理后,DNA碎片在电场中呈彗星状向阳极移动,且彗星样尾迹随药物浓度的增大而增长。HOBS能以剂量依赖的方式诱导SMMC-7721细胞凋亡。当2种HOBS浓度为8μg/ml时,细胞凋亡率分别达36.7%和38.9%。凋亡率随药物浓度的增大而升高,与对照组相比有显著差异,并出现典型的凋亡峰。2种HOB可使细胞内[Ca2+]i水平升高。[结论]HOBS能诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

工业废水对洋葱细胞遗传损伤的研究

研究工业废水对洋葱细胞遗传物质的损伤作用。采用单细胞凝胶电泳技术和微核试验,对用体积分数分别为40%,60%,80%,100%的工业废水处理过的洋葱根尖细胞进行拖尾率和微核率的测定,并观察在不同时间处理下,细胞核中物质的受损情况。结果显示,工业废水对洋葱根尖细胞造成了一定的DNA损伤,废水浓度越高,处理时间越长,细胞的拖尾率越高。在染毒8d时,工业废水体积浓度100%组的细胞拖尾率达到0.69%,与阴性对照组比较,差异极显著。细胞微核率随着废水浓度的升高而升高,在染毒8d时,100%浓度组的微核率达到4.80%,而处理时间对微核率的影响不明显。研究表明洋葱细胞可以用作单细胞凝胶电泳监测工业废水污染的检测细胞。     

利用小分子DNA鉴定重金属离子对DNA的损伤

[目的]利用小分子DNA鉴定重金属离子对DNA的损伤。[方法]将pUC18 DNA分子暴露于Hg2+、Cr6+、Pb2+、Cd2+4种重金属离子环境中,经一定时间处理后对DNA分子进行生物活性研究,并用凝胶电泳和增色效应分析了重金属离子对分子生物活性影响机制。[结果]DNA活性分析表明4,种重金属对pUC18的影响程度为Hg2+>Cr6+>Pb2+>Cd2+;凝胶电泳和增色效应结果表明4,种重金属离子主要是引起DNA分子交联导致其分子生物活性的降低,交联程度为Hg2+>Cr6+>Pb2+>Cd2+。[结论]该研究表明,pUC18DNA分子可用作鉴定重金属离子对DNA损伤的依据,为评价重金属对DNA毒害作用提供了一种简捷有效的技术方法。     

利用小分子DNA鉴定重金属离子对DNA的损伤(英文)

[目的]利用小分子DNA鉴定重金属离子对DNA的损伤。[方法]将pUC18DNA分子暴露于Hg2+、Cr6+、Pb2+、Cd2+4种重金属离子环境中,经一定时间处理后对DNA分子进行生物活性研究,并用凝胶电泳和增色效应分析了重金属离子对DNA分子生物活性影响机制。[结果]DNA活性分析表明,4种重金属对pUC18的影响程度为Hg2+>Cr6+>Pb2+>Cd2+;凝胶电泳和增色效应结果表明,4种重金属离子主要是引起DNA分子交联导致其生物活性的降低,交联程度为Hg2+>Cr6+>Pb2+>Cd2+。[结论]该研究表明,pUC18DNA分子可用作鉴定重金属离子对DNA损伤的依据,为评价重金属对DNA毒害作用提供了一种简捷有效的技术方法。     

优化醋酸钾(KAC)法提取蚜虫基因组DNA

[目的]探索一种简便、有效的单头蚜虫基因组DNA提取方法。[方法]以从不同地区采集的桃蚜为试材,采用改进的KAC法和优化的KAC法提取单头桃蚜的基因组DNA,用紫外分光光度计测定所提DNA的浓度（以OD260/280表示）,用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测所提DNA的纯度,比较2种方法的提取效果;对优化KAC法所提DNA进行PCR扩增和电泳检测。[结果]优化KAC法提取的单头蚜虫基因组DNA的OD260/280为1.6-1.9,浓度为20-50 ng/g;改进KAC法提取的单头蚜虫基因组DNA的OD260/280为1.4-1.7,浓度为8-25 ng/g;来自同一地方桃蚜的基因组DNA PCR扩增产物的电泳条带基本相同。[结论]优化改进的KAC法提取的桃蚜基因组DNA浓度和纯度均较高。     

应用单细胞凝胶电泳技术评价复合微生态制剂的遗传毒性

采用DNA损伤检测技术———单细胞凝胶电泳技术(SCGE,又名彗星试验)来检测复合微生态制剂对鱼类DNA的损伤,尝试利用鱼类的单细胞凝胶电泳技术来评价外来化学物质对水生生态环境的影响。试验结果表明,复合微生态制剂对鱼类的DNA没有明显的损伤作用,各试验浓度组与对照组相比没有显著性差异(P>0.05),复合微生态制剂对水体生态环境具有安全性。试验同时表明,鱼类肾细胞的DNA损伤可作为评价外来化学物质遗传毒性的生物标志物。     

几种提取乌苏里貉毛囊核酸方法的比较(英文)

[目的]该研究旨在探讨提取乌苏里貉毛囊核酸的可靠方法。[方法]本实验分别利用改进的有机酚法,chelex-100法,PCR缓冲液法和试剂盒法,从乌苏里貉毛发中提取核酸DNA,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析,并且对四种方法进行比较。[结果]经分光光度计测定和凝胶电泳检测,本实验研究结果表明chelex-100提取的核酸有蛋白质等杂质,PCR缓冲液法提取核酸浓度低有机酚法和试剂盒法提取的DNA浓度高,且没有杂带。[结论]本研究为进一步探索高效,简便的提取乌苏里貉毛囊核酸DNA提供了有力的科学理论基础。     

单链环状DNA添加剂抑制基因表达序列分析Ditag聚合酶链反应引物多聚体生成

[目的]研究利用单链环状DNA抑制聚合酶链反应（PCR）副产物的作用效果。[方法]设计并合成单链环状DNA,并以具同样序列发卡状结构的单链DNA为对照组,在基因表达序列分析（SAGE）Ditag PCR反应中加入上述不同浓度的DNA,利用电泳技术检测不同结构（环状/单链）以及不同浓度单链DNA对PCR多聚体附产物的抑制作用。[结果]发卡状结构的单链DNA无法抑制PCR引物多聚体副产物的产生;而在70～150 nmol/L终浓度范围内,单链环状DNA可以抑制SAGE Ditag PCR反应中引物多聚体的生成,并且不影响SAGE不同tag间的表达丰度差异。[结论]单链环状DNA可以作为PCR反应中引物多聚体生成的有效抑制剂。     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究

1材料与方法 1．1菌株供试拮抗链霉菌共10个菌株,均由该课题组分离自京郊菜田土壤和天然次生林土壤（表1）。     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究(英文)

[Objective] The aim of this study was to investigate the preparation method and amplification system of antagonistic streptomyces DNA templates based on AFLP assays, and also provide a basis for the application of AFLP technology in the analysis of streptomyces or even actinomyces. [Method] The DNAs were extracted by the modified CTAB method and amplified by the Pst Ⅰ/Mse Ⅰ AFLP kit and its reaction system. The amplified products were analyzed by the denatured polyacrylamide gel electrophoresis. [Result] The genomic DNAs of ten antagonistic strains of Streptomyces were extracted and tested. The result of 0.8% agarose gel electrophoresis showed that the major DNA bands were clear without degradation and RNA residue, with the fragment sizes ranging from 37.64 to 40.86 Kb. By ultraviolet spectrophotometry, the OD260/OD280 values varying from 1.625 to 1.833 were obtained. Furthermore, the agarose gel electrophoresis of DNA products digested by Pst Ⅰ/Mse Ⅰ presented the dispersed fluorescent long band, which indicated that the enzymatic hydrolysis was fully carried out. The amplified bands of DNA templates by the screened three pairs of primers were clear with rich polymorphism. [Conclusion] The preparation method and amplification system of DNA template established in this study can be used in the AFLP analysis of Streptomyces.