应用单细胞凝胶电泳技术评价复合微生态制剂的遗传毒性

采用DNA损伤检测技术———单细胞凝胶电泳技术(SCGE,又名彗星试验)来检测复合微生态制剂对鱼类DNA的损伤,尝试利用鱼类的单细胞凝胶电泳技术来评价外来化学物质对水生生态环境的影响。试验结果表明,复合微生态制剂对鱼类的DNA没有明显的损伤作用,各试验浓度组与对照组相比没有显著性差异(P>0.05),复合微生态制剂对水体生态环境具有安全性。试验同时表明,鱼类肾细胞的DNA损伤可作为评价外来化学物质遗传毒性的生物标志物。     

煤矿塌陷区水污染对鱼类肝细胞DNA的损伤

采用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术,初步研究了永城煤矿塌陷区水污染对鱼类肝细胞DNA的损伤。结果表明:塌陷区鱼类肝细胞DNA损伤程度极显著高于对照组(P<0.01),说明当地采煤塌陷区的水污染较严重,对鱼类肝细胞造成了损伤。     

单细胞凝胶电泳检测Pb~(2+)对小鼠淋巴细胞DNA的损伤

[目的]检测Pb2+对小鼠淋巴细胞DNA的损伤作用。[方法]应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),研究在不同Pb2+暴露浓度(0.05、0.50、5.00 mg/L)下12 h后对小鼠外周血淋巴细胞核DNA的损伤作用。采用DNA拖尾率、DNA损伤专用单位、DNA损伤级别等指标,探讨细胞DNA损伤与Pb2+处理浓度的相关性。[结果]随着Pb2+浓度的增高,拖尾率、DNA损伤专用单位都呈上升趋势。[结论]重金属Pb2+对小鼠淋巴细胞DNA损伤呈正相关剂量效应关系,应用单细胞凝胶电泳技术可对重金属导致的遗传毒性进行检测。     

兔源微生态制剂在豫丰黄幼兔肠道的定植性研究

根据微生态理论,采用微生态制剂的方法,利用分子微生态技术(DNA变性梯度凝胶电泳)对课题组研发的HNZZMZ微生态制剂(1号、2号)在豫丰黄兔品种的断奶幼兔的肠道定植情况进行了研究。研究发现,兔源HNZZMZ微生态制剂(1号)在豫丰黄兔品种的断奶幼兔的肠道的定植优于植物源HNZZMZ微生态制剂(2号)。     

乙氧氟草醚对泥鳅的毒性研究

为了检测除草剂乙氧氟草醚对水生生物的毒性,以泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus Cantor)为试验对象,通过急性毒性试验、微核试验、单细胞凝胶电泳试验,来检测其对泥鳅的毒性效应。结果表明,乙氧氟草醚对泥鳅在24、48、72、96 h的半数致死浓度(LC_(50))分别为36.66、32.86、28.92、27.39 mg/L,安全浓度(SC)为7.92 mg/L。微核率和核异常率均随着染毒浓度的增加和时间的延长不断升高,呈现明显的时间剂量效应关系。在处理6 d的最高浓度,微核率和核异常率达到最大,分别为6.417‰±0.631‰和65.417‰±5.080‰。单细胞凝胶电泳试验中,选取彗尾DNA含量、尾长、尾矩3个指标作为检测DNA受到损伤的认定标准,结果处理6 d的16.00 mg/L浓度达到峰值,单细胞彗尾DNA含量为43.06%±2.54%,尾长为268.00 pix±8.49 pix,尾矩为89.31±1.82。试验结果为乙氧氟草醚的合理使用以及环境污染监测提供了科学依据。     

DNA分子标记技术在环境污染物检测中的应用

DNA分子标记是DNA分子碱基序列变异的直接反映,利用分子标记物对污染物造成的生物体DNA损伤的检测和定量分析研究是可行的方法。文章主要综述了DNA加合物技术、随机扩增DNA多态性技术(RAPD)、扩增片段长度多态性技术(AFLP)、单细胞凝胶电泳技术(SCGE)及反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的原理及其在环境污染物检测中的应用。该方法具有快速、简便、特异性强的特点,在环境污染物早期诊断和评价方面具有重要意义,已广泛应用于遗传毒理学研究。     

三元复合驱采油污水对水丝蚓DNA损伤的影响

[目的]研究三元复合驱采油污水对水生动物基因的毒性效应。[方法]以霍甫水丝蚓(Limnodrilu hoffmeisteri)为受试生物,以浓度分别为12%、36%、24%和44%的采油污水稀释液为供试污染物,采用碱性单细胞凝胶电泳实验,以尾长(TL)、头部DNA含量(HeadDNA)和尾部DNA含量(Tail DNA)为指标检测不同浓度采油污水对水丝蚓DNA的损伤程度。[结果]三元复合驱采油污水会引起水丝蚓体细胞DNA损失,暴露组中受试生物的头部DNA含量与对照组相比均显著减少(P<0.05),尾长和尾部DNA含量均显著升高(P<0.05),随着采油污水浓度的增加,DNA损伤表现出明显的"剂量-效应"关系。[结论]该研究表明三元复合驱采油污水对水丝蚓具有基因毒性效应,可能对油田生态环境产生严重影响。     

尾矿库渗漏水导致泥鳅氧化损伤与DNA损伤的研究

为评价包头尾矿库渗漏水污染对生物的毒性效应,选用泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)作为试验材料,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术测定红细胞DNA损伤并测定肝脏组织的MDA含量。结果表明:血细胞DNA损伤率以及肝脏组织的MDA含量与尾矿库渗漏水浓度及处理时间存在一定的时间-剂量-效应关系,随渗漏水浓度和处理时间的增加,血细胞DNA损伤率增加,MDA含量呈上升趋势。说明尾矿库渗漏水污染对泥鳅的正常生理过程有明显的抑制作用,且存在遗传毒害效应。     

TUNEL法和SCGE法评价奶牛性控冻精DNA损伤

末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)和单细胞凝胶电泳法(SCGE)常被用于检验细胞DNA的完整性。本研究采用这两种方法分别对性控、常规冻精进行检测,比较不同方法对精子DNA损伤的检测结果。结果表明:TUNEL法检测性控冻精DNA的损伤率为63.32±0.56%,显著高于(P0.01)常规冻精的31.67±1.03%;SCGE法检测性控冻精和常规冻精的DNA损伤率分别为64.00±0.68%和32.23±0.72%,差异极显著(P0.01)。而两种方法对性控冻精和常规冻精DNA损伤的检测结果间没有显著差异(P0.05),说明该两种方法均可用于冻精DNA损伤检测。     

水产养殖用复合微生态制剂的安全性评价

为水产用复合微生态制剂的安全应用提供科学依据,对由蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)组成的复合微生态制剂进行了溶血性试验、小鼠急性毒性试验和斑马鱼急性毒性试验。结果表明:蜡状芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌和酿酒酵母组成的复合微生态制剂的溶血率低于5%,小鼠最大耐受剂量(MTD)大于15 000mg/kg;对斑马鱼的96h-LD50大于10 000mg/L,即该复合微生态制剂实际无毒。     

玻璃化冷冻保存对体外成熟猪卵母细胞DNA的影响

采用乙二醇(EG) 二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂处理并使用微管法冷冻保存猪卵母细胞,运用细胞形态观察和单细胞凝胶电泳(SCGE)方法检测玻璃化冷冻过程对细胞DNA损伤情况.结果显示:保护剂处理冷冻组,细胞形态正常率和DNA异常率分别为63.364%、42.059%;同保护剂处理未冷冻对照组82.571%、25.758%的差异显著(P<0.05).表明冷冻保存过程对猪卵母细胞DNA有一定影响:以无冷冻保护剂处理卵母细胞为对照检测保护荆的细胞毒性,对照组形态正常率和DNA异常率分别为84.51%、12.28%,与冷冻保护剂处理组有显著差异(P,0.05).说明冷冻保护荆对猪卵母细胞DNA有明显细胞毒性作用.     

单细胞电泳技术检测低温保存猪精子的DNA损伤

应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),对冷冻解冻后猪精子DNA的损伤情况进行研究.结果表明,冷冻解冻会对猪精子DNA造成损伤,其彗星率与鲜精相比差异显著(P＜0.05);各组冻精之间,甘油添加量为2%～3%(v/v)时,冷冻对猪精子DNA造成的损伤最低,彗星率均低于其余各组(P＜0.05).     

重金属Cd2+对四膜虫核DNA的损伤作用

采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),研究不同浓度重金属Cd2+对四膜虫核DNA的损伤作用。以拖尾率、细胞损伤率和专用单位为指标,探讨DNA损伤级别与Cd2+处理浓度间的相关性。结果表明,随着Cd2+浓度的升高,拖尾率、细胞损伤率和专用单位均呈上升趋势,说明重金属Cd2+对四膜虫核DNA损伤具有明显的浓度效应。     

单细胞凝胶电泳技术评价毛鸡骨草的遗传毒性

[目的]应用单细胞凝胶电泳技术评价毛鸡骨草的遗传毒性。[方法]试验分为5组:阳性对照组(环磷酰胺组)、阴性对照组(生理盐水组)、毛鸡骨草高(30 g/kg)、中(20 g/kg)、低(10 g/kg)剂量组,利用单细胞凝胶电泳技术分析小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞的尾部DNA率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment),以观察毛鸡骨草对小鼠DNA的影响。[结果]毛鸡骨草各剂量组对小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞的Tail DNA%和Tail Moment影响明显低于阳性对照组,差异极显著(P0.01);毛鸡骨草高剂量组肝细胞Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组相比明显降低,差异极显著(P0.01);其他各剂量组小鼠细胞Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组比,无明显差异(P0.05)。[结论]毛鸡骨草在试验剂量范围内对小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞DNA无损伤。     

生物技术在环境监测中的应用

综述近几十年来国内外应用于环境监测的生物技术方法,包括PCR技术、生物传感器、生物芯片、酶联免疫测定技术、微核技术及单细胞凝胶电泳等,对每种方法的基本原理、应用特点进行了阐述,对其中的PCR技术与生物传感器予以较为详细的介绍。揭示了生物技术在环境监测中日益广阔的应用前景及环境监测技术呈现的向更精细、更准确、更灵敏方向发展的趋势。     

单细胞凝胶电泳技术检测蜘蛛血细胞DNA损伤研究

以体外染毒法对星豹蛛雌、雄成蛛进行过氧化氢和甲醛染毒处理,采用单细胞凝胶电泳技术检测蜘蛛血细胞DNA损伤效应,用CASP软件分析彗星图像,并计算受损伤细胞率、彗星尾长和Olive尾矩.结果表明,不同浓度的过氧化氢能引起蜘蛛血细胞DNA断裂损伤,且损伤程度与浓度之间有明显的剂量-效应关系;不同浓度的甲醛能引起蜘蛛血细胞DNA损伤,其中在10ümol/L时引起DNA断裂,在25ümol/L、40ümol/L、55 ümol/L时引起DNA交联,而在70ümol/L时引起血细胞凋亡.     

性控冻精的DNA损伤及其检测方法

性控冻精的广泛应用给现代畜牧业带来了巨大的利益。性控冻精在制作生产过程会受到高倍稀释、离心、激光照射、染色及冷冻等诸多因素的影响,而使精子DNA的完整性发生变化,结果降低受胎率,同时会对性控后代的遗传稳定性产生影响。精子DNA损伤检测方法有彗星实验（COMET assay,single cell gel electrophoresis SCGE）,末端转移酶介导的d UTP末端标记法（Terminal tranferase d UTP Nick End Labelling TUNEL）,精子染色质结构分析（sperm chromatin structure assay SCSA）和精子染色体扩散实验（Sperm chromatin dispersion SCD）等。本文综述了近年来精子DNA损伤检测方法的使用概况,对比了不同方法对检测结果的优势,为更好的评价性控冻精的质量,确定分离参数,及为生产受精率高、安全性高的性控冻精提供依据。