华南主要树木丛枝菌根真菌物种多样性调查研究

为调查华南地区丛枝菌根（arbuscular mycorrhiza,AM）真菌的物种多样性与资源分布状况,本研究对该区域红花羊蹄甲（Bauhinia blakeana）、黄梁木（Neolamarckia cadamba）、构树（Broussonetia papyrifera）、尾叶桉（Eucalyptus urophylla）和杧果（Mangifera indica）5种主要树木AM真菌侵染状况进行研究,通过形态学特征及核糖体18S rRNA基因序列分析鉴定AM真菌种类。结果表明:1）5种树木均能形成丛枝菌根,红花羊蹄甲和尾叶桉为疆南星型（Arum-type）,杧果、构树和黄梁木为重楼型（Paris-type）。红花羊蹄甲和杧果的菌根侵染率高、孢子密度大,构树、黄梁木和尾叶桉的AM真菌侵染率和孢子密度相对较低。2）鉴定出AM真菌5属8种,分别为无梗囊霉属（Acaulospora）的浅窝无梗囊霉（Acaulospora lacunosa）和刺无梗囊霉（Acaulospora spinosa）,斗管囊霉属（Funneliformis）的摩西斗管囊霉（Funneliformis mosseae）,根孢囊霉属（Rhizophagus）的根内根孢囊霉（Rhizophagus intraradices）,以及球囊霉属（Glomus）的3种Glomus spp.和硬囊霉属（Sclerocystis）1种Sclerocystis sp.。3）球囊霉属的AM真菌广泛分布在红花羊蹄甲、杧果和构树根际,刺无梗囊霉分布在杧果和尾叶桉根际,摩西斗管囊霉为优势种,分布在构树和黄梁木根际;而浅窝无梗囊霉和硬囊霉只分布在1种树根际,表明其宿主专一性相对较强。结果显示华南树木根际土壤中AM真菌物种多样性较高,同时本研究为深入研究该地区林木根际AM真菌功能多样性提供了初步科学依据。     

具有ACC脱氨酶活性的红枣根际促生菌株的分离筛选及其促生效果研究

采用定向富集法从红枣根际土壤分离筛选具有ACC脱氨酶活性的细菌,同时检测其产生长素（IAA）、固氮和解磷等促生特性。结合形态特征和16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定,并采用盆栽试验验证3株高效产ACC脱氨酶的根际促生菌株Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas putida和Serratia plymuthica对红枣植株生长的影响。结果表明:1）从红枣根际共分离出10株产ACC脱氨酶的菌株,其ACC脱氨酶活性在14.23~433.05 μmol/(mg·h)。这些菌株都具有产IAA、固氮和解无机磷能力。2）经鉴定,10株菌株分别属于假单胞菌属（Pseudomonas）、芽孢杆菌属（Bacillus）和沙雷氏菌属（Serratia）。3）接种Pseudomonas putida菌剂和Serratia plymuthica菌剂均可显著促进红枣植株生长发育,提高植株株高、生物量、叶片氮及磷含量。2种菌株的接种效应明显优于Pseudomonas fluorescens菌剂,且复合菌株应用促生效果优于单一菌株。     

千年桐内生真菌的分离鉴定及溶磷能力测定

【目的】对千年桐（Aleurites montana）内生真菌进行分离鉴定,初步筛选具有较高溶磷活性的 内生真菌。【方法】从福建省南平市建阳区的外墩采育场、湖桥工区和书坊林场的千年桐根、茎、叶中分离纯 化得到内生真菌。根据菌落在根、茎、叶中出现频率及其直径生长速度筛选优势菌株,进一步对优势菌进行溶 磷能力的定性测定。【结果】共分离出 155 株菌株,其中茎内生真菌 60 株（38.71%）、叶 50 株（32.26%）、 根 45 株（29.03%）。湖桥样地采集的内生真菌数量最多、外墩样地最少。选出 25 株优势菌株,经形态学和 18 SrDNA 分子鉴定分别为毛霉菌属（Mucor sp.）、青霉属（Penicillium sp.）、拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis sp.）、生赤壳属（Bionectria sp.）、木霉属（Trichoderma sp.）、嗜热真菌属（Thermomyces sp.）、链格孢属（Alternaria sp.）、盾壳霉属（Coniothyrium sp.）和镰刀菌属（Fusarium sp.）。对优势菌株溶磷效果的试验表明,具有较强 溶磷活性的菌株分属青霉属（Penicillium sp.）和嗜热真菌属（Thermomyces sp.）。【结论】千年桐内生真菌数 量在不同地点和不同器官间分布各有不同,初步确定千年桐内生真菌菌属组成,得到具有较强溶磷活性的菌株 分属青霉属（Penicillium sp.）和嗜热真菌属（Thermomyces sp.）。     

不同产地米槁根际菌群多样性及其影响因素

以贵州省黔西南、黔南州3个产地（BP、LD、XL）的米槁根际土壤为研究对象，采用纯培养手段对米槁根际真菌进行纯化培养，探讨米槁根际土壤可培养真菌多样性和分离潜力，为后期促生真菌的筛选和功能验证提供基础依据。结果表明，从不同产地米槁根际土壤中共分离到真菌367株，鉴定为3门5纲17目38科57属。木霉属Trichoderma是3产地共有的优势属，占总菌株的20.98%。BP、LD和XL的共有属有9种且木霉属是BP（22.6%）和LD（27.3%）的绝对优势属，XL的绝对优势属为青霉菌属（16.7%）。在属水平上，BP的菌群多样性和丰富度最高，LD的菌群多样性最低，但其均匀度最高。不同产地米槁根际菌群的组成不同，其中除BP与XL之间中等不相似，其余产地间极不相似。菌群多样性与土壤化学性质及酶活性存在显著相关性，全氮、速效氮、有效钾和蔗糖酶活性是影响米槁根际菌群多样性的关键因子。     

马铃薯健株与黄萎病株根际土壤真菌群落结构及其对碳源利用特征

【目的】通过研究马铃薯健康植株与黄萎病株的根际土壤真菌群落结构与功能多样性的差异,明确土壤真菌群落结构与黄萎病发生之间的关系,为最终从微生物生态学的角度解释马铃薯黄萎病的发生原因及其生态防控提供理论依据。【方法】以河北省坝上地区马铃薯健株与黄萎病株的根际土壤为研究对象,分别利用实时荧光定量PCR（real-time PCR）和高通量测序（Illumina MiSeq）技术检测根际土壤中大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）ITS基因拷贝数量并分析真菌群落结构变化,结合冗余分析（RDA）明确真菌群落结构与土壤养分的相关性。同时利用Biolog-ECO平板法比较健株与黄萎病株根际土壤微生物对碳源的利用能力。【结果】马铃薯黄萎病的发生与土壤中大丽轮枝菌ITS基因拷贝数量存在相关性,在病株根际土壤中病原菌数量高,而在健株根际土壤中未检测到病原菌。高通量测序分析表明,病株根际土壤真菌多样性指数低于健康植株,但多样性差异不显著。在群落组成的门水平上,与健株根际土壤相比,病株根际土壤中的子囊菌门（Ascomycota）和丝孢菌门（Mortierellomycota）相对丰度上升幅度分别为20.68%和16.16%,而担子菌门（Basidiomycota）的相对丰度下降51.43%。在属水平上,病株根际土壤中轮枝菌属（Verticillium）、青霉属（Penicillium）、维希尼克氏酵母属（Vishniacozyma）、红酵母属（Rhodotorula）和芽枝霉属（Cladosporium）的相对丰度呈上升趋势,增加倍数分别为71.96、3.62、6.11、15.38和6.24倍,而小不整球壳属（Plectosphaerella）、Guehomyces、葡萄穗霉属（Stachybotrys）、赤霉属（Gibberella）、曲霉属（Aspergillus）菌群的相对丰度下降幅度分别为45.10%、61.41%、96.87%、45.85%和44.39%。真菌群落组成与土壤养分的冗余分析（RDA）表明,健株根际土壤优势群落的相对丰度（如小不整球壳属、Guehomyces、葡萄穗霉属、赤霉属、曲霉属）与硝态氮、有机质和pH呈正相关,而黄萎病株根际土壤优势群落的相对丰度（如轮枝菌属、链格孢属、刺盘孢属、被孢霉属、腐质霉属、青霉属、维希尼克氏酵母属、红酵母属和芽枝霉属）与无机磷和速效磷呈正相关。不同根际土壤的AWCD值表明,病株根际土壤微生物对碳源的利用能力高于健株。进一步分析发现,与健株相比,病株土壤微生物对羧酸类碳源的利用能力显著提高,而对氨基酸类、胺类、碳水化合物类、聚合物类和双亲化合物类碳源利用能力差异不显著。【结论】病株的根际土壤真菌多样性降低和群落结构改变是马铃薯黄萎病发生的重要特征,其中轮枝菌属菌群的相对丰度显著提高是最主要特征,并且真菌群落结构受土壤养分影响。同时,病株根际土壤微生物对羧酸类碳源利用能力显著提高。     

槲蕨根际真菌与内生真菌的多样性及相关性分析

对槲蕨(Drynaria roosii)的根际真菌和内生真菌进行分离,共获得46株根际真菌,分属2亚门5目6科9属,青霉属、曲霉属、木霉属、镰刀菌属为槲蕨根际真菌优势属;50株内生真菌分属于1亚门4目5科12属,青霉属、曲霉属、木霉属、镰刀菌属为槲蕨内生真菌优势属。槲蕨植物内生真菌及其根际真菌具有丰富的多样性,也具有一定的相关性。     

碱蓬根系嗜盐耐盐真菌的分离与鉴定

为分析耐盐植物碱蓬根系真菌的组成和耐盐程度,采用常规植物组织真菌分离方法对盐碱地中生长健康的碱蓬根系进行真菌分离,将分离得到的真菌在不同NaCl浓度培养基上进行培养,检测菌株的嗜盐耐盐性,并对分离得到的嗜盐耐盐真菌进行形态学鉴定和分子生物学鉴定。结果显示:分离得到耐盐真菌40株,分别属于镰刀菌属(Fusarium sp.)、链格孢属(Alternaria sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、腐霉属(Pythium sp.)等,其中,棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是没有被报道过的耐盐真菌;分离得到嗜盐真菌3株,都属于聚多曲霉(Aspergillus sydowii)。结果表明,耐盐植物碱蓬中嗜盐耐盐真菌多样性丰富。     

干热河谷不同树龄攀枝花苏铁丛枝菌根真菌多样性研究

攀枝花苏铁是我国特有的古老残遗树种,为适应干热河谷气候,攀枝花苏铁与丛枝菌根真菌（arbuscular mycorrhizal fungi,AMF）建立特殊的共生体系。选用不同树龄的攀枝花苏铁为研究对象,采集攀枝花苏铁根系及根际土壤样品,采用醋酸墨水染色法观察根系的AMF定殖情况并计算定殖率;同时采用湿筛沉淀法对AMF孢子进行分离,通过形态学特征及分子生物学鉴定相结合的方法研究攀枝花苏铁AMF的种类、多样性及与树龄的关系。结果表明,14年生、8年生和3年生攀枝花苏铁根系AMF定殖率分别为36.13%、28.54%、21.10%;根际土壤AMF孢子密度分别为16.02、14.13、13.3个·g^-1,形态学鉴定到6属22种,分别为球囊霉属（Glomus）、无梗囊霉属（Acaulospora）、近明球囊霉属（Claroideoglomus）、斗管囊霉属（Funneliforms）、盾巨孢囊霉属（Scutellospora）和硬囊霉属（Sclerocystis）,球囊霉属和无梗囊霉属为优势属,相对多度分别为56.91%和28.23%。分子生物学鉴定到3属6种,分别为近明球囊霉（C.claroideum）、明球囊霉（G.clarum）、缩球囊霉（G.constrictum）、无梗囊霉属（A.srobiculata）、黑球囊霉（G.melanosporum）和地表球囊霉（G.versiforme）。统计分析表明,AMF定殖率与AMF孢子密度之间的相关性是0.873 9,呈显著的正相关关系。该研究为攀枝花苏铁的保育提供了理论依据。     

蓝莓采后病原真菌的分离鉴定及抑制研究

以兔眼蓝莓(品种名为灿烂)为材料,采用组织分离法从自然腐败蓝莓中分离、纯化病原真菌,通过形态学观察及分子生物学技术进行鉴定,并考察肉桂醛、柠檬醛、牛至精油、香芹酚和丁香酚等对4种病原菌的抑制效果。结果表明,分离得到6株病原真菌,分别为1株稻黑孢霉(Nigrospora oryzae)、1株青霉属(Penicillium sp.)、3株枝孢属(Cladosporium sp.)和1株链格孢属(Alternaria sp.)真菌,经致病性试验确定链格孢霉为主要病原菌。牛至精油对4种病原真菌均具有较好的抑制效果,对链格孢霉的半最大效应浓度(EC_(50))为37 mg/L。     

内生真菌侵染对古侧柏种子萌发及幼苗生长的影响

试验选取8株古侧柏优势内生真菌,采用浸种、灌根法对古侧柏种子及幼苗进行接种处理,通过测定种子发芽率、发芽势、发芽指数和幼苗高、地径、根冠比、干物质量、叶绿素含量等指标,探讨其对古侧柏种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,黑附球菌（Epicoccum nigrum）C-4对种子萌发及幼苗生长均有促进作用,可显著提高侧柏种子的发芽势、发芽指数以及幼苗高、地径、干重、含水量和叶绿素a/b比值,烟曲霉（Aspergillus fumigatus）C-6对侧柏种子的萌发无影响,但促进了侧柏幼苗的生长;链格孢霉（Alternaria alternata）C-5对侧柏种子萌发及幼苗生长均产生抑制作用,哈茨木霉（Trichoderma harzianum）C-1浸种后对种子萌发无影响,但在定期灌根处理后,对侧柏幼苗产生抑制作用;其他供试菌株对侧柏种子萌发及幼苗生长的影响不显著。8株古侧柏优势内生真菌处理对侧柏种子萌发和幼苗生长表现出促进、抑制或无作用,其中C-4和C-6是2株具有促生能力的优势菌,为古侧柏的保护和更新提供基本材料。     

甘肃华山松溃疡病病原真菌类群的初步鉴定

近年来甘肃陇南地区华山松溃疡病发生严重，导致华山松大面积死亡，但有关病害发生的原因等尚不清楚。采用组织分离法从感病华山松的健康部位、病健交界处、子实体及病组织处分离获得97个真菌菌株，结合形态学及系统学对分离到的菌株进行初步分析。结果显示，所得菌株分为9个种，其中Neocosmospora silvicola占14.17%，Fusicolla violacea占1.67%，Microcera sp.占8.33%，Neonectria neomacrospora占11.67%，Dermea pinicola占8.33%，Nematogonum ferrugineum占9.17%，Pezicula sporulosa占4.17%，Phaeoacremonium fraxinopennsylvanicum占14.17%，Sarea resinae占9.17%。以丛赤壳科为优势菌群，占总菌株数量的44.33%；初步推断Neocosmospora silvicola为疑似病原菌。     

内蒙古呼和浩特市杨树腐烂病病原菌鉴定

To identify the pathogens causing poplar stem rot in Hohhot of Inner Mongolia.Tissue isolation method was used to isolate fungi from poplar trees in Hohhot.The pathogenicities were verified based on Koch’s rule,morphological,and molecular biological methods were then used to identify the pathogenic fungi.Eight fungi were isolated,and 3 isolates named YSFL1,YSFL3 and YSFL4-2 were found to cause the typical canker symptoms.According to the colony characteristics and sporogenetic morphology,ITS and β-tubulin sequences,they were identified as Cryptosphaeria pullmanensis (YSFL1) and Cytospora chrysosperma (YSFL3,YSFL4-2).This study proved that the pathogens of poplar canker in Hohhot area belonged to C.pullmanensis and C.chrysosperma.This result enriched the diversity of poplar canker pathogens in China,and laid a foundation for the prevention and identification of poplar pathogens in Inner Mongolia.     

不同生境春季核桃内生真菌分离及其多样性

以核桃（Juglans regia）的不同部位（根、1年生茎、2年生茎和干茎）为材料,采用组织分离法,对来自陕西山阳县、蓝田县与宜君县3个不同生境的材料进行内生真菌的分离鉴定、种群组成、定殖率、多样性指数等研究。结果显示,从576块组织块中共分离得到392株内生真菌,其中在2年生茎124株,1年生茎120株,干茎87株,根61株。392株内生真菌隶属于24个属,其中,3大优势类群为交链孢霉属（Alternaria）、花核菌属（Anthina）和茎叶核菌属（Ectostroma）,分别占菌株总数的19.90%、9.69%和8.93%。交链孢霉属主要存在于2年生茎和干茎中,花核菌属和茎叶核菌属则主要存在于2年生茎中。核桃不同部位内生真菌多样性指数1年生茎的最高,为1.07;不同生境中,山阳核桃内生真菌的多样性指数最高,为1.30,说明春季核桃内生真菌具有丰富的多样性,是潜在的真菌资源库。     

爪哇扁头猛蚁颊下囊可培养放线菌及抑菌活性研究

为研究肉食性蚂蚁爪哇扁头猛蚁工蚁颊下囊内含物中放线菌的组成及其抑菌活性，采用传统的微生物分离培养和序列分析相结合的方法，对不同蚁巢单头工蚁颊下囊中放线菌进行分离培养，共获得9株不同的放线菌。链霉菌为优势类群，有6个菌株（A2、A3、B1、B3、B4、B5），菌株B1、A3和B5在3个蚁巢中均有分布，平均分离频率较高，分别为93.3%、80.0%和53.3%；菌株C1为微杆菌属，分离频率达到100.0%，菌株A1为冢村氏菌属，分离频率为80.0%，菌株C1和A1在3个蚁巢中均有分布。菌株B2为拟无枝酸菌属，仅在2个巢中分布，分离频率仅为26.7%。利用平板对峙法和生长速率法对9株放线菌进行抑菌活性研究，菌株B2（拟无枝酸菌属）以及菌株B3、B4和B5（链霉菌属）对8种植物病原真菌具有一定的抑菌活性。其中，菌株B4的发酵液对8种病原菌均表现出较强的抑菌活性，尤其对杨树溃疡病菌、水稻纹枯病菌、核桃黑盘壳菌和苹果腐烂病菌的抑菌率达到100.0%，显示出极强的抑菌效果，可进一步开发和利用。     

红果型沙地云杉内生真菌多样性

了解沙地云杉植物内生真菌生态多样性,为沙地云杉内生真菌的种属鉴别和资源的开发利用提供科学的依据,并为下一步深入研究内生真菌代谢产物提供理论基础。对内蒙古自治区克什克腾旗白音敖包自然保护区的沙地云杉进行调查,采用组织分离法对沙地云杉的不同组织部位进行内生真菌分离,以形态学和分子生物学相结合的方法进行鉴定,选取其中60株进行扩增、测序和系统发育分析。从系统发育树可见,菌株聚为2个大分支,分别为子囊菌亚门和半知菌亚门,10个小分支对应7个科分属于10个属12种,其中链格孢属（Alternaria）与青霉属（Penicillium）为优势菌属,红果型沙地云杉内生真菌菌种资源较丰富。     

合欢枯萎病菌的分离鉴定和培养特性

以安徽省合肥市长岗镇20份合欢枯萎病株样品为对象,采用组织分离法纯化枯萎病菌并进行形态学和分子生物学特征鉴定,进而考察不同培养条件如碳源、氮源、pH和温度对病菌生长的影响。研究获得7株致病镰刀菌(Fusarium),将菌株3和3-1鉴定为木贼镰刀菌(F. equiseti),4和10为尖孢镰刀菌(F. oxysporum),1-2和3-2为腐皮镰刀菌(F. solani),2-3为层出镰刀菌(F. proliferatum)。致病力测试结果表明,F. oxysporum对合欢枝条的致病力较强,而F. solani、F. equiseti和F. proliferatum致病力弱。培养研究发现,病菌最适生长温度为28~32 ℃;F. proliferatum在pH=9时生长最快,其他菌株的最适pH为7.0;F. solani、F. proliferatum和F. equiseti能较好地利用蔗糖和乳糖,F. oxysporum在葡萄糖、蔗糖和乳糖培养基上生长较好;各菌株在含硝酸铵的培养基中菌落直径最大,而草酸铵对病菌生长不利。结果可为合欢枯萎病害的诊断和防治提供理论依据。     

肉牛源毛孢子菌Trichosporon loubieri的分离鉴定与药敏试验

为探究肉牛真菌性皮肤病的病因并有效防治该病。取发生皮癣病肉牛患部的皮屑、被毛进行真菌学检查和分离。采用沙保弱氏培养法对皮屑和毛发样品进行分离纯化。对分离株进行形态学、分子生物学鉴定和小鼠致病性、药敏试验。最终从样本中分离到一株真菌(编号zrfg01)。对分离株进行PCR扩增,获得长度为542 bp的转录基因间隔区(intergenic spacer,IGS)序列片段,序列提交GenBank,获得序列号为MF401393.1。序列在Blast中比对结果显示,zrfg01与编号KT936593.1的Trichosporon loubieri的相似性为100%。根据形态学和分子生物学方法将其鉴定为T. loubieri。动物实验表明该菌对小鼠有选择性致病作用。药敏试验表明,该菌在25 ℃环境条件下,对特比萘芬和氟胞嘧啶耐药,对克霉唑、两性霉素B、氟康唑、伏立康唑较为敏感。该研究可为诊断和治疗T. loubieri引起的肉牛皮肤癣菌病提供重要参考。     

PEG-6000胁迫下3种外生菌根真菌的生长特性

为了解不同外生菌根真菌的抗旱能力及机制，筛选具有较强抗旱性的优良菌株。选取琥珀乳牛肝菌(sp)、粘盖乳牛肝菌(sb)、橙黄硬皮马勃(sc)3种外生菌根真菌，采用液体培养和固体培养2种方式，利用PEG-6000模拟干旱条件，研究不同干旱胁迫程度对3种外生菌根真菌生长及生理变化的影响。结果表明，在不同PEG-6000浓度下,sb菌丝生长速率一致，sp在0~21 d的菌丝生长速率较高，sc则在14~28 d才呈现速生期；轻度干旱胁迫（PEG-6000浓度为10％~20％）有利于sb和sp生物量的积累，增加sb对H⁺的分泌，并提高sb的SOD活性，降低sb的MDA含量，而sc的生长则受到PEG-6000的抑制；在PEG-6000处理下，3种外生菌根真菌的菌丝形态出现了不同程度损伤，随PEG-6000浓度升高菌丝形态损伤进一步加重，但sb菌丝形态结构完整度高于sp与sc。因此，轻度干旱胁迫利于sb的生长，3种外生菌根真菌抗旱性强弱为:sb>sp>sc。本研究结果可为外生菌根真菌抗旱机制的深入研究及抗旱菌种的筛选提供参考。